川芎嗪和丹酚酸B的组合物及其用途.pdf

本发明提供了一种以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的药物组合物，川芎嗪和丹酚酸B的纯度大于或等于80％，该药物组合物可用于治疗冠心病、心绞痛、缺血性脑血栓、动脉粥样硬化、心肌缺血或心肌梗死，慢性乙肝肝纤维化、脂肪肝、老年痴呆症和癌症等。

1、  一种以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的药物组合物，其特征在于，重量比为1∶10～10∶1。

2、  根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，优选重量比为1∶2～2∶1。

3、  根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，优选重量比为1∶1.5～1.5∶1。

4、  根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，优选重量比为1∶1.2～1.2∶1。

5、  根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，优选重量比为1∶1。

6、  根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，川芎嗪可以是盐酸川芎嗪和磷酸川芎嗪，丹酚酸B可以以盐的形式存在。

7、  根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，丹酚酸B盐优选为钠盐和镁盐。

8、  根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，川芎嗪和丹酚酸B的纯度大于或等于80％。

9、  根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，川芎嗪和丹酚酸B的纯度大于或等于90％。

10、  根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，川芎嗪和丹酚酸B的纯度大于或等于98％。

11、  根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，可用于治疗冠心病，心绞痛，缺血性脑血栓，动脉粥样硬化，心肌缺血或心肌梗死，慢性乙肝肝纤维化，脂肪肝、老年痴呆症和癌症。

12、  根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，可制成药剂学上所说的任何一种剂型可制成注射剂、口服制剂和外用制剂；注射剂包括水针剂、粉针剂和输液剂，口服制剂包括片剂、胶囊、软胶囊、滴丸、颗粒剂、口服液、胶丸，水丸。外用制剂包括透皮吸收制剂。也可制成控释制剂和缓释制剂。

川芎嗪和丹酚酸B的组合物及其用途
技术领域
本发明涉及一种以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的药物组合物及其在心脑血管方面的药理活性研究。
背景技术
丹参为常用中药，始载于《神农本草经》，列为上品。中国药典(2005年版)规定丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎。丹参具有祛瘀止痛，活血通经，清心除烦等功能，用于月经不调，经闭痛经，癥瘕积聚，胸腹刺痛，热痹疼痛，疮疡肿痛，心烦不眠，肝脾肿大，心绞痛。
川芎为常用中药，始载于《神农本草经》，列为中品。中国药典(2005年版)规定川芎为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎。川芎具有活血行气，祛风止痛等功能，用于月经不调，经闭痛经，癥瘕腹痛，胸胁刺痛，跌扑肿痛，头痛，风湿痹痛。
冠心宁注射液由丹参和川芎组成，具有活血化瘀、通脉养心等功能，用于冠心病心绞痛[卫生部药品标准，第十七册174页]。
丹酚酸B是丹参中的主要活性成份，川芎嗪是川芎中的主要活性成分，二者具有多方面的药理作用，有相同的药理作用，也有不同的药理作用。由于二者分子结构差异较大，故药理作用的不同是必然的；即使相同的药理作用，其作用机制也可能是不同的。将二者组合在一起，能起到互相弥补，取长补短的作用，使药效更好。

