N，N-二甲基亚氨基二碳亚氨酸二酰胺乙酸盐、其制备方法和包含其的药物组合物 【技术领域】
本发明涉及N，N-二甲基亚氨基二碳亚氨酸二酰胺乙酸盐(N，N-dimethylimidodicarbonimidic diamide acetate)、其制备方法和包含其的药物组合物，并且更具体地，涉及通过使N，N-二甲基亚氨基二碳亚氨酸二酰胺(N，N-dimethyl imidodicarbonimidic diamide)和乙酸进行反应而制备的晶体酸加成盐N，N-二甲基亚氨基二碳亚氨酸二酰胺乙酸盐、其制备方法和包含其的药物组合物，由于所述酸加成盐的物理化学性质如溶解度、稳定性、非吸湿性、抗粘附性等极佳且毒性低，因此可非常有效地作为治疗剂用于治疗糖尿和糖尿病、肥胖症、高脂血症、脂肪肝、冠心病、骨质疏松、多囊卵巢综合征、P53基因缺失癌症等并发的代谢综合征；治疗糖尿病及预防其并发症；治疗癌症及预防肌痛、肌细胞细胞毒性和横纹肌溶解症等。
更具体地，本发明涉及新型N，N-二甲基亚氨基二碳亚氨酸二酰胺乙酸盐，其可降低溶出速率并改善渗透性，以增强其在下部胃肠道的生物利用度。
背景技术
N，N-二甲基亚氨基二碳亚氨酸二酰胺的通用名是二甲双胍，它是用于非胰岛素依赖性糖尿病的治疗剂，它是基于双胍的药物，在低血糖作用和预防并发症方面最佳。
在多篇文章中提出仅二甲双胍具有可作为首选的口服抗糖尿病剂的性质。特别地，二甲双胍的临床作用已通过其作为AMPK激活剂的药理学作用证实。已报导AMPK是生理学上控制碳水化合物和脂质代谢的重要的酶。二甲双胍激活该酶，由此使高血糖水平正常化，改善脂质状态，使排卵期月经失调正常化，并治疗脂肪肝；并且二甲双胍可有效地治疗或预防P53基因缺失的癌症。
在癌症专业期刊中，Abramson Cancer Center of Medical College，Pennsylvania报道了二甲双胍可有效地作为AMPK激活剂治疗或预防P53基因缺失的癌症[Monica Buzzai等，Systemic Treatment with the AntidiabeticDrug Metformin Selectively Impairs p53-Deficient Tumor Cell Growth，Cancer Res 2007；67：(14).July 15，2007]。
换言之，如果人类机体遭受不适的状况，二甲双胍激活控制应用至该状况的能量代谢的AMPK酶，由此控制葡萄糖和脂质，并消除癌细胞。
P53基因使受损细胞或不必要的细胞和老化的细胞的“自杀”(细胞凋亡)。如果癌症细胞变异，所述P53基因会缺失，由此形成不可治愈的癌细胞。
已通过实验证实二甲双胍可激活P53基因缺失的不可治愈的癌细胞的AMPK酶，由此改变代谢途径，因此，由于癌细胞不能使其自身适应改变后的代谢途径而被杀死。
该报道指出P53基因消除癌症，并通过利用被称为AMPK的能量代谢控制酶来保持长寿。
二甲双胍是可激活AMPK从而使得葡萄糖和脂代谢正常化的药物。已发现如果将二甲双胍给药至P53基因缺失的癌症，则所述癌细胞的能量代谢途径被改变，并且抗癌作用的增加与二甲双胍的剂量成比例，此外，用于治疗糖尿病的常规剂量的二甲双胍可有效治疗癌症。
另外，Beth Israel Deaconess医疗中心，Boston，United States的研究人员在专业医学期刊上报道了二甲双胍可有效地作为PGC-1α激活剂预防严重的副作用如肌痛、肌细胞损伤和横纹肌溶解症[Jun-ichi Hanai等，The muscle-specific ubiquitin ligase atrogin-1/MAFbx mediates statin-inducedmuscle toxicity，J.Clin.Invest.117：3940-3951(2007)]。
Atrogin-1基因的表达造成肌肉毒性如肌痛、肌细胞损伤和横纹肌溶解症，但由于具有PGC-1α转录因子活性，二甲双胍可抑制Atrogin-1基因的表达，由此抑制和预防由Atrogin-1基因表达增加导致的肌肉病变。
由于二甲双胍在药学上可以以游离碱的形式使用，但该形式的稳定性低，因此二甲双胍以药学上可接受的酸加成盐的形式给药。
韩国专利第90,479号描述了四个物理化学标准，如(1)极佳的溶解度；(2)极佳的稳定性；(3)非吸湿性；和(4)以药学可接受的盐的形式制备必须满足作为片剂形式的可加工性。作为药学上可接受的酸加成盐，满足这四个标准是非常困难的。
已对除二甲双胍盐酸盐以外的加成盐进行了研究。US 3,957,853公开了二甲双胍乙酰水杨酸盐，US 4,028,402公开了新的双胍化合物加成盐，US 4,080,472公开了二甲双胍的chlorfibric酸(chlorfibric acid)盐的制备和与糖尿病相关的疾病的治疗。此外，US 6,031,004描述了通过二甲双胍的延胡索酸盐、琥珀酸盐和马来酸盐(maleinic acid)制备的药物组合物及其应用。尽管对于二甲双胍加成盐的研究仍在进行，但二甲双胍仅被批准以盐酸盐的形式用于药物中，并被广泛地用作作为非胰岛素依赖性糖尿病地治疗剂的处方药。二甲双胍盐酸盐是几乎仅在上部小肠被吸收的药物。因此，其在下部小肠不完全地被吸收，因此这种盐难以配制成24小时的控释药物。这是二甲双胍盐酸盐溶解度高的原因(Marathe，P.等，Br.J.Clin.Pharmacol.，50：325-332(2000))。
已对除二甲双胍盐酸盐以外的加成盐进行了研究。US 3,957,853公开了二甲双胍乙酰水杨酸盐，US 4,028,402公开了新的双胍化合物加成盐，US 4,080,472公开了二甲双胍的chlorfibric酸盐的制备和与糖尿病相关的疾病的治疗。此外，US 6,031,004描述了通过二甲双胍的延胡索酸盐、琥珀酸盐和马来酸盐制备的药物组合物及其应用。然而，二甲双胍乙酸盐的制备方法和组合物尚未在现有专利中描述。此外，对于二甲双胍乙酸盐的作用尚未有已知或进展性的研究。
尽管对于二甲双胍加成盐的研究一直在进行，但实际上只有二甲双胍盐酸盐被使用。盐酸盐的单位剂量大，且其制剂体积非常大。因此，即使尝试新型加成盐，但其分子量和制剂变得过大，由此可推断其难以配制。因此，认为尚未尝试开发新的加成盐的产品。
