水溶性三唑类抗真菌化合物.pdf

本发明属于药物制剂领域，公开一种水溶性三唑类抗真菌化合物及其制备方法。该水溶性三唑类抗真菌化合物，其结构式如式Ia或式Ib或式Ic，其中，R1是式II基团，本发明化合物是在目前临床应用及新药开发过程中发现的广谱，高效抗真菌化合物的结构基础上引入新的基团，从而增加其水溶性，降低毒性，是三唑类抗真菌药物的前药，具有抗真菌谱广，抗真菌活性强，安全性好等特点。

1、  一种水溶性三唑类抗真菌化合物，其结构式如下：

式Ia

式Ib

式Ic
其中，R₁是式II基团

式II
式Ia结构中R₂为H、C_1-4的烷基或NH₂；式Ib或式Ic结构中R₂为H或C_1-4的烷基，结构包括顺式结构和反式结构；
式Ia结构中R₃为H、C_1-4的烷基或NH₂；式Ib或式Ic结构中R₃为H或C_1-4的烷基，结构包括顺式结构和反式结构；
R₄为H、可药用的碱金属离子或碱性氨基酸；
R₅为H或C_1-4的烷基；
R₆为有取代基或无取代基的五元含氮杂环、六元含氮杂环或苯基，其中所述的取代基选自卤素或氰基中的一种或几种。

2、  根据权利要求1所述的化合物，其特征在于所述的C_1-4的烷基为甲基。

3、  根据权利要求1所述的化合物，其特征在于R₆为三唑基，嘧啶基或噻唑基或它们的含取代基的衍生物。

4、  根据权利要求3所述的化合物，其特征在于R₆为1，2，4-三氮唑-1-基、5-氟嘧啶-4-基或4-(4-氰基苯基)-2-噻唑基。

5、  根据权利要求1所述的化合物，其特征在于R₁基团为2-(2，4-二氟苯基)-1，3一双(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丙基、(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-3-(5-氟-4-嘧啶基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丁基或(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-3-[4-4-(4-氰苯基)-2-噻唑基]-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丁基。

6、  根据权利要求1所述的化合物，其特征在于式Ia结构中R₂为H时，R₃为H、CH₃或NH₂；R₂为CH₃时，R₃为H、CH₃或NH₂；R₂为NH₂时，R₃为H或CH₃；式Ib或式Ic结构中，当R₂为H时，R₃为H或CH₃；当R₂为CH₃时，R₃为H。

