刺五加果提取物在制备治疗高血脂症药物中的应用.pdf

本发明属医药技术领域，具体为刺五加果提取物在制备治疗高血脂症药物中的应用。经实验研究表明，刺五加果提取物具体很好的治疗高血脂症药物中的作用，因此，可以使用该提取物制备调节血脂药物、保健品、食品添加剂或复方制剂等。主要用于制备治疗高血脂症的治疗或改善其症状。其药物或保健品有现有的以下剂型，如片剂、胶囊、滴丸、丸剂、颗粒剂、软胶囊、糖浆、口嚼剂和贴剂等。

1、  刺五加果提取物在制备治疗高血脂症药物中的应用。

2、  根据权利要求1所述的应用，其特征在于刺五加果水提取物、刺五加果总皂苷或刺五加果水提取物和刺五加果总皂苷组合物在制备治疗高血脂症药物、保健品，食品添加剂或复方制剂中的用途。

3、  权利要求1或2所述的应用，刺五加果水提取物是指刺五加果经水提取、过滤、浓缩后得到浸膏。

4、  权利要求2所述的应用，刺五加果总皂苷是指刺五加果经水提取后，提取液过大孔吸附树脂，水洗脱至无色，然后改用10％-95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇得到的部分。

5、  根据权利要求2所述的应用，刺五加果提取物、总皂苷或组合物其应用剂量范围为20～500mg/人/天，应用剂量优选为30～200mg/人/天。

6、  根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述药物或保健品为现有的任何剂型，如片剂、胶囊、粉剂、滴丸、颗粒剂、软胶囊、糖浆、口嚼剂和贴剂。

刺五加果提取物在制备治疗高血脂症药物中的应用
技术领域
本发明涉及刺五加果提取物在制备治疗高血脂症药物中的应用。
背景技术
刺五加果为五加科植物刺五加Acanthopanax senticosus(Rupr.etMaxim)Harms的成熟果实。刺五加的干燥根及根茎，其茎、叶已经入药，但其果实研究较少，没有用做药物的报道。本草纲目称刺五加为“本经上品”，能“补中益气，坚筋骨强意志，久服轻身耐老”。该药性温，味辛，微苦，无毒，入脾肾经。能扶正固本，益智安神。主治脾肾阳虚，腰膝酸软，体恤乏力，失眠，多梦，食欲不振。刺五加具有多种药理活性，这与本植物含有多种有效成分有关。目前，人们对其根茎及茎叶的研究较多，刺五加化学成分主要有苷类成分：实验证明刺五加总苷是其生物活性成分之一。刺五加根和根茎的主要成分为酚苷类和脂苷类化合物。总苷在根和根茎中的含量分别占干药材重量的0.6％～0.9％和0.6％～1.5％(王志睿，林敬明，张忠义.刺五加化学成分与药理研究进展.2003，26(8)：603)已分离出七种刺五加苷(A、B、C、D、E、F、G)，分别为胡萝卜苷(A-ELeutheroside A，C₃₅H₅₇O₆)，紫丁香酚苷(B-C₁₇H₂₄O₉)，7-羟基-6，8-二甲基香豆精葡萄糖苷(B₁-C₁₇H₂₀O₁₀)，乙基半乳糖苷(C-C₈H₁₆O₆)，紫丁香树脂酚二糖苷(D和E)，刺五加苷A，B，C，D，E，F，G的含量比例为8∶30∶10∶12∶4∶2∶1(曹先兰，李珠莲.刺五加国外实验研究(综述)[J].中草药，1980，11(6)：277)，最新研究茎中刺五加苷B苷E的含量高于根部(]Kang JS，etal.Arch Pharm Res.2001，24(5)：407)。20世纪80年代末从叶中分得5种新皂苷，即刺五加苷A₁、A₂、A₃、D₃和A₄后三者的苷元为首次从自然界中分离出来的(Shao CJ，et al.them.pharm Bull.1989，37(1)：42)。吴立军等分得新的化合物刺五加酮和新刺五加酚(necoiwuji-aphenol)，并首次分得阿魏葡萄苷(fereloyl-sucrose)(吴立军，等.刺五加茎叶化学成分.药学学报，1999，34(4)：294)。20世纪90年代初Kujawa，等又从刺五加根的甲醇提取物中分离到两种新皂苷(Kujaws ES et al.J.Natprod.1991，54(4)：1044)。
