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α-1- 抗胰蛋白酶在制备用于治疗慢性疲劳综合症的药物 中的用途
    【技术领域】
     本发明涉及 α-1- 抗胰蛋白酶在制备用于治疗慢性疲劳综合症的有效药物中的用途。 背景技术 慢性疲劳综合症 (CFS) 是一种复杂的病症， 根据国际 Fukuda 标准 (FukudaK 等 人， The chronic fatigue syndrome ： a comprehensive approach to itsdefinition and study， Ann Intern Med.1994 ； 121 ： 953-959) 在亚特兰大疾病控制中心 (Atlanta Center for Disease Control， CDC) 的指导下定义。根据这些标准， CFS 的诊断是基于满足两个主 要标准且同时存在最少四个次要标准。
     主要标准
     1. 持久的身体和心理疲劳， 持续至少 6 个月， 或新的或确定的发作的间歇性性状， 其不是由近期的劳累引起， 无法通过休息获得缓解， 且在运动时变得严重， 并且引起患者日 常活动的先前水平的实质性降低， 最终无法由患者克服。
     2. 排除可能潜在引起慢性疲劳的其它病症， 例如内分泌失调、 传染病、 肿瘤病症和 / 或精神障碍。
     次要标准
     必须同时存在下列次要标准中的四种或以上， 在疲劳出现后都持续六个月或以 上：
     - 注意力或短期记忆力衰退
     - 吞咽痛
     - 引起疼痛的颈部或腋窝腺病
     - 肌痛
     - 无发炎体征的多关节痛
     - 最近发作或具有不同于以往的特征的头痛
     - 睡眠不能恢复体力
     - 劳动后的不适持续 24 小时以上。
     可能会与 CFS 混淆的病症为纤维肌痛 (FM)， 其是具有以下特征的综合症 ： 症状为 慢性全身性肌肉骨骼疼痛， 但疼痛不是源自关节。 根据美国风湿病学会 (American College of Rheumatology) 的分类标准 (The American College ofRheuma tology， 1990， Criteria for the Classification of Fibromyalgia.Report of the Multicenter Criteria Committee， Arthritis Rheum 1990 ； 33(2) ： 160-172)， 用于诊断 FM 的两种基本特征是 ：
     1) 存在全身性疼痛， 持续三个月以上 ；
     2) 在 18 个特定点 ( 称为 “压痛点” ) 中的至少 11 个处， 对约 4kg 的指压异常敏 感。除了疼痛外， FM 患者还经历一些以下症状 ： 睡眠障碍、 肠易激综合症、 关节僵硬和僵直、
     头痛或面神经痛、 腹部不适、 膀胱过敏、 感觉异常、 麻木或瘙痒、 胸痛和肋软骨痛 ( 肋骨与胸 骨连接处的肌肉痛 )、 晕眩和恶心等。这些症状容易波动且不必同时出现。
     FM 和 CFS 是两种不同的病症， 但具有非常类似的表现和症状， 这经常会令非专业 人士困惑， 但在许多患者中这两种病症可同时存在。 几乎 80％的 CFS 患者都符合 FM 分类标 准， 但只有 7％到 10％的 FM 患者符合 CFS 分类标准。鉴别诊断这两种病症且排除其它可能 的疼痛和疲劳原因对于正确的诊断、 预后和治疗方法至关重要。
     CFS 主 要 影 响 年 轻 人， 发 作 高 峰 在 20 岁 与 40 岁 之 间。 其 在 女 性 中 的 发 病 率 是 男 性 的 2-3 倍 (Lloyd AR 等 人， Prevalence of chronic fatigue syndrome inan Australian population， Med J， 1990 年 8 月 ； 153 ： 522-528)， 但这可能是因为各年龄 段的女性都比男性更频繁地就医 (Henderson AS.， Care-eliciting behavior in man， J Nerv Ment Dis 1974 ； 159 ： 172-181)。