有关巨噬细胞侵润的疾病治疗方法 本发明涉及一种疾病的治疗方法，这种疾病的特征是，白细胞侵润到由于疾病而受损伤的区域，例如在人体内的氧和/或葡萄糖缺乏的组织中。本发明应用于中风的治疗。本发明还用于梗塞(心肌梗塞)的治疗。本发明也用于以白细胞侵润到机体受损组织区域为特征的任何疾病的治疗中。
当组织(和单个细胞)缺乏氧和/或葡萄糖时，该细胞以及由这些细胞构成的组织即受到损伤。因此，除其它反应外，在受损区域(部位)建立了一种炎症反应。这种炎症反应包括，除其它反应外，炎性细胞(例如巨噬细胞，中性粒细胞及其它白细胞)迁移到受损部位。
例如，当中风或梗塞(例如心肌梗塞，心脏病发作)发作时，不论什么原因，都削弱并减少了血管中的血液供应。结果导致氧和葡萄糖的缺乏，至少对所缺乏区域有损伤。
这种损伤在受损区域(除其它反应外)引起一种炎症反应，结果发生炎性细胞(例如巨噬细胞，中性粒细胞及其它白细胞)的迁移。因为该部位的这种损伤(创伤)，前列腺素的合成也增加了。
早产儿大脑氧和葡萄糖的缺乏进行同样的过程—婴儿大脑缺氧引起一种炎症反应(炎性细胞(例如巨噬细胞，中性粒细胞及其它白细胞)的迁移)。
因此，本发明的一个目的是提供可减轻组织和细胞损伤的药物组合物(例如，注射液(无菌))，治疗方法，以及已知化学药品地新用途(当使用这些组合物时)，例如，由于中风、梗塞(心肌梗塞)和/或以炎症反应为特征的任何疾病，例如通过巨噬细胞，中性粒细胞及其它白细胞侵润或迁移到受损区域而导致的损伤。
本发明的另一目的是提供可减弱细胞(巨噬细胞，中性粒细胞及其它白细胞)活性从而缓和(改变)机体抗炎反应的药物组合物，治疗方法及已知化学药品的新用途。
本领域的专业人员可以从本发明的下述概要和详细描述的实施方案了解本发明的其它目的。
根据本发明的一个方面，当组织和细胞受损时，例如葡萄糖和/或氧的缺乏所产生的损伤，可通过在正在受损伤的区域(例如在中风或梗塞亦或其它以巨噬细胞，中性粒细胞或其它白细胞侵润到因该疾病而受损的组织区域为特征的疾病发作时)或其后的短期给予有效量的透明质酸和/或其盐(例如透明质酸钠)来调节(例如减少炎性细胞迁移到受损的区域(部位))炎性细胞(例如巨噬细胞，中性粒细胞及其它白细胞)的活性。虽然申请人不想局限于本发明的下述反应机制，申请人相信给予透明质酸和/或其盐(例如透明质酸钠)阻断了(例如通过结合)炎性细胞(例如巨噬细胞，中性粒细胞及其它白细胞)的透明质酸(HA)受体，从而阻断了其向受损组织的迁移。
优选的透明质酸形式为分子量小于750,000道尔顿，例如10,000-300,000道尔顿的透明质酸钠。
为加强炎性反应的这种抑制(阻断)，(该炎性反应引起巨噬细胞，中性粒细胞或其它白细胞向受损区域的迁移或侵润)，NSAID可随着阻断(如结合)HA受体的透明质酸形式一同给药。由此可以抑制前列腺素的合成。
可以使用从1-10mg/kg体重至15-20mg/kg体重或以上，例如超过25mg/kg以及甚至超过3000mg/70kg体重的不同剂量(因给药方法而定)的透明质酸和/或其盐(优选分子量小于750,000道尔顿的透明质酸钠)。成人(和成年大鼠)能耐受过量的透明质酸形式，但是在新生大鼠中，过量可以并且确实能引起损伤。
这样，根据本发明的另一方面，当一种NSAID如消炎痛(溶于n-甲基葡糖胺(nmg))或其它NSAID以1-2mg/kg体重的NSAID(例如消炎痛和NMG)与每70kg个人大于200mg的透明质酸一同给药时，没有发生严重的毒副反应，如胃肠不适、神经异常、抑郁等，即使增加消炎痛的量(必要时)也没有。如果减少透明质酸的量而低于前述量，则开始重新出现使用NSAID的常见的副反应。其它治疗药物也是如此，当与大于200mg的透明质酸(例如，每70kg个人的透明质酸钠)一起给药时，没有出现严重的毒副反应。
(基于所进行的试验)透明质酸的优选形式—透明质酸钠的每一优选剂量，应为约10-25mg/kg体重，例如当皮下给药时(如在臀部)，约1800mg/70kg个人。静脉给药可使用较小(较少)剂量的透明质酸形式。优选剂量为10-20mg/kg人体重。