刺五加含2.0％～6.0％碱性多糖及2.3％～5.7％水溶性多糖(黄泰康.常用中药成分与药理手册.北京：中国医药科技出版社(第一版)，1994年)。我国从刺五加中提取出刺五加多糖PES，其中两种多糖被命名PES-A和PES-B，分子量分别为7000和7600，PES-A的组成比，葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖＝3∶3∶2∶1，主要为1-3a-D-葡萄吡喃糖及一些1-2与1-4连接的比喃型己醛糖。刺五加多糖(ASPS)包括葡萄糖、果糖、阿拉伯糖等，为免疫活性成分之一。刺五加多糖和ASII和ASIII为均一多糖，属碱溶性多糖，平均分子量为150000和30000，ASII是由单一葡萄糖组成的葡聚糖，而ASIII是由阿拉伯糖、木糖、4-甲氧基葡萄醛酸组成，其单糖摩尔比为1∶11∶1的异木聚糖。刺五加果中多糖与根多糖组成极为相似，也含有具有一定保肝作用的水溶性多糖。
另外，刺五加还含有丰富的微量元素，除含有K，Na，Ca，Mg，P，Al，Si等微量元素外，还含有e，B，Sr，Ba，Zn，Mn，Cu，Ni，Mo，V，Cr，Co，Sn，Bi，Ag，Pb，Ti等微量元素(曹先兰.刺五加微量元素的测定[J].黑龙江医药，1980，(3)：20-21)。及氨基酸等营养成分(卫平，等.短柄五加茎中氨基酸和金属元素分析，中药材，1998，11(6)：37)。
高脂血症是现代医学的病名，是冠心病发病的重要因素。祖国医学无此病名，也无类似记载。但从多年的临床实践观察，与脏腑气血功能失调和人体阴阳消长失衡而产生湿浊、瘀浊有关。据临床所见，以高脂血症而引发冠心病者比率有逐年上升趋势，所以治疗高脂血症对冠心病而言有举足轻重的作用。
目前有关刺五加果的研究及应用较少，仅见刺五加果中含有Fe、Se、Cu、Mn等多种必需微量元素和人体全部必需氨墓酸。果中总皂苷含量为0.29％。急性毒性试验。LD₅₀＞g/kg体重，表明刺五加果浸出物基本无毒(张丽萍，陈丽颖，等。刺五加果化学成分的分析，东北师大学报自然科学版，1992，(1)：123-127)以及水溶性粗多糖(张丽萍，陈丽颖，张翼伸。刺五加果水溶性多糖的研究AS-2的分离纯化与结构探讨，生物化学杂志，1993，9(1)：1-5)以及挥发性成分(薛兴亚，于万滢，陈吉平，黄威东，等.气相色谱保留参数用于刺五加果挥发油中萜烯及萜烯氧化物的分类，色谱，2005，23(4)：422-425)等少数报道。有关刺五加果方面的专利有黑红双刺干果茶及其制备方法黑红双刺干果茶及其制备方法涉及一种新型饮品及其制作工艺技术；该茶的原料由占总配伍重量30％～70％的野生刺五加干果和70％～30％的天然野刺玫干果构成(王玮，申请号：200610010512.1)。
未见到有关利用刺五加果提取物治疗高血脂症的报道。刺五加果提取物可按常规方法获得，经水提取、过滤、浓缩后得到浸膏。
发明内容
本发明提供了刺五加果提取物在制备治疗高血脂症的药物中应用。
刺五加果水提取物、刺五加果总皂苷或刺五加果水提取物和刺五加果总皂苷组合物在制备治疗高血脂症药物、保健品，食品添加剂或复方制剂中的用途。
刺五加果总皂苷是指刺五加果经水提取后，提取液过大孔吸附树脂，水洗脱至无色，然后改用10％-95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇得到的部分。