CFS 在 人 群 中 的 发 病 率 介 于 0.4 ％ 与 2.5 ％ 之 间 (White PD 等 人， Protocol for thePACE trial ： a randomised controlled trial of adaptive pacing， cognitivebehaviour therapy， and graded exercise， as supplements to standardisedspecialist medical care versus standardised specialist medical carealone for patients with the chronic fatigue syndrome/ myalgicencephalomyelitis or encephalopathy， BMC Neurol 2007， 7： 6)。 在美国和英国， 四项研究得出 0.2％到 0.7％的估值， 换句话说， 每 100,000 人有 200 到 700 例病例。在日 本， 发病率被记录为 1.5％。一般说来， 视医学、 精神病学和实验室评价的强度而定， 估计主 要护理中心 CFS 的发病率是在 0.5％与 2.5％之间 ( 澳洲皇家内科医学院， 慢性疲劳综合症 临床防治指南 2002(The RoyalAustralasian College of Physicians.Chronic Fatigue Syndrome.ClinicalPractice Guidelines 2002))。 CFS 恢复的预后极差， 且目前没有通用疗法被证实是治疗 CFS 的有效选择 (Hill NF 等人， Natural history of severe chronic fatigue syndrome， ArchPhys Med Rehabil 1999 ； 80(9) ： 1090-1094)。因此， 按现状看来， 主要治疗目标是基于缓解症状。所提供的一 些治疗包括 ： 认知行为治疗、 渐进性运动治疗、 药物介入 ( 例如抗病毒、 抗抑郁、 镇静、 止痛、 抗炎药物和其它药物 ) 和营养补品。然而， 这些介入通常不产生被视为许多 CFS 患者所必 需的最低益处 (Afari N 等人， Chronic fatigue syndrome ： a review， Am J Psychiatry， 2003 ； 160(2) ： 221-236/Rimes KA 等 人， Treatments for Chronic Fatigue Syndrome， Occupational Medicine 2005 ： 5(1) ； 32-39)。因此， 很明显对治疗 CFS 的有效药物存在需 求。
     CFS 是一种多系统疾病， 其病因或引发因子未知， 但关于致病因子存在以下各种假 设： 遗传缺陷、 中枢神经系统异常、 神经肌肉和代谢紊乱、 心理因素、 毒剂、 感染和因免疫系 统的慢性激活所引起的免疫不平衡 (Afari N 等人， Chronic fatigue syndrome ： a review， Am J Psychiatry， 2003 ； 160(2) ： 221-236)。具体来说， 基于慢性激活的免疫状态， 一些作 者提出在 CFS 中观察到的临床和免疫学异常可包括由干扰素诱发的 2-5A 防御路径缺陷 (EnglebienneP 等 人， Chronic Fatigue Syndrome.A Biological Approach， CRC Press LLC， 2002)。
     干扰素 (IFN) 是免疫系统对例如细菌、 病毒和寄生虫等外部因子和癌细胞作出反 应而天然产生的蛋白质。IFN 刺激的两种最重要的产物是蛋白激酶 R(PKR) 和核糖核酸酶
     L(RNase L)。PKR 抑制病毒 mRNA 的翻译， 而 RNase L 则关闭 dsRNA。两种蛋白质的最终目 的都是诱发感染原的凋亡。
     在 1994 Suhadolnik 等 人 (Upregulation of the 2-5A synthetase/RNaseL antiviral pathway associated with chronic fatigue syndrome， Clin InfectDis 1994 ； 18( 增刊 I) ： S96-S104) 中发现了 CFS 患者的外周血单核细胞 (PBMC) 具有摩尔质量 为 37kDa 的过度活跃 RNase L， 其是由天然形式的 83kDa RNaseL 通过蛋白水解产生。随后 De Meirleir 等人 (A 37 kDa 2-5A binding proteinas a potential biochemical marker for chronic fatigue syndrome， Am J Med2000 ； 108(2) ： 99-105) 观察到 PBMC 中 37kDa 分 子与 83kDa 分子的浓度的比率可用于区别 CFS 患者与患有 FM 或重度抑郁症的患者。