丹酚酸B的化学结构

川芎嗪的化学结构
以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的药物组合物及其药理活性或在治疗疾病方面的应用未见报到。本发明公开了一种以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的药物组合物，并提供药理实验证明了该药物组合物的药理活性；药理实验表明，川芎嗪和丹酚酸B组合物的药理活性好于川芎嗪的药理活性和丹酚酸B的药理活性，有显著性差异。
丹酚酸B的药理作用
银杏叶提取物EGb761已经成为美国市场上最畅销的保健品之一，在欧洲一些国家已经作为处方药来治疗一些与衰老相关的疾病，如AD(早老性痴呆)。中国医学科学院药物研究所张均田教授对丹酚酸B和EGb761的药理作用进行了比较，无论是抗氧化、清除自由基、各种原因致细胞损伤的保护以及抗细胞凋亡等等，丹酚酸B的有效剂量为0.007～0.7ug/ml，而EGb761为50～100ug/ml，相差100～1000倍，在MCAO模型二者均显示抗脑缺血作用，丹酚酸B的有效剂量比EGb761低十几倍之多。丹酚酸B对β-AP神经毒性(AD的主要病因)的抑制作用强于EGb761，也强于褪黑素。丹酚酸B具有如此好的活性可能源于两点：强抗氧化活性和钙拮抗作用。丹酚酸B的抗氧化活性是维生素E、甘露醇和EGb761的100倍。细胞内钙浓度过高和自由基生成过多是神经元损伤、死亡的关键因素；丹酚酸B是一个强抗氧化剂，并且能消除细胞内钙超载，将其开发成治疗老年痴呆药物，无疑具有重要的理论意义和使用价值。可以认为丹酚酸B是继青蒿素、人参之后的又一个有国际影响的中药[中国药理通讯，2006；23(4)：第十二届全国神经精神药理学学术交流会大会报告。药学学报，2006；41(8)：706～711。医药导报，2007；26(2)：107～110]。
一、保护脑血管
(1)铁依赖性脂质过氧化(IDLPO)在脑损伤的发生发展过程中起极其重要的作用。丹酚酸B对大鼠脑匀浆铁依赖性脂质过氧化有影响，能抑制大鼠脑匀浆丙二醛的生成，呈量效关系，提示作用机理与铁鳌合有关(中华老年学杂志，1997年6月第17卷)。(2)谷氨酸(Glu)和β-淀粉样蛋白[A β_1-40]可以引起神经元NO的释放增加，导致神经元的损伤，产生神经毒性，丹酚酸B能显著增加神经细胞损伤时的细胞活力，减少乳酸脱氢酶(LDH)释放率，减少NO的释放，达到保护神经细胞的作用，有望治疗老年痴呆[药学学报，2000，35(12)：881～885]。(3)线粒体是供应生物体内能量的主要来源，脑缺血再灌注所引起的能量障碍主要与线粒体的功能损伤有关。丹酚酸B具有良好的抗氧化作用，可缩小局灶性脑缺血后梗赛面积。丹酚酸B可明显抑制脑缺血再灌注所引起的脑线粒体内SOD活性下降和GSH含量下降，同时降低线粒体损伤，发挥保护脑功能的作用(中国药理通讯，2003年第二十卷第一期)。(4)血管内皮生长因子(VEGF)可引起脑血管通透性升高，丹酚酸B可显著抑制VEGF的血管通透作用，提示其对脑血管有一定的保护作用(解放军药学学报，2002年2月第18卷第1期)。
二、保护肝脏
(1)丹酚酸B可促进肝细胞增殖，抑制细胞的胶原生成，可抑制体外培养HSC(肝星状细胞)的增生，这种抑制作用与抗氧化作用有一定的关系，提示丹酚酸B有一定的抗肝纤维化作用[中华肝脏病杂志，1996年12月第4卷第4期；世界华人消化杂志，2002，10(3)：317～319]。(2)丹酚酸B抗肝纤维化的部分机理在于抑制了活化贮脂细胞增殖，并通过抑制贮脂细胞生成细胞外基质而减少了胶原纤维在肝内的沉积及干扰了狄氏间隙基底膜的形成而减轻了肝窦毛细胞血管化(中华肝脏病杂志，1996年6月第4卷第2期)。(3)丹酚酸B对于肝粘附性细胞，有促进其PGI₂生成的作用，而对于肝粘附性细胞匀浆液中的环加氧酶则呈抑制作用，可能与丹酚酸B作为色氨酸样辅助因子的作用有关。PGI₂对肝血窦的微循环状态有调节作用，而环加氧酶的抑制与抗炎症作用有关，可部分说明丹酚酸B抗肝损伤的机制(中国中药杂志，1994年第19卷第2期)。
(4)四氯化碳体外损伤原代培养大鼠肝细胞的[³H]胸腺嘧啶核苷掺入量显著降低，培养液中ALT活性显著增高，丹酚酸B能有效地阻抑细胞的这种病理变化(中国中药杂志，1997年第22卷第5期)。(5)在人身上试验表明，丹酚酸B可有效逆转慢乙肝肝纤维化(组织学逆转率达36.67％)，对血清HA含量的改善，4项纤维化血清学指标的综合下降及B超积分变化优于IFN-r。丹酚酸B和IFN-r均可改善慢乙肝患者症状体征和肝功能；未发现丹酚酸B的临床不良反应(医学研究通讯，2003年第32卷第2期)。(6)丹酚酸B抗大鼠D-半乳糖胺肝损伤，可显著降低血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性，减轻肝细胞坏死。提高肝非实质细胞花生四烯酸代谢产物6-酮基-前列腺素F₁a(6-keto-PGF₁a)、前列腺素D₂(PGD₂)及前列腺素总的生成量。表明丹酚酸B可能是丹参抗肝损伤的主要成分，其提高肝非实质细胞前列腺素(PGs)总的生成量可能是其抗肝损伤的机制之一(中国中西医结合杂志，1993年第13卷第6期)。
三、保护心血管
1、动脉粥样硬化
(1)VEGF(血管内皮生长因子)可增强血管内皮细胞的通透性，可能在动脉粥样硬化(AS)的形成和发展过程中起一定作用。丹酚酸B对VEGF诱导的血管内皮通透性升高有显著的抑制作用，提示丹酚酸B对AS有治疗作用[中国药理学与毒理学杂志，2003，17(1)：19～23]。(2)泡沫细胞是动脉粥样硬化(AS)斑块内出现的特征性病理细胞，在AS斑块组织中，VEGF的表达明显升高，在体外培养的U937泡沫细胞模型中发现，丹酚酸B可呈剂量依赖性的抑制泡沫细胞VEGF的表达，为丹酚酸B临床应用于AS的预防和治疗提供了进一步依据[药学学报，2002，37(2)：86～89]。(3)丹酚酸B对肿瘤坏死因子a(TNF-a)损伤的大鼠微血管内皮细胞(CMEC)具有直接保护作用，其作用可能与其稳定细胞膜、抗脂质过氧化有关[天津中医，2002；19(6)：38～39]。
2、心肌缺血再灌注
(1)心肌缺血再灌注对心肌细胞可产生严重损伤，诱发心律失常，严重者可导致死亡。心肌缺血再灌注性损伤可以产生大量的氧自由基，进而导致心肌细胞膜的脂质过氧化，而这种过氧化作用是导致心肌细胞再灌注损伤的重要原因之一。丹酚酸B具有很强的抗氧化作用，可以清除氧自由基，故对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用(中国药学杂志，2003年第38卷第8期；辽宁中医学院学报，2004年第6卷第1期)。(2)也有实验表明，心肌细胞钙超载和氧自由基增多是造成心肌缺血再灌注损伤的最主要原因之一，丹酚酸B可以抑制心肌细胞缺氧复氧过程中的Ca²⁺超载，是其发挥心肌缺血再灌注损伤心肌保护作用的机制之一[现代中西医结合杂志，2004；13(1)]。(3)心脏微血管内皮细胞(CMEC)是心脏缺血缺氧时首先和最易损伤的部位，因此，CMEC的保护作用研究在防治心肌缺血性疾病中具有十分重要的意义。丹酚酸B预处理可激活CMEC内源性延迟保护机制，发挥了拮抗心肌缺血缺氧损伤效应[天津中医，2002；19(1)：41～42]。(4)丹酚酸B能改善缺氧复氧引起的内皮细胞损伤，增加内皮细胞一氧化氮的释放。丹酚酸B提高一氧化氮合成的这种机制可能与其改善内皮细胞缺氧复氧损伤有关[Acta Pharmacol Sin 2002；23(10)：930～936]。
3、心肌梗死
(1)丹酚酸B对犬心肌梗死有治疗作用(中成药，2004年第26卷第3期)。
(2)丹酚酸B对大鼠心肌梗死过程中病理形态学有影响，可以减少心肌梗死面积，促进毛细血管的生长，加速梗死灶的修复，其减少心肌梗死灶的可能机制为提高细胞内SOD的含量，减少自由基对心肌细胞的毒害作用，丹酚酸B是一种有效的抗氧化剂(天津中医学院学报，2004年第23卷第1期)。
4、血液流变学
基础及临床研究显示，缺血性心脑血管疾病患者血液粘度升高，降低血液粘度是防治缺血性心脑血管疾病的重要手段之一。丹酚酸B对家兔全血粘度、红细胞压积和聚集指数有明显的降低作用(微循环学杂志，2003年01期)。
川芎嗪的药理作用
川芎嗪注射液在我国应用已有三十多年，主要用于冠心病、心绞痛、心肌梗死等缺血性心脏病，也用于缺血性脑血管疾病，疗效显著，且无明显副作用，深受医患的推崇，成为目前临床最为常用的中药制剂之一。
一、心血管药理作用[中国微循环；2003，7(4)：257～259]
1、药理学研究表明川芎嗪具有确切的抗心肌缺血作用。川芎嗪对家兔注射垂体后叶素引起的心肌缺血缺氧有明显抵抗作用，对结扎冠状动脉造成犬实验性心肌梗死有缩小梗死范围、减轻病变程度、减少心肌坏死量的作用。电镜观察对心肌细胞线粒体有一定的保护作用。随着溶栓疗法、冠脉搭桥术、体外循环下心内直视手术等缺血心肌再灌注医疗技术的应用，挽救了大量心肌缺血患者的生命，但再灌注本身也可引起心肌损伤而影响疗效。大量的药理学实验证明川芎嗪可使缺血心肌免受缺血再灌注损伤。川芎嗪能抑制缺血再灌注损伤所致心律失常、缩短心律失常持续时间、降低室颤和室速的发生率、降低缺血再灌注损伤后ST段的抬高、缩短窦律恢复时间、改善心脏血流动力学异常、增大左心室室内压峰值及其最大正负变化速率、抑制缺氧/复氧损伤的心肌细胞挛缩、提高损伤细胞生存率、抑制心肌细胞内K⁺/Na⁺浓度比的降低、减轻缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡。
2、川芎嗪抗心肌缺血机理有扩张冠脉、保护冠脉内皮、改善微循环、增加心肌营养血流量、抗血小板聚集和血栓形成、降低血液黏滞度、改善血液流变性、降低心肌耗氧、抑制氧自由基、抗脂质过氧化、改善心肌细胞的代谢抑制状态、阻滞心肌细胞钙内流，调节钾外流等方面。(1)扩张冠脉：川芎嗪扩张冠状血管，增加冠脉流量，改善心肌供氧而保护心脏。川芎嗪对内皮素-1所致犬冠脉收缩有明显拮抗作用。(2)保护冠脉内皮：血管内皮细胞损伤不仅是动脉粥样硬化的始动因素，且对冠心病的发展起重要作用，保护血管内皮细胞是防治这类疾病的新途径。川芎嗪通过保护冠脉内皮，提高机体内NO水平和降低机体内ET水平，减轻缺血及再灌注损伤。(3)改善微循环：川芎嗪能使微循环血流速度和微血管开放数目增加。对金黄地鼠去甲肾上腺素造成的微循环障碍不论在口径、流速、流量及毛细血管数等方面均有明显改善，其中对微动脉作用最明显。(4)抗血小板聚集和血栓形成：川芎嗪对冠心病患者已聚集的血小板有解聚作用，并能降低血小板表面活性。其作用机理如下：a：调节TXA₂/PGI₂系统：TXA₂/PGI₂的平衡调节着血小板功能和血栓形成。川芎嗪具有抑制血小板花生四烯酸代谢的作用，可通过抑制血小板TXA₂产生，同时促进血管内皮细胞产生PGI₂，维持TXA₂/PGI₂的平衡。b：“钙拮抗剂”效应：川芎嗪能使血小板cAMP含量升高近一倍，活化细胞膜上的“钙泵”，使血小板内Ca²⁺浓度降低，阻断Ca²⁺对血小板激活和前列腺素代谢。(5)降低血液黏滞度：川芎嗪有提高红细胞和血小板表面电荷、提高红细胞变形能力、促进纤溶活性、降低血液黏度、改善血液流变性作用。(6)降低心肌耗氧：降低心肌耗氧量有利于缺血性冠心病的治疗。川芎嗪有负变频效应，离体窦房结灌流表明，川芎嗪(1～2)×10^-3g/ml浓度能迅速使结周自律纤维的起博频率降低，并呈剂量依赖性负变频效应。川芎嗪通过这种适度的负性变时性，减少了心肌耗氧量。(7)抑制氧自由基作用：川芎嗪通过减少氧自由基的生成、直接清除氧自由基、提高机体清除氧自由基能力、减少脂质过氧化物的形成等机制对缺血心肌有保护作用。在多种动物实验及陈旧性心肌梗死、体外循环心内直视手术的临床研究中均已证实川芎嗪可使缺血心肌组织中MDA明显降低，且伴随超氧化物歧化酶(SOD)活力和谷胱甘肽过氧化物酶/脂质过氧化物(GSH-Px/LPO)明显增高。(8)改善心肌细胞的代谢抑制状态：川芎嗪可提高培养心肌细胞缺氧缺糖时³H-亮氨酸和³H-尿嘧啶核苷的掺入率，促进蛋白质、RNA合成，诱导一氧化氮合酶mRNA在缺氧缺糖心肌细胞的表达，从而改善心肌细胞的代谢抑制状态，增强细胞对缺血缺氧的耐受能力。(9)阻滞钙内流：阻滞钙内流可扩张冠脉、减轻缺血心肌“钙超载”损害。采用全细胞膜片钳技术证实川芎嗪对豚鼠心室肌L-型钙通道电流有浓度依赖性阻滞效应。对成年大鼠心室肌L-型钙通道电流也具有明显的抑制作用，且呈浓度依赖性和电压依赖性，其机理可能为川芎嗪以高亲和力与失活状态的钙通道结合而发挥效应。