本发明所述的刺五加果提取物在用于治疗高血脂症的药物用途时，其使用有效剂量为20～500mg/人/天，最佳剂量为30～200mg/人/天。
当本发明用于制备治疗高血脂症的药物时，其口服或胃肠外给药，均是安全的，在口服情况下，其可以任何常规形式给药，如片剂、胶囊、注射剂、冻干粉针、注射用乳剂、粉剂、滴丸、颗粒剂、软胶囊、糖浆、口嚼剂和贴剂。
本发明制备治疗高血脂症的药物是由刺五加果提取物或其药物组合物与固体或液体的赋形剂一起构成的，这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域是众所周知的，下面举几个具体例子，散剂是内服的粉末剂，它的赋形剂有乳糖、淀粉、浆糊精、碳酸钙、合成或天然硫酸铝、氧化镁、硬脂酸镁，碳酸氢钠、干燥酵母等；软膏剂的赋形剂可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂腊、木腊、液体石腊、树脂、高级腊等组合成的疏水剂或亲水剂。
本发明的有益效果在于，刺五加果提取物或其药物组合物作为治疗高血脂症的药物，具有疗效显著、成本低廉、毒副作用小的显著优点，将刺五加果提取物用于治疗高血脂症的新的药物用途属首次发现，同时扩大了刺五加新的药源。
附图说明
图1是各组动物TC、TG、LDL-cho、HDL-cho含量及TC/HDL-cho比值。
具体实施方式
本发明可通过下面的实验例进一步说明。
实验例1、刺五加果水提物对高脂血症小鼠的影响试验
一、材料与方法
1.1动物
ICR小鼠，70只，雄性50只，雌性20只，体重18-20g。购自吉林大学基础医学院动物实验中心，动物合格证号：SCXK-(吉)-2003-0001。
1.2药品及试剂
血脂康胶囊，规格：300mg/粒，批号20060305，北京北大维信生物科技有限公司生产；
非诺贝特组，规格：200mg/粒，批号89396，法国利博福尼制药公司生产；
胆固醇，规格：生化试剂，25g/瓶，批号：070516，天津市光复精细化工研究所；
胆酸钠，规格：生化试剂，批号：20070525，北京化学试剂公司；
猪油，由本研究室提供；
血清总胆固醇(TC)含量测定试剂盒，批号：070501，中生北控生物科技股份有限公司；
甘油三酯(TG)含量测定试剂盒，批号：071831，中生北控生物科技股份有限公司；
高密度脂蛋白胆固醇(HDL-cho)含量测定试剂盒，批号：070171，中生北控生物科技股份有限公司；
低密度脂蛋白胆固醇(LDL-cho)含量测定试剂盒，批号：070171，中生北控生物科技股份有限公司产品。
刺五加果水提物，性状：棕色粉末，味辛、微苦，批号：071015，吉林大学再生医学科学研究所提供。
1.3仪器
酶标仪，型号：PECAN A-5082，Austria SUNRISE公司产品。
1.4方法
刺五加果水提物制备方法：取刺五加果肉水浸物，用纱布过滤，祛除果肉残渣，留取滤液，加热浓缩滤液，得刺五加果水提物浸膏，真空干燥，粉碎成干膏粉即得。
高脂饲料配制方法：参照文献(李仪奎，王钦茂，周金黄.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社.1991，第1版：398)，在88.7％的基础饲料中加10％猪油、1％胆固醇和0.3％胆酸钠。将猪油加温溶化，加入胆固醇和胆酸钠，搅拌均匀后倒入饲料中，拌匀，加适量温水拌匀，平铺在方盘中，厚度约1.5cm，用壁纸刀划成2cm×3cm大小的小块，放置80℃恒温干燥箱中烘干。