同时，现有专利(US 4,080,472)描述了当制备二甲双胍游离碱时使用离子交换树脂柱来去除二甲双胍盐酸盐中的盐酸，并且现有专利描述了需要苛刻条件，即将溶剂加热回流和在热状态下过滤。
二甲双胍盐酸盐的通常的剂量是每日最高2550mg，即一天内随餐给药500mg或750mg片剂2至3次。
由于二甲双胍盐酸盐具有快的药物消除速率，这样的给药方法会造成血液中药物水平的剧烈变化，且这样的血液中药物水平的变化可能导致副作用和对药物的抗性。事实上，与二甲双胍盐酸盐的使用有关的副作用常常在胃肠道中出现，实例包括厌食、恶心、呕吐和偶发性腹泻。因此，目前正在进行对于二甲双胍盐酸盐的缓控释制剂的研究以降低这样的副作用并改善对2型糖尿病患者的治疗质量。
此外，二甲双胍盐酸盐是高度水溶性药物(＞300mg/mL，25℃)，因此如果不将其设计为特殊的制剂，就可能造成由剧烈的释放现象导致的血糖过低。因此，在患者的便利性以及治疗作用方面，认为经设计以使得规定剂量的药物可以控制释放24小时的控释片剂是优选的给药形式。
但是，二甲双胍盐酸盐高度溶于水，并且几乎不透过下部胃肠道，因此大多数药物必须在上部胃肠道吸收。因此，在制备用于控释的特殊制剂的制备技术中存在许多难题。
国内外已注册了许多用于克服这一药物技术难题的有关二甲双胍控释片剂的专利。以Depomed Inc.的名义提交的韩国专利申请第1999-7011439号描述了在8小时内释放药物的控释制剂，其使用通用的高分子聚合物，并作为用于控释可溶性药物的制剂。以Bristol Meyer’s Squibb的名义提交的韩国专利申请第2000-7010280号描述了适用于以期望的程度控释具有高溶解度的二甲双胍的两相控释片剂。
然而，由于二甲双胍的单位剂量很大，即500至750mg，考虑到添加包括控释剂的药物赋形剂，片剂的总重量非常重。此外，由于二甲双胍盐酸盐的溶解度高，因此也需要大量的待加入的控释剂，以在预期的时间内进行控释，由此，制剂可能过大而不能容易地服用。因此，在患者能够服用的片剂的体积内难以保持二甲双胍盐酸盐的持续控释。
选择二甲双胍乙酸盐作为抗糖尿病剂的原因是它能够产生药学上极佳的控释，并且二甲双胍乙酸盐的药理学作用优于二甲双胍盐酸盐的药理学作用。
近来，有关乙酸盐的各药理学作用的研究正在积极的进行。已报道了许多在餐后30分钟时少量醋通过在肠道内抑制将二糖降解为葡萄糖的酶从而降低血糖的实验。
近来，Carol Johnston等在有关醋对患有2型糠尿病的患者中的作用的研究中提到，在抗胰岛素组中的醋给药组中餐后血糖降低64％，同时胰岛素敏感性也降低34％[Vinegar：Medicinal uses and Antiglycemic effect CarolJohnston等，Medscape general medicine 2006；8(2)：61]。
此外，Ogawa提到乙酸抑制二糖酶如蔗糖酶和乳糖酶的活性。换言之，他提到乙酸在通过抑制将多糖降解为单糖的酶的作用从而降低血糖中起作用。
参考文献
1.Ogawa N，Satsu H，Watanabe H等，Acetic acid suppresses the increasein disaccharidase activity that occurs during culture of caco-2cells，J Nutr.2000Mar；130(3)：507-13。
2.Carol S.Johnston，PhD，RD；Cindy A.Gaas，BS，Vinegar：MedicinalUses and Antiglycemic Effect，Medscape General Medicine，2006；8(2)：61。
3.Ostman E，Granfeldt Y，Persson L，Vinegar supplementationlowers glucose and insulin responses and increases satiety after a bread meal inhealthy subjects，Eur J Clin Nutr，2005Sep；59(9)，983-8。
4.Johnston CS，Kim CM，Buller AJ，Vinegar improves insulin sensitivityto a high carbohydrate meal in subjects with insulin resistance or type 2diabetes，Diabetes Care，2004Jan；27(1)：281-2。
5.Leeman M，Ostman E，Vinegar dressing and cold storage ofpotatoes lowers postprandial glycaemic and insulinaemic responses in healthysubjects，Eur J Clin Nutr，2005Nov；59(11)：1266-71。
6.Ebihara K，Nakajima A，Effect of acetic acid and vinegar on bloodglucose and insulin responses to orally administered sucrose and starch，
Agric Biol Chem，1988；52：1311-1312。
7.Brighenti F，Castellani G，Benini L等，Effect of neutralized andnative vinegar on blood glucose and acetate responses to a mixed meal inhealthy subjects，Eur J Clin Nutr，1995Apr；49(4)：242-7。
日本Mitsukan公司提交的韩国专利申请第2004-7013025号描述了用于预防高血压的食物和医药组合物，其特征在于通过长期口服，极少量的乙酸显示出极佳的降血压作用。
