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1、10申请公布号CN101972315A43申请公布日20110216CN101972315ACN101972315A21申请号201010296180422申请日20100929A61K36/71200601A61P5/50200601A61P3/10200601A61P25/0220060171申请人辽宁奥达制药有限公司地址115001辽宁省营口市路南高新技术产业开发区72发明人于世家潘霖吕锐李尧军郭振海赵长会冯会生潘英宏田桂芳74专利代理机构北京国浩君伍知识产权代理事务所普通合伙11346代理人朱登河54发明名称一种中药组合物及制备方法和用途57摘要本发明涉及一种中药组合物及制备方法，属于。
2、中药制剂技术领域。所述中药组合物由中药提取物A1525、中药提取物B4050、三七2545制成。这种中药组合物能够抑制或延缓胰岛细胞凋亡、促进胰岛细胞功能恢复，还具有治疗糖尿病性周围神经病变的作用。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书6页附图4页CN101972315A1/1页21一种中药组合物，其特征在于所述中药组合物包括中药提取物A、中药提取物B和三七；其中各成分的重量百分比为中药提取物A占1525，中药提取物B占4050，三七占2545；所述中药提取物A，是由下述重量比的原料药制成丹参312份，醋制延胡索625份；所述中药提取物B，是由下述重。
3、量比的原料药制成黄芪312份，赤芍375份，川芎312份，红花312份，苏木250份，鸡血藤312份；所述三七的重量比为250份，经粉碎制成。2根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述中药组合物还包括药学上可接受的载体；包含药学上可接受载体的中药组合物中各成分的重量百分比为中药提取物A占1020，中药提取物B占2545，三七占2030，药学上可接受的载体占545。3根据权利要求2所述的中药组合物，其特征在于所述包含药学上可接受载体的中药组合物中各成分的重量比为中药提取物A占15，中药提取物B占30，三七占25，药学上可接受的载体占30。4根据权利要求2或3所述的中药组合物，其特征在于所述。
4、药学上可接受的载体选自糊精、淀粉、纤维素、淀粉衍生物或纤维素衍生物中的一种或两种以上的组合。5权利要求14中任一权利要求所述的中药组合物在制备抑制或延缓胰岛细胞凋亡、促进胰岛细胞功能恢复药物中的用途。6权利要求14中任一权利要求所述的中药组合物在制备治疗糖尿病性周围神经病变的药物中的用途。7权利要求24中任一权利要求所述的中药组合物的制备方法，包括以下步骤1、中药提取物A的制备取丹参加乙醇6倍量，回流2小时，滤过，回收乙醇，减压浓缩至在60相对密度为130135的稠膏，药渣加4060乙醇6倍量，回流15小时，滤过，药渣加水8倍量，煎煮2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至在60相对密度为。
5、130135的稠膏；醋制延胡索加6080乙醇回流提取三次，第一次加4倍量回流3小时，第二次加4倍量回流2小时，第三次加2倍量回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，减压浓缩至在60时相对密度为130135的稠膏；合并上述稠膏，干燥，即得中药提取物A；2、中药提取物B的制备将黄芪、赤芍、川芎、红花、苏木和鸡血藤混合，加水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，第三次加4倍量水煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至在60相对密度为130135的稠膏，干燥，即得中药提取物B；3、将三七粉碎成细粉；4、将步骤1、步骤2、步骤3所得产物混合、粉碎后，再加入药学上可接受的载体混合均匀，。
