唐古特青兰在制备治疗畜禽病毒性传染病的药物中的应用 技术领域 本发明属于中药领域， 具体涉及唐古特青兰及其提取物在制备治疗畜禽病毒性传 染病的药物中的应用。
背景技术 随着社会经济水平发展， 人们对畜禽产品的质量要求越来越高， 畜禽传染病对养 殖业危害很大。 对于病毒性传染病， 抗生素、 磺胺类药物无治疗作用， 虽然金刚烷胺、 利巴韦 林、 阿昔洛韦等少数药物， 具有一定疗效， 但抗病毒谱窄、 毒副作用大、 价格高昂、 且易产生 耐药毒株。因此， 寻求新型抗病毒药物迫在眉睫。
唐古特青兰为唇形科植物甘青青兰 Dracocephalum tanguticum Maxim 的干燥 地上部分， 多年生草本。产于西藏、 青海、 四川西部和甘肃南部， 是青藏高原特有植物， 藏 语称 “知羊格” ， 具有清肝热、 胃热、 干黄水、 愈疮、 止血的功效。唐古特青兰具有抗缺氧及 抗氧化作用 [ 中草药， 1995， 26(12) ： 641-644 ； 中草药， 1994， 25(3) ： 134-137]， 另申请号为 200710201082.6 的专利介绍了唐古特青兰在治疗人的生殖器疱疹病毒的作用。
迄今， 尚未见有唐古特青兰防治畜禽病毒性传染病的报道。
发明内容 本发明所要解决的技术问题是提供唐古特青兰在制备治疗畜禽病毒性传染病的 药物中的应用。
本发明的技术问题是通过以下技术方案实施的 ：
唐古特青兰在制备治疗畜禽病毒性传染病的药物中的应用。 所述的畜禽病毒性传 染病优选为鸡新城疫、 猪蓝耳病、 圆环病毒病、 猪蓝耳病与圆环病毒混合感染。前述唐古特 青兰不仅仅指唐古特青兰生药材本身， 还包括唐古特青兰炮制品、 唐古特青兰提取物， 以唐 古特青兰为活性成分的制剂或以唐古特青兰为活性成分之一的制剂 ； 优选为唐古特青兰提 取物或以唐古特青兰为活性成分的制剂。
本发明唐古特青兰提取物为采用水或有机溶剂作为溶剂， 采用二氧化碳超临界萃 取法、 渗漉、 煎煮等常规技术的提取物。 所述的有机溶剂是指乙醇、 甲醇等不同极性的溶剂。 优选采用质量百分比浓度为 80％～ 95％的乙醇或质量百分比浓度为 75％～ 85％的甲醇。
水提取物优选按照如下方法制备得到 ：
取唐古特青兰， 按药材重量的 5 ～ 20 倍加水浸泡后， 煎煮 1 ～ 4 次， 每次 1 ～ 3h， 合并煎煮液， 脱水浓缩至稠膏状烘干即得唐古特青兰提取物。
有机溶剂提取物优选按照如下方法制备得到 ：
取唐古特青兰， 粉碎， 按药材重量的 5 ～ 20 倍重量的 80％～ 95％乙醇 ( 质量百分 比浓度 ) 或 75％～ 85％甲醇 ( 质量百分比浓度 ) 浸泡 1 ～ 4 小时后， 渗漉， 回收乙醇， 浓缩 至稠膏状， 低温减压烘干， 得到提取物。
唐古特青兰生药材或其提取物可直接粉碎制成散剂， 或加入药学上可接受的辅料
采用常规方法制成口服制剂或注射剂。所述口服制剂优选为合剂、 片剂或口服液。
中等家畜 ( 如猪、 羊等 ) 每日服用唐古特青兰原生药材为 5 ～ 30g， 日服两次， 家禽 用量是中等家畜的十分之一。
本发明的有益效果 ： 发明人以唇形科植物唐古特青兰及其提取物治疗鸡新城疫、 猪蓝耳病、 圆环病毒病、 猪蓝耳病与圆环病毒混合感染， 疗效确实稳定。本发明提供了唐古 特青兰用于制备治疗畜禽传染病的药物中的应用， 为临床治疗畜禽传染病提供了一种新的 选择。 具体实施方式
以下通过实例形式的具体实施方式， 对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。
下面就本发明的临床效果进一步说明本发明的疗效 ：
