中药血脂宁丸的鉴别方法 【技术领域】
本发明属于中药领域，尤其是一种中药血脂宁丸的鉴别方法。
背景技术
血脂宁丸是一种用于痰浊阻滞型高脂血症，化浊降脂，润肠通便的中药。该种中药是通过广泛查阅《金匮要略》、《伤寒论》等有关医、药文献资料，探索治疗降低血脂的药物，搜集民间古方、验方，经反复筛选治疗降脂降压药物研制而成，从1990年版一部《中国药典》开始，历版药典均予以收载。由于血脂宁丸成分组成复杂，所以对于质量控制是十分必要的。目前在2005年版的《中国药典》442页中关于血脂宁丸鉴别的叙述如下：“取本品9g，剪碎，加硅藻土4g，研匀，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加0.5％氢氧化钠溶液10ml使溶解，滤过，滤液用盐酸调节至酸性，用乙酸乙酯提取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取何首乌对照药材2g，加三氯甲烷30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；再取熊果酸对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液4μl、对照药材溶液及对照品溶液各1μl，分别点于同一用0.5％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干；置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙色荧光斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟，日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点”。上述方法是鉴别血脂宁丸的现有技术，经过精心研究该鉴别方法，认为存在如下问题：本血脂宁丸处方为决明子、山楂、荷叶、制何首乌，该四味与白糖粉碎成细粉，过筛，混匀，每100g粉末加炼蜜70～90g制成大蜜丸，即得血脂宁丸；该处方中制何首乌与决明子均含有蒽醌类成分，鉴别时出现干扰，不利于血脂宁丸的质量控制，而且现有技术中的鉴别方法步骤繁琐；再有原中药血脂宁丸质量控制方法中含量测定项是以熊果酸为对照品，采用薄层扫描方法测定山楂含量与现有技术中鉴别方法中以何首乌为对照药材、熊果酸为对照品，鉴别处方中制何首乌和山楂步骤重复，造成质量控制方法时间长，工作效率较低。
【发明内容】
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种中药血脂宁丸的鉴别方法，该鉴别方法简单、易操作，消除了制何首乌与决明子因均含有蒽醌类成分而在鉴别时出现干扰的状况，能够快速、准确地鉴别中药血脂宁丸。
本发明是通过以下技术方案来实现的：
一种中药血脂宁丸的鉴别方法，其鉴别血脂宁丸中的蒽醌类活性成分，和/或鉴别血脂宁丸中的荷叶碱均采用薄层色谱法。
而且，所述鉴别血脂宁丸中蒽醌类活性成分包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取中药血脂宁丸5～10g，剪碎，加甲醇20～50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5～30ml使溶解，再加盐酸0.5～5ml，加热回流30分钟，放冷，用乙醚振摇提取2次，每次10～30ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5～5ml使溶解，得到供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取大黄酚、大黄素甲醚对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含0.5～5mg大黄酚与大黄素甲醚的混合溶液，作为对照品溶液；
(3)薄层色谱法显色：依照《中国药典》2005年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液4～6μl、对照品溶液2～4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，加入展开剂展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
而且，所述的展开剂为温度在30～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸溶液(10～20∶2～10∶0.2～2)。
而且，所述鉴别血脂宁丸中的荷叶碱包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取中药血脂宁丸10～30g，剪碎，加甲醇20～50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加氨试液10～30ml使溶解，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣用0.01mol/L盐酸溶液10～25ml使溶解，加三氯甲烷10～30ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，酸水液用浓氨溶液调节pH值至9～10，再用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取荷叶对照药材1～5g，加甲醇5～15ml，制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：取荷叶碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.5～2mg的溶液，作为对照品溶液；
(4)薄层色谱法显色：依照《中国药典》2005年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液6～10μl、对照药材溶液及对照品溶液各4～6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，加入展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
而且，所述的展开剂为环己烷-乙酸乙酯-浓氨溶液(5～10∶5～10∶0.1～1)。
本发明的优点及有益效果是：
1.本鉴别方法的大黄酚、大黄素甲醚用薄层色谱鉴别中采用酸水解方法，大大增加薄层斑点检出效果，便于观察鉴别，提高鉴别效率。
2.本鉴别方法的荷叶用薄层色谱鉴别中采用碱性展开剂环己烷-乙酸乙酯-浓氨溶液，能够有效提高展开速度，加快了整个血脂宁丸的鉴别速度。
3.本鉴别方法中删除了重复操作的山楂薄层鉴别方法，使整个质量控制方法得到了优化，缩短了质量控制的时间，提高了质量控制的效率。
4.本发明鉴别方法简单、易操作，消除了制何首乌与决明子因均含有蒽醌类成分而在鉴别时出现干扰的状况，是一种能够快速、准确的鉴别中药血脂宁丸的鉴别方法。
【附图说明】