     CFS 患者展现离子通道转运功能障碍所特有的许多症状。在确定 RNase L 抑制剂 (RLI) 属于离子通道转运体的 ABC 超家族时， 考虑 CFS 患者发生离子通道中断的可能性。 RLI 通过与 RNase L 中存在的锚蛋白 (ankyrin) 结构域组合而使 RNase L 失活。在 CFS 患者中 观察到锚蛋白结构域在 RNase L 裂解期间的消除， 表明这些锚蛋白片段可能会与离子通道 相互作用且中断离子通道的正常功能。这些转运体的功能障碍将会解释在 CFS 患者中所发 现的许多症状 ： 盗汗、 肉状瘤病、 化学品过敏、 巨噬细胞功能障碍、 免疫系统缺陷、 单胺转运 中断、 疼痛敏感性增强、 Th2 优势 (Th2 dominance)、 中枢神经系统异常、 视力问题、 肌肉中 的钾流失、 短暂低血糖症和抑郁症 (Englebienne P 等人， Interactionsbetween RNase L， ankyrin domain and ABC transporters as a possible originof pain， ion transport， CNS and immune disorders of chronic fatigue immunedysfunction syndrome， J Chronic Fatigue Syndrome 2001 ； 8(3/4) ： 83-102)。
     弹性蛋白酶、 组织蛋白酶 -G 和 m- 钙蛋白酶是能够引起 RNase L 的蛋白水解或 裂解的酶 (Englebienne P 等人， Interactions between RNase L， ankyrindomain and ABC transporters as a possible origin of pain， ion transport， CNS and immune disorders of chronic fatigue immune dysfunction syndrome， J Chronic Fatigue Syndrome 2001， 8(3/4) ： 83-102/Demetre E 等 人， Ribonuclease L proteolysis in peripheral blood mononuclear cells ofchronic fatigue syndrome patients， J Biol Chem 2002 ： 20 ； 277(38) ： 35746-35751)。这三种蛋白酶参与了对抗病原体的防御机制和炎 性过程， 且在炎性反应期间经常发现其以异常高的浓度存在。在 CFS 的情况下， 发现患有此 病症的患者通常具有高浓度的弹性蛋白酶 (Demetre E 等人， Ribonuclease Lproteolysis in peripheral blood mononuclear cells of chronic fatiguesyndrome patients， J Biol Chem 2002 ： 20 ； 277(38) ： 35746-35751/Nijs J 等人， Chronic fatigue syndrome ： exercise performance related to immunedysfunction， Med Sci Sports Exerc 2005 ； 37(10) ： 1647-1654)。
     Demetre E 等人在证明弹性蛋白酶的特异性抑制剂能够在很大程度上抑制在 CFS 患者的 PBMC 培养物中的 RNase L 的蛋白水解时， 证实了弹性蛋白酶在 RNaseL 降解中具有 重要作用。