试验例 1、 唐古特青兰鸡胚接种抗新城疫病毒试验。
1、 药品 ： (1) 唐古特青兰样品 1 原液 ： 按照实施例 1 方法制备得到， 用生理盐水配成每 mL 药 液含 1g 生药的浓度。
(2) 唐古特青兰样品 2 原液 ： 按照实施例 2 方法制备得到， 用生理盐水配成每 mL 药 液含 1g 生药的浓度。
(3) 西药对照药 ： 50mg/mL 利巴韦林溶液。
2、 鸡新城疫毒株由本实验室提供， 鸡胚尿囊液的 HA 效价 9log2， 经测定， 最小致死 量为 1 ∶ 1000 万倍稀释。
3、 试验鸡胚 10 日龄非免鸡胚， 购自仪征市大仪鸡场。
4、 试验分组 10 日龄鸡胚 75 个， 具体分组情况见表 1。
5、 试验方法
(1) 药物毒性实验将唐古特青兰样品 1 和唐古特青兰样品 2 分别用生理盐水稀释， 将样品原液及用生理盐水稀释的不同浓度的药液分别接种于 4 只 10 日龄鸡胚的尿囊腔中， 每只 0.2mL， 置 37℃温箱孵育 72h， 每天观察存活情况， 鸡胚全部存活的最高药液浓度为正 式实验起始浓度， 同时设生理盐水对照组， 药物对鸡胚毒性实验结果见表 2。
表 1 实验分组情况
编号 1 2 3组别 试验 I 组 试验 II 组 试验 III 组数量 ( 枚 ) 15 15 15处理 唐古特青兰样品 1 原液 唐古特青兰样品 2 原液 利巴韦林4101982188 A CN 101982190说阳性对照组 空白对照组 15 15明书接种病毒尿囊液， 按试验量给生理盐水 不接种、 不给药3/8 页4 5
表 2 中药对鸡胚毒性实验结果 (n ＝ 4)
*分母为接种胚数， 分子为存活胚数。 (2) 具体方法 ： 试验 I 组每个鸡胚尿囊腔同时接种唐古特青兰样品 1 原液 0.2mL， 病毒稀释液 试验 II 组每个鸡胚尿囊腔同时接种唐古特青兰样品 2 原液 0.2mL， 病毒稀释液 试验 III 组每个鸡胚尿囊腔同时接种 50mg/mL 的利巴韦林 0.2mL， 病毒稀释液0.1mL。
0.1mL。
0.1mL。 阳性对照组每个鸡胚尿囊腔同时接种生理盐水 0.2mL， 病毒 0.1mL。
空白对照组不接种病毒， 不给药。
上述鸡胚在 37 ℃恒温箱中继续孵化， 每天照蛋 2 ～ 3 次， 弃去 24h 内死胚， 收取 24 ～ 72h 死胚和 72h 活胚的尿囊液， 低温保存备用。以血凝 (HA) 实验检测鸡胚尿囊液的病 毒效价。
(3) 唐古特青兰对鸡新城疫病毒增殖的影响， 结果见表 3。
表 3 唐古特青兰对鸡新城疫病毒增殖的抑制作用测定结果
分组 唐古特青兰样品 1 原液24 ～ 72h 死亡胚数 2**72h 活胚数 13**HA 效价 0**5101982188 A CN 101982190说3** 12* 15 0明书12** 3* 0 15 0** 5log2* 9log2 04/8 页唐古特青兰样品 2 原液 利巴韦林组 阳性对照组 空白对照组
* ** 与阳性对照组比较 ： P ＜ 0.05， P ＜ 0.01
试验例 2、 本发明对实验性鸡新城疫的治疗试验
1、 试验动物 ： 本试验用 35 日龄艾维茵肉鸡 160 只， 随机分为 8 组， 每组 20 只， 即唐 古特青兰样品 1( 按实施例 3 制备 ) 预防组与治疗组， 唐古特青兰样品 2( 按实施例 4 制备 ) 预防组与治疗组， 西药预防组与治疗组， 感染对照组， 空白对照组。
2、 鸡新城疫毒株由本实验室提供， 鸡胚尿囊液的 HA 效价为 91og2。
3、 试验方法 ：