6、制粒，干燥，即得中药组合物。8根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于所述药学上可接受的载体选自糊精、淀粉、纤维素、淀粉衍生物或纤维素衍生物中的一种或两种以上的组合。9权利要求24中任一权利要求所述的中药组合物制备的剂型，其特征在于所述剂型为颗粒剂、胶囊剂、片剂、冲剂、混悬剂、丸剂或口服液。权利要求书CN101972315A1/6页3一种中药组合物及制备方法和用途技术领域0001本发明属于中药制剂技术领域，具体涉及一种中药组合物及制备方法和用途。背景技术0002糖尿病DM是重要的现代疾病，可引起多个系统器官的慢性并发症，导致功能障碍和衰竭，成为致残、病死的主要原因。过去认为1型糖尿病是由于遗传。
7、和环境导致的自身免疫性疾病，在机制上以细胞免疫为主，炎症反应因子，通过氧化自由基诱导凋亡。2型糖尿病是由于遗传和环境导致的胰岛素抵抗、胰岛细胞变性、衰竭的疾病。1、2型糖尿病可能的共同机制为氧化应激诱导胰岛细胞的功能障碍和细胞凋亡。随着对细胞凋亡及其基因调控与疾病关系的深入研究，发现细胞凋亡密切参与了糖尿病的发生机制。BCL2蛋白家族是位于线粒体外膜的一类蛋白，分为存活蛋白和凋亡蛋白两类。抗凋亡蛋白包括BCL2和BCLXL，凋亡蛋白包括BAX、BAD和BID。细胞中凋亡蛋白、凋亡蛋白酶和抗凋亡蛋白相互拮抗，相互平衡，当凋亡作用占优势时，天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶CASPASE3被激活，阻断DNA修。
8、复酶修复DNA损伤的通路，导致细胞不可逆的凋亡。细胞凋亡导致的胰岛功能受损在发病过程中所起的作用已受到越来越多的重视。近期的一项研究表明，无论是肥胖还是非肥胖的2型糖尿病患者，与其体重指数相当的非糖尿病人群相比，其胰岛细胞数目明显减少，胰岛细胞凋亡发生率也明显高于正常人群，而两组人群间胰岛再生和分化过程并无明显区别。胰岛细胞功能正常与否是2型糖尿病是否发生的决定因素；如果胰岛细胞能保持其代偿能力，2型糖尿病并不会发生，一旦其代偿能力下降，则2型糖尿病逐渐发生。根据英国前瞻性糖尿病研究显示，患者在被诊断为糖尿病时，细胞功能只剩下正常人的50，其后胰岛细胞功能每年以45的速度下降。以此推算，在糖尿。
9、病诊断前1015年，细胞功能已开始逐渐下降。糖尿病已成为世界范围的严重危害人们健康的疾病，随着对糖尿病基础研究的不断深入，细胞凋亡在糖尿病的发病中所起的重要作用被逐渐发现。采用抑制或延缓胰岛细胞凋亡、促进胰岛细胞功能恢复的手段，对糖尿病的防治有着巨大意义。0003糖尿病性周围神经病变糖尿病最常见的并发症，可导致糖尿病患者丧失劳动能力、致残甚至致死。该病主要表现为四肢远端和躯干部分麻木疼痛和感觉障碍，其疼痛特点针刺样或烧灼样，刀割样，甚者痛如截肢，让患者痛不欲生，对生活失去兴趣，丧失信心而处于极大痛苦之中。它不仅给患者个人、家庭带来痛苦和负担，也给社会医疗卫生事业造成严重的经济问题。针对糖尿病周。
10、围神经病变的治疗被认为是目前的一大难题。国内外医生们往往只能寻找一些近似适应症的替代药物，有麻醉性镇痛剂如杜冷丁、利多卡因、镇静剂大仑丁等、抗抑郁剂丙米嗪等、醛糖还原酶抑制剂ARI等以及弥可保甲钴铵。这些药物经临床验证其效果并不理想，加之长期服用，诸如直立性低血压、呼吸骤停、成瘾等毒副作用难以避免，多数学者现已主张限制这些药物的继续使用。一些医疗工作者采用了治疗其它疾病的药物来调理该症，如治疗心脑血管疾病的药物“银杏叶制剂”，但是这些药物的效果并不显著。这也是多年来该病的发病率居高不下，致残、致死率较高的主要说明书CN101972315A2/6页4原因。糖尿病周围神经病变长期损害患者的神经微血。
11、管，摧残患者的身体，威胁患者的生命，广大医生、包括世界卫生组织都在呼吁，希望能够早日出现有效的治疗药品，来解决这种疑难疾病的难题。发明内容0004本发明的目的是提供一种新的中药组合物，对胰岛细胞凋亡和胰岛细胞功能恢复进行干预而治疗糖尿病，并对糖尿病性周围神经病变有治疗作用。0005本发明的技术方案如下0006一种中药组合物，包括中药提取物A、中药提取物B和三七；其中各成分的重量百分比为中药提取物A占1525，中药提取物B占4050，三七占2545；0007所述中药提取物A，是由下述重量比的原料药制成丹参312份，醋制延胡索625份；0008所述中药提取物B，是由下述重量比的原料药制成黄芪312。
