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作为抗癌剂的新的吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物
    【技术领域】
     本发明涉及式 I 的取代的吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐 ：式 I，
     它们具有抗增殖活性， 例如抗癌活性， 因而可用于人体或动物体的治疗方法中。 本 发明还涉及取代的吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物的制造方法， 涉及含有所述化合物的药物组 合物， 并涉及其用于制备在温血动物 ( 例如人类 ) 中产生抗增殖作用的药剂中的应用。
     异常信号转导是癌发生的标志。细胞表面受体、 它们的配体和蛋白酪氨酸激酶是 生长信号传导途径的关键成分， 并在多种人类肿瘤中发生突变或上调。 具体而言， 表皮生长 因子受体 (EGFR) 途径参与肿瘤促发事件， 例如细胞分裂、 细胞粘附和迁移、 血管发生和抗 凋亡。EGFR 过表达出现在三分之一的全部上皮癌中， 该过表达可根据组织类型从 20％变化 至 80％， 并且与对激素疗法、 细胞毒性剂和射线疗法的抗性相关。
     EGFR 属 于 结 构 相 关 的 erbB 受 体 家 族， 其 包 括 EGFR(HER-1， erbBl)、 HER-2/ neu(erbB2)、 HER-3(erbB3) 和 HER-4(erbB4)。这些跨膜糖蛋白具有用于结合底物的胞外配 体结合结构域、 胞质酪氨酸激酶 (TK) 结构域和 Src 同源 2(SH2) 结构域。EGF、 转化生长因 子 a 和双调蛋白仅结合 EGFR， 而肝素结合 EGF、 β- 动物纤维素 (β-cellulin) 和表皮调节 素 (epiregulin) 结合 EGFR 和 HER-4， 调蛋白 (heregulin) 和神经调节蛋白结合 HER-3 和 HER-4。
     EGFR 在癌症中的核心地位使得人们竭尽全力地致力于开发 EGFR 拮抗剂。在临床 试验中进行最深入的两个策略是受体单克隆抗体——其能阻断配体结合和受体激活—— 和 EGFR TK 的小分子抑制剂。 第一代小分子抑制剂作为能可逆性地竞争 TK 催化位点的 ATP 类似物发挥作用。 正在开发的新一代抑制剂能产生不可逆的拮抗作用和 / 或靶向多种 erbB 受体。
     受体酪氨酸激酶在生物化学信号传导中起重要作用， 其能引发细胞复制。它们 是这样的大分子酶， 即其跨越细胞膜， 并具有生长因子例如表皮生长因子 (EGF) 的胞外结 合结构域和作为激酶能使蛋白质中的酪氨酸类氨基酸磷酸化的胞内部分， 从而影响细胞增 殖。已悉知多种类别的基于生长因子家族的受体酪氨酸激酶， 所述生长因子家族可结合不 同受体酪氨酸激酶 (Wilks， Advances in Cancer Research， 1993， 60， 43-73)。所述类别包 括 I 类受体酪氨酸激酶、 II 类受体酪氨酸激酶以及 III 类受体酪氨酸激酶， 其中 I 类受体 酪氨酸激酶包括 EGF 受体酪氨酸激酶家族， 例如 EGF、 TGFα、 NEU、 erbB、 Xmrk、 HER 和 let23 受体， II 类受体酪氨酸激酶包括胰岛素受体酪氨酸激酶家族， 例如胰岛素、 IGFI 和胰岛素
     相关受体 (IRR) 受体， III 类受体酪氨酸激酶包括血小板衍生长因子 (PDGF) 受体酪氨酸激 酶家族， 例如 PDGFα、 PDGFβ 和集落刺激因子 1(CDF1) 受体。
     已知 I 类激酶例如 EGF 受体酪氨酸激酶家族常常存在于常见的人类癌症中， 例 如： 乳腺癌 (Sainsbury et.al.， Brit J.Cancer， 1988， 58， 458 ； Guerin et al， Oncogene Res.， 1988， 3， 21 和 Klijn et al.， Breast Cancer Res.Treat.， 1994， 29， 73) ； 非小细胞 肺癌 (NSCLC)， 包括腺癌 (Cerny et.， Brit.J.Cancer， 1986， 54， 265 ； Reubi et al.， Int. J.Cancer， 1990， 45， 269 ； 和 Rusch et al.， Cancer Research， 1993， 53， 2379) 和肺部鳞状细 胞癌 (Hendler et al.， Cancer Cells， 1989， 7， 347) ； 膀胱癌 (Neal.et al.， Lancet， 1985， 366) ； 食管癌 (Mukaida et al.， Cancer， 1991， 68， 142) ； 胃肠癌， 例如结肠癌、 直肠癌或胃癌 (Bolen et al.， Oncogene Res.， 1987， 1， 149) ； 前列腺癌 (Visakorpi et al.， Hist℃ hem. J.， 1992， 24， 481) ； 白血病 (Konakaet al.， Cell， 1984， 31， 1035) ； 以及卵巢癌、 支气管癌或 胰腺癌 ( 欧洲专利申请 0400586)。随着更多的人肿瘤组织用于检测 EGF 受体酪氨酸激酶 家族， 预测这些激酶还广泛存在于更多的癌症中， 例如甲状腺癌和子宫癌。 还已悉知正常细 胞中很少检测到 EGF 类酪氨酸激酶活性， 而这在恶性肿瘤细胞中通常可以检测到 (Hunter， Cell.， 1987， 50， 823)。最近还发现 (W J Gullick， Brit.Med.Bull.， 1991， 47， 87) 具有酪氨 酸激酶活性的 EGF 受体在许多人类癌症中过表达， 所述人类癌症例如脑肿瘤、 肺部鳞状细 胞肿瘤、 膀胱肿瘤、 胃肿瘤、 乳腺肿瘤、 头颈肿瘤、 食道肿瘤、 妇科肿瘤和甲状腺肿瘤。
     因此， 已认识到受体酪氨酸激酶的抑制剂对于作为哺乳动物癌细胞生长的选择 性抑制剂而言应当是很有价值的 (Yaish et al.Science， 1988， 242， 933)。可支持该观点 的证据是 erbstatin—— 一种 EGF 受体酪氨酸激酶抑制剂 —— 特异地减缓移植至无胸腺 裸鼠中的表达 EGF 受体酪氨酸激活酶的人乳腺癌的生长， 而对不表达 EGF 受体酪氨酸激 酶的另一种癌的生长没有影响 (Toi et al.， Eur.J.Cancer Clin.Oncol.， 1990， 26， 722)。 苯乙烯的多种衍生物也被报道具有酪氨酸激酶抑制性 ( 欧洲专利申请 0211363、 0304493 和 0322738)， 并可用作抗肿瘤剂。两个作为 EGF 受体酪氨酸激酶抑制剂的上述苯乙烯衍 生物的体内抑制效果已表明能够抑制接种至裸鼠的人鳞状细胞癌的生长 ((Yoneda et al.， Cancer Research， 1991， 51， 4430)。多种已知的酪氨酸激酶抑制剂公开于 T R Burke Jr. 最近的综述中 (Drugs of the Future， 1992， 17， 119)。信号转导抑制剂的实例包括 可抑制 EGFR( 表皮生长因子受体 ) 响应的试剂， 例如 EGFR 抗体、 EGF 抗体和作为 EGFR 抑 制剂的分子 ； VEGF( 血管内皮生长因子 ) 抑制剂 ； 和 erbB2 受体抑制剂， 例如结合 erbB2 TM 受 体 的 有 机 分 子 或 抗 体， 例 如 HERCEPTIN (Genentech， Inc.of South San Francisco， California， USA)。EGFR 抑制剂记载于例如 WO 95/19970( 公布于 1995 年 7 月 27 日 )、 WO 98/14451( 公布于 1998 年 4 月 9 日 )、 WO 98/02434( 公布于 1998 年 1 月 22 日 ) 和美 国专利 5,747,498( 授权于 1998 年 5 月 5 日 )。EGFR 抑制剂包括， 但不限于， 单克隆抗体 C255 和抗 EGFR 22Mab(ImClone Systems Incorporated of New York， New York， USA)， 化 合 物 ZD-1839(AstraZeneca)、 BIBX-1382(Boehringer Ingelheim)、 MDX-447(Medarex Inc.of Annandale， New Jersey， USA) 和 OLX-103(Merck&Co.of Whitehouse Station， New Jersey， USA)、 VRCTC-310(Ventech Research) 和 EGF 融 合 毒 素 (Seragen Inc.of Hopkinton， Massachusetts)。VEGF 抑制剂， 例如 SU-5416 和 SU-6668(Sugen Inc.of South San Francisco， California， USA)， 也可与上述组成相结合或共同给药。 VEGF 抑制剂记载于例如 WO 99/24440( 公布于 1999 年 5 月 20 日 )、 PCT 国际申请 PCT/IB99/00797( 提交于 1999 年 5 月 3 日 )、 WO 95/21613( 公布于 1995 年 8 月 17 日 )、 WO 99/61422( 公布于 1999 年 12 月 2 日 )、 美国专利 5,834,504( 授权于 1998 年 11 月 10 日 )、 WO98/50356( 公布于 1998 年 11 月 12 日 )、 美国专利 5,883,113( 授权于 1999 年 3 月 16 日 )、 美国专利 5,886,020( 授权 于 1999 年 3 年 23 日 )、 美国专利 5,792,783( 授权于 1998 年 8 月 11 日 )、 WO 99/10349( 公 布 于 1999 年 3 月 4 日 )、 WO 97/32856( 公 布 于 1997 年 9 月 12 日 )、 WO97/22596( 公 布 于 1997 年 6 月 26 日 )、 WO 98/54093( 公 布 于 1998 年 12 月 3 日 )、 WO 98/02438( 公 布 于 1998 年 1 月 22 日 )、 WO 99/16755( 公布于 1999 年 4 月 8 日 ) 和 WO 98/02437( 公布 于 1998 年 1 月 22 日 )， 所有上述申请在此通过引用的方式全文纳入。一些具体 VEGF 抑 制剂的其他实例为 IM862(Cytran Inc.of Kirkland， Washington， USA) ； 抗 VEGF 单克隆抗 体贝伐单抗 (bevacizumab)(Genentech， Inc.of South San Francisco， California) 和 血管酶 (angiozyme)——一种来自 Ribozyme(Boulder， Colorado) 和 Chiron(Emeryville， California) 的合成性核酶。ErbB2 受体抑制剂例如 GW-282974(Glaxo Wellcome pic) 以 及单克隆抗体 AR-209(Aronex Pharmaceuticals Inc.of The Woodlands， Texas， USA) 和 2B-1(Chiron) 可与上述组分联合给药。这类 erbB2 抑制剂包括记载于以下文献的抑制 剂： WO 98/02434( 公布于 1998 年 1 月 22 日 )、 WO99/35146( 公布于 1999 年 7 月 15 日 )、 WO 99/35132( 公布于 1999 年 7 月 15 日 )、 WO 98/02437( 公布于 1998 年 1 月 22 日 )、 WO 97/13760( 公布于 1997 年 4 月 17 日 )、 WO 95/19970( 公布于 1995 年 7 月 27 日 )、 美国专 利 5,587,458( 授权于 1996 年 12 月 24 日 ) 和美国专利 5,877,305( 授权于 1999 年 3 月 2 日 )， 所述各份文献在此通过引用的方式全文纳入。可用于本发明的 ErbB2 受体抑制剂 还记载于 1999 年 1 月 27 日提交的美国临时申请 60/117,341 和 1999 年 1 月 27 日提交的 美国临时申请 60/117,346 中， 这两篇文献在此也通过引用的方式全文纳入。其他可使用 的抗增殖剂包括作为法尼基 (famesyl) 蛋白转移酶的抑制剂和受体酪氨酸激酶 PDGFr 的 抑制剂， 包括下列美国专利申请中公开和要求保护的化合物 ： 09/221946( 提交于 1998 年 12 月 28 日 ) ； 09/454058( 提交于 1999 年 12 月 2 日 ) ； 09/501163( 提交于 2000 年 2 月 9 日)； 09/539930( 提 交 于 2000 年 3 月 31 日 ) ； 09/202796( 提 交 于 1997 年 5 月 22 日 ) ； 09/384339( 提交于 1999 年 8 月 26 日 ) 和 09/383755( 提交于 1999 年 8 月 26 日 ) ； 以及 下列美国临时专利申请中公开和要求保护的化合物 ： 60/168207( 提交于 1999 年 11 月 30 日)； 60/170119( 提交于 1999 年 12 月 10 日 ) ； 60/177718( 提交于 2000 年 1 月 21 日 ) ； 60/168217( 提交于 1999 年 11 月 30 日 ) 和 60/200834( 提交于 2000 年 5 月 1 日 )。上述 各份专利申请和临时专利申请在此通过引用的方式全文纳入。 本发明的组分还可与可用于 治疗异常细胞生长或癌的其他试剂一起使用， 所述其他试剂包括但不限于能够增强抗肿瘤 免疫应答的试剂——例如 CTLA4( 细胞毒性淋巴细胞抗原 4) 抗体——和能够阻断 CTLA4 的 其他试剂 ； 以及抗增殖剂， 例如其他法尼基蛋白转移酶抑制剂。可用于本发明的具体 CTLA4 抗体包括记载于美国临时申请 60/113,647( 提交于 1998 年 12 月 23 日 ) 中的那些 CTLA4 抗体， 所述文献在此通过引用全文纳入。
     受体酪氨酸激酶对于能引发细胞复制的促有丝分裂信号的传递特别重要。 这些跨 越细胞质膜的大分子糖蛋白具有其特异性配体 ( 例如， 对于 EGF 受体而言， 特异性配体为表 皮生长因子 (EGF)) 的胞外结合结构域。配体的结合会激活存在于受体胞内部分的受体激酶的酶活性。这种活性会使靶蛋白中关键的氨基酸酪氨酸磷酸化， 从而越过细胞质膜转导 增殖信号。
