一种生物农药生产方法 【技术领域】
本发明涉及农药，特别是涉及一种可广泛用于各种农作物、果木、蔬菜的杀虫灭菌除害的生物农药生产方法。
背景技术
当今国际社会主要以化学合成农药杀虫、灭菌、除害来解决农作物、果木、蔬菜等病虫害，化学合成农药虽然解决了一些问题，但此类农药毒性大，残留时间长，对人畜有害，对大自然、空气、陆地、生态环境产生了破坏性的影响，如长期使用将会对人类带来毁灭性的灾难。
【发明内容】
本发明所要解决的技术问题是：提供一种生物农药生产方法，该方法制备的生物农药是以我国传统中草药材为主要原料经科学加工而成，该农药对人畜无毒无害，对环境友好，可替代目前使用的化学、化工合成农药，应用广泛，可满足对农作物、果木、蔬菜、花卉的杀虫、灭菌、除害的需求。
本发明解决其技术问题采用以下的技术方案：
本发明提供的生物农药生产方法，包括选料、浸泡、酶解、沸腾工序，该方法是：将购进的具有杀菌、灭虫和除害功能的中草药药材按好坏等级分出，所得原料通过浸泡、煮沸和/或酶解后取汁，然后经搅拌、低温压榨过滤、高速离心得到溶为一体的混合药液，再经高压过滤和浓缩提取后，制成体积浓度为30～40％的生物农药，其中：浸泡时，将原料用大池浸泡三至五小时；煮沸时，将原料在80～100℃的温度下进行；高压过滤时，将混合药液在≤100公斤压力下进行过滤，得到过滤药液。
按重量计，所述的中草药药材包括苦捻子10份、生半夏5份、马前子20份、野菊花10份、蒲公英20份、生贯中5份、细蕊3份、麻黄份3份和苦参10份。或者，中草药药材为苦捻子10份、生半夏5份、马前子20份、野菊花10份、大青叶10份、蒲公英20份、生贯中5份、花椒叶20份、细蕊3份、麻黄3份和苦参10份。
上述低温压榨过滤，其方法是：是将搅拌后的药汁在零下4～6℃用压榨机下进行压榨提取，以免损坏药汁的作用。
高速离心时，是将低温压榨过滤后的药汁再配以溶解剂、分离剂，经每分钟5000转的离心机离心后得到溶为一体的混合药液；所述溶解剂为PS43；所述分离剂为HS716。
本发明提供的上述生物农药在对农作物中进行杀菌、灭虫和除害的用途。
所述农作物包括棉花、水稻、小麦或果木。
本发明提供的上述生物农药在对蔬菜中进行杀菌、灭虫和除害的用途。
所述蔬菜包括叶菜类、茄科类或藤科类蔬菜。
本发明与现有技术相比具有以下主要的优点：
其一.实用性强：可生产多种不同类别，功能各异，可广泛用于各种农作物、果木、蔬菜和花卉的杀菌、灭虫和除害。经大批量长时间进行物理、田间农作物、果木、蔬菜的试验以及对白鼠的试验，本农药对棉铃虫、茶黄螨、小地老虎、茄黄斑螟、大造桥虫害有立杀死的作用，对立枯病、猝死病、白星病、灰霉病、白粉病、病毒病等有预防杀死作用，对鞭毛菌、红斑琅菌、亚门腐菌、半知亚门菌、孢子囊菌、菟丝子菌等各种寄生菌等有抑制作用。
其二.无污染，无毒无害：该生物农药绝对环保，对空气、陆地、自然环境、水和各生植物无污染，对人畜无毒无害，残留时间在六小时以内。对白鼠无中毒和无害现象。
其三.原材料充足：我国中草药品种之多，产量之大，为世界之最，所用中草药材不受限制，价格非常低廉，并且可大面积种植，完全可以满足生物农药的生产与今后发展的需要。
其四.利于推广：在一定的面积工厂场地内，采用我国的中草药和综合配料，进行制作生产大批量生物农药，可满足市场需求。
其五.生产方便：设备简单，可用国产设备。
其六.可替代国内外目前使用的化学、化工合成农药。
总之，本发明制备的生物农药是以我国传统中草药材为主要原料经科学加工而成，该农药对人畜无毒无害，对大自然不破坏、不污染环境，可广泛用于各种农作物、果木、蔬菜和花卉的杀菌、灭虫和除害。可替代国内外目前使用的化学、化工合成农药。
【具体实施方式】
本发明提供的生物农药生产方法，是以我国传统的中草药为主要原材料配以溶解剂综合剂离心分离剂进行综合生产加工，生产制造的生物农药，具体如下：