12、份，赤芍375份，川芎312份，红花312份，苏木250份，鸡血藤312份；0009所述三七的重量比为250份，经粉碎制成。0010上述技术方案中所述的中药组合物，还包括药学上可接受的载体；包含药学上可接受载体的中药组合物中各成分的重量百分比为中药提取物A占1020，中药提取物B占2545，三七占2030，药学上可接受的载体占545。0011上述技术方案中所述的中药组合物，其中，所述中药组合物中各成分的重量比为中药提取物A占15，中药提取物B占30，三七占25，药学上可接受的载体占30。0012上述技术方案中所述的中药组合物，其中，所述药学上可接受的载体选自糊精、淀粉、纤维素、淀粉衍生物或纤维。
13、素衍生物中的一种或两种以上的组合。0013上述技术方案中所述的中药组合物在制备抑制或延缓胰岛细胞凋亡、促进胰岛细胞功能恢复药物中的用途。0014上述技术方案中所述的中药组合物在制备治疗糖尿病性周围神经病变的药物中的用途。0015上述技术方案中所述的中药组合物的制备方法，包括以下步骤00161、中药提取物A的制备取丹参加乙醇6倍量，回流2小时，滤过，回收乙醇，减压浓缩至在60相对密度为130135的稠膏，药渣加4060乙醇6倍量，回流15小时，滤过，药渣加水8倍量，煎煮2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至在60相对密度为130135的稠膏；醋制延胡索加6080乙醇回流提取三次，第一次加4。
14、倍量回流3小时，第二次加4倍量回流2小时，第三次加2倍量回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，减压浓缩至在60时相对密度为130135的稠膏，合并上述稠膏，干燥，即得中药提取物A；本步骤中的中药提取物A既可以经干燥后粉碎成细粉进行使用，也可以不经过干燥粉碎过程，直接使用；00172、中药提取物B的制备将黄芪、赤芍、川芎、红花、苏木和鸡血藤混合，加水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，第三次加4倍量水煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至在60相对密度为130135的稠膏，干燥，即得中药提取物B；本步骤中的中药提取物B既可以经干燥后粉碎成细粉进行使用，也可以不经过说明书。
15、CN101972315A3/6页5干燥粉碎过程，直接使用；00183、将三七粉碎成细粉；00194、将步骤1、步骤2、步骤3所得产物混合、经干燥、粉碎后，再加入药学上可接受的载体混合均匀，制粒，干燥，即得中药组合物。0020上述技术方案中所述的制备方法，其中所述药学上可接受的载体选自糊精、淀粉、纤维素、淀粉衍生物或纤维素衍生物中的一种或两种以上的组合。0021上述技术方案中所述的中药组合物制备的剂型，其中剂型为颗粒剂、胶囊剂、片剂、冲剂、混悬剂、丸剂或口服液。0022本发明的中药组合物及其剂型具有的有益效果是能够有效的抑制或延缓胰岛细胞凋亡、促进胰岛细胞功能恢复，能够有效治疗糖尿病性周围神经病。
16、变。0023说明书附图0024图1为正常对照组大鼠胰岛HE染色后光镜下胰岛结构；0025图2为模型组大鼠胰岛HE染色后光镜下胰岛结构；0026图3为甘精胰岛素组HE染色后光镜下胰岛结构；0027图4为低剂量组大鼠胰岛HE染色后光镜下胰岛结构；0028图5为中剂量组大鼠胰岛HE染色后光镜下胰岛结构；0029图6为高剂量组大鼠胰岛HE染色后光镜下胰岛结构；0030图7为模型组大鼠胞浆及胞核内BAX表达显示图；0031图8为木丹颗粒中剂量组大鼠胞浆及胞核内BAX表达显示图；0032图9为木丹颗粒低剂量组大鼠胞浆及胞核内BAX表达显示图；0033图10为甘精胰岛素组大鼠胞浆及胞核内BAX表达显示图；0。
17、034图11为模型组大鼠胞核内BCL2表达图；0035图12为木丹颗粒中剂量组大鼠胞核内BCL2表达图；0036图13为木丹颗粒低剂量组大鼠胞核内BCL2表达图；0037图14为甘精胰岛素组大鼠胞核内BCL2表达图。具体实施方式0038为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体实施方式对本发明作进一步的说明。0039实施例1中药组合物的制备00401、取丹参312G加乙醇6倍量，回流2小时，滤过，回收乙醇，减压浓缩至在60相对密度为130135的稠膏，药渣加50乙醇6倍量，回流15小时，滤过，药渣加水8倍量，煎煮2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至在60相对密度为130135的稠膏；醋。