图1从左至右：阴性样品，大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品(中检所)，样品(批号200801)、样品(批号200802)、样品(批号200803)，决明子对照药材、制何首乌对照药材(中检所)；(烟台板)，温度16.2℃，湿度47％，展开剂：石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液；
图2从左至右：阴性样品，大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品(中检所)，样品(批号200801)、样品(批号200802)、样品(批号200803)；(merk板)，温度16.2℃，湿度47％，展开剂：石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液；
图3从左至右：阴性样品，大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品(中检所)，样品(批号200801)、样品(批号200802)、样品(批号200803)；(烟台板)，温度8.0℃，湿度25％，展开剂：石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液；
图4从左至右：阴性样品，大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品(中检所)，样品(批号200801)、样品(批号200802)、样品(批号200803)；(烟台板)，温度19.4℃，湿度76％，展开剂：石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液；
图5、图6从左至右均为：大黄酚对照品、大黄素对照品、样品(批号2008001)，决明子对照药材、制何首乌对照药材、熊果酸对照品(中检所)；(烟台板)，温度17.2℃，湿度46％，展开剂：甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)；
图7从左至右：阴性样品，荷叶碱对照品(中检所)，荷叶对照药材(中检所)，样品(批号200801)，样品(批号200802)，样品(批号200803)，(青岛板)，温度16.2℃，湿度47％，展开剂：环己烷-乙酸乙酯-浓氨溶液(7.5∶7.5∶0.2)；
图8从左至右：阴性样品，荷叶碱对照品(中检所)，荷叶对照药材(中检所)，样品(批号200801)，样品(批号200802)，(merck板)，室温16.2℃，湿度47％，展开剂：环己烷-乙酸乙酯-浓氨溶液(7.5∶7.5∶0.2)；
图9从左至右：荷叶碱对照品(中检所)，荷叶对照药材(中检所)，样品(批号200801)，样品(批号200802)，(自制板)，室温17.0℃，湿度47％，展开剂：环己烷-乙酸乙酯-浓氨溶液(7.5∶7.5∶0.2)；
图10从左至右：荷叶碱对照品(中检所)，荷叶对照药材(中检所)，样品(批号200801)，(烟台板)，室温17.0℃，湿度47％，展开剂：环己烷-乙酸乙酯-浓氨溶液(7.5∶7.5∶0.2)；
图11从左至右：荷叶碱对照品(中检所)，阴性样品，荷叶对照药材(中检所)，样品(批号200801)，样品(批号200802)，样品(批号200803)，(青岛板)，温度9.2℃，湿度26％，展开剂：环己烷-乙酸乙酯-浓氨溶液(7.5∶7.5∶0.2)；
图12从左至右：荷叶碱对照品(中检所)，阴性样品，荷叶对照药材(中检所)，样品(批号200801)，样品(批号200802)，样品(批号200803)，(青岛板)，温度20.1℃，湿度72％，展开剂：环己烷-乙酸乙酯-浓氨溶液(7.5∶7.5∶0.2)；
图13从左至右：荷叶碱对照品(中检所)，荷叶对照药材(中检所)，样品(批号2008001)，样品(批号2008002)，(青岛板)，温度18.1℃，湿度45％，展开剂：正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶1)。
【具体实施方式】
本发明通过以下实施例进一步详述。需要说明的是：下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
实施例1
一种中药血脂宁丸的鉴别方法，其鉴别血脂宁丸中的蒽醌类活性成分和血脂宁丸中的荷叶碱均采用薄层色谱法，鉴别血脂宁丸中蒽醌类活性成分包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取中药血脂宁丸5g，剪碎，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5ml使溶解，再加盐酸0.5ml，加热回流30分钟，放冷，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，得到供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取大黄酚、大黄素甲醚对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含0.5mg大黄酚与大黄素甲醚的混合溶液，作为对照品溶液；
(3)薄层色谱法显色：依照《中国药典》2005年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液4μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，加入展开剂展开，该展开剂为温度在30℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸溶液(10∶2∶0.2)，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
鉴别血脂宁丸中的荷叶碱包括如下步骤：
(1)供试品溶液地制备：取中药血脂宁丸10g，剪碎，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加氨试液10ml使溶解，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣用0.01mol/L盐酸溶液10ml使溶解，加三氯甲烷10ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，酸水液用浓氨溶液调节pH值至9，再用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取荷叶对照药材1g，加甲醇5ml，制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：取荷叶碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
(4)薄层色谱法显色：依照《中国药典》2005年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液6μl、对照药材溶液及对照品溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，加入展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，所述的展开剂为环己烷-乙酸乙酯-浓氨溶液(5∶5∶0.1)，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例2