已积极开展关于醋和乙酸本身在多种疾病中的作用的研究。然而，所述研究中表明的可观作用是作为食品的醋的研究结果，而非对于乙酸盐的实验，其未显示本发明所示的二甲双胍乙酸盐的作用，也未提及与二甲双胍的相互作用。
本发明人决定脱离必须通过选择合适的控释剂来设计制剂以克服二甲双胍盐酸盐的难题这一模式，如果活性成分的溶解度降低，即使服用立即释放片剂，副作用如血糖水平的过度降低或胃肠道病变仍然可被改善，并且通过配制立即释放制剂可进行更有效的控释；并对水溶解度相对低的二甲双胍加成盐进行了研究。然而，在实践中存在一个难题，如果新型二甲双胍衍生物的分子量与二甲双胍盐酸盐相比非常高，那么即使合成具有低溶解度的二甲双胍衍生物，二甲双胍的剂量也将增加。考虑到二甲双胍的单位剂量较大，因此这是至关重要的难题。如果开发的二甲双胍加成盐具有不太大的分子量，并由此具有可被压缩成片剂的剂量，由于溶解度降低而易于控释，在下部胃肠道和结肠具有相对极佳的渗透性，并从而与二甲双胍盐酸盐相比具有相对广泛的吸收部位，则其在药学或药代动力学上将具有极佳的连锁反应(ripple effect)。
【发明内容】
技术问题
本发明人决定脱离必须通过选择合适的控释剂来设计制剂以克服二甲双胍盐酸盐的难题这一模式，如果活性成分的溶解度降低，即使服用立即释放片剂，副作用如血糖水平的过度降低或胃肠道病变仍然可被改善，并且可更有效地控制药物的释放；并对水溶解度相对低的二甲双胍加成盐进行了研究。然而，如果新型二甲双胍衍生物的分子量与二甲双胍盐酸盐相比非常高，那么即使合成具有低溶解度的二甲双胍衍生物，由于二甲双胍的剂量增加，仍会存在实用性难题。考虑到二甲双胍的单位剂量较大，因此这是至关重要的难题。如果开发的二甲双胍加成盐具有不太大的分子量，并由此具有可被压缩成片剂的剂量，由于溶解度降低而易于控制药物释放，在下部胃肠道和结肠具有相对极佳的渗透性，并从而与二甲双胍盐酸盐相比具有相对广泛的吸收部位，则其在药学或药代动力学上将具有极佳的连锁反应。
如果所述加成盐的药理学作用能够显示出与二甲双胍的活性药理学成分的协同作用，其将是更理想的二甲双胍加成盐。在持续研究的结果的基础上，本发明人发现了具有不太大的分子量和相对较低的溶解度的二甲双胍乙酸盐，从而完成本发明。
此外，本发明人对二甲双胍乙酸盐进行了多项临床研究，并发现二甲双胍乙酸盐由于具有较低的溶解度而可获得药学和药代动力学益处，在血糖的初始下降和餐后血糖下降作用方面，二甲双胍乙酸盐比二甲双胍盐酸盐更为优异。这表明即使给药的二甲双胍乙酸盐的单位剂量少于二甲双胍盐酸盐的单位剂量，但仍可获得与二甲双胍盐酸盐相同的临床作用，因此也可在药理学上预期其极佳的连锁反应。
因此，本发明的目的是提供具有极佳的物理化学性质如溶解度和稳定性的药学可接受的二甲双胍乙酸盐，以及其制备方法。
此外，本发明的另一目的是提供用于治疗或预防糖尿病及其并发症的包含二甲双胍乙酸盐作为活性成分的药物组合物。
本发明的另一目的是提供用于治疗或预防糖尿病及其并发症的包含具有较低水溶解度的二甲双胍乙酸盐作为活性成分的药物组合物。
本发明的另一目的是提供制备二甲双胍乙酸盐的方法。
本发明的另一目的是提供包含二甲双胍乙酸盐作为活性成分的立即释放或控释的二甲双胍制剂，与二甲双胍盐酸盐相比，即使使用较少的控释剂，所述制剂仍可以控制极佳的药物释放，并且与二甲双胍盐酸盐，所述制剂对于血糖的初始下降和餐后的血糖下降具有更佳的临床作用。
此外，通过使用二甲双胍作为活性成分及使用能够控制二甲双胍的释放速率的基质，可以通过延长药物的胃停留时间来控制二甲双胍在胃肠道中的吸收速度。因此，由于即使在所配制的本发明的控释基质的量少于制备先前的控释片剂所需的基质的量的情况下，仍能在24小时内连续地且充分地实现所述药物的释放，因此可以将片剂的体积设计为适合服用的较小的水平。
技术方案
本发明人通过制备二甲双胍乙酸盐、用于制备其的方法和可用作糖尿病的治疗剂的包含其的组合物来完成本发明。
本发明包括以下12个特征：
(1)下式1表示的二甲双胍乙酸盐；
【式1】
(2)无水物、半水合物或一水合物形式的如上述(1)中所述的二甲双胍乙酸盐；
(3)制备式1的二甲双胍乙酸盐的方法，包括使1当量下式4的二甲双胍盐酸盐与1至2当量无机盐在水或有机溶剂中进行反应，以生成二甲双胍游离碱；随后在除去或不除去无机盐的情况下与1至2当量下式2的乙酸进行反应；
【式2】
【式3】
【式4】
(4)式1的二甲双胍乙酸盐的制备方法，包括使1当量式4的二甲双胍盐酸盐与1至2当量有机碱在水中进行反应，随后在不除去无机盐的情况下与式2的乙酸进行反应；
(5)制备式1的二甲双胍乙酸盐的方法，包括使1当量式4的二甲双胍盐酸盐与1至2当量无机盐或有机碱在水中进行反应，随后在不除去无机盐的情况下与1至2当量的式2的乙酸进行反应；
(6)制备如上述(3)或(4)所述的二甲双胍乙酸盐的方法，包括使1当量二甲双胍游离碱与1当量乙酸进行反应；
(7)制备如上述(3)所述的二甲双胍乙酸盐的方法，其中所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮和乙腈；
(8)制备如上述(3)所述的二甲双胍乙酸盐的方法，其中使1当量二甲双胍盐酸盐和1至2当量无机盐在水或有机溶剂中进行反应，以生成二甲双胍游离碱；
(9)包含上述(1)的二甲双胍乙酸盐作为活性成分的药物组合物，其用于治疗患有糖尿和糖尿病、肥胖症、高脂血症和冠心病并发的代谢综合征患者的糖尿病，并预防其并发症；
(10)如上述(9)所述的药物组合物，其中将所述组合物配制成片剂或胶囊剂形式；
(11)如上述(10)所述的药物组合物，其中所述组合物进一步包含药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂；和
(12)如上述(9)、(10)或(11)所述的药物组合物，其中通过每日口服给药1至3次50至3,000mg的游离碱形式的式1的二甲双胍乙酸盐，所述组合物可有效预防和治疗2型糖尿病、控制体重、降低高脂血症的脂水平、治疗脂肪肝、预防冠心病、治疗多囊卵巢综合征、治疗P53基因缺失的癌症、和预防肌痛、肌细胞细胞毒性和横纹肌溶解症。
有益作用