18、制延胡索625G加70乙醇回流提取三次，第一次加4倍量回流3小时，第二次加4倍量回流2小时，第三次加2倍量回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，减压浓缩至在60时相对密度为130135的稠膏；合并上述稠膏；00412、将黄芪312G，赤芍375G，川芎312G，红花312G，苏木250G，鸡血藤312G混合，加水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，第三次加4倍量水煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至在60相对密度为130135的稠膏；说明书CN101972315A4/6页600423、将三七250G粉碎成细粉；00434、将步骤1、步骤2、步骤3所得产物混合、干燥、。
19、粉碎，加入药学上可接受的载体糊精至总重为1000G，混匀，用85乙醇制粒，干燥，即得中药组合物。本步骤中的药学上可接受的载体也可以是淀粉、纤维素、淀粉衍生物或纤维素衍生物以及它们之间的组合。0044实施例2中药组合物的制备0045本实施例的与实施例1相同，区别在于步骤4中，按照最终产物中中药提取物A占10，中药提取物B占25，三七占20，药学上可接受的载体占45，称取步骤1、步骤2、步骤3所得产物和药学上可接受的载体淀粉和纤维素混合物，制成中药组合物。0046实施例3中药组合物的制备0047本实施例的与实施例1相同，区别在于步骤4中，按照最终产物中中药提取物A占20，中药提取物B占45，三七占。
20、30，药学上可接受的载体占5，称取步骤1、步骤2、步骤3所得产物和药学上可接受的载体纤维素衍生物，制成中药组合物。0048实施例4中药组合物剂型的制备0049实施例13中制得的中药组合物，按照本领域常用的制剂方法制备成颗粒剂、胶囊剂、片剂、冲剂、混悬剂、丸剂或口服液。0050以下通过具体的试验例来进一步阐述本发明所述中药组合物以下简称木丹颗粒用于制备抑制或延缓胰岛细胞凋亡、促进胰岛细胞功能恢复药物时所具有的有益效果0051将清洁级SD大鼠屏障环境饲养，环境温度为2025，湿度4060，12H光照/天，在实验室适应性喂养1周后，大鼠禁食24小时后，将STZ链脲佐菌素用01MMOL/L枸橼酸缓冲液。
21、PH42，4配成1浓度，按53MG/KG体重剂量左下腹腔单次注射，72小时后尾静脉取血，用血糖仪测定血糖，凡血糖167MMOL/L纳入实验。血糖稳定3D后，取成模大鼠根据随机数字表将DM大鼠随机分为模型组、木丹颗粒高剂量组、木丹颗粒中剂量组、木丹颗粒低剂量组、甘精胰岛素组，每组10只。并以体重、鼠龄别相匹配的正常大鼠10只设为正常组。造模成功后3天给药。正常组及模型组生理盐水10ML/KG灌胃，每日一次。木丹颗粒大剂量治疗组，按人鼠剂量换算给予人的等效剂量，予46G/KGD木丹颗粒剂灌胃；中剂量治疗组予23G/KGD、低剂量组予115G/KGD木丹颗粒剂每日一次灌胃；甘精胰岛素组按人鼠剂量换算。
22、给予人的等效剂量，予甘精胰岛素1U/100G腹腔注射，每日一次。灌胃4周后动物禁食12小时然后进行腹腔注射20乌拉坦05ML/100G麻醉后取其胰腺头部部分后经10多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片后HE染色观察胰岛形态学改变和免疫组织化学染色观察细胞凋亡情况。00521光镜下大鼠细胞的变化HEX4000053HE染色如图1显示，正常对照组大鼠胰岛镜下见胰岛结构完整，胰岛细胞饱满呈圆形，胞体丰满，排列紧密；如图2显示，DM组模型组大鼠胰岛镜下见大鼠胰岛，形状不规则，体积变小，胰岛细胞减少；如图4显示，木丹颗粒低剂量组也有类似的表现，大鼠胰岛细胞减少，细胞排列密集，胰岛较少，形状不规则，体积变小；如图。
