局部颜色调浅组合物及其使用方法 【技术领域】
本发明涉及皮肤、头发、指甲和/或嘴唇的颜色调浅。本发明进一步涉及用于调浅皮肤、头发、指甲和/或嘴唇颜色的组合物和方法。
背景技术
消费者，特别是亚洲的消费者，设法调浅和减少皮肤的不均匀色素沉积。进行治疗的通常的皮肤症状包括雀斑、老年斑、暗斑、色素沉着过度、变色、黑斑病、黄化病和眼睛下部的黑圈。
许多物质已经施用于皮肤以调浅皮肤的颜色。这种物质包括氢醌、曲酸、甘草和/或其衍生物、抗坏血酸/抗坏血酸衍生物、熊果苷、熊果、甘草glabra及其衍生物、绿藻普通菌素提取物、紫苏提取物、和椰子果提取物。在美国专利5,980,904和日本公开07025742、07187989、10265322、2001163759和2001181173中已经公开紫苏提取物可用作增白剂。椰子果提取物作为增白剂公开于日本专利2896815 B2中。在美国专利5,756,099中使用椰子组织的海绵体提取物用于晒黑防晒剂组合物。
皮肤和头发的色素沉积是通过分别存在于表皮和毛发纤维中的黑色素的量确定的。有三种不同的黑色素存在于，例如，表皮中：DHI-黑色素、DHICA-黑色素和pheo-黑色素。不同种类的黑色素在颜色或色调方面各有差异。DHI-黑色素是最深色的，并且其颜色微黑。DRICA-黑色素地颜色呈浅褐色。Pheo黑色素是颜色最浅的，并且其颜色呈微红色。
黑色素是在产生色素细胞(黑素细胞)中特殊的被称为黑素体的细胞器中合成的。黑素细胞对控制黑色素合成的刺激作出反应。
大部分常规的局部颜色调浅剂通过干扰酪氨酸酶(催化氨基酸酪氨酸转化为多巴醌的酶)的作用而起作用。以前，没有人知道在黑色素合成途径中，可以通过抑制酶从酪氨酸酶″向下游″转化而获得浅着色。现在，我们已经发现，通过利用能抑制多巴色素互变异构酶和/或DHICA-聚合酶的黑色素合成调节剂可得到具有优良颜色调浅，特别是皮肤颜色调浅的组合物。
希望具有一种能提供高水平的颜色调浅、漂白、浅着色、变白和/或脱色(在下文中独立地和共同称为″颜色调浅″或″调浅颜色″)功能的局部用组合物。还希望具有一种含有能用于干扰多巴色素向DHJ-黑色素和DHJCA-黑色素转化的颜色调浅剂的局部用组合物。还希望具有一种含有能用于抑制或阻止黑色素从黑素细胞向角质化细胞传输(摄取)的颜色调浅剂的局部用组合物。也还更希望具有使用本发明的组合物来调浅皮肤、头发、指甲和/或嘴唇颜色的方法。
【发明内容】
本发明的一个目的在于提供一种用于调浅皮肤颜色的组合物。
本发明的另一个目的在于提供一种用于改变/改性皮肤中黑色素合成的组合物。
本发明的再一个目的在于提供一种用于抑制或阻止角质化细胞摄取黑色素的组合物。
本发明的再一个目的是提供实现上述目的的方法。
本发明的这些及其他的目的和优点是由一种包含黑色素合成调节剂和载体的局部颜色调浅组合物提供的。还有一种包含紫苏叶提取物和载体的局部颜色调浅组合物。还有一种局部颜色调浅组合物，其包含一种选自椰子汁、棕榈汁、棕榈仁乳、山核桃仁乳、杏仁乳、槚如坚果乳、胡桃仁乳、上述物质的浓缩物和上述物质的任意组合的颜色调浅剂和载体。还有用于调浅皮肤、头发、嘴唇和/或指甲颜色的方法，该方法包括局部施用这些组合物中的任意一种。
附图简述
图1阐明实施例中的黑色素摄取测定结果。
图2表示黑色素合成途径的流程图。
【具体实施方式】
令人惊讶和出乎意外地发现，有一类局部颜色调浅组合物能提供迄今为止还不可能达到的提高的性能。我们发现，通过抑制不同于酪氨酸酶的酶，具体地讲为多巴色素互变异构酶(DCT)和/或5，6-二羟吲哚-2-羧酸聚合酶(DHICA-聚合酶)可以提高颜色调浅效果。我们也发现，通过抑制和/或阻止例如表皮中的角质化细胞摄取黑色素能提高颜色调浅能力。
在最广泛的方面，本发明不受限于局部颜色调浅剂的生理学和或化学效应的任何具体特性。
