哒嗪酮衍生物 发明背景
本发明的目的是发现一些具有有价值性质的新化合物，特别是那些可用于制备 药物的化合物。
本发明涉及抑制、调节和 / 或调控激酶的信号转导，特别是酪氨酸激酶和 / 或丝 氨酸 / 苏氨酸激酶的信号转导来发挥作用的化合物及其应用，本发明还涉及包含这些化 合物的药物组合物及这些化合物用于治疗激酶诱导的疾病的应用。
特别地，本发明涉及抑制、调节和 / 或调控 Met 激酶的信号转导来发挥作用的化 合物及其应用。
细胞调节进行的主要机制之一是通过细胞外信号的跨膜传导，从而在细胞内调 节生化途径。 蛋白磷酸化作用代表了细胞外信号从分子到分子传递，最终导致细胞响应 的一个过程。 正如多种蛋白激酶和磷酸酶的存在所证明的那样，这些信号转导级联是被 高度调控和经常重叠的。 蛋白的磷酸化主要发生在丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基上，因 此将蛋白激酶根据其磷酸化位点的特异性进行划分，即丝氨酸 / 苏氨酸激酶类和酪氨酸
激酶类。 由于磷酸化作用是细胞内普遍存在的过程并且由于细胞表型极大地受到这类途 径的活性影响，目前认为很多疾病状态和 / 或疾病源于激酶级联的分子成分的异常激活 或功能突变。 因此，这些蛋白的特征和能够调节其活性的化合物引起了大量的关注 ( 参 见 ：Weinstein-Oppenheimer 等人， Pharma.&.Therap.，2000，8，229-279)。
S.Berthou 等 人 在 Oncogene， Vol.23， No.31， 第 5387-5393 页 (2004) 中 描 述 了受体酪氨酸激酶 Met 在人的肿瘤形成中的作用和抑制 HGF( 肝细胞生长因子 ) 的可能 性。其中所描述的抑制剂 SU11274，一种吡咯 - 二氢吲哚化合物，有可能适于对抗癌症。 J.G.Christensen 等人在 Cancer Res.2003，63(21)，7345-55 中描述了另一种用于癌症治疗 的 Met 激酶抑制剂。 H.Hov 等人在 Clinical Cancer Research Vol.10，6686-6694(2004) 中 报道了另一种用于对抗癌症的酪氨酸激酶抑制剂。 化合物 PHA-665752 是针对 HGF 受体 c-Met 的一种吲哚衍生物。 在其中进一步报道了 HGF 和 Met 促成多种类型的癌症例如多 发性骨髓瘤的恶化过程。
因此，需要合成特异性地抑制、调控和 / 或调节酪氨酸激酶类和 / 或丝氨酸 / 苏 氨酸激酶类的信号转导、特别是 Met 激酶的信号转导的小分子化合物，并且是本发明的 目的。
已经发现，本发明的化合物及其盐具有很高价值的药理学特性同时又耐受良 好。
本发明特别涉及抑制、调控和 / 或调节 Met 激酶的信号转导的式 I 化合物，涉 及包含这些化合物的药物组合物和它们用于治疗哺乳动物 Met 激酶诱导的疾病和病患 (complaint) 的方法，如血管生成、癌症、肿瘤形成、生长和增殖、动脉硬化、眼部疾 病如年龄诱发性黄斑变性、脉络膜新血管生成和糖尿病性视网膜病变、炎性疾病、关节 炎、血栓形成、纤维化、肾小球肾炎、神经变性、银屑病、再狭窄、创伤愈合、移植排 斥、代谢性疾病和免疫系统疾病，还有自身免疫性疾病、肝硬化、糖尿病和血管疾病，以及不稳定性和通透性等。
实体瘤，尤其是生长快速的肿瘤，可以用 Met 激酶抑制剂进行治疗。 这些实 体瘤包括单核细胞性白血病、脑癌、泌尿生殖系统、淋巴系统、胃邻、喉部和肺部的癌 症、包括腺癌和小细胞肺癌。
本发明涉及调控、调节或抑制 Met 激酶来预防和 / 或治疗与失控或紊乱的 Met 激 酶活性有关的疾病的方法。 特别地，式 I 化合物也可用于治疗某些类型的癌症。 式 I 化 合物还可以用于在某些现存的癌症化学疗法中提供额外的或协同的作用，和 / 或可用于 恢复某些现存癌症化学疗法和放射疗法的效力。
式 I 化合物还可用于分离和研究 Met 激酶的活性或表达。 而且，它们尤其适用 于与失控或紊乱的 Met 激酶活性有关的疾病的诊断方法。
根据本发明的化合物在异种移植物肿瘤模型中可以显示具有体内抗增殖作用。 将本发明化合物施用于患有过度增殖疾病的患者，例如以抑制肿瘤生长、减少与淋巴组 织增生疾病有关的炎症、抑制移植排斥或由组织修复引起的神经病学损伤等。 本发明化 合物适于预防性或治疗性目的。 本文所用的术语 “治疗” 用于指疾病的预防和已有病症 的治疗。 预防增殖是在明显的疾病发展之前施用根据本发明的化合物来完成，例如预防 预防肿瘤生长、预防转移性生长、减少与心血管手术有关的再狭窄等。 或者，所述化合 物用于稳定或改善患者的临床症状来治疗正在发生的疾病。 宿主或患者可属于任何哺乳动物物种，例如灵长类，尤其是人类 ；啮齿类，包 括小鼠、大鼠和仓鼠 ；兔 ；马、牛、犬、猫等。 动物模型对于实验性的研究而言是很有 价值，提供了治疗人类疾病的模型。
特定的细胞对于用根据本发明的化合物治疗的敏感性可通过体外试验测定。 通 常，将细胞培养物与不同浓度的根据本发明的化合物混合一段时间，该时间足以使活性 剂诱导细胞死亡或抑制迁移，一般在 1 小时和一周之间。 体外试验可使用来自活检样本 的培养细胞进行。 接着对处理后所剩余的活细胞计数。
剂量根据所用的具体化合物、具体疾病、病人状态等变化。 治疗剂量通常大到 足够减少靶组织中不希望的细胞群体，同时又保持病人的生存力。 治疗通常持续到发生 大量的减少，例如细胞负荷减少至少约 50％，并且可以持续到体内基本上检测不到不希 望的细胞为止。
为了鉴定信号转导通路和为了检测不同信号转导通路之间的相互作用，许多 科学家已经开发了合适的模型或模型系统，例如细胞培养物模型 ( 例如 Khwaia 等人， EMBO，1997，16，2783-93) 和转基因动物模型 ( 例如 White 等人， Oncogene，2001， 20，7064-7072)。 为了确定信号转导级联中某些阶段，可以使用相互作用的化合物以便 调节信号 ( 例如 Stephens 等人， Biochemical J.，2000，351，95-105)。 根据本发明的化 合物也可以在动物和 / 或细胞培养物模型或本申请所述的临床疾病中用作检测激酶依赖 性信号转导通路的试剂。
所述激酶活性的测定是本领域技术人员熟知的技术。 使用底物例如组蛋白 ( 例 如 Alessi 等人， FEBS Lett.1996，399，3，第 333-338 页 ) 或碱性髓磷脂蛋白来测定激
酶活性的普遍检测体系描述于文献中 ( 例如 CamposJ.R.1992， J.Biol.Chem.267，第 14535 页 )。8R. 和 Glenney， Jr.，CN 102015694 A CN 102015704 A
说明书3/46 页为了鉴定激酶抑制剂，可采用多种检测体系。 在闪烁亲近测定法 (Sorg 等 人， J.of Biomolecular Screening，2002，7，11-19) 和 闪 板 法 (fiashplateassay) 中， 测 定 γATP 对作为底物的蛋白或肽的放射性磷酸化作用。 在抑制性化合物的存在下，可 检测到放射性信号降低或根本没有信号。 而且，均相时间分辨的荧光共振能量转移技 术 (HTR-FRET) 和荧光极化 (FP) 技术适于作为检测方法 (Sills 等人， J.ofBiomolecular Screening，2002，191-214)。
其它非放射性的 ELISA 检测方法使用特异性磷酸化抗体 (phospho-AB)。 该磷 酸化 -AB 仅结合已磷酸化的底物。 这种结合可通过使用过氧化物酶轭合的抗绵羊第二抗 体的化学发光检测 (Ross 等人，2002， Biochem.J.)。
有许多疾病与细胞增殖和细胞死亡 ( 凋亡 ) 的失控有关。 这些令人关注的病症 包括但不限于以下所述。 根据本发明的化合物适用于治疗存在平滑肌细胞和 / 或炎症细 胞增殖和 / 或迁移进入血管内膜层、造成血流通过该血管受限的多种病症，例如在新生 内膜闭塞性损伤的情况下。 令人关注的移植物阻塞性血管疾病包括动脉粥样硬化、移 植后的冠脉疾病、静脉移植物狭窄、周围吻合修复性再狭窄 (peri-anastomatic prosthetic restenosis)、血管成形术或安放支架后的再狭窄等。 现有技术 用于对抗癌症的二氢哒嗪酮类描述于 WO 03/037349A1。
其它用于治疗免疫系统疾病、局部缺血和炎症疾病的哒嗪类由 EP 1043 317 A1 和 EP 1 061 077 A1 可知。
EP 0 738 716 A2 和 EP 0 711 759 B1 描述了其它作为杀菌剂和杀虫剂的二氢哒嗪 酮类和哒嗪酮类。
其它哒嗪酮类在 US 4,397,854 中描述为强心药。 JP 57-95964 公开了其它哒嗪酮 类。
发明概述
本发明涉及式 I 化合物及其可药用盐、互变异构体和立体异构体、包括其所有比 例的混合物，
其中
R1 表示 H、 A、 Ar 或 Het，
R2 表 示 H、 A、 Hal、 OR3、 N(R3)2、 N ＝ CR3N(R3)2、 SR3、 NO2、 CN、 COOR3、 CON(R3)2、 NR3COA、 NR3SO2A、 SO2N(R3)2、 S(O)mA、 Het、 -[C(R3)2] 3 3 3 3 3 3 3 n N ( R ) 2 、 - [C ( R ) 2 ] n Het 、 O[C ( R ) 2 ] n N ( R ) 2 、 O[C ( R ) 2 ] n Het 、 S[C ( R ) 2 ] n N ( R ) 2 、 S [ C ( R 3) 2] nH e t 、 - N R 3[ C ( R 3) 2] nN ( R 3) 2、 - N R 3[ C ( R 3) 2] nH e t 、 N H C O N ( R 3) 2、 NHCONH[C ( R 3 ) 2 ] n N ( R 3 ) 2 、 NHCONH[C ( R 3 ) 2 ] n Het 、 NHCO[C ( R 3 ) 2 ] n N ( R 3 ) 2 、
NHCO[C(R3)2]nHet、 CON(R3)2、 CONR3[C(R3)2]nN(R3)2、 CONR3[C(R3)2]nHet、 COHet 或 COA，
R3 表示 H 或 A，
W 表示具有 1 至 3 个 N、O 和 / 或 S 原子的五元或六元不饱和或芳香族的杂环， 其可以是未被取代的或被 Hal 和 / 或 A 单 -、二 - 或三取代，
D 表示具有 1 至 3 个 N、O 和 / 或 S 原子的五元或六元不饱和或芳香族的杂环， 其可以是未被取代的或被 Hal 和 / 或 A 单 -、二 - 或三取代，
A 表示具有 1-10 个 C 原子的直链或支链烷基，其中 1-7 个 H 原子可以被 OH、 F、 Cl 和 / 或 Br 替代，和 / 或其中一个或两个 CH2 基团可以被 O、 NH、 S、 SO、 SO2 和 / 或 CH ＝ CH 基团替代，