23、3、图5显示，甘精胰岛素组和木丹颗粒中剂量组较DM组有明显改善，细胞呈圆形，排列整齐，胰岛细胞较模说明书CN101972315A5/6页7型组与低剂量组增多；如图6显示，高剂量组较DM组改善与中剂量组相近，细胞排列较整齐，胰岛细胞清晰可见。00542木丹颗粒对BAX及BCL2的影响00554周后，如图7显示，模型组大鼠胞浆，及胞核内BAX大量表达，呈深棕色；如图8显示，木丹颗粒中剂量组呈浅棕色；如图9显示，木丹颗粒低剂量组深棕色颗粒仍较多，但较DM组改善；如图10显示，甘精胰岛素组呈浅棕色。0056BCL2则相反，4周后，如图11显示，模型组大鼠胞核内BCL2呈浅棕色；如图12显示，木丹颗粒中。
24、剂量组呈深棕色，表达较模型组有增多；如图13显示，木丹低剂量组少量棕色颗粒，但较DM组有改善；如图14显示，甘精胰岛素组呈深棕色，表达广泛。0057细胞凋亡在多种疾病，包括糖尿病及其并发症发生过程中起着重要的作用。大量实验已经证明了BCL2基因家族参与了胰岛细胞凋亡的发生。树鼩经注射STZ后DM成模者胰岛中抗凋亡相关蛋白分子BCL2表达明显低于空白组，而且，BCL2表达水平与血清胰岛素水平和胰岛中胰岛素表达水平呈正相关，提示BCL2表达上调可能对细胞起保护作用。有研究发现，糖尿病大鼠主动脉HE染色见内膜增厚、平滑肌增生等早期大血管并发症的组织学改变；而BCL2蛋白在内皮细胞及平滑肌细胞的表达下。
25、降，而BAX蛋白表达明显增加。提示高血糖可能改变了凋亡调控基因的表达，引起BCL2/BAX比例的下降，从而促进了主动脉内皮细胞及平滑肌细胞凋亡，最终可能导致糖尿病主动脉病变的发生。0058在对糖尿病的治疗中，一些实验证明了中成药对糖尿病的治疗可通过调节BCL2/BAX的比值来控制。如南瓜多糖可以降低胰岛细胞BAX基因的表达、增加大鼠胰岛细胞BCL2表达，保护受损的胰岛细胞，促进胰岛素的分泌。本研究中糖尿病大鼠糖尿病4周时胰腺组织中BCL2表达下调，而同时BAX大量表达，胰腺组织中大量细胞出现凋亡，这与我们的凋亡形态学研究结果一致，说明BCL2表达下调以及BAX表达上调是糖尿病细胞凋亡机制中的重。
26、要环节，BCL2家族参与了糖尿病大鼠胰岛细胞凋亡的调节过程。0059木丹颗粒其成分多元，作用广泛，益气活血能带动血液运行、改善血液粘稠度，祛瘀能抑制胰岛细胞凋亡，通络能止痛。现代医学研究表明，部分糖尿病患者的胰腺血管存在有闭塞不通的征象。ENGHOFERL发现经STZ注射后的糖尿病大鼠胰岛内血液循环障碍也是导致细胞损伤的原因。木丹颗粒可以益气活血祛瘀，改善血流，促进微循环，使胰腺管通畅。木丹颗粒能改善NAKATP酶活性，显著对抗坐骨神经、肝、肾、胰腺、视网膜病变；木丹颗粒还具有降低糖尿病大鼠血清果糖胺含量的作用，抑制AGE的形成，减少AGE在周围神经的蓄积。木丹颗粒能去瘀生新、活血通络，上调B。
27、CL2的表达，抑制BAX的表达，具有显著的抑制胰岛细胞凋亡，恢复胰岛细胞功能的作用。0060糖尿病的基本病机表现为燥热伤阴，阴损气耗，致气阴两虚。气虚血脉瘀滞，脉络不通，“不通则痛”，则是导致糖尿病周围神经病变的主要发病机制。木丹颗粒具有益气活血，祛瘀生新、通络止痛等作用。动物实验研究资料表明，对链脲霉素糖尿病大鼠尾神经传导速度减慢具有明显的改善作用；对糖尿病大鼠红细胞山梨醇含量升高有显著抑制作用；能显著增加糖尿病大鼠的痛阈值；对急性血瘀模型大鼠血浆比黏度和红细胞压积的异常升高有保护作用；对醋酸所致小鼠扭体反应有明显控制作用；对糖尿病大鼠坐骨神经、肝、肾、胰腺、视网膜病变有保护作用；可提高糖尿。
28、病大鼠神经组织中NAKATP酶活性；可提高糖尿病大鼠神经组织中CAMP、CGMP含量；可提高糖尿病大鼠神经生长因子的表达。说明书CN101972315A6/6页80061人体临床研究试验表明，木丹颗粒治疗糖尿病性周围神经病变疗效确切、安全。神经传导速度改善情况，显效率6154，有效率7015；中医证候疗效，愈显率为2369，总有效率9323。0062以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上和实质上的限制，凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用以上所揭示的技术内容，而作出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。说明书CN101972315A1/4页9图1图2图3说明书附图CN101972315A2/4页10图4图5图6说明书附图CN101972315A3/4页11图7图8图9图10图11图12说明书附图CN101972315A4/4页12图13图14说明书附图。