配药方法：分别根据各组给药剂量、动物体重、给药天数计算出所需要量，精密称定，先加少量蒸馏水，研磨均匀，再加蒸馏水至所需浓度即可，其中，血脂康胶囊组：12mg/ml，非诺贝特组：2mg/ml，刺五加果水提物高剂量组：20mg/ml，中剂量组：10mg/ml，低剂量组：5mg/ml。
动物购入后适应环境3天，按体重随机分为：正常对照组；高脂模型组；阳性对照药血脂康胶囊组(240mg/kg)；阳性对照药非诺贝特组(40mg/kg)；刺五加果水提物高剂量组(400mg/kg)、中剂量组(200mg/kg)和低剂量组(100mg/kg)。雌性每组2只，雄性每组8只。
实验过程中，正常对照组动物饲以常规饲料，其他各组动物均饲以高脂饲料。实验动物每天上午灌胃给药1次。灌胃体积均为20ml/kg。正常对照组及高脂模型组动物灌胃蒸馏水，给药组分别给予相应的药物溶液。连续给药2周，最后1次给药当晚，动物禁食不禁水16小时，次日眼球取血0.5ml，离心(3000r/min)分离血清；采用酶比色法测定血清总胆固醇(TC)含量、采用酶比色法测定血清甘油三酯(TG)含量、采用磷钨酸-镁沉淀法测定血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-cho)含量、采用聚乙烯硫酸沉淀法测定血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-cho)含量。
指标数据以均数加减标准差(x±s)表示，统计学处理方法采用组间t-检验。
二、结果与讨论
实验结果表明，小鼠在连续饲以高脂饲料造模2周后，模型组动物的血清TC、TG、LDL-cho含量均较正常对照组明显升高，TC含量正常对照组为3.16±0.48mmol/L，模型组为6.54±0.84mmol/L(与正常组比较，p＜0.001)；TG含量正常对照组为0.69±0.20mmol/L，模型组为0.85±0.21mmol/L(与正常组比较，p＜0.05)；LDL-cho含量正常对照组为0.30±0.28mmol/L，模型组为1.92±1.09mmol/L(与正常组比较，p＜0.01)；模型组动物的血清HDL-cho含量明显降低，正常对照组为3.90±1.63mmol/L，模型组为2.40±0.79mmol/L(与正常组比较，p＜0.05)；模型组动物的血清TC与HDL-cho含量的比值(TC/HDL-cho)明显升高，正常对照组为0.90±0.24，模型组为2.89±1.53(与正常组比较，p＜0.01)；结果表明高血脂症动物模型成立。
给药两周后，刺五加果水提物400mg/kg给药剂量(CWJS-H)组，动物血清TC含量(5.47±1.16mmol/L)明显低于高脂模型组(6.54±0.84mmol/L)(与模型组比较，p＜0.05)；血清TG含量(0.58±0.14mmol/L)也较高脂模型组(0.85±0.21mmol/L)明显降低(p＜0.01)。
刺五加果水提物200mg/kg给药剂量(CWJS-M)组，动物血清TC含量(5.20±1.61mmol/L)与高脂模型组(6.54±0.84mmol/L)明显降低，差别显著(p＜0.05)；血清TG含量(0.63±0.17mmol/L)也较高脂模型组(0.85±0.21mmol/L)明显降低(p＜0.05)。
刺五加果水提物100mg/kg给药剂量(CWJS-L)组，血清TG含量(0.64±0.25mmol/L)也较高脂模型组(0.85±0.21mmol/L)明显降低(p＜0.05)。
各组动物TC、TG、LDL-cho、HDL-cho含量及TC/HDL-cho比值见表1，图1。
表1刺五加果水提物对实验性高脂血症小鼠血脂含量的影响(x±s，n＝10)