或表示具有 3-7 个 C 原子的环状烷基，
Ar 表 示 苯 基、 萘 基 或 联 苯 基， 其 各 自 是 未 被 取 代 的 或 被 Hal、 A、 OR3、 N(R3)2、 SR3、 NO2、 CN、 COOR3、 CON(R3)2、 NR3COA、 NR3SO2A、 SO2N(R3)2 和 / 或 S(O)mA 单 -、二 - 或三取代，
Het 表示具有 1 至 4 个 N、 O 和 / 或 S 原子的单 -、二 - 或三环的饱和、不饱和 或芳香族杂环，其可以是未被取代的或被以下基团单 -、二 - 或三取代 ：Hal、A、OR3、 N(R3)2、 SR3、 NO2、 CN、 COOR3、 CON(R3)2、 NR3COA、 NR3SO2A、 SO2N(R3)2、 S ( O ) mA 、 CO - Het 1、 Het 1、 [C ( R 3) 2] nN ( R 3) 2、 [C ( R 3) 2] nHet 1、 O[C ( R 3) 2] nN ( R 3) 2、 O[C(R3)2]nHet1、 NHCOOA、 NHCON(R3)2、 NHCOO[C(R3)2]nN(R3)2、 NHCOO[C(R3)2] 1 3 3 3 1 3 3 nHet 、 NHCONH[C(R )2]nN(R )2、 NHCONH[C(R )2]nHet 、 OCONH[C(R )2]nN(R )2、 OCONH[C(R3)2]nHet1、 CO-Het1、 CHO、 COA、＝ S、＝ NH、＝ NA 和 / 或＝ O( 羰基 氧 )，
Het1 表示具有 1 至 2 个 N 和 / 或 O 原子的单环饱和杂环，其可以被 A、 OA、 OH、 Hal 和 / 或＝ O( 羰基氧 ) 单 - 或二取代，
Hal 表示 F、 Cl、 Br 或 I，
m 表示 0、1 或 2，
n 表示 1、2、3 或 4。
式 I 化合物还指这些化合物的水合物和溶剂合物，以及可药用的衍生物。
本发明还涉及这些化合物的光学活性形式 ( 立体异构体 )、对映异构体、外消旋 物、非对映异构体以及水合物和溶剂合物。 该化合物的溶剂合物是指由于它们之间的相 互吸引力而形成的惰性溶剂分子在该化合物上的加合物。 溶剂合物是例如一水合物或二 水合物或醇化物。
可药用的衍生物是指例如根据本发明的化合物的盐，以及所谓的前药化合物。
前药衍生物是指被例如烷基或酰基基团、糖或寡肽所修饰的式 I 化合物，并且其 可以在生物体内迅速裂解形成有效的根据本发明的化合物。
这 些 也 包 括 根 据 本 发 明 的 化 合 物 的 生 物 可 降 解 聚 合 物 衍 生 物， 例 如 在 Int. J.Pharm.115，61-67(1995) 中所述。
措辞 “有效量” 表示可以在组织、系统、动物或人中引起例如研究人员或医师 所寻找或所期望的生物学或医学反应的药物或药物活性成分的量。另外，措辞 “治疗有效量” 表示与没有接受该量的相应个体相比，具有下述结 果的量 ：
改善治疗、愈合、预防或消除疾病、症状、状况、疾患、病症或副作用或者减 缓疾病、疾患或病症的进程。
措辞 “治疗有效量” 还包括对于增强正常生理功能有效的量。
本发明还涉及式 I 化合物的混合物的用途，例如以 1 ∶ 1、1 ∶ 2、1 ∶ 3、1 ∶ 4、 1 ∶ 5、1 ∶ 10、1 ∶ 100 或 1 ∶ 1000 比例混合的两种非对映异构体混合物的用途。
这些是特别优选的立体异构化合物的混合物。
本发明涉及式 I 化合物及其盐，并涉及制备权利要求 1-12 所述的式 I 化合物及其 可药用盐、互变异构体和立体异构体的方法，其特征为，
a) 将式 II 化合物
其中 R1 具有权利要求 1 所说明的含义，
与式 III 化合物反应，
R3-CHL-W-D-R3 III
其中 W、 D、 R2 和 R3 具有权利要求 1 所说明的含义，且 L 表示 Cl、 Br、 I 或游 离的或反应性官能性修饰的 OH 基团，
或
b) 将式 II 化合物
其中 R1、 R3 和 W 具有权利要求 1 所说明的含义， 与式 V 化合物反应， X-D-R2 V 其中 D 和 R2 具有权利要求 1 所说明的含义，且 X 表示硼酸酯基团， 或 c) 通过将氨基酰化或烷基化，将基团 R2 转化成另一个基团 R2， 或 d) 通过用溶剂解或氢解试剂处理，将其从它的官能衍生物之一中释放， 和/或 将式 I 的碱或酸转化成其盐之一。 除非另有明确说明，上下文中的基团 W、 D、 R1、 R2 和 R3 具有式 I 所说明的含11义。CN 102015694 A CN 102015704 A
说明书6/46 页措辞 “氨基甲酰基” 是指 “氨基羰基”，反之亦然。
A 表示烷基，是具有 1、2、3、4、5、6、7、8、9 或 10 个 C 原子的直链 ( 线形 ) 或支链的烷基。 A 优选表示甲基，还可以是乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁 基或叔丁基，另外还可以是戊基、1-、2- 或 3- 甲基丁基、1，1-、1，2- 或 2，2- 二甲基 丙基、1- 乙基 - 丙基、己基、1-、2-、3- 或 4- 甲基戊基、1，1-、1，2-、1，3-、2， 2-、2，3- 或 3，3- 二甲基丁基、1- 或 2- 乙基丁基、1- 乙基 -1- 甲基丙基、1- 乙基 -2- 甲 基丙基、1，1，2- 或 1，2，2- 三甲基丙基，而且优选例如三氟甲基。
A 特别优选表示具有 1、2、3、4、5 或 6 个 C 原子的烷基，优选为甲基、乙基、 丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、三氟甲基、五氟乙基或 1，1，1- 三氟乙基。
环烷基优选表示环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。
R1 优选表示 Ar。
R2 优选表示 H、 A、 -[C(R3)2]nHet 或 O[C(R3)2]nHet。
R3 优选表示 H、甲基或乙基，特别优选 H。
Ar 表示例如苯基 ；邻、间或对甲苯基 ；邻、间或对乙基苯基 ；邻、间或对丙 基苯基 ；邻、间或对异丙基苯基 ；邻、间或对叔丁基苯基 ；邻、间或对羟基苯基 ；邻、 间或对硝基苯基 ；邻、间或对氨基苯基 ；邻、间或对 (N- 甲基氨基 ) 苯基 ；邻、间或对 (N- 甲基氨基羰基 ) 苯基 ；邻、间或对乙酰氨基苯基 ；邻、间或对甲氧基苯基 ；邻、间 或对乙氧基苯基 ；邻、间或对乙氧基羰基苯基 ；邻、间或对 (N，N- 二甲基氨基 ) 苯基 ； 邻、间或对 (N， N- 二甲基氨基羰基 ) 苯基 ；邻、间或对 (N- 乙基氨基 ) 苯基 ；邻、间 或对 (N， N- 二乙基氨基 ) 苯基 ；邻、间或对氟苯基 ；邻、间或对溴苯基 ；邻、间或对 氯苯基 ；邻、间或对 ( 甲基磺酰氨基 ) 苯基 ；邻、间或对 ( 甲基磺酰基 ) 苯基 ；邻、间 或对 ( 甲硫基 ) 苯基 ；邻、间或对氰基苯基 ；邻、间或对羧基苯基 ；邻、间或对甲氧基 羰基苯基 ；邻、间或对氨基磺酰基苯基 ；另外优选 2，3-、2，4-、2，5-、2，6-、3， 4- 或 3，5- 二 氟 苯 基 ；2，3-、2，4-、2，5-、2，6-、3，4- 或 3，5- 二 氯 苯 基 ；2， 3-、2，4-、2，5-、2，6-、3，4- 或 3，5- 二溴苯基 ；2，4- 或 2，5- 二硝基苯基 ；2， 5- 或 3，4- 二甲氧基苯基 ；3- 硝基 -4- 氯苯基 ；3- 氨基 -4- 氯 -、2- 氨基 -3- 氯 -、 2- 氨基 -4- 氯 -、2- 氨基 -5- 氯 - 或 2- 氨基 -6- 氯苯基 ；2- 硝基 -4-N， N- 二甲基氨 基 - 或 3- 硝基 -4-N， N- 二甲基氨基苯基 ；2，3- 二氨基苯基 ；2，3，4-、2，3，5-、 2，3，6-、2，4，6- 或 3，4，5- 三氯苯基 ；2，4，6- 三甲氧基苯基 ；2- 羟基 -3，5- 二 氯苯基 ；对碘苯基 ；3，6- 二氯 -4- 氨基苯基 ；4- 氟 -3- 氯苯基 ；2- 氟 -4- 溴苯基 ；2， 5- 二氟 -4- 溴苯基 ；3- 溴 -6- 甲氧基苯基 ；3- 氯 -6- 甲氧基苯基 ；3- 氯 -4- 乙酰氨基 苯基 ；3- 氟 -4- 甲氧基苯基 ；3- 氨基 -6- 甲基苯基 ；3- 氯 -4- 乙酰氨基苯基或 2，5- 二 甲基 -4- 氯苯基。
Ar 特别优选表示未被取代的或被 Hal 和 / 或 CN 单 -、二 - 或三取代的苯基。
不考虑进一步取代， Het 表示例如 2- 或 3- 呋喃基、2- 或 3- 噻吩基、1-、2- 或 3- 吡咯基、1-、2-、4- 或 5- 咪唑基、1-、3-、4- 或 5- 吡唑基、2-、4- 或 5- 噁唑基、 3-、4- 或 5- 异噁唑基、2-、4- 或 5- 噻唑基、3-、4- 或 5- 异噻唑基、2-、3- 或 4- 吡 啶基、2-、4-、5- 或 6- 嘧啶基，另外更优选 1，2，3- 三唑 -1-、-4- 或 -5- 基、1，2，4- 三唑 -1-、-3- 或 5- 基、1- 或 5- 四唑基、1，2，3- 噁二唑 -4- 或 -5- 基、1，2，4- 噁 二唑 -3- 或 -5- 基、1，3，4- 噻二唑 -2- 或 -5- 基、1，2，4- 噻二唑 -3- 或 -5- 基、1， 2，3- 噻二唑 -4- 或 -5- 基、3- 或 4- 哒嗪基、吡嗪基、1-、2-、3-、4-、5-、6- 或 7- 吲 哚基、4- 或 5- 异 - 吲哚基、吲唑基、1-、2-、4- 或 5- 苯并咪唑基、1-、3-、4-、5-、 6- 或 7- 苯并 - 吡唑基、2-、4-、5-、6- 或 7- 苯并噁唑基、3-、4-、5-、6- 或 7- 苯并异 噁唑基、2-、4-、5-、6- 或 7- 苯并噻唑基、2-、4-、5-、6- 或 7- 苯并异噻唑基、4-、 5-、6- 或 7- 苯并 -2，1，3- 噁二唑基、2-、3-、4-、5-、6-、7- 或 8- 喹啉基、1-、3-、 4-、5-、6-、7- 或 8- 异喹啉基、3-、4-、5-、6-、7- 或 8- 噌啉基、2-、4-、5-、6-、 7- 或 8- 喹唑啉基、5- 或 6- 喹喔啉基、2-、3-、5-、6-、7- 或 8-2H- 苯并 -1，4- 噁嗪 基，另外优选 1，3- 苯并二氧杂环戊烯 -5- 基、1，4- 苯并二噁烷 -6- 基、2，1，3- 苯并 噻二唑 -4- 或 -5- 基、2，1，3- 苯并噁二唑 -5- 基或二苯并呋喃基。