二、脑血管药理作用[现代中西医结合杂志；2006，15(10)：1398～1399]
临床上缺血性脑血管病约占全部脑血管病的70％～80％，川芎嗪对脑神经组织的保护作用，除了舒张血管、抑制血栓形成外，还包括：(1)提高红细胞变形能力，降低血液黏度。(2)减少大鼠缺血脑组织中脂质过氧化物(LPO)的生成，增加超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量，从而减轻自由基损伤。(3)抑制c-jun蛋白表达，下调脑缺血-再灌注时c-fos的表达，上调bcl-2的表达，具有神经保护作用。且川芎嗪能与Ca²⁺通道受体可逆地结合，调节Ca²⁺的细胞内流量，保持神经元线粒体的完整性。川芎嗪与bcl-2可能均作用于神经元线粒体上，保护脑组织，减轻脑缺血再灌注时的脑损伤，提高神经元对缺血缺氧的耐受性。(4)能够抑制Ca²⁺超载，川芎嗪阻断细胞Ca²⁺内流，解除血管的痉挛，减少神经元中毒死亡，阻断自由基引起的细胞破坏。川芎嗪还可通过抑制Ca²⁺超载，减少自由基的产生等与bcl-2发生协同作用，也可通过抑制促凋亡基因如c-fos、p53等发挥抗凋亡作用。(5)脑缺血再灌注时白细胞介素-8(IL-8)水平升高，川芎嗪可抑制IL-8的合成和释放，从而阻断IL-8与炎症反应及氧自由基之间的恶性循环及连锁反应。(6)加速缺血神经细胞HSP70基因在转录和翻译水平的表达，进而使HSP70合成增多，使神经细胞对缺血产生耐受，从而起到对神经细胞的保护作用。
发明内容
1、本发明提供了一种以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的药物组合物，其重量比为1∶10～10∶1，优选重量比为1∶2～2∶1，1∶1.5～1.5∶1，1∶1.2～1.2∶1，1∶1。
2、该药物组合物中，川芎嗪可以是盐酸川芎嗪和磷酸川芎嗪，丹酚酸B可以以盐的形式存在，优选为钠盐和镁盐。
3、该药物组合物中，川芎嗪和丹酚酸B的纯度大于或等于80％；优选川芎嗪和丹酚酸B的纯度大于或等于90％；进一步优选川芎嗪和丹酚酸B的纯度大于或等于98％。
4、该药物组合物可用于治疗冠心病、心绞痛、缺血性脑血栓、动脉粥样硬化、心肌缺血或心肌梗死，慢性乙肝肝纤维化、脂肪肝、老年痴呆症、癌症等。
5、该药物组合物可制成注射剂、口服制剂和外用制剂。注射剂包括水针剂、粉针剂和输液剂；口服制剂包括片剂、胶囊、软胶囊、滴丸、颗粒剂、口服液、胶丸、水丸；外用制剂包括透皮吸收制剂；也可制成控释制剂和缓释制剂。
6、本发明所述的川芎嗪和丹酚酸B可以用任何一种方法制备，对制备方法没有任何限制。
7、本发明进行了药理试验，证明了以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的药物组合物在治疗心脑血管疾病方面的医药用途。
具体实施方式
下述各实施例仅用于说明本发明而非对本发明的限制
实施例一
磷酸川芎嗪(合成品)：购于北京市燕京药业有限公司；产品批号：070707；
质量标准：符合《中国药典》2005年版。
实施例二
丹酚酸B的制备：按专利方法制备，丹酚酸B纯度大于或等于98％。
专利申请号：200710166155.2
专利名称：丹酚酸B纯品的制备方法
丹参个子货3kg，加盐酸水溶液(PH值小于1.5)20倍量，浸渍20次，每次10小时，过滤，滤液上聚酰胺(60-100目，1kg)柱，上完各次酸水浸渍液后，用2-3％乙醇水溶液洗聚酰胺柱除杂质，然后用水洗色谱柱，将醇洗净后，用0.03％碳酸氢钠水溶液洗色谱柱，收集洗脱液，用盐酸调洗脱液使PH值小于2，上大孔吸附树脂(AB-8，2kg)柱，上完大孔吸附树脂柱后，用10％乙醇水溶液洗树脂柱除杂质，再用95％乙醇洗树脂柱，收集95％乙醇洗脱液，回收至干，得干粉A。取干粉A，加丙酮15倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉B；取干粉B，加乙酸乙酯15倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉C。取干粉C，加50％甲醇水溶液适量溶解，上Sephadex LH-20柱，用50％甲醇水溶液洗色谱柱，根据TLC合并洗脱液，回收至干，得干粉D(丹酚酸B含量为99.35％)。
实施例三
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的冻干粉针
取川芎嗪40g，丹酚酸B 40g，溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，搅拌溶解，加入氢氧化钠调PH值至4～7之间，超滤，得到无热源的澄清液，冻干，制成每支含川芎嗪40mg，丹酚酸B 40mg的冻干粉针。
实施例四
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪80g，丹酚酸B 80g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例五
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的冻干粉针
取川芎嗪13g，丹酚酸B 65g，溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，搅拌溶解，加入氢氧化钠调PH值至4～7之间，超滤，得到无热源的澄清液，冻干，制成每支含川芎嗪13mg，丹酚酸B 65mg的冻干粉针。
实施例六
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的冻干粉针
取川芎嗪65g，丹酚酸B 13g，溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，搅拌溶解，加入氢氧化钠调PH值至4～7之间，超滤，得到无热源的澄清液，冻干，制成每支含川芎嗪65mg，丹酚酸B 13mg的冻干粉针。
实施例七
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的冻干粉针
取川芎嗪17g，丹酚酸B 68g，溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，搅拌溶解，加入氢氧化钠调PH值至4～7之间，超滤，得到无热源的澄清液，冻干，制成每支含川芎嗪17mg，丹酚酸B 68mg的冻干粉针。
实施例八
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的冻干粉针
取川芎嗪68g，丹酚酸B 17g，溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，搅拌溶解，加入氢氧化钠调PH值至4～7之间，超滤，得到无热源的澄清液，冻干，制成每支含川芎嗪68mg，丹酚酸B 17mg的冻干粉针。
实施例九
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪40g，丹酚酸B 120g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例十
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪120g，丹酚酸B 40g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例十一
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪46g，丹酚酸B 115g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例十二
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪115g，丹酚酸B 46g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例十三
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪80g，丹酚酸B 88g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例十四
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪88g，丹酚酸B 80g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例十五
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪70g，丹酚酸B 91g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例十六
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪91g，丹酚酸B 70g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例十七
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪65g，丹酚酸B 91g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例十八
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪91g，丹酚酸B 65g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例十九
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪60g，丹酚酸B 96g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例二十
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪96g，丹酚酸B 60g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例二十一