     已悉知 erbB 受体酪氨酸激酶家族 —— 包括 EGFR、 erbB2、 erbB3 和 erbB4—— 常 常参与促进肿瘤细胞的增殖和存活 ( 参见 Olayioye et al.， EMBO J.， 2000， 19， 3159)。 可实现这种促进作用的一个机理是受体在蛋白水平上过表达， 所述过表达通常是由于基 因扩增所致。已在许多常见的人类癌症中观察到这一现象 ( 参见 Klapper et_al.， Adv. Cancer Res.， 2000， 77， 25)， 例 如 乳 腺 癌 (Sainsbury et al.， Brit.J.Cancer.1988， 58， 458 ； Guerin et al.， Oncogene Res..1988， 3， 21 ； Slamon et al..Science.1989， 244， 707 ； Kliin et al.， Breast Cancer Res.Treat..1994， 29， 73， 并参见 Salomonet al.， Crit. Rev.Oncol.HematoL.1995， 19， 183) ； 非 小 细 胞 肺 癌 (NSCLC)， 包 括 腺 癌 (Cerny et al.， Brit.J.Cancer.1986， 54， 265 ； Reubi et al.， Int.J.Cancer.1990， 45， 269 ； Rusch et al.， Cancer Research.1993， 53， 2379 ； Brabender et al， Clin.Cancer Res..2001， 7， 1850) 和 其他肺癌 (Hendler et al.， Cancer Cells.1989， 7， 347 ； Ohsaki etal， Oncol.Rep..2000， 7， 603) ； 膀胱癌 (Neal et al.， Lancet.1985， 366 ； Chow etal.， Clin.Cancer Res..2001， 7， 1957， Zhau et al.， Mol Carcinog.， 3， 254) ； 食管癌 (Mukaida et al.， Cancer.1991， 68， 142) ； 胃 肠 癌， 例 如 结 肠 癌、 直 肠 癌 或 胃 癌 (Bolen et al.， Oncogene Res..51987， 1， 149 ； Kapitanovic etal.， Gastroenterology.2000， 112， 1103 ； Ross et al.， Cancer Invest..2001， 19， 554) ； 前列腺癌 (Visakorpi et al.， Hist℃ hem.J..1992， 24， 481 ； Kumar etal..2000， 32， 73 ； Scher et al..J.Natl.Cancer Inst..2000， 92， 1866) ； 白血病 (Konaka et al.， CeU， 1984， 37， 1035， Martin-Subero et al..Cancer Genet Cytogenet.2001， 127-174) ； 卵巢癌 (Hellstrom eLal， Cancer Res..2001， 61， 2420) ； 头颈癌 (Shiga et al.， 0Head Neck.2000， 22， 599) 或胰腺癌 (Ovotny et al.， Neoplasma.2001， 48， 188)。随着更 多的人肿瘤组织用于检测 erbB 受体酪氨酸激酶家族的表达情况， 预测其广泛存在且重要 性在将来会进一步增强。
     还预测 EGF 型受体酪氨酸激酶的抑制剂将有利于治疗其他细胞过度增殖疾病， 例 如银屑病。
     AstraZeneca 已开发并推出了式 II 的吉非替尼 (Gefitinib， US5770599) ：
     式 II，
     这是一种口服活性的选择性表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂 (EGFR-TKI)。 已 表明， 对于局部晚期或者转移性非小细胞肺癌患者， 在其经基于铂和多西塔塞 (docetaxel) 的化学疗法失败后， 可将吉非替尼作为单一疗法对该患者继续进行治疗， 所述患者正得益 于或已得益于吉非替尼。其商标名为 Iressa。
     OSI Pharmaceutical 已 开 发 并 推 出 了 式 III 的 厄 洛 替 尼 (Erlotinib， US 5747498) ：
     III，
     这是一种口服活性的 ATP 竞争性 EGFR TK 小分子抑制剂， 目前用作对非小细胞肺 癌 (NSCLC) 和胰腺癌疾病的标准治疗手段。当其与标准细胞毒性抗生素抗癌药物结合使用 时， 活性有望增强。其商标名为 Tarceva。
     此 外， EGFR 和 erbB2 的 抑 制 性 抗 体 ( 分 别 为 (c-225/ 西 妥 昔 单 抗
     (cetuximab)) 和
     ( 曲妥珠单抗 (trastuzumab))) 也已被证明有利于临床治疗选定的实体瘤 ( 参见 Mendelsohn et al， 2000， 5Oncogene， 19， 6550-6565)。 许多公布的专利使用含有吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶核的化合物作为抗癌药物。 WO-96/31510 和 WO-98/14449 各自公开了 4- 氨基 -1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生 物及其作为抗肿瘤剂的应用。
     WO-98/14451 公开了 3-(3- 氨基苯甲基氨基 )4-(3- 氯代苯基氨基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶、 其作为抗肿瘤剂的应用和其在表皮过增殖情况下的应用。
     WO-98/14450 公开了在吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶环的 3 位上带有连氮取代基的 4- 氨 基 -1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物及其作为抗肿瘤剂的应用。
     WO-95/19774 公开了双环嘧啶衍生物及其作为 EGF、 erbB2 和 erbB4 受体酪氨酸激 酶抑制剂的应用。公开的吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物在吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶环的 4 位上含 有一个氨基 - 芳基基团， 但在 3- 为上没有取代基。
     Makarov 等人 (Chemistry of Heterocyclic Compounds， 2003， 39(2)， 238-243) 公 开了 3， 5- 二 -(N， N- 二甲基氨基亚甲基 ) 氨基 -4- 甲氧基羰酰吡唑和 3， 5- 二 -(N， N- 二甲 基氨基亚甲基 ) 氨基 -4- 氰基吡唑化合物与某些胺反应生成吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶化合物。
     国际专利申请公布文本 WO 03/000187 记载了新的吡唑并嘧啶和吡咯并嘧啶。国 际专利申请公布文本 WO 02/057267、 美国专利 6,686,366、 6,680,324 和 6,673,802 记载了 对腺苷 A1、 A2A 和 A3 受体具有特异性的化合物。国际专利申请公布文本 WO 01/47507 记载 了受体酪氨酸激酶抑制剂与能够结合 α1- 酸性糖蛋白的有机化合物的结合。国际专利申 请公布文本 WO 04/013141 记载了具有 TIE2(TEK) 活性的缩合吡啶和嘧啶。国际专利申请 公布文本 WO 04/014850 记载了作为神经激肽拮抗剂的取代的氨基嘧啶。
     国际专利申请公布文本 WO 03/000695 记载了作为蛋白激酶抑制剂的吡咯并嘧 啶。美国专利 6,187,778 记载了 4- 氨基吡咯并 [3， 4-d] 嘧啶作为神经肽 Y 受体拮抗剂。 美国专利 6,140,317、 6,140,332 和 6,180,636 记载了吡咯并嘧啶。美国专利 6,696,455、 6,537,999 和 5,877,178 记载了吡咯并嘧啶衍生物。 美国专利 5,958,930 记载了吡咯并嘧啶 和呋喃并嘧啶 (furopyrimidine) 衍生物。[29] 国际专利申请公布文本 03/000688 记载了 作为蛋白激酶抑制剂的氮杂吲哚的制备方法。国际专利申请公布文本 WO 03/018021 和 WO 03/018022 记载了用于治疗 IGF-IR 相关病症的嘧啶。 国际专利申请公布文本 WO 02/092599记载了用于治疗对 IGF-IR 酪氨酸激酶的抑制作用响应的疾病的吡咯并嘧啶。国际专利申 请公布文本 WO 01/72751 记载了作为酪氨酸激酶抑制剂的吡咯并嘧啶。国际专利申请公布 文本 WO 00/71129 记载了激酶的吡咯并三嗪抑制剂。国际专利申请公布文本 WO 97/28161 记载了吡咯并 [2， 3-d] 嘧啶及其作为酪氨酸激酶抑制剂的应用。
     有关吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物作为抗癌剂的其他参考文献为 J.Heterocycl. Chem. ， 27 ， 647-660 、 J.Med.Chem. ， 1976 ， 19 ， 555-558 、 J.Heterocycl.Chem. ， 1990 ， 27 ， 1245-1248、 Journal of the Chinese Chemical Society， 2000， 47， 347-350.、 美国专利 5,917,039、 美 国 专 利 6,423,871、 J.Org.Chem.195621(11)1240-1256、 J.Med.Chem.1991， 34， 2892-2898、 Helvetica Chimica Acta(1956)-No.l 19， 987-991、 J.Med.Chem.1997， 40， 3601-3616、 美国专利 3,600,389、 美国专利 4,182,878。
     虽然上述抗癌化合物已对本领域作出了巨大贡献， 但仍然需要开发选择性或药效 更好、 毒性更小或副作用更少的抗癌药物。 发明内容 出乎意料的是， 我们现已发现一组选定的本发明取代的吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生 物或其药学上可接受的盐具有强效抗肿瘤活性。 现有技术均未公开 1 位被含有乙炔基或 3， 5- 二取代基团的取代基取代、 且 4 位被取代的苯甲胺取代的吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶化合物。 无意于仅通过对单个生物学过程的影响表明本发明所公开的化合物具有药理学活性， 本发 明人认为， 所述化合物通过抑制参与到可引起肿瘤细胞增殖的信号转导步骤中的 erbB 受 体酪氨酸激酶家族的一个或者多个成员来提供抗肿瘤效果。具体而言， 相信本发明化合物 通过抑制 EGF 和 / 或 erbB2 受体酪氨酸激酶来提供抗肿瘤效果。
     当所述方法用于制备本发明取代的吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物或其药学上可接 受的盐时， 其作为本发明的另一个特征提供， 并通过下文的代表性实例进行说明。 必要的起 始原料可通过有机化学中的标准方法获得。 所述起始原料的制备描述于所附非限制性实施 例中。 或者， 必要的起始原料也可通过与已阐述的方法类似的方法获得， 所述类似的方法在 有机化学人员的常规技能范围内。
     本发明涉及式 I 的取代吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物及其药学上可接受的盐 ：
     式 I，
     其中 n 和 m 为 1、 2或3；
     W 为单键、 C1-C6 烷基、 烯基、 炔基、 NH、 S、 SO、 SO2、 O、 C ＝ O 或酰胺基， R1 各自独立 地选自氢、 卤素、 羟基、 氨基、 羟氨基、 羧基、 硝基、 胍基、 脲基、 氨甲酰基、 氰基、 三氟甲基，
     或 R1 各自独立地选自 C1-C6 烷基、 C3-C6 环烷基、 C1-C6 烷氧基、 C3-C6 环烷氧基、 (C1-C6) 烷氧基羰基、 芳氧基、 杂芳氧基、 C1-C6 硫代烷氧基、 C3-C6 硫代环烷氧基、 硫代芳氧基、 硫代杂芳氧基、 硝基、 氨基、 N- 单 (C1-C6) 烷基氨基、 N， N- 二 (C1-C6) 烷基氨基、 甲酰氨基、 酰 氨基、 乙酰氨基、 羟氨基、 C1-C6 烷氧基氨基、 肼基、 三氟甲基、 三氟甲氧基、 C2-C6 烯基、 C2-C6 炔 基、 芳基、 杂环基、 稠合芳基、 稠合杂芳基和稠合杂环基 ；
     R1 各自独立地选自 R3- 磺酰氨基、 苯二酰亚氨基 -(C1-C4)- 烷基磺酰氨基、 苯甲酰 氨基、 苯磺酰氨基、 3- 苯脲基、 2- 氧吡咯烷 -1- 基、 2， 5- 二氧基吡咯烷 -1- 基和 C2-C4 烷酰 氨基， 其中 R1 中所述苯磺酰氨基、 苯基、 苯氧基、 苯胺基或苯硫基 (phenylsulfanyl) 取代基 可任选地带有 1 或 2 个卤原子、 (C1-C4) 烷基、 氰基、 甲磺酰基或 (C1-C4) 烷氧基取代基 ； 或者 任意两个 R1 与它们所连接的碳原子一起形成一个含有至少 1 或 2 个选自氧、 硫或氮的杂原 子的 5-8 元环 ； 并且其中烷氧基或烷氨基基团的烷基基团或烷基部分可为直链， 或者在含 有至少 3 个碳原子的情况下可为支链或环状 ；
     其中 R3 选自 C1-C6 烷基、 C3-C6 环烷基 ；
     R2 选自氢、 C1-C6 烷基、 C3-C6 环烷基、 C1-C6 烷氧基羰基、 芳基、 杂芳基、 C1-C6 硫代烷 基、 三氟甲基、 三氟甲氧基、 杂环基、 稠合芳基、 稠合杂芳基和稠合杂环基， 例如 1， 3- 苯并二 噁茂 (1， 3-benzodioxol)、 1， 4- 苯并二氧芑 (1， 4-benzodioxin) ；
     并且 R2 选自苯基或苯甲基， 并被 1、 2、 3 或 4 个基团取代， 取代基独立地选自 R4，
     其中 R4 选自氢、 卤素、 羟基、 氨基、 羟氨基、 羧基、 硝基、 胍基、 脲基、 氨甲酰基、 氰 基、 三氟甲基、 C1-C6- 烷基、 C3-C6 环烷基、 羟基、 C1-C6 烷氧基、 C3-C6 环烷氧基、 C1-C6 烷氧基羰 基、 芳氧基、 杂芳氧基、 C1-C6 硫代烷氧基、 C3-C6 硫代环烷氧基、 硫代芳氧基、 硫代杂芳氧基、 硝基、 氨基、 N- 单 (C1-C6) 烷氨基、 N， N- 二 (C1-C6) 烷氨基、 甲酰氨基、 酰氨基、 乙酰氨基、 羟 氨基、 C1-C6 烷氧基氨基、 肼基、 三氟甲基、 三氟甲氧基、 烯基、 炔基、 芳基、 杂环基、 稠合芳基、 稠合杂芳基和稠合杂环基。 具体实施方式
     式 I 化合物及其药学上可接受的盐可通过适用于化学相关化合物的任何已知方 法制备。本发明的活性化合物可通过以下合成方案 I 制备。
     步骤 I
     步骤 II
     步骤 III
     步骤 IV
     步骤 V
     步骤 VI
     R1、 R2 和 W 定义如上。 方案 I 多种式 I 化合物还可通过以下路线制备 ： (a)通过文献中给出的已知方法， 将式 A 化合物使用无机酸例如盐酸并使用亚硝酸钠 溶液在 -10℃至 5℃的温度下重氮化， 以得到式 B 的取代的苯肼盐酸盐。其他可使用的无机 酸为硫酸等。将式 B 化合物用合适的碱中和， 以制得新的式 C 的取代的苯肼， 所述合适的碱 例如氨、 单烷基胺、 二烷基胺、 三烷基胺、 氢氧化钠、 氢氧化钾、 碳酸钠、 碳酸钾、 碳酸铵和碱 金属的碳酸氢盐。