与正常组比较，^#p＜0.05；^##p＜0.01；^###p＜0.001。与模型组比较，^*p＜0.05；^**p＜0.01。
试验结果表明，刺五加果水提物可明显降低高脂模型小鼠血清TC、TG含量。但对高脂模型小鼠血清HDL-cho、LDL-cho含量无明显影响。
实验例2、刺五加果总皂苷对高脂血症小鼠的影响试验
一、材料与方法
1.1动物
ICR小鼠，80只，雄性60只，雌性20只，体重18-20g。购自吉林大学基础医学院动物实验中心，动物合格证号：SCXK-(吉)-2003-0001。
1.2药品及试剂
血脂康胶囊，规格：300mg/粒，批号20060305，北京北大维信生物科技有限公司生产；
非诺贝特组，规格：200mg/粒，批号89396，法国利博福尼制药公司生产；
胆固醇，规格：生化试剂，25g/瓶，批号：070516，天津市光复精细化工研究所；
胆酸钠，规格：生化试剂，批号：20070525，北京化学试剂公司；
猪油，由本研究室提供；
血清总胆固醇(TC)含量测定试剂盒，批号：070501，中生北控生物科技股份有限公司；
甘油三酯(TG)含量测定试剂盒，批号：071831，中生北控生物科技股份有限公司；
高密度脂蛋白胆固醇(HDL-cho)含量测定试剂盒，批号：070171，中生北控生物科技股份有限公司；
低密度脂蛋白胆固醇(LDL-cho)含量测定试剂盒，批号：070171，中生北控生物科技股份有限公司产品。
刺五加果总皂苷，性状：棕色粉末，味微，味辛、微苦，批号：071028吉林大学再生医学科学研究所提供。
1.3仪器
酶标仪，型号：PECAN A-5082，Austria SUNRISE公司产品。
1.4方法
刺五加果总皂苷制备方法：将刺五加果肉水浸物，用纱布过滤，祛除果肉残渣，留取滤，合并滤液，滤液大孔吸附树脂柱AB-8，水洗至流出液不显色，改用90％乙醇洗脱至不显皂苷反应，收集90％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至稠膏，真空干燥，粉碎成干膏粉即得。
高脂饲料配制方法：参照文献(李仪奎，王钦茂，周金黄.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社.1991，第1版：398)，在88.7％的基础饲料中加10％猪油、1％胆固醇和0.3％胆酸钠。将猪油加温溶化，加入胆固醇和胆酸钠，搅拌均匀后倒入饲料中，拌匀，加适量温水拌匀，平铺在方盘中，厚度约1.5cm，用壁纸刀划成2cm×3cm大小的小块，放置80℃恒温干燥箱中烘干。
配药方法：分别根据各组给药剂量、动物体重、给药天数计算出所需要量，精密称定，先加少量蒸馏水，研磨均匀，再加蒸馏水至所需浓度即可，其中，血脂康胶囊组：12mg/ml，非诺贝特组：2mg/ml，刺五加果总皂苷高剂量组：20mg/ml，中剂量组：10mg/ml，低剂量组：5mg/ml。
动物购入后适应环境3天，按体重随机分为：正常对照组；高脂模型组；阳性对照药血脂康胶囊组(240mg/kg)；阳性对照药非诺贝特组(40mg/kg)；刺五加果总皂苷高剂量组(400mg/kg)、中剂量组(200mg/kg)和低剂量组(100mg/kg)；共10组，每组10只。雌性每组2只，雄性每组8只。
实验过程中，正常对照组动物饲以常规饲料，其他各组动物均饲以高脂饲料。实验动物每天上午灌胃给药1次。灌胃体积均为20ml/kg。正常对照组及高脂模型组动物灌胃蒸馏水，给药组分别给予相应的药物溶液。连续给药2周，最后1次给药当晚，动物禁食不禁水16小时，次日眼球取血0.5ml，离心(3000r/min)分离血清；采用酶比色法测定血清总胆固醇(TC)含量、采用酶比色法测定血清甘油三酯(TG)含量、采用磷钨酸-镁沉淀法测定血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-cho)含量、采用聚乙烯硫酸沉淀法测定血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-cho)含量。