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪60g，丹酚酸B 102g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例二十二
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪102g，丹酚酸B 60g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例二十三
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪55g，丹酚酸B 99g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例二十四
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪99g，丹酚酸B 55g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例二十五
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪60g，丹酚酸B 114g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例二十六
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪114g，丹酚酸B 60g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例二十七
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪50g，丹酚酸B 105g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例二十八
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪105g，丹酚酸B 50g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例二十九
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪50g，丹酚酸B 110g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例三十
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪110g，丹酚酸B 50g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例三十一
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪50g，丹酚酸B 115g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例三十二
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪115g，丹酚酸B 50g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例三十三
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪45g，丹酚酸B 108g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例三十四
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪108g，丹酚酸B 45g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例三十五
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪45g，丹酚酸B 117g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例三十六
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪117g，丹酚酸B 45g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例三十七
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪40g，丹酚酸B 108g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例三十八
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪108g，丹酚酸B 40g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例三十九
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪40g，丹酚酸B 112g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例四十
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪112g，丹酚酸B 40g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例四十一
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪40g，丹酚酸B 116g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例四十二
制备以川芎嗪和丹酚酸B为活性成分的片剂
取川芎嗪116g，丹酚酸B 40g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例四十三
丹酚酸B的制备：
丹参3kg，加盐酸水溶液(PH值小于1.5)20倍量，浸渍20次，每次10小时，过滤，滤液上聚酰胺(60-100目，1kg)柱，上完各次酸水浸渍液后，用2-3％乙醇水溶液洗聚酰胺柱除杂质，然后用水洗色谱柱，将醇洗净后，用0.03％碳酸氢钠水溶液洗色谱柱，收集洗脱液，用盐酸调洗脱液使PH值小于2，上大孔吸附树脂(AB-8，2kg)柱，上完大孔吸附树脂柱后，用10％乙醇水溶液洗树脂柱除杂质，再用50％乙醇洗树脂柱，收集50％乙醇洗脱液，回收至干，得干粉A。取干粉A，加丙酮15倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉B；取干粉B，加乙酸乙酯15倍量溶解，过滤，回收滤液至干，得干粉C，丹酚酸B含量为91.16％。
实施例四十四
丹酚酸B的制备：
丹参3kg，加盐酸水溶液(PH值小于1.5)20倍量，浸渍20次，每次10小时，过滤，滤液上聚酰胺(60-100目，1kg)柱，上完各次酸水浸渍液后，用2-3％乙醇水溶液洗聚酰胺柱除杂质，然后用水洗色谱柱，将醇洗净后，用0.03％碳酸氢钠水溶液洗色谱柱，收集洗脱液，用盐酸调洗脱液使PH值小于2，上大孔吸附树脂(AB-8，2kg)柱，上完大孔吸附树脂柱后，用10％乙醇水溶液洗树脂柱除杂质，再用70％乙醇洗树脂柱，收集70％乙醇洗脱液，回收至干，得干粉A，丹酚酸B含量为82.95％。
实施例四十五
制备以川芎嗪和丹酚酸B(丹酚酸B含量为82.95％)为活性成分的片剂
取川芎嗪80g，丹酚酸B 80g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例四十六
制备以川芎嗪和丹酚酸B(丹酚酸B含量为91.16％)为活性成分的冻干粉针
取川芎嗪13g，丹酚酸B 65g，溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，搅拌溶解，加入氢氧化钠调PH值至4～7之间，超滤，得到无热源的澄清液，冻干，制成冻干粉针。
实施例四十七
制备以川芎嗪和丹酚酸B(丹酚酸B含量为82.95％)为活性成分的片剂
取川芎嗪80g，丹酚酸B 100g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例四十八
制备以川芎嗪和丹酚酸B(丹酚酸B含量为91.16％)为活性成分的冻干粉针
取川芎嗪17g，丹酚酸B 68g，溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，搅拌溶解，加入氢氧化钠调PH值至4～7之间，超滤，得到无热源的澄清液，冻干，制成冻干粉针。
实施例四十九
制备以川芎嗪和丹酚酸B(丹酚酸B含量为91.16％)为活性成分的片剂
取川芎嗪40g，丹酚酸B 108g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁6g，压制成1000片，包糖衣，即得。
实施例五十
制备以川芎嗪和丹酚酸B(丹酚酸B含量为82.95％)为活性成分的冻干粉针
取川芎嗪17g，丹酚酸B 68g，溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，搅拌溶解，加入氢氧化钠调PH值至4～7之间，超滤，得到无热源的澄清液，冻干，制成冻干粉针。
药理试验：药物B是丹酚酸B，纯度是99.35％，由北京科士蓝医药技术有限公司提供；药物C是磷酸川芎嗪，纯度是100.0％，购于北京市燕京药业有限公司。
试验例一
药物C与B不同配比对大鼠离体心脏冠脉流量的影响
1.实验材料
1.1实验仪器及试剂
Powerlab/8sp Langendorff离体心脏灌流系统，ADInstrument Pty Ltd(澳大利亚)。Krebs-Henseleit液，其组成为(mmol/L)：NaCl 118，KCl 4.7，MgSO₄·7H₂O1.2，CaCl₂ 2.0，NaHCO₃ 20，KH₂PO₄ 1.2，Glucose 11.1，PH值7.2-7.4。
1.2 受试药物及配制
药物川芎嗪(以C表示)、丹酚酸B(以B表示)，由北京科士蓝医药技术有限公司提供。
实验前药物C、B用Krebs-Henseleit液配成C∶B分别为10mg∶10mg/ml、6.66mg∶13.33mg/ml、5mg∶15mg/ml、13.33mg∶6.66mg/ml、15mg∶5mg/ml、20mg∶0mg/ml、0mg∶20mg/ml的药液，按C∶B分别为2mg∶2mg、1.33mg∶2.66mg、1mg∶3mg、2.66mg∶1.33mg、3mg∶1mg、4mg∶0mg、0mg∶4mg/心脏给药，给药体积为0.2ml。
1.3 实验动物
健康Wistar大鼠，雄性，体重350g±30g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
2.实验方法
2.1分组方法
实验分为药物C组、药物B组和C+B药物组，C+B药物组包括1∶1配比组、1∶2配比组、1∶3配比组、2∶1配比组、3∶1配比组。共设7组，每组14只大鼠。分组方法、药物剂量及给药浓度见表1。
表1 实验分组方法

