环糊精组合物制备黄芪总皂苷注射液的方法.pdf

摘要
申请专利号：	CN200910073999.1	申请日：	2009.03.21
公开号：	CN101502558A	公开日：	2009.08.12
当前法律状态：	授权	有效性：	有权
法律详情：	授权\|\|\|实质审查的生效\|\|\|公开
IPC分类号：	A61K36/481; A61K47/40; A61K9/10; A61P9/10	主分类号：	A61K36/481
申请人：	山西振东泰盛制药有限公司
发明人：	刘近荣; 沈达; 韩雪锋
地址：	037300山西省大同市经济技术开发区湖滨大街56号
优先权：
专利代理机构：	山西太原科卫专利事务所	代理人：	朱源;郑晋周
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内容摘要

本发明涉及一种黄芪制剂的制备方法，具体为一种环糊精组合物制备黄芪总皂苷注射液的方法。解决现有黄芪注射液制造过程中存在的质量控制不稳定的问题。步骤包括，取黄芪总皂苷溶于乙醇中，取环糊精组合物溶于7000-9000毫升注射用水中，将黄芪总皂苷乙醇溶液加到环糊精溶液中，60℃加热搅拌至无醇味；加入聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯，搅拌至溶液澄清；加入氯化钠，搅拌溶解，活性炭处理，过滤脱炭；精滤，灌封，灭菌得黄芪总皂苷氯化钠注射液。

权利要求书

1、  一种环糊精组合物制备黄芪总皂苷注射液的方法，其特征在于：步骤包括，
(1)取2.4-3.0g黄芪总皂苷溶于500-1000ml乙醇中，取环糊精组合物溶于7000-9000毫升注射用水中，将黄芪总皂苷乙醇溶液加到环糊精溶液中，60℃加热搅拌至无醇味；
(2)加入聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯50-200g，搅拌至溶液澄清；
(3)加入氯化钠90g，搅拌溶解，活性炭处理，过滤脱炭；
(4)补充注射用水至10000毫升，精滤，灌封，灭菌，
即得黄芪总皂苷含量为0.24-0.3毫克/毫升的黄芪总皂苷氯化钠注射液。