原料选购和种植，中药材可在专业中药材市场购买和中草药材基地以及山地野外采摘。
生产制造不同的中药材可采用不同的加工方法进行加工，目的是取其汁，采用高温增压机可将某些药材需要在高压才能出汁的进行加工。采用水池浸泡的则采取室内大池浸泡，然后用搅拌机进行搅拌然后进行加压取汁。并应用生物技术对某些需要酶解(发酵)的中草药材进行酶解，酶解生成后再压榨取汁。然后将上述三种方法取出的汁配以溶解剂综合剂和离心分离剂(市场都可购买)，再利用高速离心机进行一定时间的高速离心运转。让药进行充分的溶合分解，达到设计范围许可质要求，然后进行沉淀过滤，浓缩提取等最后工作。
所述的加工方法如某些中草药材必须酶解(注：多层次的综合发酵是指通过一种不锈钢容器，将需要加工的中药材进行发酵至酶解菌生成才能取出其汁)。而某些中草药必须在适宜的水温下浸泡一定的时间才能取出其汁，然而某些中草药需在高温煮沸一段时间和过程中才能完整取出其汁。
所述的中草药加工生物农药方法是根据各种不同中草药的取汁加工原理，如某种药材需要多次酶解(发酵)，酶解后可用高压过滤法取出其需要的汁作为最后综合加工用。
所述的某些药材需要浸泡一定时间、一定温度以及水容量多少等才能用高压过滤机取其需要的汁，作为最后综合加工使用。
所述的某些药材需要在高温下进行煮沸后才能取汁。在低压下才能过滤取其需要的汁这样主要是为了保证其药汁的药理性不受破坏，最后综合加工使用。
所述最后的综合加工使用，是将不同方法所得到汁混合在一起，然后再配以溶解混合剂，在高速离心机下进行一定时间内的高速离心运转，使其所有的药汁溶为一体，再用离心分离剂进行高压过滤才能形成真正的生物农药。
下面结合白鼠的实验和田间实验来说明本发明制备的生物农药所具有的功效。
一.白鼠的实验：
用中草药生物农药液体对幽门结扎型大鼠胃夜量、胃酸和胃蛋白酶活性影响实验。该农药液体由苦捻子10克、生半夏5克、马前子20克、野菊花10克、大青叶10克、蒲公英20克、生贯中5克、花椒叶20克、细蕊3克、麻黄3克和苦参10克制成。
1材料与方法：
1.1实验材料：
1.1.1实验动物：健康wistar大鼠，体重为200±20g，雌雄各半，购于华中科技大学同济学院动物实验中心。
1.1.2实验药物：
实验药物由中草药生物农药液体和所加原料及雷尼替丁片组成。
所加原料为细芯5克、苦参15克、花椒叶30克、一枝黄花15克、雷公藤50克、巴豆15克、苦参硷10克、白芍药30克和白芨20克等。药物由武汉市武昌区药公司提供。经生物学鉴定，以蒸馏水煎煮30min，提取2次。再合并煎液，并将所得药液用双层纱布过滤，水溶加热蒸发浓缩至100％，1ml药汁中含生药1g，置1000ml，玻璃瓶内密封，贮于冰箱中备用。
雷尼替丁100片，由江西制药有限责任公司生产，批号：05030201，用时加蒸馏水配成0.46％的混悬液。
1.1.3主要仪器与器材
LG10‑DI低温离心机北京医用离心机厂生产
恒温培养箱 国营二六二厂生产
1.2实验方法：
1.2.1动物分组：按完全随机设计法将50只大鼠分成5组，每组10只，分别为：正常对照组，大剂量组，中剂量组，小剂量组和雷尼替丁组。
1.2.2给药方法：用药剂量按人与大鼠体表面积折算(公式：大鼠日服药量＝人日服药量×0.018)，其总加味大、中、小剂量分别为成人用药等效剂量的2倍、1倍、0.5倍。雷尼替丁也按上述方法折算制成等效剂量给药，其余组喂以相同剂量的生理盐水。即正常组每日10ml/kg，上述大鼠每天灌胃2次，连续5天。
1.2.3动物处理及标本采集：
连续喂药5天，从第4天开始禁食不禁水，24小时后，即第5天灌药后1小时，将动物乙醚麻醉，剖腹，结扎幽门。因大鼠结扎幽门后4小时，胃夜分泌增高最明显，并趋于恒定，故在造模后5小时，用过量乙醚麻醉处死动物，剪开腹腔，结扎喷们，切下全胃取出，沿胃弯切一小口，用双层纱布过滤，把胃液收集在刻度离心管内。