但是，用于本发明组合物和方法中的局部颜色调浅剂能通过控制黑色素生成和抑制皮肤、头发、嘴唇和/或指甲中的黑色素摄取而调浅皮肤的颜色。
本发明的一个实施方案单独使用了黑色素合成调节剂或其与黑色素摄取抑制剂的组合。当黑色素合成调节剂以抑制DCT和/或DHICA聚合酶的有效量存在时，可以获得优良的颜色调浅组合物。迄今为止，本领域对于干涉这部分黑色素合成途径可以导致皮肤、头发、嘴唇和/或指甲发生颜色调浅还一无所知。黑色素合成途径的流程图见说明书附图2。
此外，使用能抑制黑色素从黑素细胞向角质化细胞传输(摄取)的另外的试剂能进一步提高本发明的颜色调浅效果。
黑色素合成调节剂的例子包括椰子汁，椰子乳，棕榈汁，棕榈仁乳，山核桃仁乳，杏仁乳，槚如坚果乳，胡桃仁乳，上述各物质的浓缩物，或其任意的组合。已经浓缩的，特别是通过冷冻干燥的椰子汁是最优选的。
黑色素摄取抑制剂的例子包括来源于全部或部分紫苏植物，例如叶子，种子，茎，和根的提取物或油。优选的试剂是紫苏叶的提取物。
本发明的另一个实施方案使用紫苏叶提取物作为局部颜色调浅组合物中的颜色调浅剂，其或者独立使用，或者与另一种颜色调浅试剂结合使用。与紫苏植物其它部分，即种子、茎和根的提取物、浓缩物或油相比、紫苏叶提取物能提供出乎意料的改进的局部颜色调浅效果。除了提高的效果外，与紫苏植物其它部分提取物相比，紫苏叶提取物可以在用较低量的情况下提供局部颜色调浅效果。
本发明的另一个实施方案使用了以下任意一种作为组合物中的局部颜色调浅剂：椰子汁，棕榈汁，棕榈仁乳，山核桃仁乳，杏仁乳，槚如坚果乳，胡桃仁乳，上述各物质的浓缩物，或其任意的组合。它们可以用作主要的局部颜色调浅剂或与其它的颜色调浅剂结合使用。优选使用椰子汁。冷冻干燥的椰子汁浓缩物是最优选的。椰子汁或其浓缩物被认为能提供比椰子和/或椰子树的其它部分，即果实、乳、壳、种子、叶子和树皮的提取物、浓缩物或油更优良的颜色调浅效果。
局部颜色调浅剂以足以产生需要的颜色调浅效果的量存在于本发明的组合物中。所述量将根据试剂的类型和需要效果的性质和程度而变化。颜色调浅剂典型的存在量将是组合物总重量的约0.001wt％-约20wt％，更优选约0.01wt％-约5wt％，最优选约0.1wt％-约2.5wt％。
本发明的组合物优选包括至少一种，更优选至少两种，最优选至少三种以下成分：巴巴多斯芦荟或其提取物，水解大豆蛋白质，正葡萄糖胺，γ-氨基丁酸，促黑素细胞激素的竞争性抑制物(MSH)(例如六肽-2)，七筋茹北方贝(蓝须百合)或其提取物，牛乳蛋白质，水解牛乳蛋白质，地榆薄荷(小地榆)，谷胱甘肽还原酶抑制剂(例如小麦胚芽)或其提取物。
本发明的组合物可用于有效调浅局部施用了含有有效量局部颜色调浅剂的组合物的皮肤、头发、嘴唇和指甲的颜色。为了调浅头发的颜色或色调，本发明的组合物应该优选被擦到/揉擦入头皮中以便使组合物能够渗入毛囊或根茎中并在黑色素产生过程中吸收到头发中去。
本发明的局部施用组合物能用于治疗各种各样的皮肤症状，包括雀斑，老年斑，暗斑，色素沉积过度，发炎后色素沉积过度(例如痤疮后色素沉积过度)，变色，黑斑病，黄化病和眼睛下的黑圈。
本发明的组合物可以包括本领域中已知的任意的载体，适合的载体包括，但是不局限于，水；一种或多种植物油；酯，如棕榈酸辛酯，十四烷酸异丙酯和棕榈酸异丙酯；醚，如二辛基醚和二甲基异山梨醇；醇，如乙醇和异丙醇；脂肪族醇，如鲸蜡醇，硬脂醇和山萮醇；异链烷烃，如异辛烷，异十二烷烃和异十六烷烃；硅氧烷油，如二甲基硅氧烷和聚硅氧烷；烃油，如矿物油，矿脂，异二十碳烷和聚异丁烯；多元醇，如丙二醇，甘油，丁二醇，戊二醇和己二醇；或其组合。