     (b)
     将式 C 化合物与乙氧基亚甲基丙二腈在质子溶剂例如甲醇、 乙醇、 异丙醇、 正丁 醇、 二甲基甲酰胺或这些溶剂的混合物中于 60℃的温度下反应， 以得到新的式 D 的 N 取代 的苯基 -5- 氨基 -1H- 吡唑 -4- 腈。在另一种制备方法中， 将式 C 化合物与通过原甲酸三 乙酯与丙二腈反应而原位生成的乙氧基亚甲基丙二腈反应， 以得到新的式 D 的 N- 取代的苯 基 -5- 氨基 -1H- 吡唑 -4- 腈。温度条件在 40℃ -100℃范围内。
     (c)
     将式 D 化合物中的氰基使用无机酸例如硫酸在水性介质中水解， 然后紧接着使用 合适的碱在 10℃ -40℃的温度下碱化， 以得到新的式 E 的 N 取代的苯基 -5- 氨基 -1H- 吡 唑 -4- 甲酰胺， 所述合适的碱例如氨或碱金属的碳酸氢盐、 碳酸盐或氢氧化物。
     (d)
     将式 E 化合物与甲酰胺在无溶剂条件下或在溶剂例如环丁砜中于约 200 ℃的条 件下反应， 以得到新的式 F 的 N 取代的苯基 -5- 氨基 -1H- 吡唑 -4- 甲酰胺。温度条件在 150℃ -220℃范围内。
     (e)
     将式 F 化合物与磷酰氯在非质子溶剂例如二氯甲烷、 氯乙烷、 氯仿或这些溶剂的 混合物中于回流温度条件下反应， 以得到新的式 G 的 N- 取代的 4- 氯 - 吡唑并 [3， 4-d] 嘧 啶。在另一种制备方法中， 将式 F 化合物与亚硫酰氯、 三氯化磷或五氯化磷在非质子溶剂例 如二氯甲烷、 氯乙烷、 氯仿或这些溶剂的混合物中于 25℃至溶剂回流温度下反应， 以得到新
     的式 G 的 N- 取代的 4- 氯 - 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶。
     (g)
     G H 式I
     将式 G 化合物与式 H 的取代的烷基胺于质子溶剂例如甲醇、 乙醇、 异丙醇或这些溶 剂的混合物中于回流温度下回流， 以得到新的式 I 的 1- 取代的 4- 氨基取代的 - 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶。
     此外， N- 苯环上被乙炔基取代的式 I 化合物及其药学上可接受的盐可通过适用于 化学相关化合物的任意已知方法进行制备。 N- 苯环上被乙炔基取代的本发明活性化合物可 按照以下方案 II 中给定的方法合成。
     步骤 I
     步骤 II
     步骤 III
     步骤 IV
     步骤 V
     步骤 VI
     步骤 VII
     步骤 VIII
     方案 II通过文献中给出的已知方法， 将式 I 化合物使用无机酸例如盐酸并使用亚硝酸钠 溶液在 -10℃至 5℃的温度下重氮化， 以得到式 J 的碘代苯肼盐酸盐固体。其他可使用的无 机酸为硫酸等。将式 J 化合物用合适的碱中和， 以制得式 K 的碘代苯肼， 所述合适的碱例如 氢氧化钠、 氢氧化钾、 碳酸钠、 碳酸钾、 碳酸铵和碱金属碳酸氢盐。
     (i)
     将式 K 化合物与乙氧基亚甲基丙二腈在质子溶剂例如甲醇、 乙醇、 异丙醇、 正丁 醇、 二甲基甲酰胺或这些溶剂的混合物中于 60℃的温度下反应， 以得到新的式 L 的 N- 碘代 苯基 -5- 氨基 -1H- 吡唑 -4- 腈。 在另一种制备方法中， 将式 K 化合物与通过原甲酸三乙酯与 丙二腈反应而原位生成的乙氧基亚甲基丙二腈反应， 以得到新的式 L 的 N- 碘代苯基 -5- 氨基 -1H- 吡唑 -4- 腈。温度条件在 40℃ -100℃范围内。
     (j)
     将式 L 化合物中的氰基使用无机酸例如硫酸在水性介质中水解， 然后紧接着使 用合适的碱在 10 ℃ -40 ℃的温度下进行碱化， 以得到新的式 -M 的 N- 碘代苯基 -5- 氨 基 -1H- 吡唑 -4- 甲酰胺， 所述合适的碱例如氨或碱金属的碳酸氢盐、 碳酸盐或氢氧化物。
     (k)
     将式 N 化合物与甲酰胺在无溶剂条件下或在溶剂例如环丁砜中于约 200 ℃的温 度下反应， 以得到新的式 O 的 N- 碘代苯基 -5- 氨基 -1H- 吡唑 -4- 甲酰胺。温度条件在 150℃ -220℃范围内。
     (l)
     将式 O 化合物与磷酰氯在无溶剂条件下或在非质子溶剂例如二氯甲烷、 氯乙 烷、 氯 仿 或 这 些 溶 剂 的 混 合 物 中 于 回 流 温 度 条 件 下 反 应， 以 得 到 新 的 式 -P 的 N-( 碘代 )4- 氯 - 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶。在另一种制备方法中， 将式 O 化合物与亚硫酰氯、 三氯 化磷或五氯化磷在非质子溶剂例如二氯甲烷、 氯乙烷、 氯仿或这些溶剂的混合物中于温度 25℃下反应， 以得到新的式 P 的 N- 取代的 4- 氯 - 吡唑 [3， 4-d] 嘧啶。
     (m)
     通过文献中给出的已知方法， 将式 Q 化合物与式 H 的取代烷基胺在质子溶剂例 如甲醇、 乙醇、 异丙醇或这些溶剂的混合物中于回流温度条件下回流， 以得到新的式 S 的 1-( 碘代 ) 取代的 4- 氨基取代的 - 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶。 (n)
     将式 S 化合物与取代三甲基硅烷基乙炔在质子溶剂例如甲醇、 乙醇、 异丙醇或这 些溶剂的混合物中于回流温度条件下回流， 以得到新的式 T 的 N-( 三甲基硅烷基保护的乙 炔基取代的 ) 苯基 -4- 氨基取代的 - 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶。
     (o)
     ( 具有乙炔基的式 I 化合物 )
     将式 T 化合物用合适的碱脱保护， 以制得新的式 I 的乙炔取代的化合物， 所述合适 的碱例如氨、 单烷基胺、 二烷基胺、 三烷基胺、 氢氧化钠、 氢氧化钾、 碳酸钠、 碳酸钾、 碳酸铵 和碱金属的碳酸氢盐。
     N- 苯环上被氰基取代的本发明活性化合物可根据以下方案 III 中给出的方法合 成。
     SV( 具有氰基基团的式 I 化合物 )
     方案 III
     将式 S 化合物与氰化亚铜和碘化铜在二甲基甲酰胺或二甲亚砜中于 120℃ -145℃ 的温度范围内加热， 以得到新的式 V 的 N( 氰基取代的 ) 苯基 -4- 氨基取代 - 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶。
     最具体地， 本发明涉及选自以下的式 I 化合物 ：
     式 U 的 1-(3- 乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物
     式 T 的 [1-(3- 三甲基硅烷基乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物
     式 S 的 3- 碘苯基 -1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物
     式 V 的 3- 氰基苯基 -1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物
     式 I 的 3， 5- 二甲基吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物
     式 I 的间甲苯基 -1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物
     i) 式 J 至 P 的 (1-3- 碘苯基 )- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物
     ii) 式 E 至 G 的 3， 5- 二甲基吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物
     iii) 式 E 至 G 的 (1- 间甲苯基 )- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物体外研究
     MTT 增殖试验
     MTT[3-(4， 5- 二甲基噻唑 -2- 基 )-2， 5- 二苯基溴化四唑鎓 ] 试验由 Mosmann 于 1983 年首次进行了记载， 其基于活细胞的线粒体脱氢酶裂解浅黄色 MTT 的四唑鎓环并形成
     基本不能够透过细胞膜的深蓝色甲 甲(formazan) 晶体、 从而导致其在健康细胞中累积的能力。添加洗涤剂来溶解细胞可使晶体释放， 即将晶体溶解。存活细胞的数量与所生成的 产物的水平成正比。 然后则可通过简单的比色试验使颜色量化。 所述比色试验使用浓 度为 0-1000ng/ml 的厄洛替尼 (Erlotinib) 及其衍生物在 A549 和 H1299 细胞中进行。试 验方案基于 ATCC 并根据厂商说明书进行 ( 目录号 30-1010K)。
     蛋白质印迹分析
     使用由 MTT 增殖试验确定的理想药物浓度对合适培养基中的 1×106A549 或 H1299 细胞处理 72h， 然后提取细胞裂解产物并在减压条件下使用 10％ SDS PAGE 凝胶分级。将凝 胶印迹至经处理的尼龙膜 (Bio-Rad) 上并对 EGFR、 P13K 和 AKT 进行免疫检测。
     基质胶 (matrigel) 侵袭试验
     使用改进的博伊登室 (Boyden chamber) 试验在各种浓度的本发明化合物 ( 根据 MTT 试验确定 ) 的存在下对 H1299 或 A549 细胞的体外侵袭力进行评估。使用所述化合物 对细胞处理 48h。将 1×106 细胞悬浮在补加有 0.2％ BSA 的 600μl 无血清培养基中， 并放 置在包被有基质胶 (0.7mg/ml) 的 transwell 小室 (Corning Costar Fischer Scientific Cat#07-200-158， Pittsburgh PA) 的上区室。向小室的下区室填充 200μl 血清培养基， 并 使细胞迁移 24h。 培养后， 将细胞固定并用 Hema-3 染色， 然后如前文所述进行量化 (Mohanam 等， 1993)。迁移细胞用侵袭百分数定量表示。
     体外血管生成试验为确定厄洛替尼及其衍生物的抗血管生成特性， 如前所述使用理想浓度的药物对 A549 细胞处理 72h， 之后， 用无血清培养基代替完全培养基处理 12h。所述无血清培养基也 称作条件培养基， 用于根据标准方法诱导生长至 80％汇合率的 HMEC 细胞的血管生成。
     体内研究 ：
     上述化合物对裸鼠皮下肺肿瘤的作用
     方法
     向裸鼠的右侧后肢胁部植入 2×106A549 细胞。 当观察到肿瘤 ( ＞ 2mm) 后， 使用厄 洛替尼和剂量为厄洛替尼的 1/10 的上述化合物对小鼠进行口服处理或腹膜内 (ip) 处理。 通过文献检索， 将 100mg/kg 厄洛替尼确定为基准剂量。所选的本发明化合物在 1/10 的浓 度 (10-80ng/ml) 下所引起的对肿瘤生长的阻滞作用与厄洛替尼的类似。
     本发明的优点
     1. 上述新化合物优于现有的非小细胞肺癌标准疗法， 例如吉非替尼和厄洛替尼， 并且潜在地可用于肺癌疗法。
     2. 上述新化合物还可作用于其他区域的癌症例如胰腺癌， 并潜在地可用于对胰腺 癌的治疗。
     3. 上述新化合物还可作用于其他区域的癌症例如咽喉癌和口腔癌， 并潜在地可用 于咽喉癌和口腔癌的治疗。
     结合以下具体实施例， 本发明将得以更充分地描述， 这些实施例不应解释为限制 本发明的范围。
     实验步骤
     实 施 例 -1 ： (2， 3- 二 氢 - 苯 并 [1， 4] 二 氧 芑 -6- 基 甲 基 )-[1-(3- 乙 炔 基 - 苯 基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ] 胺 ( 化合物序号 01) 的制备
     化合物序号 ： 25化合物序号 ： 13化合物序号 ： 01向连接有机械搅拌器、 温度计座、 冷凝器、 滴液漏斗和氮气起泡器的 250ml 的 4 颈 圆底烧瓶中加入 50ml 二甲基甲酰胺。 加入 10.0g(20.60mmol)(2， 3- 二氢 - 苯并 [1， 4] 二氧 芑 -6- 基甲基 )-[1-(3- 碘苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺 ( 化合物序号 25)、 14.50g(0.146mol) 乙炔基三甲基硅烷、 46.0mg 乙酸钯 ( 六 ( 乙酸基 ) 三钯 (II))、 108.0mg 三苯基膦及 20.6ml 三乙胺。在 25-35℃的物料温度下保持 30-45 分钟。将反应物料温度 升至 80-85℃。在 80-85℃的物料温度下保持 4 小时。将反应物料温度冷却至 50-55℃并 保持 2 小时。将反应物料温度冷却至 25-30℃并维持搅拌过夜。在真空条件下完全蒸除溶 剂。将粗的油状剩余物溶于 160ml 水中， 并用 300ml 氯仿萃取化合物。有机层用硫酸钠干 燥。过滤硫酸钠并用 50ml 氯仿洗涤硫酸钠。氯仿于真空下完全蒸除， 得到 9.50g 油状粗产 +1 品 ( 化合物序号 13)。 所得化合物用质谱表征 [455(M )]。 将 9.0g 油状粗产品溶于 85ml 甲醇和 85ml 氯仿混合溶剂中。加入 11.30g 碳酸钾。在 25-35℃的物料温度下保持 14 小时。 真空条件下完全蒸除溶剂， 得到 7.50g 油状粗产品。将油状粗产品用柱色谱以己烷和乙酸 乙酯混合物为流动相进行纯化。得到 3.6g 产品 ( 产率 ： 根据理论值计算为 45.70％ )。熔 点： 161.0℃
     波谱数据 ：
     FT-IR(KBr)(cm-1) ； 3365， 3270， 3209， 3085， 3002， 2937， 2872， 2099， 1591， 1575， 1534， 1506， 1491， 1428， 1347， ， 1232， 1204， 1100， 1064， 788， 724， 1
     400MHz H NMR(DMSO-d6)δvalue(ppm) ： 4.19(s)C ≡ CH(1H)， 4.30(s)2(CH2) (4H) ， 4.63-4.64(d)(CH2)(2H) ， 6.79-6.86(m)Ar-3H ， 7.42-7.55(d&t)Ar-4H ， 8.22-8.24(d)， CH(1H)， 8.38-8.43(t)CH(1H)， 8.89(broad)(NH)(1H). 13
     C NMR ： δ value(ppm) ： 42.78(1C) ， 63.97(1C) ， 64.03(1C) ， 81.35(1C) ， 82.87(1C)， 101.86(1C)， 116.29(1C)， 116.89(1C)， 120.45(1C)， 120.73(1C)， 122.43(1C)， 123.02(1C)， 129.05(1C)， 131.83(1C)， 134.14(1C)， 139.11(2C)， 142.45(1C)， 143.16(1C)， 153.8(1C)， 156.30(1C)， 156.63(1C).