2.2 实验操作方法
大鼠断头处死，迅速取出心脏，置于4℃K-H液中，轻轻排出残留血液，将心脏连接到灌流装置并固定，开始灌流，灌流液维持37℃，并通入95％的氧气。待心电平稳后，将灌注压调节在60-70mmHg进行稳压灌流，稳定后记录给药前冠脉流量，经给药孔缓慢注入0.2ml/心脏配制好的药液，给药完毕后立即记录上述各项指标，持续观察6分钟。
2.3 检测指标
灌注压力(mmHg)；心率(次/分)；给药前及给药后即刻、1、2、3、4、5分钟冠脉流量(ml/min)、冠脉流量变化率(％)。
2.4 统计学处理
数据用均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS10.0统计软件，组间变化率比较采用one-way ANOVA分析，前后实测值采用配对t检验，P＜0.05为有显著性差异。
3.结果
3.1 各组药物对大鼠离体心脏心率的影响
实验前将灌注压调节在60-70mmHg进行稳压灌流，药物对大鼠离体心脏心率无显著影响，结果见表2。
表2 给药前后各组大鼠离体心脏灌注压力、心率

3.2 各组药物对冠脉流量的影响
给药前各组之间冠脉流量无显著性差异(P＞0.05)；给药后各组大鼠离体心脏冠脉流量均有不同程度的升高，与给药前相比，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)；给药后各配比组与单用药物C、B相比有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)，C+B药1∶1配比组有优于其它组的趋势；结果见表3。
4.结论
在升高大鼠离体心脏冠脉流量方面，由C、B两个药物组成的5个配比(1∶1、1∶2、1∶3、2∶1、3∶1)组中，以1∶1配比组为优。