     面对寻找治疗 CFS 的有效药物的需求， 发明人进行了非常广泛的深入研究和测 试， 因此得出本发明， 其是基于使用 α-1- 抗胰蛋白酶 (AAT) 制备用于治疗 CFS 的药物。发明内容 α-1- 抗胰蛋白酶 (AAT) 是在肝细胞中分泌的糖蛋白， 且通常在血清和大多数 组织中以高浓度存在， 在其中用作丝氨酸蛋白酶抑制剂。AAT 在健康受试对象的血清 中 的 参 考 值 为 0.83-2.00g/l(Kratz A 等 人， Laboratory ReferenceValues， N Engl J Med 2004 ； 315(15) ： 1548-1563)。除了作为蛋白酶抑制剂的活性外， AAT 还被描述成可 能具有重要的抗炎生物功能， 因为其能够显著抑制许多炎性介质和氧化自由基 (Brantly M.， Alphal-antitrypsin ： not just anantiprotease ： extending the half-life of a natural anti-inflammatorymolecule by conjugation with polyethylene glycol， Am J Respir Cell MolBiol 2002 ； 27(6) ： 652-654)。
     AAT 缺乏症是一种遗传疾病， 其主要引起成人早期 (30-40 岁 ) 的肺气肿。第 二常见的表现是肝病， 其可能影响新生儿、 儿童和成人。较不常见的表现是称为坏死性 脂 膜 炎 的 炎 性 皮 肤 病 (American Thoracic Society/EuropeanRespiratory Society Statement ： Standards for the diagnosis andmanagement of individuals with alpha-1 antitrypsin deficiency， Am JRespir Crit Care Med 2003 ； 168 ： 818-900)。
     当前存在治疗性 AAT 浓缩物， 其是通过分馏人类血浆而制备， 用于 AAT 替代疗法 中以便治疗缺乏这种蛋白质且患有相关肺气肿的受试对象。已显示这些浓缩物可以生物
     化学方式有效地将 AAT 的血清浓度提高到高于被认为具有保护性的最低水平 (11μmol/ l)(Wewers MD 等 人， Replacement therapy foralphal-antitrypsin deficiency associated with emphysema， New Eng J Med1987 ； 316 ： 1055-1062)。 此 外， 各种临床 研究表明， AAT 替代疗法在临床上可有效地减缓肺气肿发展且降低死亡率 (Seersholm N 等 人， Doesalpha-1-antitrypsin augmentation therapy slow the annual decline in FEV1in patients with severe hereditary alpha-1-antitrypsin deficiency ？， EurRespir J 1997 ； 10 ： 2260-2263/The Alpha-1-Antitrypsin DeficiencyRegistry Study Group， Survival and FEV1 decline in individuals withsevere deficiency of alpha-1-antitrypsin， Am J Respir Crit Care Med 1998 ； 158 ： 49-59)。
     AAT 替 代 疗 法 的 大 量 临 床 经 验 证 实， 源 自 人 类 血 浆 的 治 疗 性 AAT 浓 缩 物 具 有 极 佳 的 安 全 特 征 (safety profile)(Wencker M 等 人， Long term treatment ofalpha-1-antitrypsin deficiency-related pulmonary emphysema with h u m a n a l p h a - 1 - a n t i t r y p s i n ，E u r R e s p i r J 1 9 9 8 ； 11 ： 428-433/American ThoracicSociety/European Respiratory Society Statement ： Standards for thediagnosis and management of individuals with alpha-1 antitrypsindeficiency， Am J Respir Crit Care Med 2003 ； 168 ： 818-900)。