(1) 先测定尿囊液最小致死量， 经测定尿囊液的最小致死量为 1000 倍稀释， 每只 鸡滴鼻与点眼稀释后的尿囊液 0.2mL。
(2) 操作空白对照组的鸡不用药， 不接种尿囊液， 其余 7 组的鸡在同一时间里每只 滴鼻点眼稀释后的尿囊液 0.2mL。
(3) 用药方法与疗效唐古特青兰样品 1 预防组在接种尿囊液的同时， 开始用唐古 特青兰样品 1 口服， 每只鸡每次 1mL， 每天用药 2 次， 连用 4d。唐古特青兰样品 1 治疗组在 接种尿囊液 4d 后 ( 出现病状 ) 用药， 每只鸡每次 1mL， 每天用药 2 次， 连用 4d。唐古特青兰 样品 2 预防组在接种尿囊液的同时， 用唐古特青兰样品 2 口服， 每只鸡每次 1mL， 每天用药 2 次， 连用 4d ； 唐古特青兰样品 2 治疗组在接种尿囊液 4d 后 ( 出现病状 ) 用药， 每只鸡每次 1mL， 每天用药 2 次， 连用 4d。西药预防组在接种尿囊液的同时， 开始用 50mg/mL 的利巴韦 林口服， 每只鸡 1mL， 每日 2 次， 连用 4d。西药治疗组用 50mg/mL 的利巴韦林， 在接种尿囊液 4d 后 ( 出现症状 ) 用药， 每只鸡每次 1mL 口服， 每天 2 次， 连用 4d。感染对照组的鸡只接种 尿囊液， 不用任何药物， 结果见表 4。
表 4 鸡新城疫预防与治疗结果
试验例 3、 本发明对鸡新城疫治疗的临床观察
鸡新城疫由新城疫病毒引起的一种急性高度接触性传染病， 各种日龄的鸡均可发 病， 常呈败血症经过， 主要特征是呼吸困难， 下痢， 神经机能紊乱， 粘膜和浆膜出血， 死亡率 高， 可造成很大经济损失。 用唐古特青兰样品 1( 按实施例 3 制备 ) 和唐古特青兰样品 2( 按 实施例 4 制备 )， 每只鸡每次口服 1mL， 每天用药两次， 连用 4 天。在江苏省徐州市、 宿迁市、 南通市、 盐城市对发病鸡进行药物治疗试验， 结果见表 5、 表 6。
表 5 唐古特青兰样品 1 对鸡新城疫临床疗效结果
表 6 唐古特青兰样品 2 对鸡新城疫临床疗效结果可见， 本发明所制作的药物治疗鸡新城疫一千余例， 均取得较好疗效， 一般治疗 2d 后停止死亡， 3 ～ 4d 后可治愈， 治愈后一般不复发， 表明本发明治疗鸡新城疫有甚高疗效。 试验例 4、 本发明对猪蓝耳病与圆环病毒病的临床治疗结果
2010 年 6 月 5 日， 江苏泰州某规模猪场， 有 50 日龄仔猪 137 头， 出现精神沉郁， 食 欲减退或废绝。6 月 6 日， 体温上升到 40.8℃左右， 呼吸困难， 全身皮肤发红， 腹泻， 腹股沟 淋巴结肿大。 剖检 5 头， 剖检变化 ： 喉头充血肿胀， 肺呈点状和斑块状出血， 切面呈大理石样 变化， 肾水肿、 出血， 呈土黄色。心包膜和胸腔存在大量积液， 心脏有大量出血斑。肠系膜淋 巴结、 腹股沟淋巴结出血。取病料送江苏农科院检查， 用 RT-PCR( 反转录聚合酶链式反应 ) 检测， 诊断为猪蓝耳病病毒与圆环病毒混合感染。立即用本发明药物治疗组 1( 按照实施例 5 方法制备得到 )、 本发明药物治疗组 2( 按照实施例 6 方法制备得到 ) 和本发明药物治疗
组 3( 按照实施例 7 方法制备得到 ) 治疗， 并用黄芪多糖为对照药物， 共治疗 4 天， 每头仔猪 每次 5mL， 每天用药 2 次， 治疗结果见表 7、 表 8、 表 9。
表 7 猪蓝耳病与圆环病毒混合感染临床疗效结果单位 ： 头·％
表 8 猪蓝耳病与圆环病毒混合感染临床疗效结果单位 ： 头·％