所 述 杂 环 基 团 也 可 以 部 分 地 或 全 部 地 被 氢 化。 因 此 不 考 虑 进 一 步 取 代， Het、 Het1 和 Het2 也 可 以 表 示 例 如 2，3- 二 氢 -2-、 -3-、 -4- 或 -5- 呋 喃 基、 2，5- 二 氢 -2-、 -3-、 -4- 或 5- 呋 喃 基、 四 氢 -2- 或 -3- 呋 喃 基、1，3- 二 氧 戊 环 -4- 基、 四 氢 -2- 或 -3- 噻 吩 基、2，3- 二 氢 -1-、 -2-、 -3-、 -4- 或 -5- 吡 咯 基、2，5- 二 氢 -1-、 -2-、 -3-、 -4- 或 -5- 吡 咯 基、1-、2- 或 3- 吡 咯 烷 基、 四 氢 -1-、 -2- 或 -4- 咪 唑 基、2，3- 二 氢 -1-、 -2-、 -3-、 -4- 或 -5- 吡 唑 基、 四 氢 -1-、 -3- 或 -4- 吡唑基、1，4- 二氢 -1-、 -2-、 -3- 或 -4- 吡啶基、1，2，3，4- 四 氢 -1-、 -2-、 -3-、 -4-、 -5- 或 -6- 吡啶基、1-、2-、3- 或 4- 哌啶基、2-、3- 或 4- 吗 啉基、四氢 -2-，-3- 或 -4- 吡喃基、1，4- 二噁烷基、1，3- 二噁烷 -2-、-4- 或 -5- 基、 六氢 -1-、-3- 或 -4- 哒嗪基、六氢 -1-、-2-、-4- 或 -5- 嘧啶基、1-、2- 或 3- 哌嗪基、 1，2，3，4- 四氢 -1-、 -2-、 -3-、 -4-、 -5-、 -6-、 -7- 或 -8- 喹啉基、1，2，3，4- 四 氢 -1-、-2-、-3-、-4-、-5-、-6-、-7- 或 -8- 异喹啉基、2-、3-、5-、6-、7- 或 8-3， 4- 二氢 -2H- 苯并 -1，4- 噁嗪基，另外优选 2，3- 亚甲二氧基苯基、3，4- 亚甲二氧基苯 基、2，3- 亚乙二氧基苯基、3，4- 亚乙二氧基苯基、3，4-( 二氟亚甲二氧基 ) 苯基、2， 3- 二氢 - 苯并呋喃 -5- 或 6- 基、2，3-(2- 氧代亚甲二氧基 ) 苯基或 3，4- 二氢 -2H-1， 5- 苯并二氧杂 -6- 或 -7- 基，另外优选 2，3- 二氢苯并呋喃基、2，3- 二氢 -2- 氧代呋 喃基、3，4- 二氢 -2- 氧代 -1H- 喹唑啉基、2，3- 二氢苯并噁唑基、2- 氧代 -2，3- 二氢 苯并噁唑基、2，3- 二氢苯并咪唑基、1，3- 二氢吲哚、2- 氧代 -1，3- 二氢吲哚或 2- 氧 代 -2，3- 二氢苯并咪唑基。
Het 特别优选表示哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、哌嗪基、噁唑烷基或咪唑烷基， 其中所述基团还可以被＝ O 和 / 或 A 单 - 或二取代。
Het1 优选表示哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、哌嗪基、噁唑烷基或咪唑烷基，其 中所述基团还可以被＝ O 和 / 或 A 单 - 或二取代。
不考虑进一步取代， W 表示例如呋喃基、噻吩二基、吡咯二基、咪唑二基、吡 唑二基、噁唑二基、异噁唑二基、噻唑二基、异噻唑二基、吡啶二基、嘧啶二基，另外 优选三唑二基、噁二唑二基、噻二唑二基、哒嗪二基、吡嗪二基，所述杂环基还可以被 部分氢化。
因此， W 也表示例如二氢呋喃二基或二氢吡啶二基。 W 特别优选表示噻唑二基、噻吩二基、呋喃二基、吡啶二基或嘧啶二基，其中所述基团还可以被 Hal 和 / 或 A 单 -、二 - 或三取代。
不考虑进一步取代， D 表示例如呋喃基、噻吩二基、吡咯二基、咪唑二基、吡 唑二基、噁唑二基、异噁唑二基、噻唑二基、异噻唑二基、吡啶二基、嘧啶二基，另外 优选三唑二基、噁二唑二基、噻二唑二基、哒嗪二基、吡嗪二基。 所述杂环基还可以被 部分氢化。
因此， W 也表示例如二氢呋喃二基或二氢吡啶二基。 W 特别优选表示噻唑二 基、噻吩二基、呋喃二基、吡咯二基、噁唑二基、异噁唑二基、吡唑二基、咪唑二基、 噻二唑二基、哒嗪二基、吡嗪二基、吡啶二基或嘧啶二基，其中所述基团还可以被 Hal 和 / 或 A 单 -、二 - 或三取代。
Hal 优选表示 F、 Cl 或 Br 以及 I，特别优选 F 或 Cl。
在本发明中，所有出现一次以上的基团可以是相同的或不同的，即为各自独立 的。
式 I 化合物可以具有一个或多个手性中心，并且因此可以以各种立体异构形式存 在。 式 I 包含所有这些形式。
因此，本发明特别涉及其中至少一个所述基团具有上述优选含义之一的式 I 化合 物。 一些优选的化合物组可以通过以下亚式 Ia 至 Ij 表示，其符合式 I 并且其中没有更详 细说明的基团具有如式 I 所说明的含义，但是其中，
在 la 中， A 表示具有 1-6 个 C 原子的直链或支链烷基 ；
在 lb 中， Ar 表示被 Hal 和 / 或 CN 单 -、二 - 或三取代的苯基 ；
在 lc 中， R1 表示 Ar ；
在 ld 中， R2 表示 H、 A、 -[C(R3)2]nHet 或 O[C(R3)2]nHet ；
在 le 中， R3 表示 H ；
在 lf 中， W 表示噻唑二基、噻吩二基、呋喃二基、吡啶二基或嘧啶二基，其中 所述基团还可以被 Hal 和 / 或 A 单 -、二 - 或三取代 ；
在 lg 中， D 表示噻唑二基、噻吩二基、呋喃二基、吡咯二基、噁唑二基、异噁 唑二基、吡唑二基、咪唑二基、噻二唑二基、哒嗪二基、吡嗪二基、吡啶二基或嘧啶二 基，其中所述基团还可以被 Hal 和 / 或 A 单 -、二 - 或三取代 ；
在 lh 中，Het 表示哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、哌嗪基、噁唑烷基或咪唑烷基， 其中所述基团还可以被＝ O 和 / 或 A 单 - 或二取代 ；
在 li 中，Het1 表示哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、哌嗪基、噁唑烷基或咪唑烷基， 其中所述基团还可以被＝ O 和 / 或 A 单 - 或二取代 ；
在 lj 中， R1 表示 Ar，
R2 表示 H、 A、 -[C(R3)2]nHet 或 O[C(R3)2]nHet，
R3 表示 H，
W 表示噻唑二基、噻吩二基、呋喃二基、吡啶二基或嘧啶二基，其中所述基团 还可以被 Hal 和 / 或 A 单 -、二 - 或三取代，
D 表示噻唑二基、噻吩二基、呋喃二基、吡咯二基、噁唑二基、异噁唑二基、 吡唑二基、咪唑二基、噻二唑二基、哒嗪二基、吡嗪二基、吡啶二基或嘧啶二基，其中所述基团还可以被 Hal 和 / 或 A 单 -、二 - 或三取代，
A 表示具有 1-6 个 C 原子的直链或支链烷基，
Ar 表示被 Hal 和 / 或 CN 单 -、二 - 或三取代的苯基，
Het 表示哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、哌嗪基、噁唑烷基或咪唑烷基，其中所述 基团还可以被＝ O 和 / 或 A 单 - 或二取代，
Hal 表示 F、 Cl、 Br 或 I，
n 表示 0、1、2、3 或 4 ；
及其可药用盐、互变异构体和立体异构体，包括它们所有比例的混合物。
另外，式 I 化合物以及用于制备它们的原料可以采用如文献中所述的本身已 知的方法 ( 例如在标准专著中所述的方法，如 Houben-Weyl， Methoden der organischen Chemie[ 有机化学方法 ]， Georg-Thieme-Verlag， Stuttgart)，在已知并且适于所述反应的 精确反应条件下制备。 也可以采用此处并未更详细说明的本身已知的变通方法制备。
式 II 和 III 的起始化合物通常是已知的。 不过，如果它们是新的，那么它们 可以通过本身已知的方法制备。 所用的式 II 的哒嗪酮如果不能市售可得，则一般通过 W.J.Coates， A.McKillop， Synthesis，1993，334-342 的方法制备。 式 I 化合物可以优选通过将式 II 化合物与式 III 化合物反应来获得。
在式 III 的化合物中，L 优选表示 Cl、Br、I 或游离的或反应性修饰的 OH 基团， 例如活性酯、鎓类咪唑 (imidazolide) 或具有 1-6 个 C 原子的烷基磺酰氧基 ( 优选甲基磺 酰氧基或三氟甲基磺酰氧基 ) 或具有 6-10 个 C 原子的芳基磺酰氧基 ( 优选苯基磺酰氧基 或对甲苯基磺酰氧基 )。
该反应一般在酸结合试剂、优选有机碱如 DIPEA、三乙胺、二甲基苯胺、吡啶 或喹啉存在下进行。
加入碱金属或碱土金属的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐或加入该碱金属或碱土 金属的另一种弱酸盐，优选钾盐、钠盐、钙盐或铯盐，也可以是有利的。
根据所用的条件，反应时间为几分钟和 14 天之间，反应温度在约 -30℃和 140℃ 之间，通常在 -10℃和 90℃之间，特别是在约 0℃和约 70℃之间。
适合的惰性溶剂的实例为烃类，例如己烷、石油醚、苯、甲苯或二甲苯 ；氯代 烃类，如三氯乙烯、1，2- 二氯乙烷、四氯化碳、氯仿或二氯甲烷 ；醇类，例如甲醇、 乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇或叔丁醇 ；醚类，如乙醚、二异丙醚、四氢呋喃 (THF) 或二噁烷 ；乙二醇醚，如乙二醇单甲醚或单乙醚、乙二醇二甲醚 ( 二甘醇二甲醚 ) ；酮 类，如丙酮或丁酮 ；酰胺类，如乙酸胺、二甲基乙酸胺或二甲基甲酸胺 (DMF) ；腈类， 如乙腈 ；亚砜类，如二甲基亚砜 (DMSO) ；二硫化碳 ；羧酸类，如甲酸或乙酸 ；硝基化 合物，如硝基甲烷或硝基苯 ；酯类，如乙酸乙酯，或所述溶剂的混合物。
特别优选乙腈、二氯甲烷和 / 或 DMF。
式 I 化合物还可以优选通过将式 IV 化合物与式 V 化合物进行 Suzuki 偶联来获 得。
在式 V 化合物中， X 表示硼酸酯基团，优选
该反应在 Suzuki 偶联的标准条件下进行。
此外，通过将基团 R2 转化成另一个基团 R2，例如通过将硝基还原成氨基 ( 例如 通过在阮内镍或 Pd/ 碳上、在惰性溶剂如甲醇或乙醇中氢化 ) 而将式 I 化合物转化成另一 种式 I 化合物是可能的。
而且，游离氨基可以以常规方式、使用酰氯或酸酐酰化，或者使用未被取代或 取代的卤代烷烷基化，其有利地在惰性溶剂如二氯甲烷或 THF 中和 / 或在碱如三乙胺或 吡啶存在下、在 -60℃至 +30℃的温度进行。
式 I 化合物还可以通过溶剂解、特别是水解或通过氢解从其官能衍生物中释放而 获得。
用于溶剂解或氢解的优选的原料是含有相应的被保护的氨基和 / 或羟基而非一 个或多个游离的氨基和 / 或羟基的那些原料，优选携带氨基保护基而非 H 原子与 N 原子 键合的那些原料，例如符合式 I、但是含有 NHR’ 基团 ( 其中 R’ 是氨基保护基如 BOC 或 CBZ) 而非 NH2 基团的那些原料。