指标数据以均数加减标准差(x±s)表示，统计学处理方法采用组间t-检验。
二、结果与讨论
实验结果表明，小鼠在连续饲以高脂饲料造模2周后，模型组动物的血清TC、TG、LDL-cho含量均较正常对照组明显升高，TC含量正常对照组为3.16±0.48mmol/L，模型组为6.54±0.84mmol/L(与正常组比较，p＜0.001)；TG含量正常对照组为0.69±0.20mmol/L，模型组为0.85±0.21mmol/L(与正常组比较，p＜0.05)；LDL-cho含量正常对照组为0.30±0.28mmol/L，模型组为1.92±1.09mmol/L(与正常组比较，p＜0.01)；模型组动物的血清HDL-cho含量明显降低，正常对照组为3.90±1.63mmol/L，模型组为2.40±0.79mmol/L(与正常组比较，p＜0.05)；模型组动物的血清TC与HDL-cho含量的比值(TC/HDL-cho)明显升高，正常对照组为0.90±0.24，模型组为2.89±1.53(与正常组比较，p＜0.01)；结果表明高血脂症动物模型成立。
给药两周后，刺五加果总皂苷400mg/kg给药剂量(CWJG-H)组，动物血清TC含量(5.67±0.79mmol/L)明显低于高脂模型组(6.54±0.84mmol/L)(p＜0.05)；血清TG含量(0.56±0.20mmol/L)也较高脂模型组(0.85±0.21mmol/L)明显降低(p＜0.01)。
刺五加果总皂苷200mg/kg给药剂量(CWJG-M)组，动物血清TC含量(5.27±1.11mmol/L)与高脂模型组明显降低，显著差别(p＜0.05)；血清TG含量(0.55±0.20mmol/L)也较高脂模型组(0.85±0.21mmol/L)明显降低(p＜0.01)。
刺五加果总皂苷100mg/kg给药剂量(CWJG-L)组，动物血清血清TG含量(0.54±0.34mmol/L)也较高脂模型组(0.85±0.21mmol/L)明显降低(p＜0.05)。
各组动物TC、TG、LDL-cho、HDL-cho含量及TC/HDL-cho比值见表2，图1。
表2刺五加果总皂苷对实验性高脂血症小鼠血脂含量的影响(x±s，n＝10)

与正常组比较，^#p＜0.05；^##p＜0.01；^###p＜0.001。与模型组比较，^*p＜0.05；^**p＜0.01。
试验结果表明，刺五加果总皂苷可明显降低高脂模型小鼠血清TC、TG含量。其中刺五加果总皂苷的降低TC、TG含量效果优于刺五加果水提物。但对高脂模型小鼠血清HDL-cho、LDL-cho含量无明显影响。
制备药剂的实施例一：
刺五加果水提取物250.0g，加入淀粉50g，混匀后装入硬囊壳，制成1000粒，每粒0.3g。
制备药剂的实施例二：
刺五加果水提取物150.0g，加入淀粉50g，混匀后装入硬囊壳，制成1000粒，每粒0.2g。
制备药剂的实施例三：
刺五加果总皂苷150.0g，加入淀粉150g，混匀后装入硬囊壳，制成1000粒，每粒0.3g。
制备药剂的实施例四：
刺五加果总皂苷200.0g，加入淀粉100g，混匀后装入硬囊壳，制成1000粒，每粒0.3g。
制备药剂的实施例五：
刺五加果水提取物150.0g，刺五加果总皂苷100.0g，加入淀粉50g，混匀后装入硬囊壳，制成1000粒，每粒0.3g。