     MS ： 383.2[M]， 382.2[M-1]
     value ： 值； broad ： 宽峰
     实施例 -2 ： 3-{4-[( 苯并 [1， 3] 二噁茂 -5- 基甲基 )- 氨基 ]- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧 啶 -l- 基 }- 苯基氰 ( 化合物序号 42) 的制备
     化合物序号 ： 30 化合物序号 ： 42
     向连接有机械搅拌器、 温度计座、 冷凝器、 滴液漏斗和氮气起泡器的 100ml 的 4 颈 圆 底 烧 瓶 中 加 入 10ml 二 甲 基 甲 酰 胺 和 1.0g(2.12mmol) 苯 并 [1， 3] 二 噁 茂 -5- 基 甲基 -[1-(3- 碘苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺 ( 化合物序号 30)。加入 0.57g(6.40mmol) 氰化亚铜。将反应物料加热至回流温度。将物料在回流温度下保持 4 小 时。 将反应物料温度冷却至 25-30℃。 加入 1.0ml 氨水。 将物料搅拌 15 分钟。 加入 100.0ml 水。将物料搅拌 15 分钟。产物用 50ml 乙酸乙酯萃取， 有机层用硫酸钠干燥。将乙酸乙酯在 真空下完全蒸除。加入 5ml 异丙醚使油状粗产品结晶。得到 500.0mg 所述化合物 ( 产率 ： 根据理论值计算为 50％ )
     波谱数据 ：
     FT-IR(K Br)(cm-1) ： 3383， 3361， 3091， 2912， 2226， 1619， 1594， 1579， 1492， 1435， 1318， 1037， 985， 784， 672
     MS ： 372.3[M+2]， 371.2[M+1]
     实施例 -3 ： (2， 3- 二氢 - 苯并 [1， 4] 二氧芑 -6- 基甲基 )-[1-(3- 碘苯基 )-1H- 吡 唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺 ( 化合物序号 25) 的制备
     化合物序号 ： 76 化合物序号 ： 25
     向连接有机械搅拌器、 温度计座、 冷凝器和滴液漏斗的 100ml 的 4 颈圆底烧瓶中 加入 31.0ml 乙醇和 3.0g(8.41mmol)4- 氯 -1-(3- 碘苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 ( 化 合物序号 76)。在搅拌下于 25-30 ℃加入 2.90g(14.40mmol)2， 3- 二氢 - 苯并 [1， 4] 二氧 芑 -6- 基 - 甲胺盐酸盐。将物料在 25-30℃下搅拌 15-20 分钟。在物料温度保持在 25-30℃ 的条件下经 30-45 分钟缓慢加入 30.0g(0.20mol) 三乙胺。在 25-30℃的物料温度下保持 30-45 分钟。将反应物料温度升至回流温度。在回流的物料温度下保持 5 小时。将反应物 料温度冷却至 25-30℃。 在 25-30℃的物料温度下保持 60-90 分钟。 将反应物料温度冷却至 0-5℃。 在 0-5℃的物料温度下保持 90-120 分钟。 过滤固体并将固体用 10.0ml 冷乙醇洗涤。 化合物在 60-65℃真空干燥。得到 2.8g 干燥产品 ( 产率 ： 根据理论值计算为 68.62％ )。
     HPLC 纯度 ： 99.85％。
     熔点 ： 197.9℃。
     波谱数据 ：
     FT-IR(K Br)(cm-1) ： 3426， 3193， 3099， 2969， 2926， 1602， 1578， 1509， 1472， 1102， 1067， 938， 676， 633
     400MHz 1H NMR(DMSO-d 6) δ value(ppm) ： 4.20(s)2-CH2(4H) ， 4.63-4.65(d) CH2(2H)， 6.79-6.86(m)Ar-Ha， Hb， Hc(3H)， 7.31-7.35(t)Ar-Hd(1H)， 7.67-7.69(d)At-He， Hf， Hg(3H)， 8.24-8.26(d)Ar-Hh(1H)， 8.41-8.47(d)Ar-Hi(1H)， 8.85(s)NH(1H) 13
     C NMR ： δ value(ppm) ： 42.74(1C) ， 63.98(2C) ， 94.44(1C) ， 101.81(1C) ， 116.23(1C)， 116.81(1C)， 119.41(1C)， 120.39(1C)， 128.28(1C)130.99(1C)， 131.74(1C)， 134.19(1C)， 134.40(1C)， 139.93(1C)， 142.41(1C)， 143.11(2C)， 153.04(1C)， 156.24(1C)， 156.60(1C).MS ： 486.4[M+1]
     value ： 值
     实施例 4 ： (2， 3- 二氢 - 苯并 [1， 4] 二氧芑 -6- 基甲基 )-[1-(3， 5- 二甲基 - 苯 基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ] 胺 ( 化合物序号 49) 的制备
     化合物序号 ： 79 化合物序号 ： 49
     向连接有机械搅拌器、 温度计座、 冷凝器和滴液漏斗的 1.0L 的 4 颈圆底烧瓶中加 入 350.0ml 乙醇和 25.0g(0.096mol)4- 氯 -1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧 啶 ( 化合物序号 79)。将物料在 25-30℃下搅拌 15-20 分钟。搅拌下于 25-30℃加入 32.0g 2， 3- 二氢 - 苯并 [1， 4] 二氧芑 -6- 基 - 甲胺盐酸盐。将物料在 25-30℃下搅拌 15-20 分钟。 在保持物料温度为 25-30℃的条件下经 30-45 分钟缓慢加入 30.0g 三乙胺。在 25-30℃的 物料温度下保持 30-45 分钟。将反应物料的温度升至回流温度。将物料在回流温度下保持 10-11 小时。将反应物料冷却至 25-30℃。在 25-30℃的物料温度下保持 60-90 分钟。将反 应物料冷至 0-5℃。在 0-5℃的物料温度下保持 90-120 分钟。滤出固体并将固体用 50.0ml
     冷乙醇洗涤。将化合物在 60-65℃下真空干燥至恒重。化合物干重 35.50g。向连接有机械 搅拌器、 温度计座和冷凝器的 1.0L 的 4 颈圆底烧瓶中加入 175.0ml 二甲亚砜和 35.50g 的干 燥粗制化合物。将物料温度升至 55-60℃。在 55-60℃的物料温度下保持 30-45 分钟。通 过硅藻土床 (hyflow bed) 滤出不溶固体， 并用 20.00ml 热二甲亚砜洗涤烧瓶。将澄清滤液 收集至烧瓶中。向连接有机械搅拌器、 温度计座和滴液漏斗的 3.0L 的 4 颈圆底烧瓶中加入 1000.0ml 水。在保持物料温度为 25-35℃下将二甲亚砜溶液经 30-45 分钟缓慢加入水中。 在 25-35℃的物料温度下保持 60-90 分钟。将物料的温度冷却至 5-10℃。在 5-10℃的物料 温度下保持 90-120 分钟。滤出固体并将固体用 150ml 水洗涤。将化合物于 60-65℃下真空 干燥， 得到 32.0g 干燥化合物 ( 产率 ： 根据理论值计算为 85.5％ )。以 HPLC 测得产品纯度 为 99.48％。
     熔点范围为 183.4℃ -183.6℃。
     波谱数据 ：
     FT-IR(K Br)(cm-1) ：
     3423 ， 3236 ， 3158 ， 3097 ， 2991 ， 2919 ， 1593 ， 1546 ， 1506 ， 1485 ， 1457 ， 1437 ， 1426 ， 1371， 1344， 1326， 1306， 1280， 1262， 1252， 1234， 1217， 1205， 1150， 1122， 1097， 1065， 1048， 962， 933， 911， 885， 851， 829， 792， 765， 732， 703， 683， 653， 634， 581， 538， 467， 434.
     400MHz 1H NMR(DMSO-d6)δvalue(ppm) ： 2.34s(2CH3)， 4.19s(2CH2)， 4.64d(CH2)， Ar Ha， Hb， Hc m(3H)， Ar Hd， He， Hfs(3H)， Hg s(1H)， Hh s(1H)， NH t(1H) 13
     CNMR ： δ value(ppm) ： 21.05(2C) ， 42.76(1C) ， 64.04(2C) ， 101.72(1C) ， 116.3(1C)， 118.32(2C)， 120.45(1C)， 127.47(1C)， 131.97(1C)， 133.39(1C)， 138.22(2C)， 138.89(1C)， 142.45(1C)， 143.17(1C)， 152.78(1C)， 156.31(1C)， 156.42(1C).MS ： 388.0[M+1]
     value ： 值
     实施例 -4a ： (2， 3- 二氢 - 苯并 [1， 4] 二氧芑 -6- 基甲基 )-[1-(3， 5- 二甲基 - 苯 基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ] 胺盐酸盐 ( 化合物序号 49A) 的制备
     化合物序号 ： 49 化合物序号 ： 49-A
     向连接有机械搅拌器、 温度计座、 冷凝器和滴液漏斗的 1.0L 的 4 颈圆底烧瓶中加 入 450ml 丙酮。加入 30.0g(0.078mol)2， 3- 二氢 - 苯并 [1， 4] 二氧芑 -6- 基甲基 )-[1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ] 胺 ( 化合物序号 49)。 将物料在 25-30℃ 下搅拌 15-20 分钟。搅拌下于 25-30℃加入 21.0g 异丙醇 (IPA) 盐酸溶液。在物料温度为 25-30℃下保持 30-45 分钟。滤出固体并将固体用 150.0ml 丙酮洗涤。将化合物于 65-70℃ 下高真空干燥。得到 30.0g 干燥化合物 ( 产率 91.46％ )。
     HPLC 纯度 ： 99.80％。
     熔点 244.1℃ -244.3℃
     波谱数据 ：
     FT-IR(K Br)(cm-1) ： 3424， 3227， 3094， 3052， 2978， 2878， 2746， 1665， 1596， 1561， 1508， 1471， 1435， 1352， 1260， 1239， 1150， 985， 917， 885， 827， 778， 684， 646
     400MHz 1H NMR(DMSO-d6)δvalue(ppm ： 2.49s(2CH3)， 4.20s(2CH2)， 4.65 d(CH2)， 6.80-6.84Ar Ha， Hb， Hc m(3H)， 6.85-6.89Ar Hd， He， Hf s(3H)， 6.99Hg s(1H)， 7.77Hh s(1H)， 8.44NH t(1H)， 9.10broad(HCl) 13
     C NMR ： δ value(ppm) ： 20.98(2C) ， 44.25(1C) ， 64.05(2C) ， 101.46(1C) ， 116.78(1C)， 117.01(1C)， 119.28(2C)， 120.89(1C)， 128.60(1C)， 129.72(1C)， 135.30(1C)， 137.84(2C)， 138.51(1C)， 142.90(1C)， 143.24(1C)， 150.74(1C).