还优选携带羟基保护基而非羟基 H 原子的那些原料，例如符合式 I、但含有 R” O- 苯基 ( 其中 R” 为羟基保护基 ) 而非羟基苯基的那些原料。
在原料分子中还可能存在多个相同或不同的被保护的氨基和 / 或羟基。 如果所 存在的保护基彼此不同，则它们在许多情况中能被选择性地裂解。
表述 “氨基保护基团” 是已知的一般性术语，涉及这样的基团，该基团适用于 保护 ( 阻断 ) 氨基基团免于化学反应，但是在分子其它处进行了所需化学反应之后容易除 去。 典型的此类基团特别是未取代的或者取代的酰基、芳基、芳烷氧基甲基或芳烷基。 由于氨基保护基团在所需反应 ( 或反应序列 ) 之后被除去，它们的类型和大小并不关键 ； 然而，优选具有 1-20 个、特别是 1-8 个 C 原子的那些。 表述 “酰基”应理解为与本方法 相关的最广泛的含义。 其包括衍生自脂族、芳脂族、芳族或杂环羧酸或磺酸的酰基，特 别是烷氧基羰基、芳氧基羰基且特别是芳烷氧基羰基。 此类酰基的实例是烷酰基，如乙 酰基、丙酰基、丁酰基 ；芳烷酰基，如苯乙酰基 ；芳酰基，如苯甲酰基、甲苯酰基 ；芳 氧基 - 烷酰基，如 POA ；烷氧基羰基，如甲氧基羰基、乙氧基羰基、2，2，2- 三氯乙氧 基羰基、 BOC、2- 碘代乙氧基羰基 ；芳烷氧基羰基，如 CBZ( “苄氧羰基” )、4- 甲氧 基苄氧基羰基和 FMOC ；芳基磺酰基，如 Mtr、Pbf、Pmc。 优选的氨基保护基团是 BOC 和 Mtr，以及 CBZ、 Fmoc、苄基和乙酰基。
表述 “羟基 - 保护基团” 同样是已知的一般性术语，且涉及这样的基团，该基 团适用于保护羟基基团免于化学反应，但是在分子其它处进行了所需化学反应之后容易 除去。 典型的此类基团是上文提及的未取代的或取代的芳基、芳烷基或酰基，以及烷 基。 羟基 - 保护基团的性质和大小并不重要，因为它们在所需反应或反应序列之后再次 被除去 ；优选具有 1-20 个、特别是 1-10 个 C 原子的那些。 羟基 - 保护基团的实例尤其 是叔丁氧基羰基、苄基、对硝基苯甲酰基、对甲苯磺酰基、叔丁基和乙酰基，其中苄基
和叔丁基是特别优选的。 门冬氨酸和谷氨酸中的 COOH 基团优选被保护为它们的叔丁基 酯的形式 ( 例如 Asp(OBut))。
式 I 化合物从它们的官能衍生物中释放 - 取决于所用的保护基团 - 例如使用强 酸，有利地使用 TFA 或高氯酸，还可使用其它强无机酸如盐酸或硫酸，强有机羧酸如三 氯乙酸，或者磺酸类如苯磺酸或对甲苯磺酸。 其它惰性溶剂的存在是可能的，但通常不 是必需的。 适宜的惰性溶剂优选是有机的，例如羧酸类如乙酸，醚类如四氢呋喃或二氧 杂环己烷，酰胺类如 DMF，卤代烃类如二氯甲烷，以及醇类如甲醇、乙醇或异丙醇，和 水。 此外上述溶剂的混合物也是适宜的。 TFA 优选以过量使用而不添加其它溶剂，高氯 酸优选以乙酸和 70％高氯酸呈 9 ∶ 1 比率的混合物形式使用。 用于裂解的反应温度有利 地为约 0℃至约 50℃，优选为 15 至 30℃ ( 室温 )。
例如， BOC、 OBut、 Pbf、 Pmc 和 Mtr 基团优选使用 TFA/ 二氯甲烷或者使用约 3 至 5N HCl/ 二氧杂环己烷、在 15-30℃裂解，FMOC 基团可使用约 5 至 50％的二甲胺、 二乙胺或哌啶在 DMF 中的溶液、在 15-30℃裂解。
采用三苯甲基来保护氨基酸组氨酸、天冬酸胺、谷氨酰胺和半胱氨酸。 使用 TFA/10％苯硫酚来裂解它们，这取决于所需的终产物，其中三苯甲基从所有所述氨基酸 中被裂解 ；当使用 TFA/ 茴香醚或 TFA/ 茴香硫醚时，仅 His、 Asn 和 Gin 的三苯甲基被 裂解，而在 Cys 侧链上被保留。
采用 Pbf( 五甲基苯并呋喃基 ) 来保护 Arg。 它使用例如 TFA 在二氯甲烷中裂 解。
氢解可除去的保护基团 ( 例如 CBZ 或苄基 ) 可以例如在催化剂 ( 例如贵金属催 化剂如钯，有利地在支持剂例如碳上 ) 存在下用氢处理来裂解。 此处适宜的溶剂是上文 所述的那些，特别是例如醇类如甲醇或乙醇，或者酰胺类如 DMF。 氢解通常在约 0 至 100℃的温度以及在约 1 至 200 巴的压力下进行，优选为 20-30℃和 1-10 巴。
CBZ 基团的氢解例如在 5 至 10％ Pd/C 上、在甲醇中或使用甲酸铵 ( 而非氢 )、 在 Pd/C 上、在甲醇 /DMF 中于 20-30℃充分进行。
药用盐和其它形式
本发明所述化合物可以以其最终非盐形式使用。 另一方面，本发明还包括以它 们的药学可接受盐的形式使用这些化合物，所述盐可以通过本领域已知的方法衍生自各 种有机酸和无机酸以及碱。 式 I 化合物的药学可接受的盐形式大多数是由常规方法制备。 如果式 I 化合物含有羧基，它们的一种适宜的盐可以通过使该化合物与适宜的碱反应得到 相应的碱加成盐而形成。 此类碱例如是碱金属氢氧化物，包括氢氧化钾、氢氧化钠和氢 氧化锂 ；碱土金属氢氧化物，如氢氧化钡和氢氧化钙 ；碱金属醇盐，例如乙醇钾和丙醇 钠 ；以及各种有机碱，如哌啶、二乙醇胺和 N- 甲基 - 谷氨酰胺。 式 I 化合物的铝盐同样 包括在内。 在某些式 I 化合物的情况下，酸加成盐可通过用药学可接受的有机和无机酸 处理这些化合物而形成，所述酸例如氢卤酸如盐酸、氢溴酸或氢碘酸，其它矿酸及其相 应的盐如硫酸盐、硝酸盐或磷酸盐等，以及烷基 - 和单芳基磺酸盐如乙磺酸盐、甲苯磺 酸盐和苯磺酸盐，以及其它有机酸及其相应的盐如乙酸盐、三氟乙酸盐、酒石酸盐、马 来酸盐、琥珀酸盐、枸橼酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、抗坏血酸盐等。 相应地，式 I 化 合物的药学可接受的酸加成盐包括下列 ：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、精氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐 ( 苯磺酸盐 )、硫酸氢盐、亚硫酸氢盐、溴化物、丁酸盐、 樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、辛酸盐、氯化物、氯苯甲酸盐、枸橼酸盐、环戊烷丙酸盐、二 葡萄糖酸盐、磷酸二氢盐、二硝基苯甲酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、 半乳糖二酸盐 ( 来自粘酸 )、半乳糖醛酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、甘油 磷酸盐、半琥珀酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢 碘酸盐、2- 羟基乙磺酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、异丁酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹 果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、偏磷酸盐、甲磺酸盐、甲基苯甲酸盐、磷酸 一氢盐、2- 萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、油酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸 盐、苯乙酸盐、3- 苯基丙酸盐、磷酸盐、膦酸盐、邻苯二甲酸盐，但这并不表示限定。
此外，本发明化合物的碱盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁 (III) 盐、铁 (II) 盐、锂盐、镁盐、锰 (III) 盐、锰 (II) 盐、钾盐、钠盐和锌盐，但这不是表示限制。 上 述盐中，优选的是铵盐 ；碱金属盐如钠盐和钾盐，以及碱土金属盐钙盐和镁盐。 衍生自 药学可接受的有机非毒性碱的式 I 化合物的盐包括伯、仲和叔胺类、取代的胺类、也包含 天然存在的取代的胺类、环状胺类以及碱性离子交换树脂的盐，例如精氨酸、甜菜碱、 咖啡因、氯普鲁卡因、胆碱、 N， N′ - 双苄乙二胺 ( 苄星青霉素 )、二环己基胺、二乙 醇胺、二乙胺、2- 二乙氨基乙醇、2- 二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N- 乙基吗啉、 N- 乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡糖、组氨酸、海巴明 (hydrabamine)、异丙胺、利多卡 因、赖氨酸、葡甲胺 (meglumine)、 N- 甲基 -D- 葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树 脂、普鲁卡因、嘌呤类、可可碱、三乙醇胺、三乙胺、三甲胺、三丙胺和三 -( 羟甲基 ) 甲胺 ( 氨丁三醇 )，但这并不表示限定。
含有碱性含氮基团的本发明化合物可以使用例如以下试剂而季铵化 ：(C1-C4) 烷 基卤化物如甲基、乙基、异丙基和叔丁基的氯化物、溴化物和碘化物 ；二 (C1-C4) 烷基 硫酸酯，例如二甲基、二乙基和二戊基硫酸酯 ；(C10-C18) 烷基卤化物，例如癸基、十二 烷基、月桂基、肉豆蔻基、硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物 ；以及芳基 (C1-C4) 烷基 卤化物，例如苄基氯和苯乙基溴化物。 本发明的水溶性和油溶性化合物均可使用此类盐 来制备。
优选的上述药用盐包括乙酸盐、三氟乙酸盐、苯磺酸盐、枸橼酸盐、富马酸 盐、葡萄糖酸盐、半琥珀酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、羟乙基磺酸盐、扁桃酸 盐、葡甲胺盐、硝酸盐、油酸盐、膦酸盐、新戊酸盐、磷酸钠盐、硬脂酸盐、硫酸盐、 磺基水杨酸盐、酒石酸盐、硫代苹果酸盐、甲苯磺酸盐和氨丁三醇盐，但这并不表示限 定。
特别优选盐酸盐、二盐酸盐、氢溴酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、磷酸盐、硫酸 盐和琥珀酸盐。
碱性式 I 化合物的酸加成盐是通过使游离碱形式与足量的所需酸接触、以常规方 式形成盐而制备。 游离碱可通过使盐形式与碱接触、以常规方式分离游离碱而再生。 就 某些物理性质而言，游离碱形式在某些方面不同于其相应的盐形式，如在极性溶剂中的 溶解度 ；然而，为了本发明的目的，盐与其各自游离碱形式相符。
