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1、10申请公布号CN101999415A43申请公布日20110406CN101999415ACN101999415A21申请号201010504378722申请日20100929A01N63/04200601A01N25/00200601A01P3/00200601A01P21/00200601A01C1/0620060171申请人中国海洋大学地址266100山东省青岛市崂山区松岭路238号72发明人汪东风何晓霞徐莹樊燕张莉54发明名称一种生物活性多糖种衣剂的制备方法57摘要本发明涉及一种生物活性多糖种衣剂的制备方法。其特征在于采用了生物技术和涂膜技术,将具有抗真菌作用的拮抗酵母与具有成膜效果。
2、的多糖相结合,制备出含有拮抗酵母菌的生物活性多糖种衣剂,用于包被种子。该生物活性多糖种衣剂制备方法简单;具有生物活性抑菌功能;能够提高种子自身抗性;贴合种子包覆以保护种子,稳定而不受水分等其它因素影响,无毒且环境友好。因此,该生物活性多糖种衣剂可广泛应用于保护种子不受霉菌侵染,提高种子发芽率及成苗率,从而提高作物产量。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页CN101999423A1/1页21一种生物活性多糖种衣剂的制备方法,其特征在于,采用了生物技术和涂膜技术,制备出含有拮抗酵母菌的生物活性多糖种衣剂。2权利要求1所述用于生物活性多糖种衣剂的制备。
3、方法如下1将商业应用的酵母菌如啤酒酵母、鲁氏酵母、罗伦隐球酵母等一种或几种经斜面活化后接种到装有已经灭菌的50MLYEPD培养基的250ML三角瓶中,恒温30下150R/MIN培养40H,发酵液静止或3000R/MIN离心20MIN收集菌体,用无菌水洗涤菌体两次,用无菌水或生理盐水将酵母菌制成菌悬液,菌悬液浓度调至1061015单位血球计数板计数法。2将多糖用蒸馏水溶解后,加入增塑剂,加热搅拌均匀,得到多糖膜液。3将120L酵母细胞悬浮液加入到50250L浓度为0550的多糖膜液中,搅拌均匀即得。4将上述生物活性多糖膜液喷、浸或刷于种子表面,自然风干,再放入15的交联剂中进行交联,交联220M。
4、IN后再用清水浸泡220MIN,然后将种子于自然环境下晾干,即在种子表面附着一层生物活性多糖种衣剂,保护种子不受霉菌侵染和物理伤害等。3根据权利要求书2所述的各种多糖为魔芋胶、结冷胶、海藻酸钠、卡拉胶、瓜尔豆胶、茶叶多糖或南瓜多糖等一种或几种,其浓度为0550。4根据权利要求书2所述的增塑剂为甘油、山梨醇、甘露醇、阿拉伯醇等一种或几种,其浓度为012。5根据权利要求书2所述的交联剂为CACL2、柠檬酸钠、ZNSO4等一种或几种,其浓度为15。权利要求书CN101999415ACN101999423A1/3页3一种生物活性多糖种衣剂的制备方法0001技术领域本发明涉及处理作物种子的制剂,具体涉及。
5、到商业用酵母菌与多糖共同组成的种衣剂。0002背景技术种子在长成植株的过程中会受到很多病虫的危害,这些危害会严重影响到植株的生长发育及最终的产量。种子处理是最重要、最有效、最方便、最经济的植保手段之一,它能有效地防治地下害虫、霉菌等危害,目前已成为很多地区病虫害春防工作的主要内容。同浸种、拌种、闷种相比,种衣剂处理技术具有使用方便、防治成本低、保水抗旱、促进种苗品质、提高种子发芽率等优点,是一项把防病、治虫、消毒、促长融为一体的种子处理技术。0003种衣剂可直接或经稀释后包覆于种子表面,形成具有一定强度和通透性的保护膜的水基悬浮制剂。用传统化学药剂种衣剂对种子进行处理达到防病虫目的,较为普遍和。
6、流行,但在连续多年的应用中,也相继出现了一些缺点和不足,如种衣剂中的杀菌剂、杀虫剂大都是在土壤中化学性质较稳定的农药,在杀死种皮周围有害病虫的同时也杀死了大量有益微生物;采用化学药剂制成的种衣剂进行包衣,可能会使土壤微生态环境平衡变得脆弱,药剂残留在土壤中还对环境造成一定的污染。0004有关生物类种衣剂方面的专利不多,其中有CN1276973A的含有益微生物或次生代谢产物的生物种衣剂,CN1799361A的带有激活蛋白和腐植酸的生物种衣剂等,都有保护种子的作用。近来研究发现,酵母具有抑制有害真菌病原菌的生长等性能,并且可以通过激活植物体内的酶系来增强植物自身的抗性,效果较为明显,但目前还没有专。