试验例二
药物C与B不同配比对小鼠常压耐缺氧的影响
摘要：目的：观察川芎嗪、丹酚酸B的常压耐缺氧作用。方法：采用小鼠常压耐缺氧模型。结果：川芎嗪在72mg/kg剂量下，与空白对照组比较，有明显延长小鼠常压耐缺氧时间作用。两药联合用药实验中，与空白对照组比较，在1∶1配比的72mg/kg、36mg/kg剂量组及2∶1配比的72mg/kg剂量组均不同程度延长小鼠常压耐缺氧时间，延长率分别为35.96％、22.0％、19.0％。并且，按1∶1配比的72mg/kg组的效果明显优于单用川芎嗪的72mg/kg剂量组的效果(P＜0.05)。结论：川芎嗪有明显的耐缺氧作用，与丹酚酸B按1∶1比例联合用药时效果更优。
1.实验材料
1.1 动物
KM小鼠，雌雄各半，22-24g。由中国医学科学院实验动物研究所提供，合格证号SCXK(京)2005-0013。
1.2 药品
磷酸川芎嗪(以C表示)、丹酚酸B(以B表示)由北京科士蓝医药技术有限公司提供。
心得安(10mg/片)，天津力生制药股份有限公司生产。
1.3 试剂
凡士林，天津市石油化学实验厂。
钠石灰，上海市纳辉干燥试剂厂。
2.实验方法
2.1 C、B药单味给药对小鼠常压耐缺氧的影响
小鼠120只，雌、雄各半，按体重、性别随机分为10组，每组12只。分别设空白对照组，C、B药单味药给药组，剂量分为72mg/kg、36mg/kg、18mg/kg、9mg/kg组，阳性对照药心得安50mg/kg组。C、B药组在实验前用0.9％的氯化钠配制成相应浓度的溶液，浓度分别为3.6mg/ml、1.8mg/ml、0.9mg/ml、0.45mg/ml，心得安浓度为2.5mg/ml。按体重0.2ml/10g腹腔给药，每日一次，连续给药7天，空白对照组给予等体积的0.9％氯化钠。于末次给药后0.5h，取各组体重相近小鼠各一只，作为同批检测动物。将小鼠迅速放入盛有15g钠石灰的250ml广口磨口瓶内，每瓶一只(密封)，立即秒表计时，记录小鼠因缺氧而死亡时间。以最后一次张口喘气为死亡时间，观察小鼠的存活时间，计算存活时间延长百分率^[1]：