2、  根据权利要求1所述的环糊精组合物制备黄芪总皂苷注射液的方法，其特征在于：环糊精组合物为β-环糊精和羟丙基-β-环糊精按照质量比1：1-2混合的组合物。

3、  根据权利要求1所述的环糊精组合物制备黄芪总皂苷注射液的方法，其特征在于：包合时黄芪总皂苷和环糊精组合物所用质量比为1：4-10。

4、  根据权利要求1所述的环糊精组合物制备黄芪总皂苷注射液的方法，其特征在于：黄芪总皂苷含量为0.27毫克/毫升。

说明书

环糊精组合物制备黄芪总皂苷注射液的方法
技术领域
本发明涉及一种黄芪制剂的制备方法，具体为一种环糊精组合物制备黄芪总皂苷注射液的方法。
背景技术
黄芪为常用中药材，具有养元，扶正去邪、养心通脉、健脾利湿之功效，现代临床广泛用于心气虚损、血脉淤阻之病毒性心肌炎、心功能不全及脾虚湿困之肝炎等。黄芪注射液是一种常见的剂型，黄芪注射液在临床大量用于胸痹心痛症的治疗，疗效确切。经研究，其心血管系统活性主要有效成分为黄芪皂苷类，药理实验证明它与黄芪注射液疗效相当。目前临床使用的黄芪注射液尚存在含量不高、缺乏可靠质量标准、药效不易控制、临床使用会引起病人过敏等反应，使用安全性不高等不足。
现有黄芪注射液的制备方法种类比较多，例如专利号为031419275公开了一种黄芪总苷注射剂制剂及其制备方法。在该专利申请中，提供了一种含量明确、质量可控、性能稳定的黄芪总皂苷注射液的制备方法。原料使用了黄芪总皂苷，助溶剂(尤其是以丙二醇、乙醇组合为最佳，而且用量为0。5：1-1：0。5)，黄芪总皂苷的含量为5-50毫克/瓶，在该专利说明书中，记载到该申请制造的药物为地奥黄芪注射液。而且该注射液对犬急性心肌梗塞的保护作用进行了实验研究。直接以经提取纯化的黄芪总皂苷为原料制备成注射剂，可以提高黄芪总皂苷的含量，增加质量可控性，使黄芪制剂更有效、安全。但黄芪总苷较难溶于水，将其制备成注射剂时需要寻找合适的方法增加其溶解度。专利号为200510095308.x的专利公布了一种黄芪甲苷环糊精包含物的制备方法，主要技术方案是将黄芪甲苷制成环糊精包合物，根据剂型的需要再配以辅料制备成各类不同的剂型。但黄芪总皂苷成分复杂，除黄芪甲苷还含其它皂苷类，各种皂苷间又存在性质上的差异，实验表明，仅用上述方法先制备出环糊精包合物再配制黄芪总皂苷注射液的过程中，环糊精经过干燥且存放一段时间后再溶解于水的过程中就会出现包合不完全、原料损失大、不易制得澄清溶液、溶液不稳定、易出现沉淀等问题。
发明内容
本发明为了解决现有黄芪注射液制造过程中存在的质量控制不稳定的问题而提供了一种环糊精组合物制备黄芪总皂苷注射液的方法。
本发明是由以下技术方案实现的，一种环糊精组合物制备黄芪总皂苷注射液的方法，步骤包括，
(1)取2.4-3.0g黄芪总皂苷溶于500-1000ml乙醇中，取环糊精组合物溶于7000-9000毫升注射用水中，将黄芪总皂苷乙醇溶液加到环糊精溶液中，60℃加热搅拌至无醇味；
(2)加入聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯50-200g，搅拌至溶液澄清；
(3)加入氯化钠90g，搅拌溶解，活性炭处理，过滤脱炭；
(4)补充注射用水至10000毫升，精滤，灌封，灭菌。
即得黄芪总皂苷含量为0.24-0.3毫克/毫升的黄芪总皂苷氯化钠注射液。以0.27毫克/毫升为最佳。
上述制备方法中，包合所用环糊精组合物是β-环糊精和羟丙基-β-环糊精按照质量比1：1-2混合的组合物。包合时黄芪总皂苷和环糊精组合物所用质量比为1：4-10。聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯的使用浓度为0.5％-2％或5mg/ml-20mg/ml。
以不同投料比，采用搅拌法进行包合，β-环糊精和羟丙基-β-环糊精按照质量比1：1、1：2、1：3、1：4、1：5、1：10进行组合并与黄芪总皂苷1：1进行包合，取样测量黄芪总皂苷、黄芪甲苷含量，结果以β-环糊精和羟丙基-β-环糊精按照质量比1：1、1：2的组合物投料比较适宜，1：3、1：4、1：5、1：10的组合物投料与1：1、1：2的组合物投料比较，含量相差不是很明显，说明1：1-2的组合物投料即可达到最佳的包合效果，随着投料比例的增加而含量变化不明显，说明部分环糊精为投料过量，未参与包合，属无效成分，因此我们确定了β-环糊精和羟丙基-β-环糊精按照质量比1：1-2为最佳组合投料比。不同的组合物投料比包合物中黄芪总皂苷、黄芪甲苷含量及包合率如下表所示。0.2735mg/ml，为0.0921mg/ml。
表1 不同的组合物投料比包合物中黄芪总皂苷和黄芪甲苷含量及包合率

环糊精组合物比例确定后我们又以β-环糊精和羟丙基-β-环糊精按照质量比1：2的组合物，与黄芪总皂苷按1：1、2：1、4：1、8：1、10：1、20：1进行包合，测包合物中黄芪总皂苷和黄芪甲苷含量，结果以黄芪总皂苷与环糊精组合物按1：4-10的投料比较适宜，1：1-2投料，测得含量较低，说明包合不完全，1：20投料与1：4-10比较，含量相差不是很明显，说明1：4-10之间投料即可达到最佳的包合效果，随着投料比例的增加而含量变化不明显，说明部分环糊精为投料过量，未参与包合，属无效成分，因此我们确定了黄芪总皂苷和环糊精组合物的最佳投料比为1：4-10。不同投料比包合物中黄芪总皂苷和黄芪甲苷所含数量及包合率如下表所示。
表2 不同投料比包合物中黄芪总皂苷和黄芪甲苷所含数量及包合率