     为了检验 AAT 对弹性蛋白酶的抑制是否可以防止 RNase L 降解， 发明人使用 CFS 患 者的活体外 PBMC 培养物以及 AAT 浓缩物进行了各种研究。基于这些研究， 发明人证实 CFS 患者的 PBMC 提取物显示升高的弹性蛋白酶活性， 其远高于健康受试对象的 PBMC 提取物。 来自 6 名健康受试对象的 PBMC 提取物显示 81U/mg 提取物的平均弹性蛋白酶活性 (CV ＝ 38.9)， 最小 - 最大值为 51-125U/mg 提取物 ； 而来自 8 名 CFS 患者的 PBMC 提取物显示 322U/ mg 提取物的平均弹性蛋白酶活性 (CV ＝ 30.5)， 最小 - 最大值为 193-453U/mg 提取物。
     发明人还发现 AAT 能够基本上抑制 CFS 患者的 PBMC 培养物的细胞内弹性蛋白酶活性。将 10 名 CFS 患者的 PBMC 在不存在 AAT 和存在以下两种不同 AAT 浓度的情况下培 养 12 小时 ： 3g/l 和 6g/l。关于无 AAT 的对照组中的弹性蛋白酶活性的抑制百分率， 获得如 下结果 ： 对于 3mg/ml AAT 培养物， 细胞内弹性蛋白酶活性的平均抑制率为 -87.2％ (CV ＝ 0.09)， 最低为 -75.3％， 最高为 -95.4％ ； 而对于 6mg/ml AAT 培养物， 细胞内活性的平均抑 制率为 -91.0％ (CV ＝ 0.08)， 最低为 -76.1％， 最高为 -97.4％。
     此外， 发明人证实了 AAT 可防止 CFS 患者的 PBMC 培养物中的 83kDa RNaseL 降解产 生过度活跃形式的 37kDa RNase L。将 2 名健康受试对象的 PBMC 和 2 名 CFS 患者的 PBMC 在不存在 AAT 和存在 3g/l AAT 的情况下培养 12 小时。 在 2 名健康受试对象的 PBMC 培养物 中， 在这两个培养物之间的 RNase L 降解分析中未观察到显著差异。在无 AAT 的情况下培 养 PBMC 之后， 83kDa RNase L 与 37kDaRNase L 的比率分别为 0.3 和 0.4， 而在存在 AAT 的情 况下培养之后， 83kDa RNaseL 与 37kDa RNase L 的比率分别为 0.2 和 0.3。这两个值都低 于 0.5 的极限值， 该极限值被视作表明 83kDa RNase L 发生蛋白水解。在 CFS 患者的 PBMC 培养物中， 发现在存在 AAT 的情况下， RNase L 的降解降低 80％。在无 AAT 的情况下培养 2 名 CFS 患者的 PBMC 之后， 83kDa RNase L 与 37kDa RNase L 的比率分别为 1.4 和 2.4， 而在 存在 AAT 的情况下培养之后， 83kDa RNase L 与 37kDa RNaseL 的比率分别为 0.2 和 0.6。 发明人发现 AAT 激活 2-5A 合成酶路径中所涉及的基因的表达， 使得施用外源 AAT 可使 CFS 患者的 PBMC 中的 RNase L 重新恢复正常活性且防止其发生蛋白水解。在不存在 和存在以下两种不同 AAT 浓度的情况下培养 6 名 CFS 患者的 PBMC ： 0.5g/l 和 3.0g/l。随 后用 Genechips Human Genome U133 Plus 2.0(Affymetrix) 系统提取和分析 RNA。与不 存在 AAT 的培养物相比， 存在 0.5g/l 和 3.0g/l AAT 的培养物中编码 2， 5- 寡腺苷酸合成酶 ( 该酶负责合成 2-5A 分子， 因此是 RNaseL 激活因子 ) 的基因的表达分别增加 2.9 倍和 3.2 倍。因此， 用 AAT 刺激 2， 5- 寡腺苷酸合成酶的表达可重新恢复 RNase L 自身的活性且同时 有助于防止其发生蛋白水解。