7、利涉及到酵母类种衣剂。发明内容0005本发明的目的是提供一种生物活性多糖种衣剂的制备方法,方法新颖、简单,可以为种衣剂市场开拓一片新领域。0006一种生物活性多糖种衣剂的制备方法,其特征在于采用了生物技术和涂膜技术,制备出含有拮抗酵母菌的生物活性多糖种衣剂。该生物活性多糖种衣剂的制备分为如下三步0007一酵母菌细胞悬浮液的制备0008将商业应用的酵母菌如啤酒酵母、罗伦隐球酵母、鲁氏酵母等一种或几种接入已经灭菌的YEPD或麦芽汁培养基中,恒温培养一段时间后,静止或离心,收集酵母细胞并用水或生理盐水洗涤得到酵母菌的菌悬液,并调整至相应浓度。0009二多糖膜的制备0010将魔芋胶、结冷胶、海藻酸钠、。
8、卡拉胶、瓜尔豆胶、茶叶多糖或南瓜多糖等一种或几种用蒸馏水溶解后,加入增塑剂,稍加热搅拌均匀,冷却后,得到多糖膜液。0011三生物活性多糖种衣剂的制备0012将酵母菌细胞悬浮液加入到多糖膜液中,搅拌均匀,然后将种子浸入其中,配以交联剂,即可在种子表面形成一层膜。说明书CN101999415ACN101999423A2/3页40013本发明的这种生物活性多糖种衣剂具有以下优点1可广泛应用于保护种子不受霉菌侵染,提高种子自身抗性,包覆稳定,提高种子发芽率及成苗率,从而提高作物产量。2所用酵母不产生抗生素及其它有毒物质,无化学污染,安全性高;2所用多糖成膜性能优良,成本低,在自然界中可被生物降解,不会。
9、产生环境污染问题;3将生物技术与涂膜技术有机结合,同时具备两种方法的优点;4生物活性多糖膜经过交联后,不会因表面附水等因素而溶解,稳定耐用。具体实施方式0014本发明中所述的种子是指花生、玉米、大豆等种子。0015实例100161将商业应用的啤酒酵母菌种经斜面活化后接种到装有已经灭菌的50MLYEPD培养基的250ML三角瓶中,恒温30下150R/MIN培养40H,发酵液3000R/MIN离心20MIN收集菌体,用无菌水洗涤菌体两次,再用无菌水将酵母菌制成菌悬液,菌悬液浓度调至109单位血球计数板计数法。00172取魔芋胶05KG加入到100L蒸馏水中,搅拌均匀,再加入01KG增塑剂甘油,搅拌。
10、30MIN,得到多糖膜液。00183将5L酵母菌菌悬液加入到多糖膜液100L中,搅拌均匀,得到生物活性多糖膜液。00194将生物活性多糖膜液刷于花生种子表面,风干后浸入2交联剂CACL2中20MIN,用清水浸泡20MIN后晾干,制备成生物活性多糖种衣剂包衣的花生种子。0020实例200211将商业应用的鲁氏酵母经斜面活化后接种到装有已经灭菌的50MLYEPD培养基的250ML三角瓶中,恒温30下150R/MIN培养40H,发酵液静置收集菌体,用无菌水洗涤菌体两次,再用无菌水并将酵母菌制成菌悬液,菌悬液浓度调至1010单位血球计数板计数法。00222取结冷胶10KG加入到100L蒸馏水中,搅拌均。
11、匀再加入08KG增塑剂山梨醇,搅拌30MIN,得到多糖膜液。00233将2L酵母菌菌悬液加入到多糖膜液100L中,搅拌均匀,得到生物活性多糖膜液。00244将生物活性多糖膜液喷于玉米种子表面,风干后浸入3交联剂柠檬酸钠中10MIN,用清水浸泡10MIN后晾干,制备成生物活性多糖种衣剂包衣的玉米种子。0025实例300261将商业应用的罗伦隐球酵母经斜面活化后接种到装有已经灭菌的50MLYEPD培养基的250ML三角瓶中,恒温30下150R/MIN培养40H,发酵液3000R/MIN离心20MIN收集菌体,用无菌生理盐水洗涤菌体两次,再用无菌生理盐水将酵母菌制成菌悬液,菌悬液浓度调至1011单位血球计数板计数法。00272取海藻酸钠15LG加入到100L蒸馏水中,搅拌均匀,再加入15KG增塑剂甘露醇,搅拌30MIN,得到多糖膜液。00283将1L酵母菌菌悬液加入到多糖膜液100L中,搅拌均匀,得到生物活性多糖说明书CN101999415ACN101999423A3/3页5膜液。00294将生物活性多糖膜液涂于大豆种子表面,风干后浸入4交联剂ZNSO4中2MIN,用清水浸泡2MIN后晾干,制备成生物活性多糖种衣剂包衣的大豆种子。说明书CN101999415A。