2.2 C、B药不同配比对小鼠常压耐缺氧的影响以及与单用C药的比较
小鼠180只，雌、雄各半，按体重、性别随机分为15组，每组12只。分别设空白对照组、C+B给药组、阳性对照药心得安50mg/kg组及单用C药72mg/kg组。给药组剂量设置：C+B药按3个配比给药，每个配比各设四个剂量组，1∶1配比，给药剂量为72(36+36)mg/kg、36(18+18)mg/kg、18(9+9)mg/kg、9(4.5+4.5)mg/kg。1∶2配比，给药剂量为72(24+48)mg/kg、36(12+24)mg/kg、18(6+12)mg/kg、9(3+6)mg/kg。2∶1配比，给药剂量为72(48+24)mg/kg、36(24+12)mg/kg、18(12+6)mg/kg、9(6+3)mg/kg组。C药组在实验前用0.9％的氯化钠配制成溶液，浓度为3.6mg/ml。C+B药在实验前用0.9％的氯化钠配制成相应浓度的溶液，四个剂量组给药浓度分别为3.6mg/ml、1.8mg/ml、0.9mg/ml、0.45mg/ml，心得安浓度为2.5mg/ml。按体重0.2ml/10g腹腔给药，每日一次，连续给药7天，空白对照组给予等体积的0.9％氯化钠(检测方法同上)。
2.3 统计方法
实验数据以均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用t检验，显著水平以0.05和0.01为标准。
3.实验结果
3.1 C、B药单味给药对小鼠常压耐缺氧的影响
C药高剂量组，单味腹腔给药7天，与空白对照组比较，能明显延长小鼠常压耐缺氧时间，延长率为21.35％(P＜0.05)。结果见表1。
3.2C、B药不同配比对小鼠常压耐缺氧的影响以及与单用C药的比较
与空白对照组比较，在1∶1配比的72mg/kg、36mg/kg剂量组及2∶1配比的72mg/kg剂量组均不同程度延长小鼠常压耐缺氧时间，延长率分别为35.96％、22.0％、19.0％。并且，按1∶1配比的72mg/kg组的效果明显优于单用川芎嗪的72mg/kg剂量组的效果(▲P＜0.05)。心得安能够明显延长小鼠常压耐缺氧时间，延长率为65.5％。结果见表2。
表1C、B药单味给药对小鼠常压耐缺氧的影响(x±s)(n＝12)

注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表2C、B药不同配比对小鼠常压耐缺氧的影响(x±s)(n＝12)

注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与C组比较，▲P＜0.05。
4、结论
川芎嗪单味给药时，高剂量下对小鼠常压耐缺氧存活时间有一定延长作用；而与丹酚酸B按1∶1比例联合给药后，延长小鼠耐缺氧存活时间的作用能明显增强，提示两药存在协同作用，可能是由于两药作用环节或靶点不同所致。
参考文献
1.陈奇主编：中药药理研究方法学，人民卫生出版社，1996；783-784.
试验例三
C与B药物1∶1配比对大鼠心肌缺血的影响
摘要：目的：观察药物川芎嗪和丹酚酸B在1∶1配比时联合用药对大鼠心肌缺血的影响。方法：采用结扎大鼠冠状动脉前降支造成心肌缺血模型，给药7天。结果：72mg/kg、36mg/kg剂量组能够减轻心肌缺血程度，与模型组比较差异显著(P＜0.01，P＜0.05)。结论：川芎嗪和丹酚酸B联合用药能够降低心肌梗死程度，具有明显的抗心肌缺血作用。
1.目的：观察C与B药物1∶1配比组对大鼠心肌缺血的影响
在离体罐流心脏实验以及对小鼠耐缺氧实验中的结果提示，川芎嗪和丹酚酸B在1∶1比例时效果显著。因此，本实验在上述两个实验基础上，观察了川芎嗪和丹酚酸B两药物在1∶1配比时联合用药对大鼠心肌缺血的保护作用。
2.材料与方法
2.1动物
实验动物：成年健康SD大鼠，雄性，体重(260±20)g。饲养于室内通风柜内，恒温(22±2)℃，自然昼夜，自由食水。动物合格证编号SCXK(京)2004-0001。
2.2分组及给药
药物两种，分别是川芎嗪(以C表示)和丹酚酸B(以B表示)，由北京科士蓝医药技术有限公司提供。
大鼠按体重分组，随机分为6组，每组10只。
1)正常对照组；2)假手术组；3)模型组；
4)受试药高剂量组  C+B＝36mg/kg+36mg/kg
5)受试药中剂量组  C+B＝18mg/kg+18mg/kg
6)受试药低剂量组  C+B＝9mg/kg+9mg/kg
给药方法：术前禁食过夜，自由饮水。术后给药7天，末次给药后1h取材。
2.3动物模型制备
动物以戊巴比妥腹腔注射麻醉(30mg/kg)，仰位固定，以标准II导联监测动物心电图；切开气管，插入气管插管，接动物人工呼吸机行人工呼吸(90次/分，呼吸比值1.5∶1)；左侧第4～5肋间开胸，破开心包膜，暴露心脏，于冠状动脉前降支根部穿线(3/8弧带针缝合线，0/3尼龙线)，备结扎用；穿线后稳定10分钟，结扎(无ST段及T波改变者淘汰)，缝合胸壁，恢复自然呼吸。
2.4主要仪器
16道生理记录仪(MP-150，美国BIOPAC)；AE200型电子分析天平(上海，梅特勒-托利多仪器有限公司)。
2.5统计学处理
用SPSS10.0软件包进行统计学分析，数据用(x±s)表示，组间比较应用t检验，P＜0.05为显著性差异，P＜0.01为非常显著性差异。
2.6指标检测
大鼠心肌梗塞面积的测定：
末次给药后1h取材，摘取心脏，放置-20℃冰箱30min后取出，沿心脏结扎线以下横切6片，置1％红四氮唑(TTC)磷酸缓冲液中染色10-15min(37℃水浴)。肉眼观察，梗死区呈灰白色，未梗死区呈红色。沿坏死组织边缘分离将梗死心肌组织与未梗死心肌组织分别称重，以梗死心肌占整个心脏重量的百分比表示梗死范围。
3.结果
对大鼠心肌梗塞面积的影响：
大鼠结扎冠状动脉前降支后心肌缺血明显，模型组大鼠心肌坏死区重量分别占左心室和全心脏重量的18.82％，14.10％，给予受试药物7天后，与模型组比较，高、中剂量组的心肌缺血情况均有不同程度的改善(P＜0.01；P＜0.05)。见表1，表2。
表1受试药物对大鼠心肌梗塞面积的影响(x±s，N＝10)