一种中药血脂宁丸的鉴别方法，其鉴别血脂宁丸中的蒽醌类活性成分采用薄层色谱法包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取中药血脂宁丸10g，剪碎，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，再加盐酸5ml，加热回流30分钟，放冷，用乙醚振摇提取2次，每次30ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷5ml使溶解，得到供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取大黄酚、大黄素甲醚对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含5mg大黄酚与大黄素甲醚的混合溶液，作为对照品溶液；
(3)薄层色谱法显色：依照《中国药典》2005年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液6μl、对照品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，加入展开剂展开，该展开剂为温度在60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸溶液(20∶10∶2)，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
实施例3
一种中药血脂宁丸的鉴别方法，其鉴别血脂宁丸中的荷叶碱采用薄层色谱法包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取中药血脂宁丸20g，剪碎，加甲醇35ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加氨试液20ml使溶解，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣用0.0lmol/L盐酸溶液15ml使溶解，加三氯甲烷20ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，酸水液用浓氨溶液调节pH值至9.5，再用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取荷叶对照药材3g，加甲醇10ml，制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：取荷叶碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1.2mg的溶液，作为对照品溶液；
(4)薄层色谱法显色：依照《中国药典》2005年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液8μl、对照药材溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，加入展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，所述的展开剂为环己烷-乙酸乙酯-浓氨溶液(8∶7∶0.6)，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
为了验证本发明中药血脂宁丸的鉴别方法的合理性，进行了以下实验研究：
血脂宁丸中的蒽醌类活性成分用薄层色谱鉴别方法研究：
原标准以何首乌为对照药材鉴别处方中制何首乌，因处方中制何首乌与另味药材“决明子”均含有蒽醌类成分，故删除何首乌对照药材作为对照。
蒽醌类成分是众所周知的降脂通便的活性成分，故考察大黄素、大黄酚、大黄素甲醚作为对照品，鉴别该药物中蒽醌类活性成分的可行性。曾使用甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)为展开剂，但蒽醌类成分的斑点Rf值过高，故采用石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)溶液为展开剂，结果见图5、图6。最终确定采用大黄酚、大黄素甲醚为对照品，鉴别该药物中蒽醌类活性成分。
为增加薄层斑点检出效果，采用酸水解方法，供试品色谱中，在与大黄酚、大黄素甲醚对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的荧光斑点，阴性样品无干扰。结果见图1。
上述使用的阴性样品，按处方配比，取除制何首乌与决明子的其他各味，按工艺制得样品，再按权利要求书中供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
另对本方法进行了耐用性试验，包括不同薄层板，低温及高湿环境对分离情况的影响，考察结果图图2、图3、图4。结果发现高湿条件下，影响分离效果。
血脂宁丸中的荷叶碱采用薄层色谱法鉴别方法研究：
荷叶为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn的干燥叶，具有清热解暑、升发清阳、凉血止血之功效，用于减肥始于明代，李时珍的本草纲目中就有“荷叶服之，令人瘦劣”，现代药理研究证明其具有调节血脂、镇咳祛痰、降低血压、平滑肌解痉等作用，临床用于治疗高脂血症、肥胖、肺炎、小儿夏季热等症。荷叶中的生物碱与黄酮类成分均具有明显的降脂生理活性，文献报道荷叶生物碱降脂作用优于其黄酮成分，且如选用黄酮作为对照，血脂宁丸中山楂成分中黄酮类物质将会对其进行干扰，所以选用荷叶生物碱来进行鉴别。荷叶生物碱中含有众多成分，根据荷叶药典指标(《中国药典》2005年版一部195页)，本发明采用荷叶碱与荷叶药材作为对照，鉴别处方中的药材荷叶。
利用生物碱类成分进行鉴别，曾对酸碱性的展开剂进行了选择、优化。酸性展开剂为正丁醇-冰醋酸-水，结果见图13(青岛板)，碱性展开剂为环己烷-乙酸乙酯-浓氨(7.5∶7.5∶0.2)溶液，结果见图7(青岛板)，上述结果显示，碱性展开剂展开效果较好，另酸性展开剂展开速度慢(展开8cm需要2个小时左右)。因此，选用碱性展开剂。
经检验，供试品色谱中，在与荷叶碱对照品、荷叶对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。
上述使用的阴性样品，按处方配比，取除制荷叶的其他各味，按工艺制得样品，再按权利要求书中供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
另对本方法进行了耐用性试验，包括不同薄层板，低温及高湿环境对分离情况的影响。使用不同薄层板试验时发现，使用碱性展开剂，不同薄层板结果差异较大，结果见图8(Merck板)，图9(自制板)，图10(烟台板)，故在质量标准正文中，在薄层板后，标注青岛板。低温条件见图11(青岛板)，高湿条件见图12(青岛板)，低温与高湿对展开结果无显著性差异。