如本发明所述的二甲双胍乙酸盐具有比先前用作抗糖尿剂的二甲双胍盐酸盐更出色的降低血糖水平的作用，具体而言，餐前和餐后的降低血糖水平作用极为出色，并提高胰岛素敏感性。更具体地，与二甲双胍盐酸盐相比，二甲双胍乙酸盐通过降低溶解度可获得药学和药代动力学上极佳的作用，该作用显示对药物的释放的有效控制。此外，本发明的二甲双胍乙酸盐具有适合的分子量大小，且在药学、药理学或临床方面优于二甲双胍盐酸盐。通过口服，本发明的二甲双胍乙酸盐在小肠中缓慢释放，并同时被分解为二甲双胍和乙酸，随后二甲双胍被吸收，而乙酸抑制小肠内二糖的降解，由此抑制血糖水平的上升。二甲双胍乙酸盐是药学上非常优秀的化合物，显示出最佳的生物利用度。
此外，本发明的二甲双胍乙酸盐的制备方法分步骤进行，以使该方法可以简便地进行且无需特殊装置。通过简便地改进步骤以增加工业适用性，使合成能够在通用生产装置中进行而无需特殊装置，本发明的二甲双胍乙酸盐的制备方法能够低成本地合成新型二甲双胍盐。
与先前的通过使用盐酸制备的二甲双胍盐酸盐相比，本发明的二甲双胍乙酸盐是适于制备药物制剂的晶体酸加成盐，其是仅使用一种盐作为药物的双胍化合物。此外，二甲双胍乙酸盐是新型药物，其片剂制剂可提高药学和物理化学益处如稳定性、非吸湿性和可加工性，而且即使使用了毒性低于二甲双胍盐酸盐的乙酸，其仍可提高对于糖尿病及其并发症的治疗作用。
下表1比较了形成二甲双胍盐酸盐的晶体酸加成盐的盐酸和形成二甲双胍乙酸盐的晶体酸加成盐的乙酸的经口毒性。两种酸的毒性数据摘录自Registry of Toxic Effects of Chemical Substances(RTECS)Data。
【表1】
如表1所示，在制备二甲双胍的晶体酸加成盐中使用的盐酸本身具有毒性，但与盐酸相比，本发明使用的乙酸非常安全。通过以多种方法进行的二甲双胍乙酸盐的药理学作用的体内和体外实验，可以预期与二甲双胍盐酸盐相比二甲双胍乙酸盐在降血糖作用、降脂作用和改善代谢综合征方面更为出色，并且即使使用小于二甲双胍盐酸盐的剂量也能实现治疗目的。
【附图说明】
图1是本发明实施例1的二甲双胍乙酸盐的XRD测量的结果。
图2是比较例1的二甲双胍盐酸盐的XRD测量的结果。
图3是本发明实施例1的二甲双胍乙酸盐的NMR测量的结果。
图4是比较例1的二甲双胍盐酸盐的NMR测量的结果。
图5是本发明实施例1的二甲双胍乙酸盐的IR测量的结果。
图6是比较例1的二甲双胍盐酸盐的IR测量的结果。
图7是本发明实验实施例2的溶解度测量的结果。
图8是本发明实验实施例3的吸湿性测量的结果。
图9是本发明的二甲双胍乙酸盐的pKa测量的结果。
图10是本发明实施例10的二甲双胍乙酸盐的控释片剂和通过比较例2制备的二甲双胍乙酸盐控释片剂的溶解测量的结果。
【具体实施方式】
本发明涉及下式1的新型二甲双胍乙酸盐，其片剂制剂具有更优异的物理化学性质如溶解度、稳定性、非吸湿性和可加工性，且对于治疗或预防糖尿病及其并发症更为有效：
【式1】
此外，本发明提供了式1的二甲双胍乙酸盐的制备方法，包括在水或有机溶剂中将碱加入式4的二甲双胍盐酸盐中，以生成由下式3表示的二甲双胍游离碱；并如下述反应方案1所述，使所得的二甲双胍游离碱和下式2表示的乙酸进行反应：
【反应方案1】
【式2】
【式3】
【式4】
反应方案1中描述的制备方法包括
1)除去式4的二甲双胍盐酸盐的加成盐；
2)将式2的乙酸添加至式3的二甲双胍的反应溶液中以制备混合物；和
3)搅拌混合物，并将所得固体进行过滤、洗涤和干燥，以形成式1的新型晶体酸加成盐。
本发明的二甲双胍的晶体酸加成盐通过将乙酸添加至包含由式3表示的二甲双胍的溶液来制备，包括如下步骤。
在第一个步骤中，可以在水或有机溶剂条件下使用无机盐以得到二甲双胍游离碱。无机盐的实例包括碱性氢氧化物如氢氧化钠和氢氧化钾，优选使用氢氧化钠。对于1当量二甲双胍盐酸盐可使用1至2当量无机盐。
在第二个步骤中，将乙酸加入包含二甲双胍的反应溶液中，对于1当量二甲双胍盐酸盐优选使用1至2当量乙酸。
在第一个和第二个步骤中，使用常见的溶剂作为反应溶剂，并且优选使用选自甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮和乙腈的有机溶剂。
第三个步骤是形成晶体酸加成盐的步骤，并且在-10至80℃的温度下进行。
以更简化的方法的形式提供了不进行第一个和第二个步骤的二甲双胍乙酸盐的制备方法。二甲双胍乙酸盐可通过在水或有机溶剂条件下使二甲双胍盐酸盐和有机碱进行反应来制备，在制备方法中可使用碳酸氢钠、碳酸钾和乙酸钠作为有机碱，优选使用乙酸钠。此外，如反应方案2中所述，也可通过使二甲双胍盐酸盐同时与乙酸和无机盐反应来制备二甲双胍乙酸盐，在制备方法中可以使用碱性氢氧化物如氢氧化钠和氢氧化钾作为无机盐，优选使用氢氧化钠。对于1当量二甲双胍盐酸盐，可使用1至2当量有机碱。
【反应方案2】
除非另有说明，否则术语“二甲双胍乙酸盐”在这里是指二甲双胍(1∶1)乙酸盐。
本发明的二甲双胍乙酸盐包括无水物(anhydride)和水合物，优选无水物。
根据本发明建立二甲双胍游离碱的制备方法，使得该方法可简便地进行且无需任何特殊装置。为除去二甲双胍盐酸盐中的盐酸，美国专利第4,080,472号使用离子交换树脂柱，或者美国专利第4,028,402号公开了在加热至回流和过滤热溶液的苛刻条件下进行的制备方法。然而，通过简化方法使得可以在通用生产装置中制备二甲双胍的有机酸盐且无需特殊装置，从而提高工业实用性，使得本发明能够更低成本地制备二甲双胍的有机酸盐。该游离碱的制备方法可用于与用于制备药学可接受的盐的各种酸进行的反应中。
适用于本发明的游离碱的合成方法的药学可接受的盐的种类如下：盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、亚硫酸盐、连二硫酸盐、乙酸盐、苯甲酸盐、柠檬酸盐、羟乙酸盐、乙醛酸盐、巯基乙酸盐、γ-羟基丁酸盐、palmoate、天冬氨酸盐、谷氨酸盐、吡咯烷酮羧酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、葡萄糖-1-磷酸盐、氯苯氧基乙酸盐、双羟萘酸盐(embonate)、氯苯氧基乙酸盐、马来酸盐、对氯苯氧基异丁酸盐、甲酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、环己烷羧酸盐、己酸盐、辛酸盐、癸酸盐、十六酸盐、十八酸盐、苯磺酸盐、三甲氧基苯甲酸盐、对甲苯磺酸盐、金刚烷羧酸盐、谷氨酸盐、吡咯烷酮羧酸盐、丙二酸盐、苹果酸盐、草酸盐等。