表 9 猪蓝耳病与圆环病毒混合感染临床疗效结果单位 ： 头·％通过本次临床应用结果看， 本发明中药注射液治疗猪蓝耳病、 圆环病毒病， 疗效比 黄芪多糖效果明显。表明本发明中药制剂， 治疗猪病毒性传染病有显著疗效。
本发明实施例中使用的是采自青海唇形科植物唐古特青兰的干燥品。
实施例 1 本发明提取物 1 的制备
唐古特青兰 500g， 按药材总重量的 10 倍加水浸泡 6h 后， 置煎煮罐煎 1h， 滤出药 液， 再加药材总重量的 10 倍水煎 1h， 滤出药液， 合并两次药液， 脱水浓缩至稠膏状， 低温减 压烘干， 共得 45g 提取物。
实施例 2 本发明提取物 2 的制备
取唐古特青兰 500g， 粉碎， 用唐古特青兰粉末重量 10 倍量， 质量百分浓度为 90％ 乙醇浸泡 4 小时后， 渗漉， 回收乙醇， 浓缩至稠膏状， 低温减压烘干， 共得 28g 提取物。
实施例 3 本发明口服液 1 的制备
唐古特青兰 500g， 按药材重量的 8 倍加水浸泡 6h， 置煎煮罐煎 2h， 滤出药液， 再加 药材重量的 8 倍水煎 2h， 滤出药液， 合并两次药液， 浓缩至 500mL， 装瓶， 封口、 灭菌即可。
实施例 4 本发明口服液 2 的制备
取唐古特青兰 500g， 溶于唐古特青兰药材重量 10 倍量 85％乙醇浸泡 4 小时后， 渗 漉， 回收乙醇， 浓缩至无醇味， 装瓶， 封口、 灭菌即可。
实施例 5 本发明注射剂 1 的制备
唐古特青兰 1000g， 按药材重量的 12 倍加水浸泡 6h， 置煎煮罐煎 1h， 滤出药液， 再 加 10 倍水煎 1h， 滤出药液， 合并两次药液， 脱水浓缩至稠状， 加入质量百分浓度为 95％的乙 醇， 使含醇量达 60％， 放置 24h 后， 抽滤， 回收乙醇。滤液再加入质量百分浓度为 95％的乙 醇， 使含醇量达 70％， 放置 24h 后， 抽滤， 回收乙醇。将滤液加蒸馏水至 800mL。加入 8 克的 活性炭， 煮沸恒温 30min， 滤液加蒸馏水至 1000mL， 加热至 80℃， 加入 20mL 苯甲醇， 反复抽滤 至澄明， 调 pH 至 7.0， 灌封， 灭菌 30min， 备用。
实施例 6 本发明注射剂 2 的制备
取唐古特青兰 1000g， 粉碎， 加入唐古特青兰药材重量 10 倍量， 浓度为 95％乙醇 中， 浸泡 4h 后过滤， 残渣再用 95％乙醇浸泡 4h 过滤， 合并两次滤液， 回收乙醇至无醇味， 将 药液浓缩至 800mL， 加入 8 克活性炭， 煮沸恒温 30min， 抽滤， 滤液加蒸馏水至 1000mL， 加热至 80℃， 加入 20mL 苯甲醇， 反复抽滤至澄明， 灌封， 灭菌 30min， 备用。
实施例 7 本发明注射剂 3 的制备
取唐古特青兰 1000g， 粉碎， 溶于唐古特青兰药材重量 8 倍量， 浓度为 80％甲醇中， 浸泡 5h 后过滤， 残渣再用 80％甲醇浸泡 5h 过滤， 合并两次滤液， 回收甲醇至无醇味， 将药 液浓缩至 800mL， 加入 8 克活性炭， 煮沸恒温 30min， 抽滤， 滤液加蒸馏水至 1000mL， 加热至
80℃， 加入 20mL 苯甲醇， 反复抽滤至澄明， 灌封， 灭菌 30min， 备用。
实施例 8 本发明提取物 3 的制备
取唐古特青兰 500g， 粉碎， 用唐古特青兰粉末重量 10 倍量， 质量百分浓度为 75％ 甲醇浸泡 4 小时后， 渗漉， 回收甲醇， 浓缩至稠膏状， 低温减压烘干， 共得 30g 提取物。
实施例 9 本发明片剂的制备
将按照实施例 1 方法制备得到的唐古特青兰提取物加糊精， 混匀制粒， 60℃烘干， 过 20 目筛整粒， 压片。10