我们将上述方法制得的黄芪总皂苷包合物按照注射剂的制备方法制成黄芪总皂苷氯化钠注射液，进行留样观察，在贮存6个月后100瓶中有1瓶出现了轻微混浊，说明采用环糊精包合物制得的黄芪总皂苷氯化钠注射液还是不理想，为此我们又在上述工艺中加入了聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯增溶剂，并对其用量及稳定性进行了试验。
我们选用β-环糊精和羟丙基-β-环糊精按照质量比1：2的组合物，黄芪总皂苷和该环糊精组合物按质量比为1：4进行包合，并按0.1％-5％的浓度加入聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯，制备成黄芪总皂苷氯化钠注射液，制备过程中发现加入0.5％-2％浓度的聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯明显提高了黄芪甲苷的含量，并且在相同贮存条件下放置6个月进行观察，结果所有加入聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯的注射剂都没有出现混浊，均为透明澄清液体。加入不同浓度聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯黄芪总皂苷与黄芪甲苷的含量如下表所示。
表3 不同浓度聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯中黄芪总皂苷和黄芪甲苷含量

为了进一步验证本发明所制得的注射剂的稳定性，我们选择同一批注射剂在60℃、18-26℃、0-4℃、4576lx光照条件下进行试验。结果如下表：
表5 注射剂稳定性试验结果

条件时间(天) 澄明度鉴别黄芪总皂苷的含量 (mg/ml) 黄芪甲苷的含量 (mg/ml) 60℃ 0 30 90 180澄清澄清澄清澄清阳性阳性阳性阳性0.27420.2739 0.27370.27370.09310.0921 0.09180.0917 18-26℃ 0 30 90 180澄清澄清澄清澄清阳性阳性阳性阳性0.27440.2740 0.27380.27370.09330.0927 0.09190.0915 0-4℃ 0 30 90 180澄清澄清澄清澄清阳性阳性阳性阳性0.27380.2739 0.27350.27310.09290.0925 0.09160.0918 4576lx 0 30 90 180澄清澄清澄清澄清阳性阳性阳性阳性0.27430.2739 0.27310.27270.09340.0927 0.09160.0909