此外，本发明涉及用于治疗或预防糖尿病的药物组合物，其包括式1的二甲双胍乙酸盐作为活性成分并且具有多种组成。
由上述方法制备的本发明的二甲双胍乙酸盐包含药学可接受的载体，因此可以多种口服制剂形式施用，并可以控释和即释(immediately-release)片剂、软胶囊剂、硬胶囊剂、丸剂、颗粒剂或粉剂、注射剂和液体制剂的形式而用于制备用于预防或治疗与糖尿病相关的疾病状态的药物制剂。
考虑到对病患的便利和治疗作用，在上述多种口服制剂中，能够控制药物溶出度的控释片剂被认为是最优选的给药形式，其能够防止血液中剧烈的水平变化并防止副作用和抗药性。
在药学可接受的载体中，使用选自肠溶聚合物、疏水化合物和亲水聚合物的成分作为用于控释的基质剂。可使用选自聚乙酸乙烯酯邻苯二甲酸酯、甲基丙烯酸共聚物、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、虫胶、乙酸纤维素邻苯二甲酸酯、丙酸纤维素邻苯二甲酸酯、(聚(甲基丙烯酸/甲基丙烯酸甲酯)共聚物)的至少一个或两个化合物的混合物作为肠溶聚合物，优选使用羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯。
疏水化合物可选自药学可接受的聚乙酸乙烯酯、聚甲基丙烯酸酯共聚物如聚(丙烯酸乙酯/甲基丙烯酸甲酯)共聚物、聚(丙烯酸乙酯/甲基丙烯酸甲酯/三甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯)共聚物、乙基纤维素和乙酸纤维素、脂肪酸和脂肪酸酯、脂肪酸醇、蜡和无机化合物等。特别地，至少一种或两种化合物可选自作为脂肪酸和脂肪酸酯的硬脂酸棕榈酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、山嵛酸甘油酯、十六酸十六酯、单油酸甘油酯、和硬脂酸；作为脂肪酸醇的十八醇十六醇混合物(cetostearyl alcohol)、鲸蜡醇和硬脂醇；作为蜡的巴西棕榈蜡、蜂蜡和微晶蜡；作为无机化合物的滑石、沉淀碳酸钙、磷酸氢钙、氧化锌、氧化钛、高岭土、膨润土、蒙脱石和硅酸镁铝(vee gum)等。
亲水性聚合物的实例包括但不限于多糖、纤维素衍生物、树胶、蛋白质、聚乙烯基衍生物、聚甲基丙烯酸酯共聚物、聚乙烯衍生物、羧基乙烯基聚合物和它们的混合物。特别地，糖的实例包括但不限于糊精、聚糊精、葡聚糖、果胶和果胶衍生物、藻酸盐、聚(半乳糖醛酸)、木聚糖、阿拉伯木聚糖、阿拉伯半乳糖、淀粉、羟丙基淀粉、淀粉酶、支链淀粉和它们的混合物；纤维素衍生物的实例包括但不限于羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、甲基纤维素、、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素乙酸酯琥珀酸酯、羟乙基甲基纤维素和它们的混合物；树胶的实例包括但不限于瓜尔胶、刺槐豆胶、黄蓍胶、角叉菜胶、金合欢树胶(gum acasia)、阿拉伯树胶、胞外多糖胶、黄原胶和它们的混合物；蛋白质的实例包括但不限于明胶、酪蛋白、玉米蛋白和它们的混合物；聚乙烯基衍生物的实例包括但不限于聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇缩醛二乙基氨基乙酸酯和它们的混合物；聚甲基丙烯酸酯共聚物的实例包括但不限于聚(甲基丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸(2-二甲基氨基乙基)酯、甲基丙烯酸甲酯)共聚物、聚(甲基丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯)共聚物、聚(甲基丙烯酸、丙烯酸乙酯)共聚物和它们的混合物；聚乙烯衍生物的实例包括但不限于聚乙二醇、聚环氧乙烷和它们的混合物；羧基乙烯基聚合物的实例包括但不限于卡波姆。
损害本发明作用的药学可接受的稀释剂的实例包括但不限于淀粉、微晶纤维素、乳糖、葡萄糖、甘露醇、藻酸盐、碱土金属盐、粘土、聚乙二醇和磷酸二钙等。粘合剂的实例包括但不限于淀粉、微晶纤维素、高分散硅石、甘露醇、乳糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、天然树胶、合成树胶、共聚维酮(copovidone)和明胶等。崩解剂的实例包括但不限于淀粉或变性淀粉，如羟基乙酸淀粉钠、玉米淀粉、马铃薯淀粉或预糊化淀粉等；粘土如膨润土、蒙脱石和硅酸镁铝等；纤维素如微晶纤维素、羟丙基纤维素或羧甲基纤维素等；褐藻胶如藻酸钠或藻酸；交联纤维素如交联甲羧纤维素钠等；树胶如瓜尔胶和黄原胶等；交联聚合物，如交联聚维酮；泡腾制剂如碳酸氢钠和柠檬酸等。润滑剂的实例包括但不限于滑石、硬脂酸镁、碱土金属硬脂酸钙、锌、月桂基硫酸盐、氢化植物油、苯甲酸钠、硬脂酰富马酸钠、单硬脂酸甘油酯和聚乙二醇4000。
本发明对于使用赋形剂无限制，并且所述赋形剂的含量可以在对于本领域技术人员而言常见的含量范围内。
如上所述，二甲双胍乙酸盐可以以多种用于口服给药的制剂形式施用，并且本发明药物组合物的对人体的剂量可以根据患者的年龄、性别、体重、国籍、健康状况和疾病状况而变化，也可根据医嘱进行分批给药。
将参考以下的实施例更详细地描述本发明。以下的实施例仅用于说明目的，不意图对本发明的范围进行限制。
实施例
实施例1：二甲双胍乙酸盐的制备
室温下，将2kg(1当量)二甲双胍盐酸盐和483g(1当量)氢氧化钠在10L甲醇中搅拌2小时，然后将残留固体过滤，并将滤液减压浓缩。随后将15L丙酮加入所得固体中并搅拌。将不溶物质过滤，并将滤液减压浓缩，得到1，230g二甲双胍游离碱。将二甲双胍游离碱溶于33L丙酮，加入2.8L(4当量)乙酸，随后将混合物在室温下搅拌2小时。将所得晶体过滤，在水和丙酮中重结晶，得到1,089g二甲双胍乙酸盐(收率：47.7％)。