另外任选地，本发明的组合物可以包括本领域中已知的另外的皮肤增白剂，有用的试剂的例子包括以下：氢醌、曲酸、甘草和/或其衍生物、抗坏血酸/抗坏血酸衍生物、熊果苷、熊果、甘草glabra及其衍生物和绿藻普通菌素提取物。其它的增白剂公开于美国专利5,980,904中，其在此引入作为参考。
另外任选地，本发明的组合物可以包括一种或多种以下成分：麻醉剂，抗变应原剂，抗真菌剂，抗微生物剂，抗炎症剂，抗菌剂，螯合剂，着色剂，润肤剂，exfollients，成膜剂，香料，湿润剂，驱虫剂，润滑剂，补湿剂，药剂，防腐剂，护肤剂，渗透皮肤改进剂，稳定剂，表面活性剂，增稠剂，粘度调节剂或维生素。
组合物可以被制成任何适合的产品形式。这种产品形式包括，但是不局限于，膏，洗液，软膏，凝胶，泡沫，香脂，气雾剂喷雾剂，泵喷雾剂，棒，湿纸巾或片状。
实施例
使用来自于S91细胞系的小鼠黑瘤细胞(在下文称″细胞″)在各种试验中验证椰子汁(冷冻干燥的浓缩物)在黑色素合成途径中的作用。将细胞培养在1∶1的HamF10+10％马血清和DMEM+10％牛胎血清的混合物中。所有的细胞试验均在湿润的，37℃下，含5％CO2的培育箱中进行。分别用浓度为0.02％和0.05％w/v的椰子汁(冷冻干燥的浓缩物)对细胞进行处理24小时。在24小时时取得细胞提取物，进行以下测定：多巴色素互变异构酶(实施例1)和DEICA聚合酶(实施例2)。
实施例1：多巴色素互变异构酶试验(椰子汁)
根据Chakraborty等人在1998年在Effect of arbutin onmelanogenic proteins in human melanocytes，Pigment Cell Res.11：206-212一文中公开的方法测定多巴色素互变异构酶(DCT)的活性。具体地讲，将冰冻的DOPA(每毫升0.1M磷酸钠缓冲剂0.5毫克，pH为6.8)与Ag2O(30毫克Ag2O∶1毫克DOPA)混合约1分钟，通过0.22μm的微孔过滤器过滤。DCT是通过向0.5毫升新制备的多巴色素(～0.5毫克/毫升)加入总计为0.1毫升细胞提取物来进行分光光度测定而测得的。反应在室温下在塑料比色杯中进行，之后跟踪在475纳米处吸收的消失。向反应混合物中加入苯硫脲(1mM)，因为细胞提取物中存在的酪氨酸酶可能会干扰所述测定。计算每毫克蛋白质提取物的多巴色素转化百分比并相对于对照物归一化。实验表明，与对照物相比，0.02％wt./vol.椰子汁(冷冻干燥的)能使多巴色素转化率平均降低50％(42/58)。
实施例2：DHICA聚合酶测定(椰子汁)
根据Chakraborty等人1996年在Eur.J.Biochem.236：180-188上公开的″Polymerization of 5，6-dihydroxyindole-2-Carboxylicacid to melanin by the pme117/silver locus protein″一文中的方法进行DRICA聚合酶测定。具体而言，将细胞提取物(0.5毫升，150-200μg蛋白质)通过用溶解缓冲剂平衡的小麦胚芽凝集素柱(1毫升床层体积)。用0.5毫升1M的N-乙酰基葡萄糖胺洗脱结合的物质，其含有粗DHICA聚合因子和其他黑素生成蛋白质。在0.5毫升的反应混合物中含有要测定的酶制剂(来自于小麦胚芽凝集素洗脱液的20μg蛋白质)或者适当的缓冲剂空白，DRICA(0.5mM)，和100mM磷酸钠缓冲剂，pH为7.0。其中也包括苯硫脲，它用来抑制制剂中的内源的酪氨酸酶活性。