     MS ： 425.3[M+2]， 424.3[M+1]， 422.3[M-1]， 387.4[M-HCl]
     value ： 值； broad ： 宽峰
     实施例 -5 ： 苯并 [1， 3] 二噁茂 -5- 基甲基 -[1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ) 胺 ( 化合物序号 50) 的制备
     化合物序号 ： 79 化合物序号 ： 50
     向连接有机械搅拌器、 温度计座、 冷凝器和滴液漏斗的 250ml 的 4 颈圆底烧瓶中加 入 40.0ml 乙醇和 2.0g(7.74mmol)4- 氯 -1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧 啶 ( 化合物序号 79)。搅拌下于 25-30℃加入 2.33g(15.40mmol)(3， 5- 亚甲基二氧基 ) 苯 甲胺。将物料温度升至回流温度。在物料温度为回流温度下保持 6 小时。将物料温度冷至 25-30℃。在物料温度为 25-30℃下保持 60 分钟。将反应物料温度冷却至 0-5℃。在物料温 度为 0-5℃下保持 60 分钟。 滤出固体并将固体用 10.0ml 冷乙醇洗涤。 将化合物于 60-65℃ 真空干燥。化合物干重 ： 2.20g( 产率 76.38％ )。
     熔点 ： 150.2℃。
     HPLC 纯度 ： 99.79％。
     波谱数据 ：
     FT-IR(K Br)(cm-1) ： 3423， 3233， 3149， 3101， 3006， 2891， 1593， 1542， `501， 1485， 1437， 1364， 1340， 1316， 1278， 1238， 1128， 1096， 1072， 1041， 946， 929， 846， 829， 809， 791， 703， 687， 635， 434
     4 0 0 M H z 1H N M R ( D M S O - d 6) δ v a l u e ( p p m ) ： 2.35s(2CH3)， 4.64d(CH2)， 5.79s(CH2)6.86sAr Ha ， Hb(2H) ， 6.94-6.97d Hc d(1H) ， 7.81sAr Hd ， He ， Hfs(3H) ， 8.38-8.39(d)Hg， Hh(2H)， ， NHt(1H) 13
     C NMR ： δ value(ppm) ： 21.02(1C) ， 43.09(1C) ， 64.04(1C) ， 100.82(1C) ， 101.72(1C)， 108.05(1C)， 108.12(2C)， 118.31(1C)， 120.74(1C)， 127.44(2C)， 132.78(1C)， 133.36(1C)， 138.19(1C)， 138.86(1C)， 146.24(1C)， 147.28(1C)， 152.77(1C)， 156.30(1C)， 156.37(1C)MS ： 374.0[M+1]
     value ： 值
     实施例 -6 ： [1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]-[2-(2- 甲 氧基 - 乙氧基 )- 乙基 ] 胺 ( 化合物序号 51) 的制备
     化合物序号 ： 79 化合物序号 ： 51
     向连接有机械搅拌器、 温度计座、 冷凝器和滴液漏斗的 250ml 的 4 颈圆底烧瓶中加 入 60ml 乙醇和 10.0g(0.038mol)4- 氯 -1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 ( 化合物序号 79)。 于 25-30℃下搅拌加入 22.40g(0.18mol)2-(2- 甲氧基 - 乙氧基 )- 乙胺。 将反应物料温度升至回流温度。在物料温度为回流温度下保持 5 小时。将反应物料温度冷 却至 25-30℃。 在物料温度为 25-30℃下保持 60 分钟。 将反应物料温度冷至 0-5℃。 在 0-5℃ 的物料温度下保持 60min。 没有固体形成。 将乙醇在真空下完全蒸除。 得到粗制油状物。 将 油状物溶于 45ml 乙腈中。加入 300.0ml 异丙醚。形成固体。滤出固体并将固体用 50.0ml 异丙醚洗涤。将化合物于 60-65℃下真空干燥。化合物干重 ： 7.50g( 产率 -56.80％ )。
     熔点 ： 90.4℃。
     HPLC 纯度为 99.76％。
     波谱数据 ：
     FT-IR(K Br)(cm-1) ： 3537， 3362， 3265， 3132， 3050， 3012， 2915， 2883， 2872， 1627， 1602， 1568， 1528， 1479， 1389， 1201， 1166， 1134， 980， 929， 886， 684 1
     400MHz H NMR(DMSO-d 6 ) δ value(ppm) ： 2.35s(2CH3) ，.3.22s(O-CH3) ， 3.31d(O-CH2-CH2) ， 3.43-3.56t(NH-CH2) ， 3.61-3.69t(O-CH2) ， 6.96s(Ar-Ha ，Hb) ， 7.80s(Ar-Hc)， 8.37s(Hd)， 8.38t(NH)， 8.54d(He). 13
     C NMR ： δvalue(ppm) ： 21.03(2C)， 40.01(1C)， 57.99(1C)68.79(1C)， 69.48(1C)， 71.21(1C)， 101.76(1C)， 118.29(2C)， 127.44(1C)， 133.40(1C)， 138.21(2C)， 138.87(1C)， 152.72(1C)， 156.33(1C)， 156.54(1C).
     MS ： 342[M+1]
     value ： 值
     实施例 -7a ： 3， 5- 二甲基苯肼盐酸盐的制备
     向连接有机械搅拌器、 温度计座和冷凝器的 5.0L 的 4 颈圆底烧瓶中加入 2220.0ml 盐酸。于 25-35℃下加入 200.0g(1.65mol)3， 5- 二甲基苯胺。将反应物料搅拌 20 分钟。将 反应物料冷却至 -5-0℃。 将亚硝酸钠溶液 [ 将 120.0g(1.74mol) 亚硝酸钠溶解于 1060.0ml 去离子水 (DM Water) 中并冷至 0-5℃ ] 在 -5-0℃下经 60-90 分钟加入到二甲基苯胺物料 中。 将物料温度保持在 -5℃至 0℃达 60-75 分钟。 向连接有机械搅拌器、 温度计座和冷凝器 的 10.0L 的 4 颈圆底烧瓶中加入 740.0ml 盐酸。加入 746.0g(3.30mol) 二水合氯化亚锡。 于 25-35℃下将物料搅拌 30-45 分钟。将反应物料冷至 -5-0℃。将该重氮化溶液于 -5-0℃ 下经 150-180 分钟缓慢加入到氯化亚锡溶液中。在物料温度为 -5-0℃下保持 30-45 分钟。 将反应物料温度升至 25-35℃。在物料温度为 25-35℃下保持 90-120 分钟。滤出固体并将 固体用 200.0ml 水洗涤。将化合物于 55-60℃下真空干燥。向连接有机械搅拌器、 温度计座
     和冷凝器的 2.0L 的 4 颈圆底烧瓶中加入 1000.0ml 乙醇和化合物粗品。将物料温度升至回 流温度。将物料温度保持在回流温度达 30-45 分钟。加入 20.0g 碳并将物料温度保持在回 流温度达 30-45 分钟。滤出碳并用 200.0ml 乙醇洗涤碳。将滤液收集至烧瓶中， 在物料温 度不超过 60℃下， 真空完全蒸除乙醇。将物料温度冷至 25-35℃并解除真空。加入 800.0ml 异丙醚。在物料温度为 25-35℃下保持 45-60 分钟， 随后将物料温度冷至 0 至 5℃。在物料 温度为 0 至 5℃下保持 45-60 分钟。滤出固体并将固体用 200.0ml 异丙醚洗涤。化合物于 45-50℃下真空干燥至恒重。化合物干重为 ： 243.0g( 产率 85.22％ )。HPLC 测得的纯度为 99.6％， HPLC 测得的 3， 5- 二甲基含量为 0.13％。
     波谱数据 ：
     Spectral data ： FT-IR(K Br)(cm-1) ： 3237， 3118， 3008， 2919， 2662， 1608， 1588， 1577， 1533， 1518， 1308， 1276， 1159， 1061， 684， cm-1. 1
     400MHz H NMR(DMSO-d 6 ) ： δ value(ppm) ： 2.20s(2-CH3) ， 2.49s(NE2) ， 6.58s(Ar-Ha， Hb， Hc.8.10broad(NH)， 10.09broad(HCl). 13
     C NMRδvalue ： 21.11(2C)， 112.33(2C)， 123.02(1C)， 137.98(2C)， 145.56(1C).
     Mass ： 137.26[M]+1， -HCl， 121.20[M-NH2]
     value ： 值； broad ： 宽峰
     实施例 -7b ： 5- 氨基 -1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡唑 -4- 腈的制备
     向连接有机械搅拌器、 温度计座和冷凝器的 5.0L 的 4 颈圆底烧瓶中加入 1000.0ml 水。加入 240.0g(1.40mol)3， 5- 二甲基苯肼盐酸盐。于 25-30℃下将反应物料的 pH 值用氨 水调节至 9.75±0.25。 在物料温度为 25-30℃下保持 30-45 分钟。 在物料温度为 25-30℃下 保持 45-60 分钟， 并将化合物用 3×500.0ml 的二氯甲烷进行萃取。有机层用硫酸钠干燥至 水含量不高于 0.2％重量 / 体积。 滤出硫酸钠并用 250.0ml 二氯甲烷洗涤硫酸钠。 将滤液收 集至烧瓶中， 在低于 50℃下， 真空条件下完全蒸除二氯甲烷。最后在物料温度不高于 50℃ 条件下， 施加高真空完全除去痕量的二氯甲烷。 将物料温度冷至 25-30℃并解除真空。 加入
     150.0ml 己烷。在物料温度为 25-30℃下保持 45-60 分钟。滤出固体并将固体用 50.0ml 己 烷洗涤。将化合物于 25-30℃下真空干燥 5-6 小时， 并称量经干燥的化合物。化合物干重 ： 121.0g。 在氮气氛围下， 向连接有机械搅拌器、 温度计座和冷凝器的 2.0L 的 4 颈圆底烧瓶中 加入 725ml 乙醇 ( 无水 ) 和 121.0g(0.89mol)3， 5- 二甲基苯肼。 并加入 109.0g(0.89mol) 乙 氧基亚甲基丙二腈。 将反应物料温度升至回流温度。 将物料温度在回流温度下保持 90-120 分钟。将反应物料温度冷却至 10 至 15℃。在物料温度为 10 至 15℃下保持 90-120 分钟。 滤出固体并将固体用 125ml 异丙醚洗涤。将化合物于 45-50℃真空干燥至恒重。
     化合物干重 ： 161.5g( 产率 ： 54.83％ )。
     HPLC 纯度 ： 99.91％。
     波谱数据 ：
     FT-IR(K Br)(cm-1) ： 3406， 3340， 3237， 3015， 2921， 2210， 1647， 1616， 1601， 1567， 1375， 650
     400MHz 1H MR(DMSO-d 6) ： δ value(ppm) ： 2.39s(2CH3) ， 6.64s(NH2) ， 7.04 ， 7.07d(Ar-Ha， Hb， Hc)， 7.74s(Hd) 13
     C NMR ： δ value(ppm) ： 20.77(2C) ， 73.26(1C) ， 114.86(1C) ， 121.65(2C) ， 129.22(1C)， 137.25(2C)， 138.81(1C)， 141.39(1C)， 151.0(1C)
     MS ： 213.26， 186.28
     value ： 值
     实施例 -7c ： 5- 氨基 -1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡唑 -4- 羧酸酰胺 ( 化合物序 号： 77) 的制备
     化合物序号 ： 77在氮气氛围下， 向连接有机械搅拌器、 温度计座和冷凝器的 1.0L 的 4 颈圆底烧瓶 中加入 780.0g 浓硫酸。将物料冷却至 10-15 ℃。在 10-15 ℃下经 120-150 分钟分批缓慢 加入 92.0g(0.44mol)5- 氨基 -1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡唑 -4- 腈。在物料温度为 10-15℃下保持 30-45 分钟。将反应物料温度升至 25-30℃， 并在物料温度为 25-30℃下保 持 90-120 分钟。向连接有机械搅拌器、 温度计座和冷凝器的 10.0L 的 4 颈圆底烧瓶中加入 3.50kg 碎冰。在搅拌条件下并在不超过 10℃的物料温度下， 将反应物料溶液缓慢加至碎冰 中。在物料温度为 5-10℃下保持 60-90 分钟， 并在物料温度不超过 40℃条件下， 用氨水调 节物料的 pH 至 9.75±0.25。在物料温度为 30-40℃下保持 90-120 分钟。滤出固体并将固 体用 100.0ml 水洗涤。将化合物于 55-60℃真空干燥 . 得到化合物的干重为 95.0g( 产率 97.30％ )。HPLC 纯度 ： 99.60％。
     波谱数据 ：
     FT-IR(K Br)(cm-1) ： 3425， 3339， 3257， 3190， 3112， 3010， 2918， 1654， 1605， 1555， 1465， 1333， 961， 889， 689， 632 1
     400MHz H NMR(DMSO-d6) ： δvalue(ppm) ： 2.32-2.49s(2 CH3)， 6.30s((NH2)， 6.98d[3H(Ar-Ha， Hb， Hc)]， 7.14 broad(C ＝ O-NH2)， 7.85d(1H) 13
     C NMR ： δ value(ppm) ： 20.87(2C) ， 97.31(1C) ， 120.71(1C) ， 120.40(2C) ， 138.09(1C)， 138.62(2C)， 138.75(1C)， 149.15(1C)， 166.21(1C)
     MS ： 231.28[M+1]， 216.28[M-NH2]
