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1、10申请公布号CN102048993A43申请公布日20110511CN102048993ACN102048993A21申请号200910236477922申请日20091029A61K36/9062200601A61P9/00200601A61P9/10200601A61K125/0020060171申请人中国中医科学院中药研究所地址100700北京市东城区东直门内南小街16号中国中医科学院中药研究所72发明人杨洪军游云黄璐琦吴宏伟陈畅54发明名称高良姜提取物在制备抑制钙离子通道药物中的应用57摘要本发明目的在于扩展高良姜提取物的用途将含有高良姜素的高良姜提取物用于抑制钙离子通道特别是抑制T。
2、RP通道，从而防治动脉粥样硬化等心脑血管疾病的药物。TRP通道是非选择性阳离子通道。TRPC通道与动脉粥样硬化等心脑血管疾病密切相关。通过抑制血管内皮细胞TRPC通道活性，血管功能会明显改善，并且可以明显改善动脉粥样硬化的血管病理改变。既往对高良姜素的化学防护作用、抗氧化作用、抗病毒、抗菌作用、抗肿瘤作用的探索较为深入；本发明扩展高良姜提取物用于制备防治心脑血管疾病的药物。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页附图2页CN102048997A1/1页21一种治疗心脑血管疾病的药物，其特征在于，它是一种高良姜提取物，其中高良姜总黄酮为5085，高良。
3、姜素含量为510。2一种治疗心脑血管疾病药物的制备方法，其特征在于1高良姜根茎清洗干净，烘干。2醇类回流提取，合并提取液，减压回收，得提取物。提取物加水分散后，上大孔树脂，先用1030浓度的乙醇洗脱除杂，再用6080浓度乙醇洗脱得高良姜总黄酮提取物。以紫外法测定提取物中总黄酮含量达50以上，采用HPLC法测定提取物中高良姜素的含量达5以上。3如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，回流提取所用的醇类为乙醇、甲醇、乙酸乙酯，优选乙醇。4如权利要求1所述的高良姜提取物制备防治心脑血管疾病药物中的用途，其特征在于高良姜提取物在抑制钙离子通道药物中的应用。5如权利要求4所述的高良姜提取物的应用，其特征。
4、在于高良姜素在制备抑制钙离子通道药物中的应用。6如权利要求5所述的高良姜素的应用，其特征在于高良姜素在制备抑制TRP通道药物中的应用。7如权利要求6所述的高良姜素的应用，其特征在于高良姜素在制备抑制TRPC通道药物中的应用。8如权利要求6所述的高良姜素的应用，其特征在于高良姜素在制备抑制TRPM通道药物中的应用。9根据权利要求1所述的治疗心脑血管疾病药物，其特征在于，所述的药物是有高良姜总黄酮添加药用辅料制成的注射剂或口服剂。10根据权利要求9所述的治疗心脑血管疾病的药物，其特征在于，所述口服剂是片剂、胶囊剂、滴丸剂。权利要求书CN102048993ACN102048997A1/3页3高良姜提。
5、取物在制备抑制钙离子通道药物中的应用技术领域0001本发明涉及一种含有高良姜素的高良姜提取物在制备防治高血压、动脉粥样硬化等心脑血管疾病药物中的应用，尤其涉及高良姜素在制备通过抑制瞬时感受器阳离子通道TRANSIENTRECEPTORPOTENTIAL，TRP，进而抑制钙离子内流的应用。背景技术0002瞬时感受器阳离子通道TRP通道是一种跨膜蛋白质，被激活时允许包括钙离子在内的阳离子进行跨膜运输。与其它的钙通道如电压门控通道和配体门控通道参与相对特化的细胞功能不同，TRP家族的引人入胜之处在于其潜在的细胞功能的普遍性和多样性。TRP基因在种系发生树中相当保守，存在于从微生物到高等脊椎动物中。其。