经过大量试验可以发现黄芪总皂苷难溶于水，将黄芪总皂苷用两种环糊精的组合物制成包合物且加入增溶剂聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯后有效成分的溶解度和溶液的稳定性显著提高。
与背景技术中所述的先制造出黄芪总皂苷环糊精包含物，再利用包合物制备注射液的技术相比，用本发明方法直接制得的黄芪总皂苷氯化钠注射液，稳定性好，药物含量高，疗效好，毒副作用低。将本发明制得的黄芪总皂苷氯化钠注射液的澄明液体在4-8℃、室温及60℃温度条件下放置6个月，溶液性状不发生任何变化，取样测黄芪总苷含量，未发生变化，药液稳定、可靠。
我们还对本发明所述的黄芪总皂苷氯化钠注射液对垂体后叶素引起的大鼠心肌缺血的影响做了研究。
受试药物：黄芪总皂苷氯化钠注射液，本发明制得；黄芪注射液，上海禾丰制药有限公司生产，外观呈褐色，每ml含生药2g；垂体后叶素注射液：上海第一生化药业有限公司生产，临用前以生理盐水配成2U/ml备用。以上两种药物均在所记录的各项指标稳定30分钟后静脉滴注。
动物：健康雄性SD大鼠，第二军医大学实验动物中心提供，50只，体重为350-450克，随机分为5组如下：
分组                    动物数(只)      剂量         给药途径
生理盐水组              10              5mi/Kg       静脉滴注
黄芪注射液组            10              2g/Kg        静脉滴注
黄芪总皂苷注射液低剂量组10              1.5mg/Kg     静脉滴注
黄芪总皂苷注射液中剂量组10              5mg/Kg       静脉滴注
黄芪总皂苷注射液高剂量组10              15mg/Kg      静脉滴注
实验方法：
大鼠用3％戊巴比妥钠45mg/Kg腹腔注射麻醉。分离左股静脉并留置聚乙烯管以备给药。以针状电极插入四肢皮下，记录正常标准肢体II导心电图(ECG-6511型心电图机，上海光电医用电子仪器有限公司)。如有心电图异常则该动物弃之不用。稳定30min，静脉滴注受试药物。30min后从股静脉10秒内注入垂体后叶素5U/Kg，注射后立即连续记录各时间点II导心电图(走纸速度50mm/s，电压10mm×1)。然后取给药后15sec、30sec、60sec、2min、5min、10min、20min、和30min时间点进行统计处理，观察ST段抬高程度的变化。统计分析：实验结果中各时间段ST段抬高程度减去基础值(△值)，以x±S表示，作时间T检验比较，P<0.05判断为具有显著性的统计学差异。
实验结果：
(1)静脉注射垂体后叶素后一般心电图变化
结果表明：大鼠静脉注射垂体后叶素后一般心电图主要表现为ST段迅速抬高，T波变低平或倒置，提示有心肌缺血。心率失常表现有频发室早，亦可见高度至完全房室传导阻滞。
(2)受试药物对损伤性ST段抬高的影响
结果表明：以注射垂体后叶素诱发损伤引起的ST段抬高程度为判断指标，黄芪总皂苷注射液低、中、高三个剂量组和阳性对照药黄芪注射液均可显著降低麻醉SD大鼠静脉注射垂体后叶素引起心肌损伤造成的心电图ST段抬高，其中以黄芪总皂苷中、高剂量组效果明显，显示有较好的量效关系。
结论：
黄芪总皂苷氯化钠注射液1.5mg/Kg、5mg/Kg和15mg/Kg静脉注射均可降低垂体后叶素诱发的SD大鼠心肌损伤引起的ST段抬高程度；小剂量组△ST段与生理盐水组比较绝对值虽有降低，但大部分时间段未达到统计学显著差异，而中、高剂量组和生理盐水组比较△ST段抬高程度差异显著，说明黄芪总皂苷对预防心肌血损伤有较好作用，并有一定的量效关系。
具体实施方式
实施例1
1.称取黄芪总皂苷2.4g(其中含黄芪甲苷0.8g)，溶于约500ml乙醇中；取24g环糊精组合物(β-环糊精和羟丙基-β-环糊精按照质量比1∶1-2)溶于7000毫升注射用水中，将黄芪总皂苷乙醇溶液加到环糊精溶液中，60℃加热搅拌至无醇味；
2.加入聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯50g，搅拌至溶液澄清；
3.加入氯化钠90g，搅拌溶解，加0.1％活性炭处理，过滤脱炭；
4.补足注射用水至10000ml，精滤，灌封，100ml/瓶，30min加压灭菌，检验，包装，即得。
本实施例制得的黄芪总皂苷注射液，取样测量，黄芪总皂苷含量为0.2397g/ml，黄芪甲苷含量为0.0787mg/ml。将其置于4-8℃、室温及60℃温度条件下放置十二个月，取出后观察，结果药液仍澄清透明，无任何析出物，药液性状未发生明显变化。取样测得黄芪总苷及黄芪甲苷的含量未发生明显变化。
实施例2
1.称取黄芪总皂苷2.7g(其中含黄芪甲苷0.9g)，溶于约650ml乙醇中；取12g环糊精组合物(β-环糊精和羟丙基-β-环糊精按照质量比1：1-2)溶于8000毫升注射用水中，将黄芪总皂苷乙醇溶液加到环糊精溶液中，60℃加热搅拌至无醇味；
2.加入聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯100g，搅拌至溶液澄清；
3.加入氯化钠90g，搅拌溶解，加0.1％活性炭处理，过滤脱炭；
4.补足注射用水至10000ml，精滤，灌封，100ml/瓶，30min加压灭菌，检验，包装，即得。
本实施例制得的黄芪总皂苷注射液，取样测量，黄芪总皂苷含量为0.2735mg/ml，黄芪甲苷含量为0.0921mg/ml。将其置于4-8℃、室温及60℃温度条件下放置十二个月，取出后观察，结果药液仍澄清透明，无任何析出物，药液性状未发生明显变化。取样测得黄芪总苷及黄芪甲苷的含量未发生明显变化。
实施例3
1.称取黄芪总皂苷3g(其中含黄芪甲苷1g)，溶于约750ml乙醇中；取24g环糊精组合物(β-环糊精和羟丙基-β-环糊精按照质量比1：1-2)溶于9000毫升注射用水中，将黄芪总皂苷乙醇溶液加到环糊精溶液中，60℃加热搅拌至无醇味；
2.加入聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯200g，搅拌至溶液澄清；
3.加入氯化钠90g，搅拌溶解，加0.1％活性炭处理，过滤脱炭；
4.补足注射用水至10000ml，精滤，灌封，100ml/瓶，30min加压灭菌，检验，包装，即得。
本实施例制得的黄芪总皂苷注射液，取样测量，黄芪总皂苷含量为0.3112g/ml，黄芪甲苷含量为0.1022mg/ml。将其置于4-8℃、室温及60℃温度条件下放置十二个月，取出后观察，结果药液仍澄清透明，无任何析出物，药液性状未发生明显变化。取样测得黄芪总苷及黄芪甲苷的含量未发生明显变化。