在T＝0和T＝4小时时间点，取反应混合物在400纳米处的吸收的分光光度读数，发现，DHJCA-黑色素，而不是DRICA本身，能吸收这些波长的光(Orlow等人，1992，Synthesis and characterization ofmelanins from dihydroxyindole-2-carboxylic acid anddihydroxyndole，Pigment Cell Res.5：113-121)。将吸光率的增加与空白管观察到的吸光率的比值定义为DHICA聚合因子比活性。实验表明，与对照物相比，0.02％wt./vol.椰子汁(冷冻干燥的)能使多巴色素转化率平均降低52.5％(55％/50％)。与对照物相比，0.05％wt./vol.椰子汁(冷冻干燥的)能使多巴色素转化率平均降低75％(74/76)。
实施例3：黑素体摄取测定(紫苏叶提取物)
黑素体分离
B16黑素细胞的合生培养可产生中等量的黑素体。但是，为了诱导该细胞系中形成的黑素体增加，用补充有10mM氯化铵(最终浓度)的正常生长介质对半合生(60％)培养的B16细胞处理大约36小时。然后对该介质抽气，用蒸馏水洗涤(2×2ml)黑色素沉着过多的细胞以向细胞提供低渗应力。将等分(2毫升)的低渗溶解溶液(0.02％NP-40的水溶液)加入到各盘中，在室温下将各盘培养大约5分钟。使用光学显微镜跟踪检测细胞溶解作用，将来自于三(3)个培养皿中的细胞质浸在15毫升的锥形管中，并在大约(200×g)的离心力下离心分离5分钟以除去细胞碎屑。所得含有黑素体的上层清液转入清洁的15毫升锥形管中，并离心(850×g)20分钟。将所得含有分离的黑素体的颗粒状物再悬浮于1毫升的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中并在4℃下储存直到使用。
用黑素体处理角质化细胞
将正常的人表皮角质化细胞(NHEKs)(可得自Clonetics公司)置于24孔盘的各孔中，密度为200,000细胞/孔。大约24小时后，用1毫升适当的含有经过和未经过附加处理的黑素体制剂的生长培养基(即，DMEM/KGM-2)代替上述生长培养基。用不同浓度的紫苏叶提取物(粉末形式或水溶液形式)处理细胞。然后将细胞放回到培育箱中大约1.5小时。为了这一研究，用自单一盘B16细胞分离的黑素体量来处理各孔角质化细胞。
在某一些试验中，将24孔盘处理过的角质化细胞在1,000rpm下离心15分钟以促进黑素体沉积到角质化细胞的表面膜上。然后将盘放回到培育箱中1.25小时。
黑素体摄取分析
为进行分析，用PBS漂洗(3×1ml)各孔角质化细胞中的细胞，使用胰蛋白酶/EDTA将其从盘中除去，用PBS对其进行洗涤。为了分析角质化细胞对于黑素体的摄取，根据Bessou-Touya，S.等人在Chimeric humanepidermal reconstructs to study the role of melanocytes andkeratinocytes in pigmentation and photoprotection.，J.Invest.Dermatol.，111：1103-1108，1998中的修改方法从细胞中提取内在化的黑色素，并通过测定在405纳米处的黑色素特有的吸收而对其进行分光光度定量分析。
结果
黑素细胞合成黑色素并且沉积到黑素体上。在视觉上显示出皮肤颜色是由于角质化细胞中存在黑色素/黑素体。黑素体被角质化细胞摄取，其在角质化细胞中的摄取速率、滞留和历程是决定皮肤颜色的关键因素。因此，内在化黑色素值反映出角质化细胞对于黑色素/黑素体摄取的量和对其的滞留。因此，内在化黑色素值较低，特别是内在化黑色素值低于含黑色素的对照物的内在化黑色素值时，表明角质化细胞对于黑色素的摄取已经得到了抑制。如图1所阐明的，对于紫苏叶提取物的内在化黑色素值比带有黑色素的对照物的内在化黑色素值更低。
应当理解的是，上述描述仅在于说明本发明，本领域技术人员在不背离本发明的情况下可以进行各种替代和改进，因此，本发明意欲包括所有属于附加权利要求范围内的这种替代、改进和变化。