表2受试药物对大鼠心肌梗塞面积的影响(x±s，N＝10)

注：与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01。
4.小结
采用结扎大鼠冠状动脉前降支造成心肌缺血模型，灌胃给受试药物(1∶1配比)7天(按着72mg/kg、36mg/kg、18mg/kg剂量)。结果显示：药物在72mg/kg、36mg/kg剂量下都能够减轻心肌缺血程度，与模型组比较差异显著(P＜0.01；P＜0.05)。
5.结论
川芎嗪和丹酚酸B在1∶1配比下联合用药，能够减轻实验鼠心肌梗死面积，具有明显的抗大鼠心肌缺血作用。
试验例四
川芎嗪和丹酚酸B组合物对大鼠局灶性脑缺血影响的实验研究
摘要
采用三氯化铁局部贴敷大鼠大脑中动脉造成局灶性脑缺血损伤模型，通过对模型大鼠神经症状和脑梗塞范围的测定，探讨受试药对模型大鼠的保护作用。结果表明，川芎嗪和丹酚酸B组合物于术后30分钟静脉注射、术后2小时和23小时腹腔注射可以明显改善造模后6小时和24小时的神经症状，明显缩小模型动物脑血栓形成24小时的脑梗塞范围(P＜0.01)。结论：川芎嗪和丹酚酸B组合物可通过抑制脑血栓形成，减轻局灶性脑缺血损伤，其疗效好于川芎嗪组和丹酚酸B组。
实验目的
观察川芎嗪和丹酚酸B组合物对大鼠大脑中动脉阻断造成的大鼠局灶性脑缺血的影响。
实验材料
一、动物
SD大鼠，雄性，体重200-220g，合格证号：SCXK(京)2004-0001，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
二、药品与试剂
受试药：C是川芎嗪，B是丹酚酸B，C+B组中C∶B＝1∶1。受试药由北京科士蓝医药技术有限公司提供。试剂：红四氮唑(TTC)，为淡黄色粉末，北京马氏精细化学品有限公司产品。
三、仪器：XTT实体显微镜，云南光学仪器厂产品；AEG-220型电子分析天平，日本Shimadzu公司产品；307-6台式牙科车，上海齿科医械厂产品；HZQ-C空气浴振荡器，哈尔滨东明医疗仪器厂产品。
实验方法和结果
一、分组及给药
实验动物按体重随机分为4组，即生理盐水组、C组、B组、C+B组。各组动物均于术后30分钟舌下静脉给药，术后2小时和23小时腹腔注射给药二次。注射剂量采用0.4ml/100g体重。
二、大脑中动脉血栓模型制作
大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液(350mg/kg)麻醉，右侧卧位固定，在眼外眦和外耳道连线中点作一弧形切口，长约1.5cm，夹断颞肌并切除，暴露颞骨，于实体显微镜下，用牙科钻在颧骨与颞鳞骨接合处靠近口侧1mm处作一直径2.5mm的骨窗，清理残渣，暴露大脑中动脉(位于嗅束及大脑下静脉之间)，置一小片塑料薄膜保护血管周围组织。将吸有50％氯化铁溶液10μL的小片定量滤纸敷在此段大脑中动脉上，30min后取下滤纸，用生理盐水冲洗局部组织，逐层缝合，回笼饲养。室温控制在24℃。
三、神经症状评分标准
对试验动物在术后24h，进行行为检测。评分标准：①提鼠尾观察前肢屈曲情况，如双前肢对称前伸，记为0分；如手术对侧前肢出现肩屈曲、肘屈曲、肩内旋或兼具，记为1分。②将动物置于平面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力，记为0分；如手术对侧阻力下降，记为1分。③将动物两前肢置一金属网上，观察肌张力。双侧肌张力对等且有力为0分；手术对侧前肢肌张力下降记为1分。④提鼠尾，动物有不停地向手术对侧旋转者，记为1分。根据以上标准评分，满分为4分，分数越高，动物的行为障碍越严重。
四、脑梗塞范围的测定
动物经行为评分后，断头取脑。去掉嗅球、小脑和低位脑干后的剩余部分在4℃以下冠状切成5片，并迅速将脑片置于TTC染液中(每5ml染液中含4％TTC 1.5ml，1M K₂HPO₄ 0.1ml，其余加蒸馏水至刻度)，37℃避光温孵30分钟，取出后置于10％甲醛液中避光保存24h。经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占全脑重量及患侧脑重量的百分比作为脑梗塞范围。
五、结果
上述实验结果用x±s表示，统计学检验采用组间配对比较t检验，结果见表1和表2。
表1受试药对MCAT大鼠神经症状的影响(x±s)

表2受试药对MCAT大鼠脑梗塞范围的影响(x±s)

注：与生理盐水组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01
小结
从上表可以看出，C+B、C、B于术后30分钟静脉注射、术后2小时和23小时腹腔注射均可以明显改善造模后6小时和24小时的神经症状；且C+B、C、B还可以明显缩小模型动物脑血栓形成24小时的脑梗塞范围(P＜0.01，P＜0.05，P＜0.05)。结论：C+B、C、B均可通过抑制脑血栓形成，减轻局灶性脑缺血损伤，而且C+B组的疗效好于C组和B组。