6、组织分布也极为广泛，除了中枢神经系统外，还分布于感觉器官和心血管、胃肠道、呼吸、泌尿生殖、造血、免疫系统中。在28种已经被鉴定的哺乳动物TRP通道亚型中，至少有19种在血管内皮细胞表达。这些通道参加了多种血管功能，包括调节血管张力、血管通透性，参与机械信号传导，血管分泌功能，血管新生，内皮细胞增生，内皮细胞凋亡和死亡等等。TRP通道功能异常可能会导致人类心血管系统的异常。0003WO2006/074802A1专利申请书中论述了TRPC通道用于心脑血管疾病中的治疗。其研究表明利用基因技术，在兔动脉粥样硬化模型，通过抑制血管内皮细胞TRPC3，TRPC6和TRPC7活性，血管功能会明显改善，并且明。
7、显改善动脉粥样硬化的血管病理改变。该研究建立了TRPC通道与心脑血管疾病如动脉粥样硬化的联系。0004研究证明在动脉粥样硬化模型中，TRPC1蛋白在被损伤的血管平滑肌和新生内膜中高表达，DJBEECH等利用TRPC1的阻断抗体T1E3显著降低了体外培养的人隐静脉新生内膜的形成，并且对内皮功能没有明显的抑制作用；其研究结果提示TRPC1阻断剂可以抑制血管平滑肌细胞增生和内膜新生，从而证明了TRPC1拮抗剂在治疗血管损伤性疾病中的作用，因此以TRPC1为靶标治疗阻塞性血管疾病具有很好的前景文献BIOCHIMBIOPHYSACTA2007，1772890714。研究证明TRPC5和TRPM3通道与血。
8、管平滑肌细胞的迁移、增殖密切相关。平滑肌细胞迁移与增殖是动脉粥样硬化、心肌肥厚等疾病的重要病理过程。0005高良姜是姜科植物高良姜ALPINIAOFFICINARUMHANCE干燥根茎。为常用中药，具有温胃散寒、止痛解痉之功。高良姜素GALANGIN，3，5，7一三羟基黄酮是一种天然的黄酮醇类化合物，是中药高良姜主要有效成分之一。近年来国外对该成分的药理药效活性进行了大量研究，对它的化学防护作用、抗氧化作用、抗病毒、抗菌作用、抗肿瘤作用的探索较为深入。高良姜素可以抑制咖啡因与碳酰胆碱诱导的离体猪膀胱平滑肌的收缩作用文献PLANTAMEDICA2005，7110962964，其作用机制与平滑肌的。
9、钙动员有关。另有研究表明高良姜素可以抑制对笨肾上腺素或KCL诱导的离体大鼠胸主动脉血管段收缩，高良姜素可能通过影响血管内皮功能和抑制钙离子内流发挥作用。0006但是尚没有研究表明高良姜对TRPC通道的抑制作用，以及高良姜素在心脑血管疾病防治中的用途。说明书CN102048993ACN102048997A2/3页4发明内容0007本发明提供了含有高良姜素的高良姜提取物在心脑血管疾病防治中的新用途。0008高良姜提取物对大鼠胸主动脉的舒张作用0009取SD大鼠胸主动脉离体血管环，利用氯化钾终浓度45MMOL/L刺激血管造成血管收缩模型，用以评价药物对血管的舒张作用。0010采用ALCM离体组织器官。
10、实验系统，浴槽内加入KH液作为等压等渗溶液。精密称取243MG高良姜素，加入100UL的二甲基亚砜DMSO和900UL的KH液。配成高良姜素母液。将高良姜素母液按3倍梯度稀释成梯度溶液，用KCL预激血管使其收缩，至血管张力稳定后，累计浓度给药，每两次给药时间间隔10MIN。最终的浓度梯度为3107MOL/L，1106MOL/L，3106MOL/L，1105MOL/L，3105MOL/L，9105MOL/L，27104MOL/L，结果显示高良姜素具有很好的血管舒张作用，半数有效剂量为117MMOL/L。0011高良姜素对TRP通道的抑制作用0012高良姜素可以通过抑制TRP蛋白，抑制钙离子内流。。
