一种红花黄色素的纯化方法.pdf

本发明公开一种红花黄色素的纯化方法，采用红花黄色素提取粗品为原料，优化条件得到合适的柱分离条件，进一步放大到动态轴向压缩工业制备色谱系统上分离，得到高纯度的红花黄。本发明的优点是，提取后粗品直接使用动态轴向压缩工业制备色谱分离即可达到较好的分离提纯效果，操作简单，周期短，效率高，纯度可达98.5%以上。

1.  一种红花黄色素的纯化方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）将红花黄色素提取粗品溶于水后进行过滤，除去微小的固体不溶物，得到滤液作为分离粗品；
（2）将过滤产物通过进样泵或者进样阀注入制备色谱系统；
（3）采用甲醇/水或乙醇/水做流动相，洗脱得到红花黄色素单体。

2.  根据权利要求1所述的方法，其特征是：所述的红花黄色素提取粗品为水提取或有机溶剂沉淀后所得。

3.  根据权利要求2所述的方法，其特征是：所述色谱系统采用动态轴向压缩柱，且所填充固定相为硅胶键合物修饰填料。

4.  根据权利要求3所述的方法，其特征是：流动相中醇与水的体积比（V/V）范围为35:65~20:80。

一种红花黄色素的纯化方法
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种红花黄色素的纯化方法。
技术背景
红花是我国重要的中草药，为菊科植物的干燥花，内含红花红色素和红花黄色素两种色素，其性温、味辛，具有活血通经、祛瘀止痛、降低胆固醇、降血压等功效，主要用于月经不调、痛经、经闭、跌打损伤，对冠心病、传染性肝炎等疾病亦有一定的疗效。红花黄色素（Saffower Yellower）是从红花的花瓣中提取出的天然黄色素，为查耳酮类化合物。红花黄色素是我国批准允许使用的食用天然色素，已列入GB2760-1996中，为国家级新药。研究发现红花黄色素不仅是一种很有价值的天然食用色素，具有色泽艳丽，耐高温、耐高压、耐低温、耐光、耐酸、耐还原和抗微生物等优点，而且还有扩张冠状动脉、抗氧化、保护心肌、降血压、免疫抑制和脑保护等多种药理功能。通常可以采用传统吸附树脂的方法纯化得到红花黄色素产品，但是工艺技术耗时长，同时纯度不高。
发明内容
本发明的目的在于针对目前在纯化红花黄色素的过程中所存在的时间长以及纯度不高的问题，提供一种采用制备液相色谱系统纯化高纯度红花黄色素的新方法，该方法包括以下步骤：
a.将红花黄色素提取粗品溶于水后进行过滤，一般将红花黄色素粗品配制成饱和溶液，具体实施时，可根据实际溶解效果进行调整；
b.取配制好的红花黄色素溶液，用填充好固定相填料的动态轴向压缩柱进行分离，收集红花黄色素对应谱带的馏分；
c.将步骤b中收集的对应谱带洗脱液中的溶剂蒸干，即可得到色谱纯为98.5%的红花黄色素单体。
本发明的有益效果是可直接采用提取后的红花黄色素粗品来制备，不需要大量的前处理过程，简单、易控制，工艺技术简化，适用于大规模制备。高效液相色谱测定中，纯度高于98.5%，完全可用于药物的开发。
具体实施方式
实施例1
1.取1g红花黄色素粗品溶于水，配制成饱和溶液，置于过滤装置中，过滤除去固体颗粒；
2.将红花黄色素溶液泵入动态轴向压缩柱制备色谱系统，柱填充尺寸为Φ50×250mm，填料为十八烷基硅胶，粒径为10~30um，上样量1g。流动相的体积比为30:70，当红花黄色素洗脱完毕后，流动相切换成高比例醇，将后端杂质冲出，一个分离周期结束。采用的紫外可见光度检测器的检测波长为440nm，收集保留时间在45~47min的馏分，经HPLC分析纯度≥98.8%。
实施例2
1.取2g红花黄色素粗品溶于水，配制成饱和溶液，置于过滤装置中，过滤除去固体颗粒；
2.将红花黄色素溶液注入动态轴向压缩柱制备色谱系统，柱填充尺寸为Φ50×250mm，填料为十八烷基硅胶，粒径为20~45um，上样量2g。流动相的体积比为25:75，当红花黄色素洗脱完毕后，流动相切换成高比例醇，将后端杂质冲出，一个分离周期结束。采用的紫外可见光度检测器的检测波长为440nm，收集保留时间在55~68min的馏分，经HPLC分析纯度≥98.3%。
实施例3
1.取12g红花黄色素粗品溶于水，配制成饱和溶液，置于过滤装置中，过滤除去固体颗粒；
2.将红花黄色素溶液注入动态轴向压缩柱制备色谱系统，柱填充尺寸为Φ200×250mm，填料为十八烷基硅胶，粒径为10~15um，上样量12g。流动相的体积比为27:73，当红花黄色素洗脱完毕后，流动相切换成高比例醇，将后端杂质冲出，一个分离周期结束。采用的紫外可见光度检测器的检测波长为440nm，收集保留时间在60~75min的馏分，经HPLC分析纯度≥98.1%。