目前，在新生大鼠中的试验表明，适当的给药剂量可在成人体内形成约每ml血液3mg的所选形式的透明质酸(如透明质酸钠)的体积浓度。给药量，例如透明质酸钠，可从约10mg/kg成人体重到约25mg/kg成人体重。最近利用新生大鼠的试验，达到了每kg大鼠血液中含有10mg透明质酸的水平(新生大鼠皮下给药后12小时)。在一定情况下，如果认为更可取，这些剂量可以调高或调低。
给药优选从疾病(例如中风或心肌梗塞)出现时或此后短期内(24小时内)开始，同时一直持续到不需要时为止。优选能在血液中维持所达到的(药量)水平。例如，经初始静脉内给药，在血液中形成15mg/kg体重的水平。然后，这一水平可通过如皮下给药(例如，皮下注射)来维持。
可同时给予有效剂量的NSAID(例如，就消炎痛而言，1-2mg/kg体重)。
也可给予治疗心肌梗塞或中风的药物，例如溶栓药。溶栓药包括TPA，链激酶(蛋白分解产物)，尿激酶等等。其它可用的药物是NSAID乙酰水杨酸(阿司匹林)，β阻滞剂，肝素，血纤维蛋白溶酶原激活剂及其它适当药物。
除了NSAID，其它药物(当出现或已经发生中风时)在有或没有NSAID时，可以与透明质酸形式(例如分子量小于750,000道尔顿如3000,000道尔顿的透明质酸钠)一同给药。这些药物可按它们所期望的剂量给药。这些药物可以为如上所述，也可含有抗血小板药物例如那些能改变血小板功能(抗凝聚)和阻止血栓形成(血块)的药物。
一种形式的透明质酸和/或其盐(例如钠盐)及透明质酸的同系物、类似物、衍生物、络合物、酯、片断及亚单位，优选的适用于本发明的透明质酸及其盐是由Sterivet Laboratories Limited提供。其中一种是含透明质酸钠20mg/ml的15ml小瓶(300mg/小瓶-Lot 2F3)。这种透明质酸钠是一平均分子量约225,000的2％溶液。其同时含有足量的水，且该水是经三次蒸馏而且符合U.S.P.注射用水的无菌要求。透明质酸和/或其盐可装在1型硼硅酸盐玻璃小瓶中，并用一个不与瓶中物反应的丁基橡胶塞封住。
这种透明质酸和/或其盐(例如钠盐)具有以下特点：
从天然源获得的一种纯净、基本无热原的透明质酸，具有至少一种选自含有下列的特征：
(i)分子量在150,000-225,000的范围内；
(ii)少于总重量的约1.25％的硫酸粘多糖；
(iii)少于总重量的约0.6％的蛋白质；
(iv)少于总重量的约150ppm的铁；
(v)少于总重量的约15ppm的铅；
(vi)少于0.0025％的葡糖胺；
(vii)少于0.025％的萄糖醛酸；
(viii)少于0.025％的N-乙酰葡糖胺；
(ix)少于0.0025％的氨基酸；
(x)在257nm的UV消光系数小于约0.275；
(xi)在280nm的UV消光系数小于约0.275；
(xii)pH值在7.3-7.9范围内。
优选将透明质酸与水混合，并且这种透明质酸的平均分子量在150,000-225,000的范围内。更为优选的是，这种透明质酸具有至少一种选自下列特征组的特征：
(i)少于总重量的约1％的硫酸粘多糖；
(ii)少于总重量的约0.4％的蛋白质；
(iii)少于总重量的约100ppm的铁；
(iv)少于总重量的约10ppm的铅；
(v)少于0.00166％的葡糖胺；
(vi)少于0.0166％的萄糖醛酸；
(vii)少于0.0166％的N-乙酰葡糖胺；
(viii)少于0.00166％的氨基酸；
(ix)在257nm的UV消光系数小于约0.23；
(x)在280nm的UV消光系数小于约0.19；
(xi)pH值在7.5-7.7范围内。
透明质酸和/或其盐的其它形式以及透明质酸的同系物、衍生物、络合物、酯、片段及亚单位可以从其它供应者中选择，例如先前提到的现有技术文献中所述。此外，申请人建议由LifeCoreTMBiomedical，Inc.生产并提供的具有下列规格的透明质酸钠：特征 规格外观 白膏到
有色颗粒气味 无明显气味粘均分子量 ＜750,000道尔顿UV/可见光扫描， 与标准扫描相匹配190-820nmOD，260nm ＜0.25OD单位透明质酸酶敏感性 阳性反应IR扫描 与标准扫描相匹配pH，10mg/g溶液 6.2-7.8水 8％最大量蛋白质 ＜0.3mcg/mg NaHy乙酸盐 ＜10.0mcg/mg HaHy重金属，最大ppmAs Cd Cr Co Cu Fe Pb Hg Ni2.0 5.0 5.0 10.0 10.0 25.0 10.0 10.0 5.0