     发明人还发现 AAT 抑制金属硫蛋白 (metallothionine) 的表达， 因此施用外源 AAT 可降低 CFS 患者的 PBMC 的促炎性路径的激活。 在不存在和存在以下两种不同 AAT 浓度的情 况下培养 6 名 CFS 患者的 PBMC ： 0.5g/l 和 3.0g/l。随后用 Genechips Human Genome U133 Plus 2.0(Affymetrix) 系统提取和分析 RNA。结果表示为在存在 AAT 的情况下的基因表达 与不存在 AAT 的情况下的基因表达的比率。 在存在 AAT 的情况下培养之后， 编码金属硫蛋白 的各种基因的表达减少。 具体来说， 与不存在 AAT 的培养物相比， 存在 0.5g/l 和 3.0g/l AAT 的培养物中金属硫蛋白 2A、 金属硫蛋白 1X、 金属硫蛋白 1H、 金属硫蛋白 1F 和金属硫蛋白 1E 的表达分别平均减少 2.2 倍和 4.5 倍。如上所述， 金属硫蛋白缺乏会减少促炎性细胞因子 (IL1b、 IL6、 TNFa) 的产生 (Itoh N 等人， Cytokine-induced metallothionine expression and modulation of cytokineexpression by metallothionine， Yakugaku Zasshi 2007 ； 127(4) ： 685-694)。因此， AAT 所引起的表达抑制可产生相同的作用且遏制 PBMC 中的促炎 性路径。 此外， 金属硫蛋白还在一氧化氮 (NO) 产生中扮演非常重要的角色， NO 是免疫介质， 在 CFS 患者中以高浓度存在 (Kurup RK 等人， Hypothalamic digoxin， cerebral chemical dominance and myalgic encephalomyelitis， Int JNeurosci 2003 ； 113(5) ： 683-701)。 AAT 诱导的金属硫蛋白表达的减少会引起 NO 产生的减少， 这是 AAT 在 CFS 患者中的另一种 有益作用。
     发明人还发现 AAT 激活编码 AAT 的基因的表达， 使得施用外源 AAT 可促进其 在 CFS 患者的 PBMC 中的自身表达。在不存在和存在以下两种不同 AAT 浓度的情况下培 养 6 名 CFS 患者的 PBMC ： 0.5g/l 和 3.0g/l。随后用 Genechips HumanGenome U133 Plus 2.0(Affymetrix) 系统提取和分析 RNA。结果表示为在存在 AAT 的情况下的基因表达与 不存在 AAT 的情况下的基因表达的比率。与不存在 AAT 的培养物相比， 存在 0.5g/l 和 3.0g/l AAT 的培养物中编码 AAT 的基因 (SERPINA1) 的表达分别平均增加 1.4 倍和 2.0 倍。虽然 AAT 主要在肝细胞中合成， 但 Perlmutter DH 等人也描述了其在单核细胞中的表 达 (The cellulardefect in alpha 1-proteinase inhibitor(alpha 1-PI)deficiency isexpressed in human monocytes and in Xenopus oocytes injected with humanliver mRNA， Proc Natl Acad Sci U S A， 1985 ； 82(20) ： 6918-6921)。因此， 细胞内 AAT 的表达和 AAT 的存在诱导的表达可对 CFS 患者的 PBMC 培养物的弹性蛋白酶具有抑制作用。此外， 应 当相信 AAT 在 PBMC 细胞中内在化之后可直接抑制细胞内弹性蛋白酶， 如在其他类型的细胞 所述的那样 (Zhang B 等人， Alphal-antitrypsin protects beta-cells from apoptosis， Diabetes 2007 ； 56(5) ： 1316-1323)。因此， CFS 患者的 PBMC 培养物中的这两种弹性蛋白酶 抑制机制可同时存在， 甚至产生累积效应。 AAT 迄今已知的应用是严格基于补偿表现为肺病 ( 肺气肿 ) 或炎性皮肤病 ( 脂膜 炎 ) 的这种蛋白质的天然缺乏， 但来源于这些实验的含 AAT 药物的潜在新型治疗应用与这 些已知应用毫无关联， 因此以上发现更加令人吃惊。
     虽然就在 CFS 治疗中含有 AAT 的新型药物所显现的形式而言， 发明人不希望受限 于任何假设， 但他们已经以非限制性方式确立了以下假设 ： AAT 在引起 CFS 相关症状的免疫 细胞的控制中和免疫系统的相关基因的表达调控中起重要作用。
     CFS 可用从人类血浆纯化或由重组或转基因技术产生的治疗性 AAT 浓缩物治疗。 治疗也可用含有足量 AAT 以便获得最小剂量的血浆或其它治疗产品进行。