     value ： 值； broad ： 宽峰
     化合物 -7d ： 1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1， 5- 二氢 - 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 酮 ( 化 合物序号 78) 的制备
     化合物序号 ： 77 化合物序号 ： 78
     在氮气氛围下， 向连接有机械搅拌器、 温度计座和冷凝器的 2.0L 的 4 颈圆底烧瓶 中加入 300.0g 甲酰胺。加入 90.0g(0.39mol)5- 氨基 -1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡 唑 -4- 羧酸酰胺 ( 化合物序号 77)。将反应物料温度升至回流温度 (185-195℃ )。在回流 的物料温度下保持 60-90 分钟。将反应物料温度冷却至 140-150 ℃。在保持物流温度为 80-150℃时缓慢加入 900.0ml 水。在物料温度为 80-90℃下保持 45-60 分钟。将反应物料 温度冷却至 25-30℃。在物料温度为 25-30℃下保持 90-120 分钟。滤出固体并将固体用 150.0ml 水洗涤。在连接有机械搅拌器、 温度计座和冷凝器的 2.0L 的 4 颈圆底烧瓶中加入 500.0ml 去离子水 (DM water) 和湿的化合物粗品。将物料温度升至回流温度。在回流的物 料温度下保持 75-90 分钟， 然后将物料温度冷却至 25-30℃。在 25-30℃的物料温度下保持 90-120 分钟。滤出固体并将固体用 100.0ml 水洗涤。将化合物在 60-65℃下真空干燥。化 合物干重 ： 65.0g( 产率 69.21％ )。
     HPLC 纯度 ： 99.47％。
     波谱数据 ：
     FT-IR(K Br)(cm-1) ： 3156， 3112， 3015， 2950， 2876， 1708， 1615， 1591， 1529， 1474， 1136， 1097， 839， 827， 780， 711， 679， 641， 627 1
     400MHz H NMR(DMSO-d 6)δvalue(ppm) ： 2.34s(CH3)， 2.49s(CH3)， 7.03s[Ar-Ha， Hb(2H)， 7.64s[Ar-Hc(1H)]8.19s(1H)， 8.29s(1H)， 12.20broad(NH) 13
     C NMR ： δ value(ppm) ： 20.91(2C) ， 107.46(1C) ， 119.38(2C) ， 128.40(1C) ，
     135.63(2C)， 138.32(2C)， 148.59(1C)， 151.69(1C)， 157.14(1C)
     MS ： 241.26[M+1]
     value ： 值； broad ： 宽峰
     化合物 -7e ： 4- 氯 -1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 ( 化合物序 号： 79) 的制备
     化合物序号 ： 78 化合物序号 ： 79
     在氮气氛围下， 向连接有机械搅拌器、 温度计座和冷凝器的 2.0L 的 4 颈圆底烧瓶 中加入 650.0g 三氯氧磷 (V)(POCl3)。加入 60.0g(0.25mol)1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1， 5- 二氢 - 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 酮 ( 化合物序号 78)。将反应物料温度升至回流温度 (105-108℃ )， 在回流的物料温度下保持 8-9 小时。将反应物料温度冷却至 25-30℃并加入 600.0ml 氯仿。 在 25-30℃的物料温度下保持 30-45 分钟。 向连接有机械搅拌器、 温度计座、 冷凝器的 5.0L 的 4 颈圆底烧瓶中加入 2.0kg 碎冰。在保持物料温度低于 10℃的条件下， 缓 慢加入反应物料。在 0-10℃的物料温度下保持 30-45 分钟。将物料温度升至 25-30℃。加 入 600.0ml 氯仿。在 25-30℃的物料温度下保持 30-45 分钟， 并将物料静止 20-30 分钟。分 离出底部有机层。有机层用硫酸钠干燥至水的含量不高于 0.20％重量 / 体积。加入 15.0g 碳。将物料温度升至 45-50℃。在 45-50℃的物料温度下保持 30-45 分钟。碳和硫酸钠通 过硅藻土床过滤并将硅藻土床用 300.0ml 氯仿洗涤。将滤液收集至烧瓶中。在物料温度不 超过 60℃的条件下将氯仿在真空下完全蒸干。最终在物料温度不超过 60℃的条件下， 使用 高真空完全去除痕量的氯仿。将物料温度冷却至 25-30℃并解除真空。加入 250.0ml 异丙 醚。在 25-30℃的物料温度下保持 45-60 分钟。滤出固体并将固体用 50.0ml 异丙醚洗涤。 化合物在 55-60℃下真空干燥， 化合物干重 ： 56.0g( 产率 86.6％ )。
     HPLC 产品纯度 ： 99.79％。
     波谱数据 ：
     FT-IR(K Br)(cm-1) ： 3096， 2952， 2913， 2854， 1614， 1605， 1589， 1546， 1481， 1426， 13791351， 1274， 1261， 1225， 848， 640， 1
     4 0 0 M H z H N M R ( D M S O - d 6) ： δvalue(ppm) ： 2.36s(CH3)， 2.49s(CH3)， 7.05s[Ar-HHb(2H)]， 7.73s[Ar-Hc(1H)]， 8.69s(1H)， 8.95s(1H) 13
     C NMR ： δ value(ppm) ： 20.97(2C) ， 114.47(1C) ， 118.62(2C) ， 128.56(1C) ， 133.52(2C)， 137.70(1C)， 138.56(1C)， 152.33(1C)， 154.0(1C)， 155.2(1C)
     MS ： 259.26[M+1]， 223.28[M-Cl]
     value ： 值
     实施例 -8 ： 2， 3- 二氢 - 苯并 [1， 4] 二氧芑 -6- 基 - 甲胺盐酸盐的制备于 20-30℃向连接有机械搅拌器、 温度计座和冷凝器的 2.0L 的 4 颈圆底烧瓶中加 入 242.0g 氨甲醇 (methanolic ammonia)[ 经化学分析为 100％重量 / 重量 ][ 注 ： 经化学分 析： 23.0％重量 / 重量， 体积 1350.0ml] 和 30.0g(0.183mol)1， 4- 苯并二噁烷 -6- 甲醛。在 20-30℃下， 将该物料搅拌 20-30 分钟。待溶解澄清后， 将反应物料在 20-30℃下加入 2.0L 氢化釜中。在氮气氛围下加入 30.0g 阮内镍 ( 经甲醇干燥 )。将釜装配至氢化器。用氢气 缓慢吹扫， 将氮气从氢化釜中除去。在振荡下将氢化釜中的氢气进料至最高达 50-55psi。 保持氢气压力 (50-55psi) 直至氢气消耗停止。将反应物料温度升至 40-45℃。在 45-50℃ 待停止氢气消耗之后， 将反应物料温度冷却至 25-30℃。将氢气压保持在 50-55psi 直至氢 气消耗停止 ( 约 90-120 分钟 )。在氮气氛围下， 将阮内镍通过硅藻土床过滤。在氮气氛围 下， 将阮内镍用 300.0ml 甲醇洗涤。将滤液收集至烧瓶中。在物料温度不超过 55℃下， 将甲 醇在真空下完全蒸除。将物料温度冷却至 40-45℃并解除真空。加入 50.0ml 异丙醇， 将反 应物料的 pH 用异丙醇盐酸盐 (IPA HCl) 调节至 0.5±0.25。在 25-30℃的物料温度下保持 搅拌 60-90 分钟。滤出固体并将固体用 20.0ml 异丙醇洗涤。化合物在 40±5℃下真空干 燥。化合物干重 ： 31.0g( 产率 ： 84.1％ )。
     波谱数据 ：
     FT-IR(K Br)(cm-1) ： 3447.6， 2977.6， 2870.0， 1594.5， 1506.6， 1474.0， 1285.8， 1077.7， 1051.735.2， 617.9， 472.0
     MS ： 202.6[M+1]
     实施例 -9 ： 2-(2- 甲氧基 - 乙氧基 )- 乙基苯磺酸酯 ( 化合物序号 ： 83) 的制备
     化合物序号 ： 83
     向连接有机械搅拌器、 温度计座、 冷凝器和滴液漏斗的 2.0L 的 4 颈圆底烧瓶中加 入 100g(0.832mol) 二甘醇一甲醚 (diethylene glycolmethylether) 和 600.0ml 二氯甲烷。 将反应物料冷却至 -5 至 0℃， 然后加入 210.0g(2.07mol) 三乙胺。在保持物料温度为 -5 至 0℃下， 加入 147.0g 苯磺酰氯。将反应物料温度升至 25-30℃， 并保持 2 小时。反应物料用 400.0ml 二氯甲烷稀释， 并将反应物料冷却至 -5 至 0℃。加入 500.0ml 水， 然后将反应物料 温度升至 25 至 30℃并保持 30 分钟。将有机层分离， 然后有机层用 2×500.0ml 10％碳酸 氢钠溶液洗涤。将有机层用硫酸钠干燥， 然后在真空下将二氯甲烷完全蒸除。所得油状粗 产品重量为 183.0g( 产率 ： 84.4％ )。
     波谱数据 ：
     FT-IR( 纯 )(cm-1) ： 3066.4， 2882.1， 2824.4， 1586.1， 1448.9， 1359.2， 1187.3，
     923.7， 849.9， 793.0， 689.6
     MS ： 261.3[M+1]
     实施例 -10 ： 2-(2- 甲氧基 - 乙基 )- 乙胺 ( 化合物序号 ： 84) 的制备
     化合物序号 ： 83 化合物序号 ： 84
     将 180.0g(0.69mol)2-(2- 甲氧基 - 乙氧基 )- 乙基苯磺酸酯 ( 化合物序号 79) 和 600.0ml 氨甲醇加入至 1.0L 压力密封釜中。在密闭条件下， 将反应物料加热至 120-130℃。 在 120-130℃的反应物料温度下保持 4 小时。将反应物料温度冷却至 25-30℃， 然后将甲醇 在真空下完全蒸除。剩余物料用 75.0ml 的水稀释， 然后将物料 pH 值用 5.0ml 的浓盐酸调 节至 1 至 2。将反应物料用 200.0ml 二氯甲烷洗涤。将水层 pH 再次用 130.0ml 氨水溶液调 节至 9-10。将化合物用 300.0ml 二氯甲烷萃取， 然后将有机层用硫酸钠干燥。将二氯甲烷 完全蒸除， 最后在 50℃以下的温度下抽真空。
     油状粗产品重量为 39.60g( 产率 ： 48.1％ )。
     波谱数据 ：
     FT-IR( 纯 )(cm-1) ： 3369.7， 2876.4， 1584.8， 1457.2， 1354.2， 1304.3， 1245.3， 1029.7， 849.3， 578.2MS ： 120.1[M+1]
     实施例 -11 ： 4- 甲氧基 -3-(3- 吗啉 -4- 基 - 丙氧基 ) 苯甲胺 ( 化合物序号 ： 85) 的制备
     化合物序号 ： 85
     在 20-30℃下， 向连接有机械搅拌器、 温度计座和冷凝器的 2.0L 的 4 颈圆底烧瓶 中加入 600.0ml 氨甲醇 [ 注 ： 经化学分析 ： 25.0 ％重量 / 重量 ] 和 33.0g(0.118mol)4- 甲 氧基 -3-(3- 吗啉 -4- 基 - 丙氧基 ) 苯甲醛。在 20-30℃下， 将物料搅拌 20-30 分钟。待溶 解澄清后， 将反应物料在 20-30℃下加至 2.0L 氢化釜中。在氮气氛围下加入 33.0g 阮内镍 ( 用甲醇干燥 )。将釜装配至氢化器。用氢气缓慢吹扫， 将氮气从氢化釜中除去。在振荡 下， 将氢化釜中的氢气进料至最高达 50-55psi。保持氢气压力 (50-55psi) 直至氢气消耗 停止。将反应物料温度升至 40-45℃。在 45-50℃待停止氢气消耗之后， 将反应物料温度冷 却至 25-30℃。将氢气压保持在 50-55psi 直至氢气消耗停止 ( 约 90-120 分钟 )。在氮气 氛围下， 将阮内镍通过硅藻土层过滤。在氮气氛围下， 将阮内镍用 300.0ml 甲醇洗涤。滤液
     收集至烧瓶中。在物料温度不超过 55℃下， 将甲醇在真空下完全蒸除。将物料温度冷却至 30-35℃并解除真空。所得油状物料重量为 31.0g( 产率 ： 根据理论值计算为 93.6％ )。
     波谱数据 ：FT-IR( 纯 )(cm-1) ： 3356.1， 2954.9， 2857.2， 1606.7， 1591.2， 1515.0， 1444.1， 1426.4， 1260.5， 1235.7， 1137.9， 1116.7， 1068.5， 1028.5， 863.0， 808.7， 653.7， 589.5
     MS ： 281.2[M+1]
     实施例 -12 ： 3， 4- 二 -(2- 甲氧基 - 乙氧基 )- 苯甲醛的制备
     在 25-30 ℃下， 向连有机械搅拌器、 温度计座、 冷凝器的 2.0L 的 4 颈圆底烧瓶中 加入 80.0g(0.57mol)3， 4- 羟基苯甲醛和 800.0ml 丙酮。将反应物料搅拌 20 分钟。加入 324.0g(1.74mol)1- 碘 -2- 甲氧基 - 乙烷和 240.0g(1.70mol) 碳酸钾。将反应物料加热至 回流。在回流的物料温度下保持 6 小时。将反应物料温度冷却至 25-30℃， 然后滤出无机 固体。于低于 60℃的温度在真空下， 将丙酮完全蒸除。剩余物料用 400.0ml 去离子水 (DM water) 稀释。化合物用 400.0ml 乙酸乙酯萃取， 有机层用硫酸钠干燥。将乙酸乙酯在真空 下完全蒸除， 最后在低于 60℃的温度下高真空处理。得到 69.20g 粗产品 ( 油状 )( 产率 ： 根据理论值计算为 47.0％ )。
     波谱数据 ：
     FT-IR ： 3448.5， 2932.7， 2889.4， 2825.0， 1685.8， 1586.2， 1508.8， 1437.7， 1276.1， 11988.9， 1125.6， 1050.2， 810.4， 743.4， 653.6， 588.1.