7、  一种权利要求1所述化合物的生产方法，其特征在于用含有式II基团的化合物进行单酯化反应，或者将得到的单酯化合物进一步转变成其药用盐。

8、  根据权利要求7所述化合物的生产方法，其特征在于用含有式II基团的羟基化合物与下列式III化合物进行单酯化反应，或者将得到的单酯化合物进一步转变成其药用盐

式III

9、  根据权利要求8所述化合物的生产方法，其特征在于式Ia、式Ib和式Ic化合物的具体生产步骤如下：
式Ia的生产方法：

式Ib和式Ic的生产方法：

其中，B^-为可药用的碱金属离子或碱性氨基酸。

10、  权利要求7所述化合物的生产方法，其特征在于在式Ia中，R₂或R₃中有一个为NH₂基团，通过下列方法合成：

水溶性三唑类抗真菌化合物
技术领域
本发明属于药物制剂领域，涉及一种水溶性三唑类抗真菌化合物及其制备方法。
背景技术
三唑是咪唑环中的一个碳原子被氮取代得到的五元杂环，作为药效团三唑比咪唑具有更低的毒性而广泛地出现在多类医药、农药中，且迄今已有众多的三唑类药物用于临床和农业；作为重要的功能基，三唑具有较强的络合金属离子和形成氢键的能力而在化学领域备受青睐。
三唑类抗真菌药物是目前最广泛使用的治疗真菌病尤其是深部真菌病的药物。其作用机理是三唑环上的N-4通过与真菌细胞色素P-450中铁卟啉中心的铁原子配位，抑制底物脱甲基化反应，致使形成细胞膜的重要物质麦角甾醇缺乏，羊毛甾醇蓄积，导致真菌细胞膜破裂，达到抑菌和杀菌的作用。
较早用于临床的三唑类抗真菌药是1983年上市的特康唑(Terconazole)。开创了三唑化合物抗真菌治疗先河，引起了对三唑类化合物研发的极大兴趣。五年之后，伊曲康唑(Itraconazole)和氟康唑(Fluconazole)相继应用于临床。尤其是氟康唑用于临床以来，因其具有广谱高效、副作用相对较小、可口服等特点引起了抗真菌药革命性的变化。
真菌病尤其是深部真菌病，在传统治疗上，两性霉素B是标准药物，但此药毒副作用较大，为此，开发了脂质体给药系统。三唑类抗真菌药物的开发上市，是对两性霉素B的一个补充。三唑类抗真菌药，如氟康唑、伏立康唑半衰期长、高效、低毒，既可口服又可静脉给药，临床用于治疗深部真菌感染，疗效好、不良反应小，但由于该类药物水溶性的问题，要么做成大容量的大输液，要么添加的助溶剂做成合适的临床用制剂。但同时也带来安全性的风险。
针对这一问题，很多研究者对三唑类抗真菌药物进行结构修饰，以增加水溶性、降低毒性，一是形成磷酸酯前药，如2003年上市的磷氟康唑(Fosfluconazole)，是氟康唑的磷酸酯，与氟康唑相比水溶性增加，抗真菌活性强，安全性好，主要作用于念珠菌属与隐球菌属真菌。二是利用三唑环上氮原子成季铵盐，可增加其水溶性。三是利用天然葡萄糖含多羟基、水溶性好的特点，形成新型水溶性糖基化合物。
我们经过研究，发现在含羟基的三唑类抗真菌化合物中，利用和可以药用的二元羧酸进行单酯化反应后再和可药用的碱性金属离子及氨基酸成盐，同样可以降低毒性，增加水溶性和药用安全性。在大量实验基础上，我们筛选出1，4-二元羧酸及其衍生物和含羟基的三唑类抗真菌化合物进行单酯化，并经转化成可药用的盐。
发明内容：
本发明的目的是提供一类新型水溶性三唑类抗真菌化合物，该类化合物主要是在目前临床应用及新药开发过程中发现的广谱，高效抗真菌化合物的结构基础上引入新的基团，从而增加其水溶性，降低毒性，是三唑类抗真菌药物的前药，具有抗真菌谱广，抗真菌活性强，安全性好等特点。
一种新型水溶性三唑类抗真菌化合物，其结构式如下：

其中，R₁是式II基团

式Ia结构中R₂为H、C_1-4的烷基或NH₂，式Ib或式Ic结构中R₂为H或C_1-4的烷基；
式Ia结构中R₃为H、C_1-4的烷基或NH₂，式Ib或式Ic结构中R₃为H或C_1-4的烷基；
R₄为H、可药用的碱金属离子或碱性氨基酸；
R₅为H或C_1-4的烷基；
R₆为有取代基或无取代基的五元含氮杂环、六元含氮杂环或苯基，其中所述的取代基选自卤素或氰基中的一种或几种，R₆中所述的取代基优选为氰基、氟或氯。
上述C_1-4的烷基优选甲基。
上述R₆为三唑基，嘧啶基或噻唑基或它们的含取代基的衍生物时抗菌活性较好。优选1，2，4-三氮唑-1-基、5-氟嘧啶-4-基或4-(4-氰基苯基)-2-噻唑基。对应R₆为以上优选基团最佳R₁结构如下

2-(2，4-二氟苯基)-1，3-双(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丙基

(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-3-(5-氟-4-嘧啶基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丁基