实施例2：二甲双胍乙酸盐的制备
在10L反应器中加入5L水、2kg(1当量)二甲双胍盐酸盐和578g(1.2当量)氢氧化钠，在室温下搅拌2小时。随后在1小时内加入1L(1.45当量)乙酸，并将混合物在室温下搅拌过夜。所得晶体用丙酮-水(12∶1)混合物洗涤，随后用丙酮洗涤，在60℃下干燥，得到1,112g二甲双胍乙酸盐(收率：48.7％)。
实施例3：二甲双胍乙酸盐的制备
在反应器中加入1kg(1当量)二甲双胍盐酸盐和2L水，然后加入0.5L(1.45当量)乙酸，并在30℃下搅拌两小时至全部溶解。然后在1小时内向反应溶液中加入289.8g(1.2当量)氢氧化钠水溶液。将所得晶体过滤并用丙酮洗涤，然后在60℃下干燥，得到601g二甲双胍乙酸盐(收率：52.7％)。
实施例4：二甲双胍乙酸盐的制备
在反应器中加入20.0g(1当量)二甲双胍盐酸盐和30ml水，然后加入10ml(1.45当量)乙酸，并在30℃下搅拌两小时至全部溶解。向反应溶液中加入1.23g(1.5当量)氢氧化钠水溶液。将所得晶体过滤并用丙酮洗涤，然后在60℃下干燥，得到16.7g二甲双胍乙酸盐(收率：73.0％)。
实施例5：二甲双胍乙酸盐的制备
在反应器中加入20.0g(1当量)二甲双胍盐酸盐、50ml水和19.72g(1.2当量)乙酸钠三水合物并搅拌。随后将所得晶体过滤并用丙酮洗涤，然后在60℃下干燥，得到11.72g二甲双胍乙酸盐(收率：51.3％)。
实施例6：二甲双胍乙酸盐的制备
在室温下，在20L反应器中加入0.4L水、241.50g氢氧化钠、9L丙酮和1kg二甲双胍盐酸盐并搅拌2小时40分。将所得晶体过滤并用丙酮洗涤。加入0.2L水和1L乙酸并搅拌。将所得晶体过滤并用丙酮洗涤，然后在60℃下干燥，得到1,056g二甲双胍乙酸盐(收率：92.4％)。
实施例7：二甲双胍乙酸盐的制备
在反应器中加入78g(1当量)二甲双胍游离碱、234ml异丙醇、234ml水和57ml(1.65当量)乙酸并搅拌。将所得晶体过滤并用异丙醇洗涤，然后在60℃下干燥，得到54.6g二甲双胍乙酸盐(收率：47.8％)。
实施例8：二甲双胍乙酸盐的制备
在室温下，将20.00g(1当量)二甲双胍盐酸盐和4.84g(1当量)氢氧化钠在200ml乙醇中搅拌两小时，然后将残留固体过滤，并将滤液减压浓缩。随后向所得固体中加入300ml丙酮并搅拌。将不溶物质过滤，并将滤液减压浓缩得到12.0g二甲双胍游离碱。在所述二甲双胍游离碱中加入500ml丙酮和10ml(1.45当量)冰醋酸，随后将混合物进行搅拌。将所得晶体过滤并用丙酮洗涤，然后在60℃下干燥，得到13.6g二甲双胍乙酸盐(收率：59.5％)。
实施例9：二甲双胍乙酸盐的制备
在反应器中加入20.0g(1当量)二甲双胍盐酸盐和50ml水，然后加入10ml(1.45当量)冰乙酸，并在30℃下搅拌两小时至全部溶解。然后向反应溶液中加入10.2g(1.5当量)氢氧化钾水溶液。将所得晶体过滤并用丙酮洗涤，然后在60℃下干燥，得到13.3g二甲双胍乙酸盐(收率：58.2％)。
实施例10：二甲双胍乙酸盐的药物组合物
按下表2中标明的含量将二甲双胍乙酸盐、羟丙基甲基纤维素和轻质无水硅酸倒入并混合，然后在16至17MPa的压力下碾压，得到块状物(slug)。将所得的块状物粒化为14号大小，与硬脂酸镁混合，并将混合物压缩以制备片剂层。然后使用Hi-Coater(SFC-30N，Sejong Machine Co.，Ltd，韩国)，用Opadry OY-C-7000A作为包衣剂形成薄膜包衣层，以制备包含500mg二甲双胍乙酸盐的二甲双胍控释片剂。
实施例11：二甲双胍乙酸盐的药物组合物
按下表2中标明的含量将二甲双胍乙酸盐、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素和轻质无水硅酸倒入并混合，然后在16至17MPa压力下碾压，以得到块状物。将所得的块状物粒化为14号大小，与硬脂酸镁混合，并将混合物压缩以制备片剂。然后使用Hi-Coater(SFC-30N，Sejong Machine Co.，Ltd，韩国)，用Opadry OY-C-7000A作为包衣剂形成薄膜包衣层，以制备包含500mg二甲双胍乙酸盐的二甲双胍控释片剂。
实施例12：二甲双胍乙酸盐的药物组合物
按下表2中标明的含量将20号大小的二甲双胍乙酸盐、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素和山嵛酸甘油酯倒入并混合。将轻质无水硅酸过35号筛并与硬脂酸镁混合，并将混合物压缩以制备片剂层。然后使用Hi-Coater(SFC-30N，Sejong Machine Co.，Ltd，韩国)，用Opadry OY-C-7000A作为包衣剂形成薄膜包衣层，以制备包含750mg二甲双胍乙酸盐的二甲双胍控释片剂。
比较例1：二甲双胍盐酸盐的制备
将500mg二甲双胍游离碱溶解于30ml丙酮中，然后加入280ml浓盐酸，并在室温下搅拌2小时。将所得晶体过滤并用丙酮洗涤，然后在70℃下用热空气干燥，得到490mg二甲双胍盐酸盐(收率：76.4％)。
比较例2：二甲双胍盐酸盐的药物组合物
按下表2中标明的含量将二甲双胍盐酸盐、羟丙基甲基纤维素和轻质无水硅酸倒入并混合，然后在16至17MPa压力下碾压，得到块状物。将所得的块状物粒化为14号大小，并与硬脂酸镁混合，并将混合物压缩以制备片剂。然后使用Hi-Coater(SFC-30N，Sejong Machine Co.，Ltd，韩国)，用Opadry OY-C-7000A作为包衣剂形成薄膜包衣层，以制备包含500mg二甲双胍盐酸盐的二甲双胍控释片剂。
比较例3：二甲双胍盐酸盐的药物组合物
按下表2中标明的含量将二甲双胍盐酸盐、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素和轻质无水硅酸倒入并混合，然后在16至17MPa压力下碾压，得到块状物。将所得的块状物粒化为14号大小，并与硬脂酸镁混合，并将混合物压缩以制备片剂。然后使用Hi-Coater(SFC-30N，Sejong Machine Co.，Ltd，韩国)，用Opadry OY-C-7000A作为包衣剂形成薄膜包衣层，以制备包含500mg二甲双胍盐酸盐的二甲双胍控释片剂。