如上所述，式 I 化合物的药学可接受的碱加成盐与金属或胺类如碱金属和碱土金 属或者有机胺类形成。 优选的金属是钠、钾、镁和钙。 优选的有机胺是 N， N′ - 二苄乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、 N- 甲基 -D- 葡萄糖胺和普鲁卡因。
本发明酸性化合物的碱加成盐是通过使游离酸形式与足量的所需碱接触、以常 规方式形成盐而制备。 游离酸可通过使该盐形式与酸接触、再以常规方式分离该游离酸 而再生。 就某些物理性质而言，游离酸形式在某些方面不同于其相应的盐，如在极性溶 剂中的溶解度 ；然而，为了本发明的目的，盐与其各自游离酸形式相符。
如果本发明化合物含有一个以上能够形成此类药学可接受盐的基团，则本发明 还包括多重盐。 典型的多重盐形式包括例如二酒石酸盐、二乙酸盐、二富马酸盐、二葡 甲胺盐、二磷酸盐、二钠盐和三盐酸盐，但这并不表示限定。
关于上文所述，可以看出，在本上下文中的表述 “药学可接受的盐” 表示活性 成分，其包括呈其一种盐形式的式 I 化合物，特别是如果此盐形式与该活性成分的游离形 式或早先使用的该活性成分的任何其它盐形式相比提供改善的药动学性质。 活性成分的 药学可接受的盐形式还可以首次为该活性成分提供从前不具有的所需的药动学性质，且 甚至可以对此活性成分的药效学就其在体内的治疗效果而言具有积极的影响。
本发明还涉及药物，其包含至少一种式 I 化合物和 / 或其可药用盐、其互变异构 体和立体异构体、包括其所有比例的混合物，以及任选包含赋形剂和 / 或辅剂。
药物制剂可以以剂量单元形式施用，每一剂量单元包含预定量的活性成分。 这 类单元可包含例如 0.5mg 至 1g、优选 1mg 至 700mg、特别优选 5mg 至 100mg 的本发明化 合物，这取决于所治疗的病症、施用方法以及患者的年龄、重量和病情 ；或者药物制剂 可以以每剂量单元包含预定量的活性成分的剂量单元形式施用。 优选的剂量单元制剂是 包含如上所述的活性成分的每日剂量或部分剂量或者其相应份数的那些。 此外，此类药 物制剂可以使用制药领域技术人员公知的方法制备。
药物制剂可适用于通过任何所需适宜方法施用，例如通过口服 ( 包括口颊或舌 下 )、直肠、鼻、局部 ( 包括口颊、舌下或经皮 )、阴道或胃肠外 ( 包括皮下、肌内、静 脉或皮内 ) 方法。 此类制剂可以使用制药领域已知的所有方法制备，例如使活性成分与 一种或多种赋形剂或一种或多种辅剂组合。
适用于口服施用的药物制剂可以作为分离的单元施用，例如胶囊或片剂 ；粉末 剂或颗粒剂 ；在水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂 ；可食用泡沫或泡沫性食物 ；或 者水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。
因此，例如，在以片剂或胶囊剂形式口服施用的情况下，可以使活性成分组分 与口服非毒性和药学可接受的惰性赋形剂组合，例如乙醇、甘油、水等。 粉末剂是通过 将化合物粉碎成适宜的细度、使其与以类似方式粉碎的药用赋形剂混合来制备，所述赋 形剂例如可食用碳水化合物如淀粉或甘露醇。 可以同样存在调味剂、防腐剂、分散剂和 染料。
胶囊剂通过制备如上所述粉末混合物并随即填充成形的明胶壳来制备。 在填充 操作之前，可以向该粉末混合物中加入助流剂和润滑剂，例如高度分散的硅酸、滑石、 硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体形式的聚乙二醇。 同样可以加入崩解剂或溶解剂，例如琼 脂、碳酸钙或碳酸钠，以便在服用胶囊之后改善药物的利用度。
此外，如果需要或必需，适宜的粘合剂、润滑剂和崩解剂以及染料也可以掺入 到该混合物中。 适宜的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖类如葡萄糖或 β- 乳糖、由玉米制得的甜味剂、天然或合成橡胶如阿拉伯胶、西黄蓍胶或海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚 乙二醇、蜡类等。 在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲 酸钠、乙酸钠、氯化钠等。 崩解剂非限制性地包括淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、 黄原胶等。 片剂如下配制，通过例如制备粉末混合物、制粒或干法压制该混合物、添加 润滑剂和崩解剂以及压制该完整的混合物以得到片剂。 粉末混合物如下制备 ：使以适宜 方式粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基质以及任选与下列混合 ：粘合剂例如羧甲基 纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮、溶解阻滞剂例如石蜡、吸收促进剂例如季盐 (quaternary salt) 和 / 或吸附剂例如膨润土、高岭土或磷酸二钙。 该粉末混合物可以通过 用粘合剂使其润湿、再压制过筛而被制粒，所述粘合剂例如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶浆 或者纤维素或聚合物材料的溶液。 作为制粒法的替代选择，可以将粉末混合物通过压片 机，得到非均匀形状的块状物，将其破碎以形成颗粒。 可通过添加硬脂酸、硬脂酸盐、 滑石或矿物油来使颗粒润滑，以便防止粘附片剂成形模具。 然后将该经润滑的混合物压 制以得到片剂。 还可以使本发明化合物与自由流动的惰性赋形剂组合，然后直接压制得 到片剂，而不进行制粒或干法压制步骤。 可以存在由虫胶密封层、糖或聚合物材料层以 及蜡打光层组成的透明或不透明保护层。 可以将染料加至这些衣材中，以便能够区分不 同的剂量单元。
可以将口服液体例如溶液剂、糖浆剂和酏剂制备成剂量单元形式，以使给定的 量包含预先确定的化合物量。 可通过将化合物溶解在具有适宜调味剂的水溶液中来制备 糖浆剂，而使用非毒性醇性载体来制备酏剂。 可通过使化合物分散在非毒性载体中来制 备混悬剂。 同样可以加入增溶剂和乳化剂例如乙氧基化异硬脂醇类和聚氧乙烯山梨醇醚 类、防腐剂、调味添加剂例如薄荷油或天然甜味剂或糖精或者其它人造甜味剂等。
如果需要，用于口服施用的剂量单元制剂可以被包囊在微囊中。 该制剂还可以 以使释放延长或延迟的方式制备，例如通过使微粒物质包裹或包埋在聚合物、蜡等中。
式 I 化合物及其盐、互变异构体和立体异构体也可以以脂质体递送系统的形式施 用，如小单层囊泡、大单层囊泡和多层囊泡。 可以由多种磷脂类例如胆固醇、硬脂胺或 磷脂酰胆碱类形成脂质体。
式 I 化合物及其盐、互变异构体和立体异构体也可使用单克隆抗体作为单个载体 来递送，化合物分子与该载体是偶联的。 化合物还可以偶联到作为靶向药物载体的可溶 性聚合物上。 此类聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺 基酚、聚羟乙基天冬酰胺基酚或聚氧化乙烯多聚赖氨酸，被棕榈酰基取代。 所述化合物 还可偶联到一类生物可降解的聚合物上，该聚合物适用于获得药物的控制释放，例如聚 乳酸、聚 -ε- 己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯类、聚缩醛类、聚二羟基吡喃类、聚氰基 丙烯酸酯类和交联或两亲性水凝胶嵌段共聚物。
适用于经皮施用的药物制剂可以作为用于延迟的、紧密与受者表皮接触的 独立的贴片施用。 因此，例如，活性成分可以从该贴片中通过离子透入法递送，如 Pharmaceutical Research，3(6)，318(1986) 的概述部分描述。
适用于局部施用的药物化合物可配制成软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、粉末 剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。
为了眼或其它外部组织例如口和皮肤的治疗，该制剂优选作为局部用软膏或乳膏应用。 在配制为软膏的情况下，活性成分可以与石蜡或水混溶性乳膏基质应用。 或 者，用水包油乳膏基质或油包水乳膏基质，可以配制活性成分得到乳膏。
适用于局部施用于眼的药物制剂包括滴眼剂、其中活性成分被溶解或混悬在适 宜的载体特别是水性溶剂中。
适用于局部施用于口的药物制剂包括锭剂、软锭剂和漱口剂。
适用于直肠施用的药物制剂可以以栓剂或灌肠剂的形式施用。
适用于鼻施用的其中载体物质是固体的药物制剂包括具有例如 20-500 微米粒度 的粗粉，其采取鼻吸的方式施用，即经鼻道从靠近鼻子的含有粉末的容器中快速吸入。 用液体作为载体物质以喷鼻剂或滴鼻剂施用的适宜制剂包含活性成分的水溶液或油溶 液。
适用于通过吸入施用的药物制剂包含细微粒子粉剂或雾剂，其可通过不同类型 的加压分配器、用气溶胶、雾化器或吸入器产生。
适用于阴道施用的药物制剂可以以阴道栓剂、棉塞剂、乳膏剂、凝胶剂、糊 剂、泡沫剂或喷雾制剂施用。
适用于胃肠外施用的药物制剂包括水性或非水性灭菌注射溶液，其包含抗氧 剂、缓冲剂、制菌剂和溶质，通过该溶质使该制剂与受治疗的受者的血液等渗 ；以及水 性或非水性灭菌混悬液，其可包含混悬介质和增稠剂。 该制剂可以在单剂量或多剂量容 器中施用，例如密封的安瓿或小瓶，并以冷冻干燥 ( 冻干 ) 状态贮藏，以便仅需要在临用 前添加无菌载体液体如注射用水。 根据处方制备的注射溶液和混悬液可由无菌粉末、颗 粒和片剂制备。
毫无疑问，除了以上具体提及的组分外，制剂还可包含本领域常用的与制剂特 定形式有关的其它试剂 ；因此，例如，适用于口服施用的制剂可包含调味剂。
式 I 化合物的治疗有效量取决于多种因素，包括例如动物的年龄和重量、需要治 疗的确切病情及其严重程度、制剂的性质和施用方法，且最终由治疗医生或兽医师来确 定。 然而，用于治疗肿瘤生长例如结肠癌或乳癌的本发明化合物的有效量通常为每天 0.1 至 100mg/kg 受者 ( 哺乳动物 ) 体重，特别典型的是每天 1 至 10mg/kg 体重。 因此，对 于重 70kg 的成年哺乳动物每天的实际量通常为 70 至 700mg，此量可以每天以单剂量施 用，或者通常每天以一系列分剂量 ( 例如 2、3、4、5 或 6 次 ) 施用，从而使总日剂量相 同。 其盐或溶剂合物或生理功能衍生物的有效量可以以本发明化合物本身的有效量的分 数来确定。 可以设想，相似剂量适用于上述其它病症的治疗。
本发明还涉及药物，其包含至少一种式 I 化合物和 / 或其可药用盐、互变异构体 和立体异构体，包括其以任何比率的混合物，以及至少一种其它药物活性成分。
本发明还涉及套药包 ( 药盒 )，由以下分立的药包组成 ：
(a) 有效量的式 I 化合物和 / 或其可药用的盐、互变异构体和立体异构体、包括 其所有比例的混合物 ；
和
(b) 有效量的其它药物活性成分。