11、0013本发明中TRPC通道的活性分析包括以下步骤00141表达TRPC通道的细胞与荧光染料共同孵育00152利用离子通道激活剂刺激钙离子内流，然后加入待测化合物。0016检测荧光变化00173检测荧光变化。0018TRP通道的活性分析还包括利用膜片钳技术、全细胞电流技术检测细胞内外的离子变化。0019本发明所述的表达TRPC通道的细胞包括HEK293、SMC、CHO细胞等。本发明所述的荧光染料包括FURO2，FLUO4，DI4ANEPPS等。离子通道激活剂包括GADOLINIUM，PREGNENOLONE，OAG等。0020HEK293细胞转染TRPC5CDNA，经四环素筛选后，细胞膜稳定表。
12、达TRPC5蛋白。荧光染料FURA2孵育细胞1小时后，高良姜素乙醇溶液10M孵育细胞15分钟，加入GADOLINIUM50M作为激动剂。在钙离子通道高通量荧光分析仪FLEXSTATIONII384进行荧光浓度读取。附图1是10M高良姜素对TRPC5通道的抑制作用图GADOLINIUM50M作为激动剂。高良姜素对TRPC5的半数抑制浓度为02UM。0021以PREGNENOLONESULPHATE1M为激动剂，高良姜素1M溶液对TRPM3通道具有明显的抑制作用。0022本发明具有如下优点高良姜素通过抑制TRPC通道，抑制钙离子内流，进而影响内皮功能及平滑肌细胞的迁移与增生。高良姜素通过抑制TRP。
13、C通道用于心脑血管疾病特别是心肌缺血、动脉粥样硬化的防治，具有全新的作用机制，具有良好的应用前景。具体实施方式0023下面结合具体实施例对本发明作进一步阐释，但不限制本发明0024实施例1高良姜总黄酮的制备10025高良姜10KG，10倍95乙醇回流提取2小时，8倍95乙醇回流提取1小时，合并说明书CN102048993ACN102048997A3/3页5提取液，减压回收至无醇味。0026等体积乙酸乙酯萃取34次以高良姜素或黄酮颜色反应为指示，合并乙酸乙酯萃取液。回收乙酸乙酯，回收物用20乙醇分散，后上大孔树脂，用30乙醇洗脱2个柱体积后，再用70乙醇洗脱5个柱体积，得高良姜总黄酮。提取路线见。
14、附图20027实施例2高良姜总黄酮的制备20028高良姜10KG，10倍95乙醇回流提取2小时，8倍95乙醇回流提取1小时，合并提取液，减压回收至无醇味。0029上大孔树脂，先用水洗脱5个柱体积，再用30乙醇洗脱，以黄酮颜色反应为指示，洗脱5个柱体积；再用70乙醇洗脱5个柱体积，得高良姜总黄酮。提取路线见附图30030实施例3高良姜总黄酮片剂的制备0031按照实施例1所述的方法制备得到高良姜总黄酮提取物，提取物80以下干燥后过6080目筛，取高良姜总黄酮有效部位200克，加入适量微晶纤维素和硬脂酸镁，混匀，干压成1000片。0032实施例4高良姜总黄酮颗粒剂的制备0033按照实施例1所述的方法。
15、制备得到高良姜总黄酮提取物，提取物80以下干燥后，取高良姜总黄酮有效部位200克，加入蔗糖100G、羟丙纤维素100G、微粉硅胶20G，以适量70乙醇作湿润剂，湿法制粒，烘干，分装制成100袋颗粒剂。0034实施例5高良姜总黄酮口服液的制备0035取蒸馏水适量，加入聚山梨酯80制成溶液，再加入高良姜总黄酮提取物200G，边加热边搅拌使之溶解，另外将蔗糖30G、防腐剂适量溶于蒸馏水，在搅拌下缓缓加入上述溶液中，加蒸馏水至1000ML，混匀，过滤，分装成200支，灭菌，得口服液。说明书CN102048993ACN102048997A1/2页6附图1说明书附图CN102048993ACN102048997A2/2页7附图2附图3说明书附图CN102048993A。