     MS ： 255.4[M+1]
     实施例 -13 ： 3， 4- 二 -(2- 甲氧基 - 乙氧基 )- 苯甲胺 ( 化合物编号 ： 86) 的制备
     化合物序号 ： 86
     在 20-30 ℃下， 向连接有机械搅拌器、 温度计座和冷凝器的 2.0L 的 4 颈圆底烧 瓶中加入 600.0ml 氨甲醇 [ 注 ： 经化学分析 ： 25.0 ％重量 / 重量 ] 和 60.0g(0.236mol)3， 4- 二 -(2- 甲氧基 - 乙氧基 )- 苯甲醛。在 20-30℃下， 将物料搅拌 20-30 分钟。待溶解澄 清后， 将反应物料在 20-30℃下加至 2.0L 氢化釜中。在氮气氛围下加入 33.0g 阮内镍 ( 经 甲醇干燥 )。将釜装配至氢化器。用氢气缓慢吹扫， 将氮气从氢化釜中除去。在振荡下， 将 氢化釜中的氢气进料至最高达 50-55psi。保持氢气压力 (50-55psi) 直至氢气消耗停止。 将反应物料温度升至 40-45℃。在 45-50℃待停止氢气消耗之后， 将反应物料温度冷却至 25-30℃。 将氢气压保持在 50-55psi 直至氢气消耗停止 ( 约 90-120 分钟 )。 在氮气氛围下， 将阮内镍通过硅藻土床过滤。 在氮气氛围下， 将阮内镍用 300.0ml 甲醇洗涤。 滤液收集至烧 瓶中。在物料温度不超过 55℃下， 将甲醇在真空下完全蒸除。将物料温度冷却至 30-35℃ 并解除真空。所得油状物料重量为 52.0g( 产率 ： 86.3％ )。
     波谱数据 ：
     质谱 ： 256.3[M+1]
     已按照实施例 -1 中所述方法制备了 1-(3- 乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物的类似化合物， 化合物序号为 1 至 12。
     已按照实施例 -1 中所述的方法制备了 1-(3- 三甲基硅烷基乙炔基苯基 )-1H- 吡 唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物的类似中间体化合物， 化合物序号为 13 至 24。
     已按照实施例 -2 中所述的方法制备了 3- 碘苯基 -1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生 物的类似化合物， 化合物序号为 25 至 36。
     已按照实施例 3 中所述的方法制备了 3- 氰基苯基 -1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物的类似化合物， 化合物序号为 37 至 48。
     已通过与实施例 -4、 5 和 6 中所述相似的方法制备了 3， 5- 二甲基吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物的类似化合物， 化合物序号为 49 至 60。已通过与实施例 4、 5 和 6 中所述相似的方法制备了间甲苯基 -1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物的类似化合物， 化合物序号为 61 至 71。
     已通过与实施例 7a-7e 中所述相似的方法制备了 1-(3- 碘苯基 )- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶的中间体化合物， 化合物序号为 72 至 76。
     已通过与实施例 7a-7e 中所述相似的方法制备了 3， 5- 二甲基吡唑并 [3， 4-d] 嘧 啶的中间体化合物， 化合物序号为 77 至 79。已通过与实施例 7a-7e 中所述相似的方法制备了 (1- 间甲苯基 )- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶的中间体化合物， 化合物序号为 80 至 82。
     58101965350 A CN 101965351权利要求书(按照条约第19条的修改)1/10 页1. 式 I 的取代的吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物及其药学上可接受的盐，式I 其中 m 为 1、 2或3； W 为单键 ； n 为 1 时， R1 为 C2-C6 烷基 ； n 为 2 或 3 时， R1 为 C1-C6 烷基 ； 和 n 为 1、 2 和 3 时， R1 为 C1-C6 烯基、 炔基、 NH、 S、 SO、 SO2、 O、 C ＝ O 或酰胺基 ； 或， R1 各自独立地选自氢、 卤素、 羟基、 氨基、 羟氨基、 羧基、 硝基、 胍基、 脲基、 氨甲酰基、 氰基、 三氟甲基， 或， n 为 1 时， R1 各自独立地选自 C2-C6 烷基 ； n 为 2 或 3 时， R1 为 C1-C6 烷基 ； 和 n 为 1、 2 和 3 时， R1 为 C3-C6 环烷基、 C1-C6 烷氧基、 C3-C6 环烷氧基、 (C1-C6) 烷氧基羰基、 芳氧基、 杂芳 氧基、 C1-C6 硫代烷氧基、 C3-C6 硫代环烷氧基、 硫代芳氧基、 硫代杂芳氧基、 硝基、 氨基、 N- 单 (C1-C6) 烷基氨基、 N， N- 二 (C1-C6) 烷基氨基、 甲酰氨基、 酰氨基、 乙酰氨基、 羟氨基、 C1-C6 烷 氧基氨基、 肼基、 三氟甲基、 三氟甲氧基、 C2-C6 烯基、 C2-C6 炔基、 芳基、 杂环基、 稠合芳基、 稠 合杂芳基和稠合杂环基 ； 或， n 为 1、 2 和 3 时， R1 各自独立地选自 R3- 磺酰氨基、 苯二酰亚氨基 -(C1-C4)- 烷基磺 酰氨基、 苯甲酰氨基、 苯磺酰氨基、 3- 苯脲基、 2- 氧吡咯烷 -1- 基、 2， 5- 二氧吡咯烷 -l- 基 和 C2-C4 烷酰氨基， 其中 R1 中所述苯磺酰氨基、 苯基、 苯氧基、 苯胺基、 或苯硫基取代基可任 选地带有 1 或 2 个卤原子、 (C1-C4) 烷基、 氰基、 甲磺酰基或 (C1-C4) 烷氧基取代基 ； 或者任 意两个 R1 与它们所连接的碳原子一起形成一个含有至少 1 或 2 个选自氧、 硫或氮的杂原子 的 5-8 元环 ； 并且其中烷氧基或烷氨基基团的烷基基团或烷基部分可为直链， 或者在含有 至少 3 个碳原子的情况下可为支链或环状 ； 其中 R3 选自 C1-C6 烷基、 C3-C6 环烷基 ； R2 选自氢、 C1-C6 烷基、 C3-C6 环烷基、 C1-C6 烷氧基羰基、 芳基、 杂芳基、 C1-C6 硫代烷基、 三 氟甲基、 三氟甲氧基、 杂环基、 稠合芳基、 稠合杂芳基和稠合杂环基， 例如 1， 3- 苯并二噁茂、 1， 4- 苯并二氧芑， 并且 R2 选自苯基或苯甲基， 并被 1、 2、 3 或 4 个基团取代， 取代基独立地选自 R4， 其中 R4 选自氢、 卤素、 羟基、 氨基、 羟氨基、 羧基、 硝基、 胍基、 脲基、 氨甲酰基、 氰基、 三 氟甲基、 C1-C6- 烷基、 C3-C6 环烷基、 羟基、 C1-C6 烷氧基、 C3-C6 环烷氧基、 C1-C6 烷氧基羰基、 芳 氧基、 杂芳氧基、 C1-C6 硫代烷氧基、 C3-C6 硫代环烷氧基、 硫代芳氧基、 硫代杂芳氧基、 硝基、 氨基、 N- 单 (C1-C6) 烷氨基、 N， N- 二 (C1-C6) 烷氨基、 甲酰氨基、 酰氨基、 乙酰氨基、 羟氨基、 C1-C6 烷氧基氨基、 肼基、 三氟甲基、 三氟甲氧基、 烯基、 炔基、 芳基、 杂环基、 稠合芳基、 稠合杂 芳基和稠合杂环基。 2. 权利要求 1 的式 I 的吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物， 选自 ：59101965350 A CN 101965351权利要求书(按照条约第19条的修改)2/10 页A)1-(3- 乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物 a)N-((2， 3- 二氢苯并 [b][1， 4] 二氧芑 -6- 基 ) 甲基 )-[1-(3- 乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡 唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 - 胺 b)[2-(2- 甲氧基 - 乙氧基 )- 乙基 ]-[1-(3- 乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 基 ]- 胺 c)[2-(2- 甲氧基 - 乙氧基 )- 乙基 ]-[1-(3- 乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 基 ]- 胺 d)(3， 4- 二 甲 氧 基 - 苯 甲 基 )-[1-(3- 乙 炔 基 - 苯 基 )-1H- 吡 唑 并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 基 ]- 胺 e)[3， 4- 二 -(2- 甲氧基 - 乙氧基 )- 苯甲基 [1-(3- 乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺 f) 苯 并 [1， 3] 二 噁 茂 -5- 基 甲 基 -[1-(3- 乙 炔 基 - 苯 基 )-1H- 吡 唑 并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 基 ]- 胺 g)[1-(3- 乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基氨基 ]- 乙酸 h)3， 4- 二 乙 氧 基 - 苯 甲 基 -[1-(3- 乙 炔 基 - 苯 基 )-1H- 吡 唑 并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 基 ]- 胺 i)[1-(3- 乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]-(3， 4， 5- 三甲氧基 - 苯甲 基 )- 胺 j)[4-(2- 甲氧基 - 乙氧基 )- 苯甲基 ]-[1-(3- 乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 基 ]- 胺 k)(4- 甲氧基 - 苯甲基 -[1-(3- 乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺 l)[4-(3- 吗啉 -4- 基 - 丙氧基 )-1- 苯甲基 ]-[1-(3- 乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺 B)[1-(3- 三甲基硅烷基乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物 a)N-((2， 3- 二氢苯并 [b][1， 4] 二氧芑 -6- 基 ) 甲基 )-[1-(3- 三甲基硅烷基乙炔 基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 - 胺 b)[2-(2- 甲氧基 - 乙氧基 ) 乙基 ]-[1-(3- 三甲基硅烷基乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺 c)[4- 甲氧基 -3-(3- 吗啉 -4- 基 - 丙氧基 ) 苯甲基 ]-[1-(3- 三甲基硅烷基乙炔基 - 苯 基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺 d)(3， 4- 二甲氧基 - 苯甲基 )-[1-(3- 三甲基硅烷基乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺 e)[3， 4- 二 -(2- 甲氧基 - 乙氧基 )- 苯甲基 [1-(3- 三甲基硅烷基乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡 唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺 f) 苯并 [1， 3] 二噁茂 -5- 基甲基 -[1-(3- 三甲基硅烷基乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺 g)[1-(3- 三甲基硅烷基乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基氨基 ]- 乙酸 h)3， 4- 二乙氧基 - 苯甲基 -[1-(3- 三甲基硅烷基乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺60101965350 A CN 101965351权利要求书(按照条约第19条的修改)3/10 页i)[1-(3- 三甲基硅烷基乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]-(3， 4， 5- 三 甲氧基 - 苯甲基 )- 胺 j)[4-(2- 甲氧基 - 乙氧基 )- 苯甲基 ]-[1-(3- 三甲基硅烷基乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑 并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺 k)(4- 甲氧基苯甲基 -[1-(3- 三甲基硅烷基乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 基 )- 胺 l)[4-(3- 吗啉 -4- 基 - 丙氧基 )- 苯甲基 ]-[1-(3- 三甲基硅烷基乙炔基 - 苯基 )-1H- 吡 唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺 C)3- 碘苯基 -1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物 a)N-((2， 3- 二氢苯并 [b][1， 4] 二氧芑 -6- 基 ) 甲基 )-[1-(3- 碘 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 - 胺 b)[2-(2- 甲 氧 基 - 乙 氧 基 )- 乙 基 ]-[1-(3- 碘 - 苯 基 )-1H- 吡 唑 并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 基 ]- 胺 c)[4- 甲氧基 -3-(3- 吗啉 -4- 基 - 丙氧基 ) 苯甲基 ]-[1-(3- 碘 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺 d)(3， 4- 二甲氧基苯甲基 )-[1-(3- 碘 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺 e)[3， 4- 二 -(2- 甲氧基 - 乙氧基 )- 苯甲基 ]-[1-(3- 碘 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺 f) 苯 并 [1， 3] 二 噁 茂 -5- 基 甲 基 -[1-(3- 碘 - 苯 基 )-1H- 吡 唑 并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 基 ]- 胺 g)[1-(3- 碘 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基氨基 ]- 乙酸 h)3， 4- 二乙氧基 - 苯甲基 )-)-[1-(3- 碘 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺 i)[1-(3- 碘 - 苯 基 )-1H- 吡 唑 并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 基 ]-(3， 4， 5- 三 甲 氧 基 - 苯 甲 基 )- 胺 j)[4-(2- 甲 氧 基 - 乙 氧 基 )- 苯 甲 基 ]-[1-(3- 碘 - 苯 基 )-1H- 吡 唑 并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 基 ]- 胺 k)(4- 甲氧基 - 苯甲基 -[1-(3- 碘 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺 l)[4-(3- 吗啉 -4- 基 - 丙氧基 )- 苯甲基 ]-[1-(3- 碘 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 基 ]- 胺。 3. 