该套药包包括适宜的容器，如盒子、单个的瓶、袋或安瓿。 该套药包可以例如 包括分离的安瓿，各自含有有效量的式 I 化合物和 / 或其可药用盐、互变异构体和立体异构体、包括其以任何比例的混合物，以及溶解或冻干形式的有效量的其它药物活性成 分。
应用
本发明的化合物适合作为用于哺乳动物、尤其是人的药物活性成分，以治疗酪 氨酸激酶诱导的疾病。 这些疾病包括肿瘤细胞增殖、促进实体瘤生长的病理性新生血管 形成 ( 或血管生成 )、眼新生血管形成 ( 糖尿病性视网膜病、年龄诱导的黄斑变性等 ) 和 炎症 ( 银屑病、类风湿性关节炎等 )。
本发明包括式 I 化合物和 / 或其生理学可接受的盐和溶剂合物在制备用于治疗或 预防癌症的药物中的用途。 优选治疗的癌症来源于脑癌、泌尿生殖道癌症、淋巴系统癌 症、胃癌、喉癌和肺癌。 另一组优选的癌症形式是单核细胞性白血病、肺腺癌、小细胞 肺癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤和乳腺癌。
还包括根据本发明的权利要求 1 所述的化合物和 / 或其生理学可接受的盐和溶剂 合物在制备用于治疗或预防其中涉及血管生成的疾病的药物中的用途。
这类其中涉及血管生成的疾病是眼病，如视网膜血管化、糖尿病性视网膜病、 年龄诱导的黄斑变性等。 式 I 化合物和 / 或其生理学可接受的盐和溶剂合物在制备用于治疗或预防炎症疾 病的药物中的用途也属于本发明的范围。 这类炎症疾病的实例包括类风湿性关节炎、银 屑病、接触性皮炎、迟发型超敏反应等。
还包括式 I 化合物和 / 或其生理学可接受的盐和溶剂合物在制备用于在哺乳动物 中治疗或预防酪氨酸激酶诱导的疾病或酪氨酸激酶诱导的病症的药物中的用途，其中就 该方法而言，对需要该治疗的患病哺乳动物施用治疗有效量的根据本发明的化合物。 治 疗量根据具体疾病而改变，可以由本领域技术人员不经过度尝试确定。
本发明还包括式 I 化合物和 / 或其生理学可接受的盐和溶剂合物在制备用于治疗 或预防视网膜血管化的药物中的用途。
用于治疗或预防眼病如糖尿病性视网膜病和年龄诱导的黄斑变性的方法也是本 发明的组成部分。 治疗或预防炎症疾病如类风湿性关节炎、银屑病、接触性皮炎和迟发 型超敏反应的用途以及治疗或预防选自骨肉瘤、骨关节炎和佝偻病的骨病的用途也属于 本发明的范围。
表述 “酪氨酸激酶诱导的疾病或病症” 是指依赖于一种或多种酪氨酸激酶活性 的病理情况。 酪氨酸激酶直接或间接参与多种细胞活动、包括增殖、粘着和迁移以及分 化的信号转导通路。 与酪氨酸激酶活性相关的疾病包括肿瘤细胞增殖、促进实体瘤生长 的病理性新生血管形成、眼新生血管形成 ( 糖尿病性视网膜病、年龄诱导的黄斑变性等 ) 和炎症 ( 银屑病、类风湿性关节炎等 )。
式 I 化合物可以施用于患者以治疗癌症，特别是快速生长的肿瘤。
因此，本发明涉及式 I 化合物及其可药用盐、互变异构体和立体异构体、包括其 所有比例的混合物在制备用于治疗激酶信号转导的抑制、调节和 / 或调控在其中起作用 的疾病的药物中的用途。
本文优选的是 Met 激酶。
优选式 I 化合物及其可药用的衍生物、溶剂合物和立体异构体、包括其所有比例
的混合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗受根据权利要求 1 的化合物对酪氨酸 激酶类的抑制的影响的疾病。
特别优选制备药物的用途，所述药物用于治疗受根据权利要求 1 的化合物对 Met 激酶的抑制的影响的疾病。
尤其优选用于治疗疾病的用途，其中所述疾病为实体瘤。
实体瘤优选选自肺、鳞状上皮、膀胱、胃、肾、头和颈、食道、宫颈、甲状 腺、肠、肝、脑、前列腺、生殖泌尿道、淋巴系统、胃和 / 或喉的肿瘤。
实体瘤还优选选自肺腺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、结肠癌和乳 腺癌。
还优选用于治疗血液和免疫系统的肿瘤的用途，优选用于治疗选自急性髓性白 血病、慢性髓性白血病、急性淋巴性白血病和 / 或慢性淋巴性白血病的肿瘤的用途。
可以将所公开的式 I 化合物与其它已知的治疗剂、包括抗癌药组合施用。 本文 所用的术语 “抗癌药” 涉及以治疗癌症为目的被施用于癌症患者的任何活性剂。
本文所定义的抗癌治疗可以作为单一疗法应用，或除本发明的化合物外，还可 以包括常规的手术或放疗或化疗。 这类化疗可以包括如下类别的抗肿瘤药中的一种或多 种：
(i) 用于医学肿瘤学的抗增殖 / 抗肿瘤 /DNA- 损伤剂及其组合，如烷化剂 ( 例 如顺铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安和亚硝基脲 ) ；抗代谢 物 ( 例如抗叶酸剂，如氟嘧啶类如 5- 氟脲嘧啶和替加氟、雷替曲塞、甲氨蝶呤、阿糖胞 苷、羟基脲和吉西他滨 ) ；抗肿瘤抗生素 ( 例如蒽环类抗生素，如阿霉素、博来霉素、多 柔比星、道诺霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素 -C、更生霉素 (dactinomycin) 和光 辉霉素 ) ；抗有丝分裂剂 ( 例如长春花生物碱类，如长春新碱、长春碱、长春地辛和长春 瑞滨，和紫杉烷类如泰素 ((taxol) 和泰素帝 ((taxotere)) ；拓扑异构酶抑制剂 ( 例如表鬼 臼毒素类如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶 (amsacrine)、拓扑替康、伊立替康和喜树碱 ) 和细胞分化剂 ( 例如全反式视黄酸、13- 顺式 - 视黄酸和芬维 A 胺 ) ；
(ii) 细胞抑制剂，如抗雌激素药 ( 例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔 芬和 iodoxyfene)、雌激素受体减量调节剂 ( 例如氟维司群 )、抗雄激素药 ( 例如比卡鲁 胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙孕酮 )、 LHRH 拮杭剂或 LHRH 激动剂 ( 例如戈舍瑞 林、亮丙瑞林和布舍瑞林 (buserelin))、孕酮类 ( 例如醋酸甲地孕酮 )、芳香酶抑制剂 ( 例 如阿那曲唑、来曲唑、 vorazole 和依西美坦 ) 和 5α- 还原酶抑制剂如非那雄胺 ；
(iii) 抑制癌细胞侵入的活性剂 ( 例如金属蛋白酶抑制剂如马立马司他和尿激 酶 - 纤溶酶原激活物受体功能抑制剂 ) ；
(iv) 生长因子功能抑制剂，例如这类抑制剂包括生长因子抗体、生长因子受体 抗体 ( 例如抗 -erbb2- 抗体曲妥单抗 [HerceptinTM] 和抗 -erbb1- 抗体西妥昔单杭 [C225])、 法尼基转移酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸 / 苏氨酸激酶抑制剂，例如表皮生长 因子家族的抑制剂 ( 例如 EGFR 家族酪氨酸激酶抑制剂，如 N-(3- 氯 -4- 氟苯基 )-7- 甲 氧基 -6-(3- 吗啉代丙氧基 ) 喹唑啉 -4- 胺 ( 吉非替尼， AZD1839)、 N-(3- 乙炔基苯 基 -6，7- 双 (2- 甲氧基乙氧基 ) 喹唑啉 -4- 胺 ( 厄洛替尼， OSI-774) 和 6- 丙烯酰氨 基 -N-(3- 氯 -4- 氟苯基 )-7-(3- 吗啉代丙氧基 ) 喹唑啉 -4- 胺 (CI 1033)) ；例如血小板衍生生长因子家族的抑制剂和例如肝细胞生长因子家族的抑制剂 ；
(v) 抗血管生成剂，例如抑制血管内皮生长因子的作用的那些 ( 例如抗血管内皮 细胞生长因子抗体贝伐单抗 [AvastinTM]，诸如公开在公布的国际专利申请 WO 97/22596、 WO 97/30035、 WO 97/32856 和 WO 98/13354 中的那些化合物 ) 和通过其它机理起作用 的化合物 ( 例如利诺胺 (linomide)、整联蛋白 αvβ3 功能抑制剂和血管生长抑制素 ) ；
(vi) 血 管 损 伤 剂， 如 考 布 他 汀 (combretastatin)A4 和 国 际 专 利 申 请 WO99/02166、 WO 00/40529、 WO 00/41669、 WO 01/92224、 WO 02/04434 和 WO 02/08213 中所公开的化合物 ；
(vii) 反义疗法，例如针对上述靶标的那些，如 ISIS 2503、抗 -Ras 反义物 ；
(viii) 基 因 治 疗 方 法， 包 括 例 如 替 代 异 常 基 因 如 异 常 p53 或 异 常 BRCA1 或 BRCA2 的方法 ；GDEPT( 基因导向性酶前药治疗 ) 方法，例如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷 激酶或细菌硝基还原酶的那些 ；和增加患者对化疗或放疗耐受性的方法，例如多药抗药 性基因疗法 ；和
(ix) 免疫疗法，包括例如增加患者肿瘤细胞免疫原性的离体和体内方法，例如 使用细胞因子如白细胞介素 2、白细胞介素 4 或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的转染 ；降 低 T- 细胞无变应性的方法 ；使用转染的免疫细胞如细胞因子转染的树突细胞的方法 ；使 用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法，和使用抗独特型抗体的方法。
来自下表 1 的药物优选但非排他性地与式 I 化合物组合使用。
该类组合治疗能借助于同时、连续或分别给予治疗中的各组分来实现。 这种类 型的组合产品使用根据本发明的化合物。
测定法
通过下文所述的测定法对实施例中所述的式 I 化合物进行了测试，发现它们具 有激酶抑制活性。 其它测定法由文献已知，能容易地由本领域技术人员进行 ( 例如参 见 Dhanabal 等人， Cancer Res.59 ：189-197 ；Xin 等人， J.Biol.Chem.274 ：9116-9121 ； Sheu 等 人， Anticancer Res.18 ：4435-4441 ；Ausprunk 等 人， Dev.Biol.38 ：237-248 ； Gimbrone 等人， J.Natl.CancerInst.52 ：413-427 ；Nicosia 等人， In Vitro 18 ：538-549)。
Met 激酶活性的测定
根据制造商的数据 (Met，活性，upstate，目录号 14-526)，表达 Met 激酶，目的 在于在昆虫细胞 (Sf21 ；草地夜峨 (S.frugiperda)) 中产生蛋白质，随后在杆状病毒表达载 体中以 “N- 末端 6His- 标记的” 重组人蛋白质的形式进行亲和色谱纯化。