比较例4：二甲双胍盐酸盐的药物组合物
按下表2中标明的含量将20号大小的二甲双胍盐酸盐、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素和山嵛酸甘油酯倒入并混合。将轻质无水硅酸粒化为35号大小，并与硬脂酸镁混合，并将所述的混合物压缩以制备片剂层。然后使用Hi-Coater(SFC-30N，Sejong Machine Co.，Ltd，韩国)，用Opadry OY-C-7000A作为包衣剂形成薄膜包衣层，以制备包含750mg二甲双胍盐酸盐的二甲双胍控释片剂。
【表2】
试验实施例1：二甲双胍乙酸盐结构的定性确定
从通过实施例1制备的式1二甲双胍盐酸盐的X-射线衍射光谱、核磁共振谱数据、红外光谱数据和熔点，可以确定本发明的二甲双胍乙酸盐与通过比较例1制备的式4的二甲双胍盐酸盐具有不同的晶体形式和结构。
1)粉末X-射线衍射分析光谱
在下表3中表明在图1中描述的粉末X-射线衍射分析光谱中显示的二甲双胍乙酸盐的特征峰。其中“2θ”表示衍射角，“d”表示晶面间的距离，“I/Io”表示峰的相对强度。以下分析通过可获自Rigaku公司的D/MAX-2200V X-射线衍射仪(XRD)进行。通过比较图1所示的二甲双胍乙酸盐和图2所示的二甲双胍盐酸盐，可以确定得到了不同的晶体。
【表3】
2θ d I/Io 11.940 7.4063 223 15.740 5.6257 318 17.699 5.0070 1000 19.281 4.5997 618 20.231 4.3666 595 21.399 4.1489 213 21.819 4.0699 157 24.040 3.6988 649 26.280 3.3884 501 27.839 3.2020 407 28.540 3.1250 670 29.920 2.9839 251 33.480 2.6743 109 35.580 2.5211 102
2)熔点的测量
可以确定通过实施例1制备的式1二甲双胍乙酸盐的熔点为227.3-228.0℃，比较例1的二甲双胍盐酸盐的熔点为222.8-224.0℃。
3)元素分析
通过比较一价盐和二价盐的实际测量值和理论值，从实施例1中制备的式1的二甲双胍乙酸盐的元素分析可以确定1当量乙酸结合在二甲双胍乙酸盐中。表4中所示的分析结果通过FISONS EA-1108元素分析仪对C、H和N的分析，和通过Thermo Finnegan FLASH EA-1112元素分析仪对O的分析获得。
【表4】
分析项 C(％) H(％) N(％) O(％) 二甲双胍乙酸盐的测量值 38.2 8.2 36.8 17.0 二甲双胍单乙酸盐的理论值 38.09 7.99 37.01 16.91 二甲双胍二乙酸盐的理论值 38.55 7.68 28.10 25.67
4)核磁共振(NMR)谱的数据
通过确定实施例1中制备的式1的二甲双胍乙酸盐的核磁共振(1H-NMR)峰(图3)和比较例1的二甲双胍盐酸盐的核磁共振峰(图4)，由于可以确定在δ＝1.885ppm处产生乙酸上的甲基，因此可以发现乙酸与二甲双胍游离碱结合。
5)红外光谱(FT-IR)数据
通过确定实施例1中制备的式1的二甲双胍乙酸盐的红外光谱(FT-IR)峰(图5)和比较例1的二甲双胍盐酸盐的红外光谱峰(图6)，由于峰完全改变，具体而言，在1622cm-1处产生的乙酸上的羰基，因此可以发现乙酸与二甲双胍游离碱结合。
试验实施例2：水中溶解度的测量
将实施例1中制备的式1的二甲双胍乙酸盐在水中的溶解度与用作二甲双胍药物组合物中的有效成分的二甲双胍盐酸盐在水中的溶解度比较。
试验条件和方法如下所述。
1)将水充入搅拌的水浴中，并将温度设定为30℃。
2)将20mL水充入100mL Erlenmeyer烧瓶中，向其中分别倒入10g二甲双胍盐酸盐和二甲双胍盐酸盐。
3)将分别包含二甲双胍乙酸盐和二甲双胍盐酸盐的Erlenmeyer烧瓶固定在水浴的支架上，随后在30℃下将该装置以每分钟60次的速度进行操作。
4)每隔24小时取出样品并进行过滤，随后使用紫外光谱仪(λ＝233nm)通过定量分析计算它们的浓度。
上述的实验过程重复进行5天，得到在30℃下的饱和溶解度和达到饱和溶解度的速率，如下表5中所示。
【表5】
如表5所示，5天后，从二甲双胍乙酸盐和二甲双胍盐酸盐各自的饱和溶解度测量中可以看出它们的饱和溶剂度分别是292.48mg/mL和534.61mg/mL，表明乙酸盐的溶解度低于盐酸盐的溶解度。如表5所示，二甲双胍乙酸盐的饱和溶解度比二甲双胍盐酸盐的饱和溶解度低，并且其达到饱和溶解度的速率比盐酸盐慢。因此，由于在制备二甲双胍控释片剂中通过使用更少的聚合物赋形剂能够实现期望的释放速率，因此二甲双胍乙酸盐在制剂方面具有益处。
试验实施例3：吸湿性的测量
对实施例1中制备的式1的二甲双胍乙酸盐和用作二甲双胍药物组合物的活性成分的可商购的二甲双胍盐酸盐的吸湿性进行比较。
实验条件和方法如下。
1)在40℃下将二甲双胍盐酸盐和二甲双胍乙酸盐分别干燥24小时，以达到恒定量。
2)将KH2PO4(22g/100g)饱和溶液充入干燥器底部，并将内部湿度设置为95％，将干燥器所在空间的温度保持在25℃。
3)分别精确取100mg二甲双胍盐酸盐和二甲双胍乙酸盐，并且它们的重量与容器一同进行测量。
4)将二甲双胍盐酸盐和二甲双胍乙酸盐与容器一同置于干燥器中，并间隔24小时与容器一同取出，测量它们的重量，通过增加的重量计算吸收的水分。
将上述实验步骤重复6天后，95％RH，25℃下的吸湿性示于下表6中。
【表6】
如表6所示，二甲双胍乙酸盐的吸湿性低于二甲双胍盐酸盐的吸湿性。
由于二甲双胍盐酸盐具有高吸湿性，其在运输过程中吸收水分，其颗粒相互压缩形成聚集体，但二甲双胍乙酸盐能够大大降低其状态在运输过程中改变的可能性，并在产品制备中在药物制备步骤如压缩步骤中显示出极佳的流动性且长时间不形成聚集体。
试验实施例4：pKa的确定实验(光谱分析)