微生物生物含量 未观察到
内毒素 ＜0.07EU/mg NaHy
生物安全试验 通过家兔眼毒性试验
可以经皮下、静脉内注射给药。
本发明将用下述实施例来阐明。实施例1
在手术前1/2小时，以0.6mg透明质酸钠/60μl/只动物的量，在七天大的Fischer新生大鼠背后皮下注射透明质酸钠(MW300，000道尔顿)。手术后一天一次注射给药进行七天，并于手术后14天处死。结扎右颈总动脉1小时(诱发中风)。然后将动物放在含有8％氧气的保温箱内。(左侧未结扎，同时提供了一种适当的对照)。到4和7天时，在对照组动物中很容易地产生了大脑损伤，这是通过尼斯尔染色(对神经)以及神经胶质增生包括对GFAP、结合体43和巨噬细胞(ED-1表位)增加了染色来确定的。当CD44在巨噬细胞和星形细胞中增加同时RHAMM在神经元细胞和巨噬细胞的小集团中增加时，可以观察到透明质酸受体也增加了染色。同样观察到了形态学的损伤，此时神经元的缺失很明显并且大脑右半球已萎陷。用HA处理7天的动物在14天时处死(如这些试验的对照中)上述参数没有一个为阳性。即没有显示出大脑萎陷、神经元缺失、巨噬细胞侵润或gliotic蛋白质或透明质酸受体表达增加的迹象。给予透明质酸的动物的大脑形态学上为正常，尽管尚未对神经元活动进行功能试验。但在没有任何明显形态学改变的情况下，预期不会有大面积的功能损伤。
每只动物的给药剂量为每23g动物经皮下给予0.6mg透明质酸钠(分子量300,000道尔顿)，对70kg的人而言，这意味着每人1.8g的皮下给药剂量。静脉剂量可以少一些。人体内大约有85cc血液/kg。这样，平均每个成人会有6000cc血液(70kg的个人)。因此，所达到的浓度为约0.3mg透明质酸钠/1ml或cc血液。为达到这一浓度，对人的给药剂量是约25mg/kg体重。实施例2
实施例2重复实施例1，只是结扎右颈总动脉3小时(比实施例1中1小时长2小时)以增加更多的大脑坏死。在实施例2中，每只新生大鼠(不考虑大鼠的实际体重)给予相同剂量的透明质酸钠(HA)(0.6mg透明质酸钠)，手术的同时给每只动物皮下注射透明质酸钠。
皮下给药12小时后，即可获得15-20mg/kg的HA血液水平。血液水平的继续分析表明，HA水平可在15mg/kg保持24小时。
手术后，我们继续以相同剂量每24小时注射一次HA计7天。7天中没有一刻HA水平下降至低于15mg/kg。
测试动物(包括对照)的大脑2周。
注射HA的三只动物中，大脑处于与实施例1给予HA的小鼠的大脑相同状态。对照组受到了严重大脑损伤。作为这些试验的一个结果，我们可得出，剂量低至1mg/kg动物体重即有疗效，例如阻断巨噬细胞、中性粒细胞和其它白细胞侵润到中风区域(部位)。优选10mg或更多HA/kg动物(人)的剂量，例如10-20mg/kg体重。实施例3
人和成年大鼠可耐受过量的透明质酸钠(HA)，新生大鼠却不能如此耐受。这样，在实施例3中，其中新生大鼠相对较小，给予25mg/kg剂量的HA导致了大鼠大脑损伤。实施例4
四只大鼠每只给予异丙肾上腺素以诱发心肌梗塞(心脏病发作)。给予异丙肾上腺素以诱发梗塞是一本领域的专业人员可以理解的普通的已知技术，在此不详细说明。两只大鼠在发生了梗塞后，立即注射剂量为15mg/kg的透明质酸钠(分子量300,000道尔顿)(HA)。皮下注射持续7天(每天一次皮下注射)。最初注射12小时后，每只大鼠血液系统中HA的血液水平为10mg/kg体重。
其它两只大鼠在发生了梗塞后，立即皮下注射盐水(作为对照)。皮下注射持续7天，每天注射一次。然后处死大鼠。给予盐水的动物中，心脏组织由于大量累积的白细胞而坏死。给予HA的大鼠中，没有观察到心脏组织的损伤，而且没有明显的白细胞(通过冷冻切片的E0-1染色测定)。
因此，我们可以得出，在人体中给予10-25mg/kg体重的剂量是合适的。尽管稍少的剂量仍然有疗效，但是结果不理想。理想的结果是治疗中风和心肌梗塞的目的。
优选的是，所选择的HA剂量在最初静脉内给药以在血液中建立所需的HA水平。然后，这一水平通过如皮下给药(皮下注射)而维持。优选的血液水平应至少为10mg/kg。
本发明优选的实施方案可以进行许多改变而不超出本发明的范围，这意味着在此包括的所有材料是用于阐明本发明而没有限定的意思。