1.2.4观察指标：
1.2.4.1胃液量，游离酸和总酸度测定：以3000r/min，吸取上清液进行胃液分析，并记录胃液量。取清晰胃液2ml，置于小烧杯中，加入二甲基黄指标剂和酚酞指标剂各3滴，混匀，呈樱红色，于小烧杯下衬一白纸，用微量滴定管徐徐滴入0.02mol/L氢氧化钠(NaOH)标准溶液，随滴随摇，直至樱红色消失，开始出现橙色，记录NaOH溶液的消耗量，即为游离酸度终点量，继续用0.02mol/LnaOH标准溶液滴定，至出现酚酞的红色(微红色不退)，记录NaOH溶液的消耗量与上所用氢氧化钠之和即为总酸度终点量，按下式计算：
游离酸和总酸度：游离酸(mmol/L)＝游离酸度终点量×10
总酸度(mmol/l)＝总酸度终点量×10
1.2.4.2胃蛋白酶活性的检测：取胃液1mL放入50mL的三角烧杯中，加0.05mol/L盐酸夜15m L，混匀，每只杯中放入蛋白管2根(取内径1mm粗细均匀的毛细管，使其用虹吸作用灌满新鲜鸡蛋清，管内无气泡，然后放在85摄氏度的热水皿中使蛋白凝固，待冷后，取出)，用脱脂棉塞好瓶口，在37摄氏度恒温培养箱中孵育24h，测量蛋白管两端透明部分的长度(mm)，以四端之值求其平均值，按下式计算：
胃蛋白酶活性：胃蛋白酶单位(U)＝平均值2×16
1.2.5统计学处理：
根据以SPSS统计软件进行分析，组间差异比较采用两样本均数比较的检验。
2.结果：
从表1分析可以看出，液体各组对胃液量、游离酸、总酸量及胃蛋白酶活性均有抑制作用。与正常对照组相比具有非常显著差异(p＜0.01)；对胃液量、游离酸、总酸量及胃蛋白酶活性的抑制作用随剂量增大而增强，其中大剂量组与雷尼替丁组相比无明显差异(p＞0.05)。
结果表明实验药物有明显抑制大鼠胃液量、游离酸、总酸量及胃蛋白酶活性的作用。同时对白鼠无害。
二.田间实验
田间实验1：对棉花、小叶木及部分粮食作物，果树及叶芽类的受害叶片进行了综合实验，用3％的中草药生物农药液体97％的水进行混合后对受害叶片进行喷雾投药，10～20分钟后进行显微放大观察结果如表2。
田间实验2：用5％的中草药生物农药液体95％的水进行混合后对立枯病，焠死病、白星病、灰霉病、病毒病受害部位进行喷雾投药一次，其结果见表3。
田间实验3：用10％的中草药生物农药液体加90％的水混合喷洒植物寄生虫对寄生菌刹灭情况见表4。
附表
表1加味中草药液体对大鼠胃夜量、胃酸和胃蛋白活性的影响(n＝10)
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注：与正常对照组相比，△P＜0.05 △△P＜0.01
与雷尼替丁组相比，●P＜0.05 ●●P＜0.01
表2对棉花、小叶木及部分粮食作物，果树及叶芽类的受害叶片的综合实验
害虫名称 害虫比例％ 死亡比例％ 死亡时间 (分钟) 未死的情况 综合结果
红蜘蛛 100％ 70& 30 有中毒现象 加量
茶黄螨 100％ 70％ 10 中枢神经受 限 加量
棉铃虫 100％ 60％ 10 运动迟缓 加量
茄黄斑螟 100％ 90％ 10 运动迟缓 加量
表3 对立枯病、焠死病、白星病、灰霉病、病毒病受害部位进行喷雾投药的试验结果
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表4 喷洒植物寄生虫对寄生菌刹灭情况
寄生菌名称 菌害比例％ 死亡时间 (分钟) 死亡比例％ 未死亡的情况 结果
鞭毛菌 100％ 15 93 有中毒现象 满意
红斑琅菌 100％ 15 91 有中毒现象 满意
亚门腐菌 100％ 35 91 有中毒现象 满意
孢子蘘菌 100％ 60 74 有中毒现象 满意
菟丝子菌 100％ 100 97 有中毒现象 满意