可以使用各种可利用的测定系统测定激酶活性。在闪烁亲近测定法 (Sorg 等人， J.of.Biomolecular Screening，2002，7，11-19)、闪板法或过滤结合试验中，使用放射性
标记的 ATP(32P-ATP，33P-ATP) 测定作为底物的蛋白质或肽的放射性磷酸化。 在存在抑 制性化合物的情况下，能检测到减少的放射性信号或检测不到放射性信号。 此外，也可 以用均匀时间分辨荧光共振能量转移 (HTR-FRET) 和荧光偏振 (FP) 技术作为测定方法 (Sills 等人， J.of Biomolecular Screening，2002，191-214)。
其它非放射性 ELISA 测定方法使用特异性磷酸 - 抗体 (phospho-AB)。 磷酸 - 抗 体仅结合磷酸化底物。 可以根据化学发光、使用过氧化物酶轭合的第二抗体检测这种结 合 ((Ross 等人，2002， Biochem.J.)。
闪板法 (Met 激酶 )
所 用 的 试 验 板 是 来 自 Perkin Eimer 的 96- 孔 FlashplateR 微 量 滴 定 板 ( 目 录 号 SMP200)。 将 下 述 激 酶 反 应 的 组 分 吸 移 入 测 定 板 中。 将 Met 激 酶 和 底 物 聚 Ala-Glu-Lys-Tyr(pAGLT，6 ∶ 2 ∶ 5 ∶ 1) 与放射性标记的 33p-ATP 一起在存在和不存在 测试物质的情况下、以 100μl 的总体积于室温孵育 3 小时。 使用 150μl 60mM EDTA 溶 液终止反应。 于室温进一步孵育 30 分钟后，抽滤出上清液，每次用 200μl 0.9％ NaCl 溶 液将各孔洗涤三次。 用闪烁测定仪 (Topcount NXT， Perkin-Eimer) 测定结合的放射性。
所用的全值是不含抑制剂的激酶反应。 这应为约 6000 ～ 9000cpm。 所用的药 理学零值是 0.1mM 终浓度的星形孢菌素。 使用 RS1_MTS 程序测定抑制值 (IC50)。
每个孔中的激酶反应条件 ：
30μl 测定缓冲液
10μl 在含有 10％ DMSO 的测定缓冲液中的待测底物
10μl ATP( 终浓度 1μM cold，0.35μCi 33P-ATP)
50μl 在测定缓冲液中的 Met 激酶 / 底物混合物 ；
(10ng 酶 / 孔，50ng pAGLT/ 孔 )
所用的溶液 ：
- 测定缓冲液 ：
50mM HEPES
3mM 氯化镁
3μM 原钒酸钠
3mM 氯化锰 (II)
1mM 二硫苏糖醇 (DTT)
pH ＝ 7.5( 使用氢氧化钠设定 )
- 终止溶液 ：
60mM Titriplex III(EDTA)
-33P-ATP ：Perkin-Elmer ；
-Met 激酶 ：Upstate，目录号 14-526，储备液 1μg/10μl ；比活性 954U/mg ；
-Poly-Ala-Glu-Lys-Tyr，6 ∶ 2 ∶ 5 ∶ 1 ：Sigma 目录号 P1152
体内试验
实验操作 ：雌性 Balb/C 小鼠 ( 饲养者 ：Charles River Wiga) 在抵达时为 5 周龄。 使其适应我们的饲养条件 7 天。 随后，给每个小鼠在骨盆区域皮下注射在 100μl PBS( 不 含 Ca++ 和 mg++) 中的 4 百万 TPR-Met/NIH3T3 细胞。 在 5 天后，将动物随机分成 3组，从而使得每个由 9 只小鼠组成的组具有 110μl( 范围 ：55-165) 的平均肿瘤体积。 每 天给对照组施用 100μl 媒介物 ((0.25％甲基纤维素 /100mM 乙酸盐缓冲液， pH 5.5)，给 治疗组每天施用 200mg/kg 溶解于媒介物中的 “A56” 或 “A91” ( 体积同样为 100μl/ 动物 )，在各种情况中，都是通过胃管施用。 9 天后，对照组具有 1530μl 的平均体积， 这时终止实验。
肿瘤体积的测量 ：用游标卡尺测量长 (L) 和宽 (B)，由公式 L×B×B/2 计算肿 瘤体积。
饲养条件 ：每笼 4 或 5 只动物，用商业小鼠食物 (Sniff) 饲养。
在上下文中，所有温度均以℃表示。 在下列实施例中， “常规后处理” 意指 ： 如果必要，加入水 ：如果必要，将 pH 调节至 2 ～ 10，这取决于终产物的构成，用乙酸乙 酯或二氯甲烷萃取混合物，分离各相，将有机相用硫酸钠干燥，蒸发，通过硅胶色谱法 和 / 或通过结晶法纯化残余物。 在硅胶上的 Rf ；洗脱剂 ：乙酸乙酯 / 甲醇 9 ∶ 1。
质谱 (MS) ：EI( 电子碰撞离子化 )M+
FAB( 快速原子轰击 )(M+H)+
ESI( 电喷雾离子化 )(M+H)+
APCI-MS( 大气压化学离子化 - 质谱 )(M+H)+ HPLC 方法 ： 方法 A ：梯度 ：4.5min/ 流速 ：3ml/min 99 ∶ 01-0 ∶ 100 水 +0.1％ ( 体积 )TFA ：乙腈 +0.1％ ( 体积 )TFA 0.0 至 0.5min ：99 ∶ 01 0.5 至 3.5min ：99 ∶ 01 → 0 ∶ 100 3.5 至 4.5min ：0 ∶ 100 柱 ：Chromolith SpeedROD RP18e 50-4.6 波长 ：220nm 方法 B ：梯度 ：4.2min/ 流速 ：2ml/min 99 ∶ 01-0 ∶ 100 水 +0.1％ ( 体积 )TFA ：乙腈 +0.1％ ( 体积 )TFA 0.0 至 0.2min ：99 ∶ 01 0.2 至 3.8min ：99 ∶ 01 → 0 ∶ 100 3.8to 4.2min ：0 ∶ 100 柱 ：Chromolith Performance RP18e ；100mm 长， 内径 ：3mm 波长 ：220nm 保留时间 Rt. 单位是分钟 [min]。实施例
通用工作操作 1(GWP 1) ：将 1-1.2 当量乙醛酸和乙酸 (2 当量 ) 加入到 1 当量苯乙酮中，将该混合物在 95-100℃搅拌 3-24h。 将反应混合物冷却，加入水 (3-5ml/g 苯乙酮 )，在冰冷却下将混 合物用 25％氨溶液中和，加入 1 当量氢氧化肼。 将混合物在回流下搅拌 3h，在此期间形 成糊状沉淀物，这意味着在一些情况中必须加入水。 在冷却后，将沉淀物抽滤出，用水 清洗并干燥。
4-(6- 氧代 -1，6- 二氢哒嗪 -3- 基 ) 苯甲腈
根据 GWP 1 将 50g 4- 乙酰基苯甲腈转化成哒嗪酮。 收率 ：50.4g 暗黄色固体， ESI 198， Rt. ＝ 2.27min( 方法 A)。 将该物质不经进一步纯化进一步反应。
3-(6- 氧代 -1，6- 二氢哒嗪 -3- 基 ) 苯甲腈
根据 GWP 1 将 7.3g 3- 乙酰基苯甲腈转化成哒嗪酮。 收率 ：4.12g 褐色固体， ESI 198。 将该物质不经进一步纯化进一步反应。
实施例 1
类似于下列流程，进行 6-(3，5- 二氟苯基 )-2-(5 ′ - 甲基 -[2，2 ′ ] 联吡啶 基 -6- 基 - 甲基 )-2H- 哒嗪 -3- 酮 ( “A1” ) 的制备。
1.1 将 1.05g(4.19mmol)2- 溴 -6- 溴 甲 基 吡 啶 和 2.15g 碳 酸 钾 加 至 792mg(3.81mmol)6-(3，5- 二氟苯基 )-2H- 哒嗪 -3- 酮在 19ml 乙腈中的悬液，将混合 物在 80℃搅拌 18 小时。 将反应混合物过滤，用乙腈洗涤。 将滤液蒸发，在叔丁基甲基 醚与水之间分配。 用硫酸钠干燥有机相，蒸发。 在硅胶柱上用石油醚 / 乙酸乙酯作为 洗脱剂对残渣进行色谱分析 ：2-(6- 溴 - 吡啶 -2- 基甲基 )-6-(3，5- 二氟苯基 )-2H- 哒 嗪 -3- 酮，为黄色晶体 ；ESI 378,380。
1.2 在氮气下将 189mg(0.50mmol)2-(6- 溴吡啶 -2- 基 - 甲基 )-6-(3，5- 二氟 苯基 )-2H- 哒嗪 -3- 酮、339mg(1.20mmol)5- 甲基吡啶 -2- 硼酸 N- 苯基二乙醇胺酯、 425mg(2.00mmol) 三水磷酸钾在 5ml 1，2- 二甲氧基 - 乙烷中的悬液加热至 80℃，加入 70mg(0.1mmol) 二 -( 三苯基膦 ) 氯化钯 (II) 和 2 滴三乙胺。 将混合物在 100℃的温度搅 拌 42 小时。 将反应混合物用二氯甲烷稀释，经由硅藻土将其抽滤出。 将滤液在水与二 氯甲烷中分配。 用硫酸钠干燥有机相，蒸发。 在硅胶柱上用二氯甲烷 / 甲醇作为洗脱剂 对残渣进行色谱分析 ：6-(3，5- 二氟苯基 )-2-(5′ - 甲基 -[2，2′ ] 联吡啶基 -6- 基甲 基 )-2H- 哒嗪 -3- 酮 ( “A1” )，为黄色固体 ；ESI 391 ； 1
H-NMR(d6-DMSO) ：δ[ppm] ＝ 2.35(s，3H)，5.57(s，2H)，7.20(d， J ＝ 10Hz，1H)，7.30(d，J ＝ 7Hz，1H)，7.35(m，1H)，7.65(m，2H)，7.71(d，J ＝ 8Hz， 1H)，7.92(t， J ＝ 7.8Hz，1H)，8.11(d， J ＝ 8.5Hz，1H)，8.22(d， J ＝ 10Hz， IH)， 8.26(d， J ＝ 8Hz，1H)，8.51(s，1H)。
实施例 2
类似于以下流程，进行 3-[6- 氧代 -1-(6-{5-[1-(2- 吡咯烷 -1- 基乙基 )-1H- 吡 唑 -4- 基 ] 嘧啶 -2- 基 } 吡啶 -2- 基甲基 )-1，6- 二氢哒嗪 -3- 基 ] 苯甲腈 ( “A2”) 的 制备。
2.1 将 392mg(0.56mmol) 二 ( 三 苯 基 膦 ) 氯 化 钯 (II)、293mg(1.12mmol) 三 苯基膦和 3.18g(11.2mmol)5- 溴 -2- 碘嘧啶加至保持在氮气下的 4.27g(11.2mmol)6- 甲 基 -2-( 三丁基甲锡烷基 ) 吡啶在 77ml 甲苯中的溶液。 将反应混合物在氮气和 140℃加热 18 小时。 将反应混合物蒸发，在硅胶柱上用叔丁基甲基醚 / 甲醇作为洗脱剂对残渣进行 色谱分析 ：5- 溴 -2-(6- 甲基吡啶 -2- 基 ) 嘧啶，为褐色晶体 ；ESI 250,252。
2.2 将 1.48g(8.31mmol)N- 溴代琥珀酰亚胺和 7.5mg(31μmol) 过氧化苯甲酰 ( 含 有 25％水 ) 加入 2.08g(8.32mmol)5- 溴 -2-(6- 甲基吡啶 -2- 基 ) 嘧啶在 18ml 氯苯中的溶 液。 将反应混合物在 80℃的温度搅拌过夜。 将反应混合物真空蒸发，在硅胶柱上用石油 醚 / 乙酸乙酯作为洗脱剂对残渣进行色谱分析 ：5- 溴 -2-(6- 溴甲基吡啶 -2- 基 ) 嘧啶， 为黄色晶体 ；ESI 328,330,332。