根据pH值，离子化的实施例1中制备的式1的二甲双胍乙酸盐可为酸、游离碱或两性化合物的形式，由此在各自的滴定点产生pH变化。因此，由计算的pH值和实际测量的pH值的差得到pKa值。pKa值示于下表7中，其结果示于图9中。
【表7】
试验实施例5：二甲双胍乙酸盐和二甲双胍盐酸盐的溶出曲线比较试验
使用通过实施例10制备的本发明的二甲双胍乙酸盐的控释片剂和通过比较例2制备的二甲双胍盐酸盐的控释片剂，通过Korean Pharmacopoeia中的通用实验中的溶出度实验中的桨法(paddle method)测量溶出性质，结果如图10所示。
将被设计为除活性成分不同外其它都相同的二甲双胍乙酸盐控释片剂和二甲双胍盐酸盐控释片剂的溶出性质进行比较，从实验结果中可发现二甲双胍乙酸盐由于溶解度的差异而显示出速率更低和时间更长的溶出。
试验实施例6：二甲双胍乙酸盐和二甲双胍盐酸盐的有效性比较实验
1.降低血糖水平的作用
本实验支持本发明的作用。在该实验中，将实施例1的二甲双胍乙酸盐和可商购的二甲双胍盐酸盐给药至试验动物，为了比较它们的作用，进行下表8所示的步骤。
【表8】
主题 二甲双胍乙酸盐和二甲双胍盐酸盐的降血糖作用的对比试验 目的 通过将二甲双胍乙酸盐和二甲双胍盐酸盐给药至糖尿病诱导的试验动物来比 较降血糖作用 实验对象 210至230g的8周龄雄性大鼠 试验方法 1)选择在5天的适应期内被判断为健康的大鼠。 2)间隔48小时，通过静脉注射四氧嘧啶(40mg/kg)两次在大鼠中诱导糖尿病。 3)选择葡萄糖为至少13.8mmol/L的个体，并在给药四氧嘧啶6天后分为三组。 4)通过腹膜向各组给药盐水(对照组；n＝5)、二甲双胍盐酸盐(对应于0.05mg 的二甲双胍活性成分的量；n＝5)、二甲双胍乙酸盐(对应于0.05mg二甲双胍推 定成分的量；n＝5)。给药后，在10小时内进行确定血糖浓度。 评价方法 [葡萄糖浓度的测定] 1)在给药后，在0、2、4、6、8和10小时进行测量血液中的葡萄糖浓度。 2)在各时间段取尾部静脉血液以测量血液中的葡萄糖浓度，作为血糖水平。
血糖降低实验的详细结果示于下表9中。
【表9】
如表9所示，对照组在给药10小时后的葡萄糖浓度是14.4mmol/L。二甲双胍乙酸盐给药组在给药10小时后的葡萄糖浓度是6.9mmol/L，表明降低了约7.5mmol/L。同时，二甲双胍乙酸盐给药组在给药10小时后的血液中的血糖浓度是9.4mmol/L，表明低于对照组中的血糖浓度，但高于二甲双胍乙酸盐组中的血糖浓度。换言之，可以确定二甲双胍乙酸盐的降低血糖作用比二甲双胍盐酸盐的降血糖作用更为出色。
2.餐后血糖下降的实验
本实验支持本发明的作用。在本实验中，将实施例1的二甲双胍乙酸盐和可商购的二甲双胍盐酸盐给药至试验动物，为了比较它们的作用，进行下表10中所示的步骤。
【表10】
二甲双胍乙酸盐和二甲双胍盐酸盐的OGTT(口服葡萄糖耐受实验)
餐后血糖降低实验的详细结果示于下表11中。
【表11】
<单位：mg/dl>
组 0min 20min 40min 60min 90min 120min 240min G1 113.00±2.64 105.25±4.16** 115.13±4.08* 122.75±4.88** 113.38±5.85 114.88±5.59 77.00±3.55 G2 101.63±4.94 262.13±15.33** 212.00±15.68 170.75±17.38 134.50±15.64 106.63±10.44 63.63±4.94 G3 101.63±4.58 213.13±11.36** 201.00±21.78 165.75±15.91 129.63±8.08 106.38±4.07 80.00±3.73 G4 104.13±6.53 190.25±16.05** 169.63±21.19 141.50±18.24* 106.38±13.75 86.25±11.25** 69.25±7.96 G5 104.00±6.53 246.00±16.70** 194.38±8.02 151.50±5.45* 122.38±4.69 111.75±6.45 83.63±3.49 G6 107.13±2.84 227.50±20.57** 187.25±15.16 147.25±9.89* 121.25±8.15 106.75±5.65 87.13±4.50 G7 104.75±3.98 187.38±10.32** 167.63±7.04 135.63±5.53** 110.50±4.78 87.88±9.90** 64.38±7.69 G8 106.13±4.06 337.88±24.06 260.00±26.29 198.75±22.16 156.38±18.83 131.00±17.11 81.00±6.48
*与G8有显著的差别，P＜0.05
**与G8有显著的差别，P＜0.01
1)在给药蔗糖后20分钟，与G8相比，在G3、G4、G6和G7中能够观察到血糖降低的作用。
2)在G3中，在120分钟时能够观察到降低血糖作用，在G2和G3中，在240分钟时能够观察到降低血糖作用。
3)可以发现，在给药蔗糖后20至60分钟，在200和400mg/kg剂量组，二甲双胍乙酸盐的降低血糖作用高于二甲双胍盐酸盐的降低血糖作用。
4)从所述结果能够推论二甲双胍乙酸盐的餐后降低血糖作用比二甲双胍盐酸盐的餐后降低血糖作用更为出色。
工业实用性
如上所述，本发明的二甲双胍乙酸盐具有比先前的二甲双胍盐酸盐更为出色的降血糖作用，具体而言，与餐后控制血糖能力较弱的二甲双胍盐酸盐相比，二甲双胍乙酸盐的餐后降血糖作用显著更佳。此外，本发明增强了工业实用性，通过简单地改进步骤，使得与难以进行或必须在苛刻的条件下进行的先前的制备方法相比可以在通用的制备装置中进行合成而无需特殊装置，从而使得新型二甲双胍盐可以以更低的成本合成。此外，由于二甲双胍乙酸盐的溶解度低于二甲双胍盐酸盐，因此能够防止血糖过量降低和因大量释放而造成的药物损失。因此，由于可配制成即释形式和1天24小时的控释形式的制剂，因此二甲双胍乙酸盐是非常有用的药物活性成分，并由此易于维持血液中相同的浓度。