     和其它蛋白质一样， 并不认为获得所需结果必需完全 AAT 分子的存在。因此， 含有 自 AAT 分子的对应序列获得的部分氨基酸序列的分子可用于治疗 CFS。这些分子可从人类 血浆获得， 或通过合成方法或重组或转基因技术产生。
     本发明还涉及一种治疗 CFS 的方法， 其包含对患有 CFS 或有发生 CFS 风险的患者 施用治疗有效量的 AAT， 以及一种或一种以上医药学上的惰性或活性载剂。
     具体实施方式
     本发明的治疗方案包括周期性和重复施用 AAT， 以便减少或消除 CFS 症状。以 1 天与 31 天之间的频率， 每千克 (kg) 体重输注 6mg 或以上的 AAT 剂量被视为足以治疗 CFS。 AAT 的优选剂量是以 1 天与 31 天之间的频率， 每千克体重输注 15mg 到 360mg。更优选的剂 量是每周每千克体重输注 25mg 到 60mg， 或依据直到下个剂量的预期时间间隔按比例调整 的这些量的倍数。
     或者， 本发明包括为了在施用 24 小时后， 使血清中 AAT 的期望含量达到基础含量 的 8 倍而制定的治疗方案。
     根据本发明的该实施方案， AAT 可通过肠胃外注射来施用， 且根据一优选实施方 案施用是静脉内进行， 但也可肌肉内或真皮内进行。或者， AAT 可通过吸入来施用。视给药途径而定， AAT 制剂被制成于医药学上可接受的媒剂或载剂中的溶液或悬浮液形式。这 些媒剂的适当实例包括 ： 注射用水、 注射用无菌水和其它水性媒剂 ( 例如氯化钠注射液、 林 格液 (Ringer’ s solution) 注射液、 右旋糖注射液、 右旋糖和氯化钠注射液、 林格乳酸盐 (Ringer’ s lactate) 注射液 ) ； 可混合于水的媒剂 ( 例如乙醇、 聚乙二醇、 丙二醇 ) ； 非水性 媒剂 ( 例如玉米油、 棉籽油、 花生油和芝麻油 )。 对其它赋形剂、 防腐剂、 缓冲溶液、 抗微生物 剂和类似产品的需求和选择是在所属领域技术人员的范围内， 且将取决于各种因素， 包括 给药系统和途径、 所需保存期限以及储存和运输条件。
     实施例
     在等待活体外结果的同时， 发明人获准进行了体恤授权使用 (compassionate use) 试验， 将基于 AAT 的制剂施予被诊断患有 CFS 的患者。
     在 2003 年被诊断患有 CFS 的女性患者达到了 Fukuda 诊断标准， 且其它诱导慢性 疲劳的医学过程 ( 例如内分泌失调、 传染病、 肿瘤病症和 / 或精神障碍 ) 已被排除在外。在 用 AAT 浓缩物开始治疗之前， 患者 PBMC 中的弹性蛋白酶浓度为 1459U/mg( 每毫克 PBMC 提取 物中的活性单位 ) ； 在功能储备评估测试中， 患者展现 17.2ml/kg/min( 理论值的 63.5％ ) 的最大耗氧量、 64 瓦 ( 理论值的 54.0％ ) 的最大功率、 149 跳 ( 理论值的 87.6％ ) 的最大 心率 ； 且在神经认知功能障碍研究中， 患者显示非常严重的认知损害。 通过静脉内输注基于 AAT 的制剂 (60 毫克 / 千克体重， 每周一次 ) 持续 8 周， 对患者进行治疗。在治疗结束时， 患 者 PBMC 中的弹性蛋白酶浓度为 134U/mg( 每毫克 PBMC 提取物中的活性单位 ) ； 在功能储备 评估测试中， 患者展现 16.4ml/kg/min( 理论值的 60.6％ ) 的最大耗氧量、 85 瓦 ( 理论值的 71.7％ ) 的最大功率、 151 跳 ( 理论值的 88.8％ ) 的最大心率 ； 且在神经认知功能障碍研究 中， 患者显示非常严重的认知损害。总而言之， 用基于 AAT 的制剂治疗后， 患者显示明显的 临床改善， 重新返回工作岗位， 经历较少的疲劳， 体育锻炼的忍耐力得到提高， 且认知功能 障碍稍微有所减轻。
     本发明因此证实， 通过本发明 CFS 患者可用基于 AAT 制备的药物有效地治疗。 这些 患者将受免疫细胞的慢性炎症影响， 且根据本发明， AAT 抑制弹性蛋白酶且因此避免 RNase L 降解， 从而防止离子通道失去管制， 而离子通道失去管制被认为是造成 CFS 相关症状学的 原因。此外且根据活体外获得的结果， AAT 可调控免疫系统的相关特定基因的表达， 以便重 新恢复免疫系统的正常功能且降低促炎性路径的激活。
     虽然已通过优选实施方案的实施例描述了本发明， 但这些实施例不应理解为限制 本发明， 本发明是通过对以下权利要求的最宽的解释来限定。9