2.3 将 54.6mg(0.166mmol)5- 溴 -2-(6- 溴 甲 基 吡 啶 -2- 基 )- 嘧 啶 和 54.1mg(0.166mmol) 碳酸铯加至 32.7mg(0.166mmol)3-(6- 氧代 -1，6- 二氢哒嗪 -3- 基 ) 苯甲腈在 0.5ml DMF 中的悬液，将混合物在 80℃搅拌 18 小时。 将反应混合物加至水中。 将所形成的沉淀物抽滤出，用水洗涤，真空干燥，得到 3-{1-[6-(5- 溴嘧啶 -2- 基 ) 吡 啶 -2- 基甲基 ]-6- 氧代 -1，6- 二氢哒嗪 -3- 基 } 苯甲腈，为浅褐色晶体 ；ESI 445,447 ； 1
H-NMR(d6-DMSO) ：δ[ppm] ＝ 5.57(s，2H)，7.20(d， J ＝ 9.5Hz，1H)， 7.36(d， J ＝ 8Hz ；1H)，7.70(t， J ＝ 7.8Hz，1H)，7.92(d， J ＝ 7.7Hz，1H)，7.97(t， J ＝ 7.9Hz，1H)，8.22(m，2H)，8.29(d， J ＝ 7.5Hz， lH)，8.36(s， lH)，9.15(s，2H)。
2.4 将 l0.0g(50.5mmol) 吡唑 -4- 硼酸频哪醇酯的溶液溶于 100ml 乙腈中，加入 17.5g(101mmol)N-(2- 氯 - 乙基 ) 吡咯烷盐酸盐和 49.4g(152mmol) 碳酸铯。 将所形成 的悬液在室温搅拌 18 小时。 将反应混合物抽滤出，用乙腈洗涤。 将滤液蒸发，在乙酸 乙酯与饱和氯化钠溶液之间分配。 用硫酸钠干燥有机相，蒸发 ：1-(2- 吡咯烷 -1- 基乙 基 )-4-(4，4，5，5- 四甲基 -1，3，2- 二氧硼杂环戊烷 -2- 基 )-1H- 吡唑，为浅橙色油， 其逐渐结晶 ； 1
H-NMR ( d 6- DMSO ) ：δ [ppm] ＝ 1 .25( s ， 12 H) ， 1 . 65( m， 4 H) ， 2 . 44( m ， 4H)，2.79(t， J ＝ 6.8Hz，2H)，4.21(t， J ＝ 6.8Hz，2H)，7.56(s，1H)，7.93(s，1H)。
2.5 在 氮 气 下、 将 28.9mg(65μmol)3-{1-[6-(5- 溴 嘧 啶 -2- 基 ) 吡 啶 -2- 基 甲 基 ]-6- 氧 代 -1，6- 二 氢 哒 嗪 -3- 基 } 苯 甲 腈、21mg(72μmol)1-(2- 吡 咯 烷 -1- 基 乙 基 )-4-(4，4，5，5- 四 甲 基 -1，3，2- 二 氧 硼 杂 环 戊 烷 -2- 基 )-1H- 吡 唑 和 27.6mg(130μmol) 三水磷酸钾在 0.5ml 1，2- 二甲氧基乙烷中的悬液加热至 85℃。 然后 加入 3.9mg(6μmol) 二 ( 三苯基膦 ) 氯化钯 (II) 和 1 滴三乙胺，将混合物在 80℃搅拌 18 小时。 将反应混合物冷却，在水与乙酸乙酯之间分配。 用硫酸钠干燥有机相，蒸发。 通过制备型 HPLC 纯化残渣 ：3-[6- 氧代 -1-(6-{5-[1-(2- 吡咯烷 -1- 基乙基 )-1H- 吡 唑 -4- 基 ] 嘧 啶 -2- 基 } 吡 啶 -2- 基 甲 基 )-1，6- 二 氢 哒 嗪 -3- 基 ] 苯 甲 腈 甲 酸 盐 ( “A2” )，为浅黄色冻干物 ；ESI 530 ； 1
H- NMR ( d6- DMSO ) ：δ[ppm] ＝ 1.68( m，4 H ) ， 2 . 49( m ， 4 H ) ， 2 . 89( t ， J ＝ 6.6Hz，2H)，4.29(t， J ＝ 6.6Hz，2H)，5.59(s，2H)，7.21(d， J ＝ 10Hz，1H)， 7.32(d，J ＝ 7.5Hz ；1H)，7.71(t，J ＝ 7.8Hz，1H)，7.93(d，J ＝ 7.7Hz，1H)，7.96(t， J ＝ 7.9Hz，1H)，8.14(s，1H)，8.18(s，1H，甲酸盐 -H)，8.24(m，2H)，8.31(d， J ＝ 7.5Hz，1H)，8.38(s，1H)，8.49(s，1H)，9.20(s，2H)。
实施例 3
类似于以下流程，进行 2-(4-{5-[1-(2- 吡咯烷 -1- 基乙基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ]- 嘧 啶 -2- 基 } 噻吩 -2- 基甲基 )-6- 间甲苯基 -2H- 哒嗪 -3- 酮 ( “A3” ) 的制备。
3.1 将 890mg(4.47mmol)(4- 溴 -2- 噻吩基 ) 甲醇、1.80mg(6.71mmol) 三苯基膦 和 1.50mg(8.71mmol) 偶氮二甲酸二叔丁酯连续加至 882mg(4.47mmol)3-(6- 氧代 -1， 6- 二氢哒嗪 -3- 基 ) 苯甲腈在 50ml DMF 中的悬液。 将反应混合物蒸发，在硅胶柱上用 乙酸乙酯 / 环己烷作为洗脱剂对残渣进行色谱分析 ：3-[1-(4- 溴噻吩 -2- 基甲基 )-6- 氧 代 -1，6- 二氢哒嗪 -3- 基 ] 苯甲腈，为米黄色固体 ；ESI 372,374。
3.2 将 791mg(8.06mmol) 醋酸钾加至 1.00g(2.69mmol)3-[1-(4- 溴噻吩 -2- 基甲 基 )-6- 氧代 -1，6- 二氢哒嗪 -3- 基 ] 苯甲腈和 905mg(3.49mmol) 双 -( 频哪醇合 ) 二硼在 10ml DMF 中的溶液，在氩气下将混合物加热至 70℃。 然后加入 94mg(0.13mmol) 二 ( 三 苯基膦 ) 氯化钯 (II)，将混合物在 70℃搅拌 1 小时。 将反应混合物加至水中。 将所形成 的沉淀物抽滤出，用水洗涤，干燥，用叔丁基甲基醚搅拌 ：3-{6- 氧代 -1-[4-(4，4，5， 5- 四甲基 -1，3，2- 二氧硼杂环戊烷 -2- 基 ) 噻吩 -2- 基甲基 ]-1，6- 二氢哒嗪 -3- 基 } 苯甲腈，为褐色固体，其不经进一步纯化用于随后反应。
3.3 将 1.27g(4.94mmol) 三水磷酸钾加至 1.00g( 约 2mmol)3-{6- 氧代 -1-[4-(4， 4，5，5- 四 甲 基 -1，3，2- 氧 硼 杂 环 戊 烷 -2- 基 ) 噻 吩 -2- 基 甲 基 ]-1，6- 二 氢 哒 嗪 -3- 基 }- 苯甲腈和 704mg(2.47mmol)2- 溴 -5- 碘嘧啶在 10ml 乙二醇二甲醚中的溶液， 在氩气下将混合物加热至 80℃。 然后加入 28mg(0.04mmol) 二 ( 三苯基膦 ) 氯化钯 (II)， 在氩气下将反应混合物搅拌 18 小时。 经由硅藻土将反应混合物抽滤出。 将滤液在水与 乙酸乙酯之间分配。 将有机相蒸发，在硅胶柱上用石油醚 / 乙酸乙酯对残渣进行色谱分
析 ：3-{1-[4-(5- 溴嘧啶 -2- 基 )- 噻吩 -2- 基甲基 ]-6- 氧代 -1，6- 二氢哒嗪 -3- 基 } 苯 甲腈，为米黄色晶体 ；ESI450,452 ； 1
H-NMR(d6-DMSO) ：δ[ppm] ＝ 5.56(s，2H)，7.16(d， J ＝ 9.5Hz，1H)， 7.73(t， J ＝ 7.8Hz，1H)，7.83(s，1H)，7.94(d， J ＝ 8Hz，1H)，8.17(d， J ＝ 9.5Hz， 1H)，8.27(d， J ＝ 8Hz，1H)，8.32(d， J ＝ 1.2Hz，1H)，8.38(t， J ＝ 1Hz，1H)， 8.98(s，2H)。
3.4 类似于前述实施例 2 进行最后步骤，得到 2-(4-{5-[1-(2- 吡咯烷 -1- 基乙 基 )-1H- 吡唑 -4- 基 ] 嘧啶 -2- 基 }- 噻吩 -2- 基甲基 )-6- 间甲苯基 -2H- 哒嗪 -3- 酮 ( “A3” ) ； 1
H - NMR ( d 6- DMSO ) ：δ [ppm] ＝ 1 . 85( m ， 2 H ) ， 2 . 03( m ， 2 H ) ， 3 . 05( m ， 2H)，3.55(m，2H)，3.70(t，J ＝ 6.6Hz，2H)，4.55(t，J ＝ 6.6Hz，2H)，5.58(s，2H)， 7.18(d， J ＝ 9.5Hz，1H)，7.74(t， J ＝ 7.8Hz， IH)，7.88(s，1H)，7.96(d， J ＝ 8Hz， 1H)，8.18(d， J ＝ 9.5Hz，1H)，8.23(s，1H)，8.28(m，2H)，8.38(t， J ＝ 1Hz，1H)， 8.47(s，1H)，9.08(s，2H)，9.48(bs，1H)。
实施例 4
类似于以下流程，进行 2-{6-[5-(1- 甲基哌啶 -4- 基甲氧基 ) 嘧啶 -2- 基 ] 吡 啶 -2- 基甲基 }-6- 间甲苯基 -2H- 哒嗪 -3- 酮 ( “A4” ) 的制备。
实施例 5
类似于以下流程，进行 2-{4-[5-(1- 甲基哌啶 -4- 基甲氧基 ) 嘧啶 -2- 基 ] 噻 吩 -2- 基甲基 }-6- 间甲苯基 -2H- 哒嗪 -3- 酮 ( “A5” ) 的制备。
药理学数据 Met 激酶抑制 表1
IC50 ：10nm ～ 1μm ＝ A 1μm ～ 10μm ＝ B ＞ 10μm ＝ C 实施例 A ：注射小瓶 使用 2N 盐酸将 100g 式 I 的活性成分和 5g 磷酸氢二钠在 3 升重蒸馏水中的溶液调节至 pH 6.5，无菌过滤，转入注射小瓶中，在无菌条件下冷冻干燥，并在无菌条件下 密封。
每个注射小瓶含有 5mg 活性成分。
实施例 B ：栓剂
将 20g 式 I 的活性成分与 100g 大豆卵磷脂和 1400g 可可脂的混合物熔化，倒入 模具中，使其冷却。 每枚栓剂含有 20mg 活性成分。
实施例 C ：溶液
由 1g 式 I 的活性成分、9.38g NaH2PO4 ·2H2O、28.48gNa2HPO4 ·12H2O 和 0.1g 苯扎氯按在 940ml 重蒸馏水中制备溶液。 将 pH 调节至 6.8，将溶液补足至 1 升，通过照 射灭菌。 该溶液可以以滴眼剂的形式使用。
实施例 D ：软膏剂
将 500mg 式 I 的活性成分与 99.5g 凡士林在无菌条件下混合。
实施例 E ：片剂
按照常规方式将 1kg 式 I 的活性成分、4kg 乳糖、1.2kg 马铃薯淀粉、0.2kg 滑石 粉和 0.1kg 硬脂酸镁的混合物压制成片剂，使得每片含有 10mg 活性成分。
实施例 F ：糖衣丸 (dragee)
按照与实施例 E 类似的方式压制片剂，随后按照常规方式用蔗糖、马铃薯淀 粉、滑石粉、西黄蓍胶和染料的包衣层包衣。
实施例 G ：胶囊剂
以常规方式将 2kg 式 I 的活性成分装入硬明胶胶囊中，使得每粒胶囊含有 20mg 活性成分。
实施例 H ：安瓿剂
将 1kg 式 I 的活性成分在 60 升重蒸馏水中的溶液无菌过滤，转入安瓿中，在无 菌条件下冷冻干燥，并在无菌条件下密封。 每支安瓿剂含有 10mg 活性成分。52