权利要求 1 的式 I 的吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物， 优选选自 3- 氰基苯基 -1H- 吡唑 并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物 a)3-{4-[(2， 3- 二氢 - 苯并 [1， 4] 二氧芑 -6- 基甲基 )- 氨基 ]- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧 啶 -1- 基 }- 苯基氰 b)3-{4-[2-(2- 甲氧基 - 乙氧基 )- 乙氨基 ]- 吡唑并 [3， 4-d]-1- 基 }- 苯基氰 c)3-{4-[4- 甲氧基 -3-(3- 吗啉 -4- 基 - 丙氧基 )- 苯甲基氨基 ]- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧 啶 -1- 基 }- 苯基氰 d)3-[4-(3， 4- 二甲氧基 - 苯甲基氨基 ]- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -1- 基 }- 苯基氰 e)3-{4-[3， 4- 二 -(2- 甲 氧 基 - 乙 氧 基 )- 苯 甲 基 氨 基 ]- 吡 唑 并 [3， 4-d] 嘧 啶 -1- 基 }- 苯基氰61101965350 A CN 101965351权利要求书(按照条约第19条的修改)4/10 页f)3-{4-[( 苯并 [1， 3] 二噁茂 -5- 基甲基 )- 氨基 - 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -1- 基 }- 苯 基氰 g)[1-(3- 氰基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基氨基 ]- 乙酸 h)3-[4-(3， 4- 二乙氧基 - 苯甲基氨基 )- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -1- 基 ]- 苯基氰 i)3-[4-(3， 4， 5- 三甲氧基 - 苯甲基氨基 )- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -1- 基 ]- 苯基氰 j)3-{4-[4-(2- 甲氧基 - 乙氧基 )- 苯甲基氨基 ]- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -1- 基 }- 苯基 氰 k)3-[4-(4- 甲氧基 - 苯甲基氨基 )- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -1- 基 ]- 苯基氰 l)3-{4-[4-(3- 吗啉 -4- 基 - 丙氧基 ) 苯甲基氨基 ]- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -1- 基 }- 苯 基氰。 4. 权利要求 1 的式 I 的吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物， 更优选选自 3， 5- 二甲基吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物 a)N-((2， 3- 二氢苯并 [b][1， 4] 二氧芑 -6- 基 ) 甲基 )-1-(3， 5- 二甲基苯基 )-1H- 吡 唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 胺 b)N-( 苯并 [d][1， 3] 二噁茂 -5- 基甲基 )-1-(3， 5- 二甲基苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 胺 c)1-(3， 5- 二甲基苯基 )-N-(2-(2- 甲氧基 - 乙氧基 ) 乙基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 胺 d)[1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]-[4- 甲氧基 -3-(3- 吗 啉 -4- 基 - 丙氧基 )- 苯甲基 ]- 胺 e)(3， 4- 二 甲 氧 基 - 苯 甲 基 )-[1-(3， 5- 二 甲 基 - 苯 基 )-1H- 吡 唑 并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 基 ]- 胺 f)[3， 4- 二 -(2- 甲氧基 - 乙氧基 )- 苯甲基 ]-[1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]- 胺 g)[1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基氨基 ] 乙酸 h)3， 4- 二 乙 氧 基 - 苯 甲 基 )-[1-(3， 5- 二 甲 基 - 苯 基 )-1H- 吡 唑 并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 基 ]- 胺 i)[1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]-(3， 4， 5- 三甲氧基 - 苯 甲基 )- 胺 j)[1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]-[4-(2- 甲氧基 - 乙氧 基 ) 苯甲胺 k)[1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]-[4-( 甲氧基 ) 苯甲胺 l)[1-(3， 5- 二甲基 - 苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 ]-[4-(3- 吗啉 -4- 基 - 丙 氧基 ) 苯甲胺。 5. 权利要求 1 的式 I 的吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物， 还优选选自间甲苯基 -1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶衍生物 a)N-((2， 3- 二氢苯并 [b][1， 4] 二氧芑 -6- 基 ) 甲基 )-1- 间甲苯基 -1H- 吡唑 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 胺 b)[2-(2- 甲 氧 基 - 乙 氧 基 )- 乙 基 ]-(1- 间 甲 苯 基 -1H- 吡 唑 并 [3， 4-d] 嘧62101965350 A CN 101965351权利要求书(按照条约第19条的修改)5/10 页啶 -4- 基 )- 胺 c)[4- 甲氧基 -3-(3- 吗啉 -4- 基 - 丙氧基 )- 苯甲基 ]-(1- 间甲苯基 -1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 )- 胺 d)(3， 4- 二甲氧基 - 苯甲基 )-(1- 间甲苯基 -1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 )- 胺 e)[3， 4- 二 -(2- 甲氧基 - 乙氧基 )- 苯甲基 ]-(1- 间甲苯基 -1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 基 )- 胺 f)(1- 间甲苯基 -1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基氨基 )- 乙酸 g)3， 4- 二乙氧基 - 苯甲基 )-(1- 间甲苯基 -1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 )- 胺 h)(1- 间甲苯基 -1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 )-(3， 4， 5- 三甲氧基 - 苯甲基 )- 胺 i)[4-(2- 甲 氧 基 - 乙 氧 基 )- 苯 甲 基 ]-(1- 间 甲 苯 基 -1H- 吡 唑 并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 基 )- 胺 j)(4- 甲氧基 - 苯甲基 )-(1- 间甲苯基 -1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 基 )- 胺 k)[4-(3- 吗 啉 -4- 基 - 丙 氧 基 )- 苯 甲 基 ]-(1- 间 甲 苯 基 -1H- 吡 唑 并 [3， 4-d] 嘧 啶 -4- 基 )- 胺。 6. 一种制备 N- 苯环上被乙炔基取代的式 I 及其药学上可接受的盐的方法， 所述制备可 通过适用于化学相关化合物的任意已知方法进行。本发明 N- 苯环上被乙炔基取代的活性 化合物可按照以下方法合成 ：通过文献中给出的已知方法， 将式 I 化合物使用无机酸例如盐酸并使用亚硝酸钠溶液 在 -10℃至 5℃的温度下重氮化， 可得到式 J 的碘取代的苯肼盐酸盐固体。其他可使用的无 机酸为硫酸等。将式 J 化合物用合适的碱中和， 以制得式 K 的碘取代的苯肼， 所述合适的碱 例如氢氧化钠、 氢氧化钾、 碳酸钠、 碳酸钾、 碳酸铵和碱金属的碳酸氢盐。63101965350 A CN 101965351权利要求书(按照条约第19条的修改)6/10 页将式 K 化合物与乙氧基亚甲基丙二腈在质子溶剂例如甲醇、 乙醇、 异丙醇、 正丁醇、 二 甲基甲酰胺或这些溶剂的混合物中于 60 ℃的温度下反应， 以得到新的式 L 的 N- 碘代苯 基 -5- 氨基 -1H- 吡唑 -4- 腈。在另一种制备方法中， 将式 K 化合物与通过原甲酸三乙酯与 丙二腈反应而原位生成的乙氧基亚甲基丙二腈反应， 以得到新的式 L 的 N- 碘代苯基 -5- 氨 基 -1H- 吡唑 -4- 腈。温度条件在 40℃ -100℃范围内。将式 L 化合物中的氰基使用无机酸例如硫酸在水性介质中水解， 然后紧接着使用合适 的碱在 10℃ -40 ℃的温度下进行碱化， 以得到新的式 -M 的 N- 碘代苯基 -5- 氨基 -1H- 吡 唑 -4- 甲酰胺， 所述合适的碱例如氨或碱金属的碳酸氢盐、 碳酸盐或氢氧化物。将式 N 化合物与甲酰胺在无溶剂条件下或在溶剂例如环丁砜中于约 200℃的温度下反 应， 以得到新的式 O 的 N- 碘代苯基 -5- 氨基 -1H- 吡唑 -4- 甲酰胺。 温度条件在 150℃ -220℃ 范围内。64101965350 A CN 101965351权利要求书(按照条约第19条的修改)7/10 页将式 O 化合物与磷酰氯在无溶剂条件或非质子溶剂例如二氯甲烷、 氯乙烷、 氯仿或这 些溶剂的混合物中于回流温度条件下反应， 以得到新的式 -P 的 N-( 碘代 )-4- 氯 - 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶。在另一种制备方法中， 将式 O 化合物与亚硫酰氯、 三氯化磷或五氯化磷在非 质子溶剂例如二氯甲烷、 氯乙烷、 氯仿或这些溶剂的混合物中于温度 25℃下反应， 以得到新 的式 P 的 N- 取代的 4- 氯 - 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶。Q H 式S 通过文献中给出的已知方法， 将式 Q 化合物与式 H 的取代烷基胺在质子溶剂例如甲醇、 乙醇、 异丙醇或这些溶剂的混合物中于回流温度条件下回流， 以得到新的式 S 的 1-( 碘代 ) 取代的 4- 氨基取代的 - 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶。将式 S 化合物与取代三甲基硅烷基乙炔在质子溶剂例如甲醇、 乙醇、 异丙醇或这些溶 剂的混合物中于回流温度条件下回流， 以得到新的式 T 的 N-( 三甲基硅烷基保护的乙炔基 取代的 ) 苯基 -4- 氨基取代的 - 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶。T 式 I( 具有乙炔基 ) 将式 T 化合物用合适的碱脱保护， 以制得新的式 I 的乙炔取代的化合物， 所述合适的碱 例如氨、 单烷基胺、 二烷基胺、 三烷基胺、 氢氧化钠、 氢氧化钾、 碳酸钠、 碳酸钾、 碳酸铵和碱 金属的碳酸氢盐。 7. 一种制备权利要求 1 的 N-((2， 3- 二氢苯并 [b][1， 4] 二氧芑 -6- 基 ) 甲基 )-1-(3， 5- 二甲基苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 胺或其盐的方法， 所述方法包括65101965350 A CN 101965351权利要求书(按照条约第19条的修改)8/10 页化合物序号 ： 49通过文献中给出的已知方法， 将式 A 化合物使用无机酸例如盐酸并使用亚硝酸钠溶液 在 -10℃至 5℃的温度下重氮化， 以得到式 B 的取代的苯肼盐酸盐。其他可使用的无机酸为 硫酸等。将式 B 化合物用合适的碱中和， 以制得新的式 C 的取代的苯肼， 所述合适的碱例如 氨、 单烷基胺、 二烷基胺、 三烷基胺、 氢氧化钠、 氢氧化钾、 碳酸钠、 碳酸钾、 碳酸铵和碱金属 的碳酸氢盐。将式 C 化合物与乙氧基亚甲基丙二腈在质子溶剂例如甲醇、 乙醇、 异丙醇、 正丁醇、 二 甲基甲酰胺或这些溶剂的混合物中于 60 ℃的温度下反应， 以得到新的式 D 的 N 取代的苯 基 -5- 氨基 -1H- 吡唑 -4- 腈。 在另一种制备方法中， 将式 C 化合物与通过原甲酸三乙酯与丙 二腈反应而原位生成的乙氧基亚甲基丙二腈反应， 以得到新的式 D 的 N- 取代的苯基 -5- 氨 基 -1H- 吡唑 -4- 腈。温度条件在 40℃ -100℃范围内。将式 D 化合物中的氰基使用无机酸例如硫酸在水性介质中水解， 然后紧接着使用合适 的碱在 10℃ -40℃的温度下碱化， 以得到新的式 E 的 N 取代的苯基 -5- 氨基 -1H- 吡唑 -4- 甲66101965350 A CN 101965351权利要求书(按照条约第19条的修改)9/10 页酰胺， 所述合适的碱例如氨或碱金属的碳酸氢盐、 碳酸盐或氢氧化物。将式 E 化合物与甲酰胺在无溶剂条件下或在溶剂例如环丁砜中于约 200 ℃的条件 下反应， 以得到新的式 F 的 N 取代的苯基 -5- 氨基 -1H- 吡唑 -4- 甲酰胺。温度条件在 150℃ -220℃范围内。将式 F 化合物与磷酰氯在非质子溶剂例如二氯甲烷、 氯乙烷、 氯仿或这些溶剂的混合 物中于回流温度条件下反应， 以得到新的式 G 的 N- 取代的 4- 氯 - 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶。 在 另一种制备方法中， 将式 F 化合物与亚硫酰氯、 三氯化磷或五氯化磷在非质子溶剂例如二 氯甲烷、 氯乙烷、 氯仿或这些溶剂的混合物中于 25℃至溶剂回流温度下反应， 以得到新的式 G 的 N- 取代的 4- 氯 - 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶。G 化合物序号 ： 49 将式 G 化合物与 2， 3- 二氢 - 苯并 [1， 4] 二氧芑 -6- 基 - 甲胺盐酸盐在质子溶剂例如甲 醇、 乙醇、 异丙醇或这些溶剂的混合物中于回流温度下回流， 以得到新的 N-((2， 3- 二氢苯 并 [b][1， 4] 二氧芑 -6- 基 ) 甲基 )-1-(3， 5- 二甲基苯基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 胺 ( 化合物序号 ： 49)。 8. 一种制备 N-((2， 3- 二氢苯并 [b][1， 4] 二氧芑 -6- 基 ) 甲基 )-1-(3， 5- 二甲基苯 基 )-1H- 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶 -4- 胺 ( 化合物序号 ： 49.HCl) 的方法，67101965350 A CN 101965351权利要求书(按照条约第19条的修改)10/10 页化合物序号 ： 49 盐酸盐 所述方法包括将式 V 化合物用盐酸通过常规方法在合适的溶剂介质中进行处理， 所述 合适的溶剂介质例如水、 甲醇、 乙醇、 异丙醇、 乙酸乙酯、 乙腈、 二氯甲烷、 丙酮或这些溶剂的 混合物。 9. 一种制备式 N- 苯环上被氰基取代的式 I 及其药学上可接受的盐的方法， 所述制备可 通过适用于化学相关化合物的任意已知方法进行。 N- 苯环上被氰基取代的本发明活性化合 物可按照以下方法合成 ：式 S( 具有氰基基团的式 I 化合物 ) 方案 III 将式 S 化合物与氰化亚铜和碘化铜在二甲基甲酰胺或二甲亚砜中于 120℃ -145℃的温 度范围内加热， 以得到新的式 V 的 N-( 氰基取代的 ) 苯基 -4- 氨基取代 - 吡唑并 [3， 4-d] 嘧啶。 10. 权利要求 2 化合物， 所述化合物在哺乳动物中具有抗增殖性。 11. 在哺乳动物中具有抗增殖性的药物组合物， 包含治疗有效量的权利要求 2 的化合 物。 12. 权利要求 2 的化合物， 所述化合物在哺乳动物中具有抗增殖性， 其可用于治疗癌 症， 例如肺肿瘤、 抗性品系肺癌、 胰腺癌、 成胶质细胞瘤、 头部肿瘤、 颈部肿瘤和脑肿瘤。68