(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-3-[4-4-(4-氰苯基)-2-噻唑基]-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丁基
R₁基团为2-(2，4-二氟苯基)-1，3-双(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丙基、(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-3-(5-氟-4-嘧啶基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丁基或(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-3-[4-4-(4-氰苯基)-2-噻唑基]-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丁基。
式Ia结构中R₂为H时，R₃为H、CH₃或NH₂；R₂为CH₃时，R₃为H、CH₃或NH₂；R₂为NH₂时，R₃为H或CH₃；式Ib或式Ic结构中，当R₂为H时，R₃为H或CH₃；当R₂为CH₃时，R₃为H。
式Ia、式Ib和式Ic的生产方法为用含有式II基团的化合物进行单酯化反应，或者将得到的单酯化合物进一步转变成其药用盐。
上述用含有式II基团的羟基化合物与下列式III化合物进行单酯化反应，或者将得到的单酯化合物进一步转变成其药用盐

具体生产步骤如下：
式Ia所示的化合物可以通过下列方法合成

该步反应的溶剂可以是丙酮、乙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜、四氢呋喃、二氧六环等不含活泼氢的有机溶剂。优选丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氧六环。反应温度可以在-10℃至100℃之间反应。优选50-70℃。反应时间最佳为3-6小时。

该步反应的溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、叔丁醇、正丁醇、2-丁醇等醇类溶剂，也可以是丙酮、丁酮、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜等极性有机溶剂，优选甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇和丙酮，特别优选乙醇。反应温度在-10℃至100℃之间反应，优选室温反应。
式Ib所示的化合物可以通过下列方法合成

该步反应的溶剂可以是丙酮、乙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜、四氢呋喃、二氧六环等不含活泼氢的有机溶剂。优选丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氧六环。反应温度可以在-10℃至100℃之间反应。优选50-70℃。反应时间最佳为3-6小时。

该步反应的溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、叔丁醇、正丁醇、2-丁醇等醇类溶剂，也可以是丙酮、丁酮、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜等极性有机溶剂，优选甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇和丙酮，特别优选乙醇。反应温度在-10℃至100℃之间反应，优选室温反应。
其中，B^-为可药用的碱金属离子或碱性氨基酸。
式Ic所示的化合物可以通过下列方法合成

该步反应的溶剂可以是丙酮、乙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜、四氢呋喃、二氧六环等不含活泼氢的有机溶剂。优选丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氧六环。反应温度可以在-10℃至100℃之间反应。优选50-70℃。反应时间最佳为3-6小时。

该步反应溶剂可以是二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、四氢呋喃、二氧六环等溶剂，优选二氯甲烷和氯仿。反应温度可以在-10℃至150℃之间反应，优选在所选反应溶剂的沸点。顺-反转型所需的催化剂可以是三氯化铝、四氯化钛、三氯化铁、硫酸铝、硫酸钛、硫酸铁等路易斯酸，也可以是盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、三氟乙酸、三氯乙酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等无机及有机酸，优选三氯化铝和盐酸。

该步反应的溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、叔丁醇、正丁醇、2-丁醇等醇类溶剂，也可以是丙酮、丁酮、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜等极性有机溶剂，优选甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇和丙酮，特别优选乙醇。反应温度在-10℃至100℃之间反应，优选室温反应。
其中，B^-为可药用的碱金属离子或碱性氨基酸。
在式Ia中，当R₂或R₃中有一个为NH₂基团时，可通过下列方法合成：

该步反应中2-氨基丁二酸包括L和D型二种异构体，二酸成酸酐可以在三氯化磷、三氯氧磷、五氧化磷、五氯化磷等无机磷化合物中反应，也可以在硫酸、磷酸、多聚磷酸等脱水剂中反应，优选三氯化磷。酸酐与醇成单酯的反应溶剂可以是丙酮、乙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜、四氢呋喃、二氧六环等不含活泼氢的有机溶剂。优选丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、二氧六环。反应温度可以在-10℃至100℃之间反应。优选50-70℃。反应时间最佳为3-6小时。单酯成盐的反应的溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、叔丁醇、正丁醇、2-丁醇等醇类溶剂，也可以是丙酮、丁酮、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜等极性有机溶剂，优选甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇和丙酮，特别优选乙醇。反应温度在-10℃至100℃之间反应，优选室温反应。
本发明的药物活性化合物可以单独使用或配制成药物组合物来使用，所述药物组合物除含活性的三唑成分外还含有药物可接受的载体、助剂或稀释剂。可以通过多种方式将该化合物进行给药，例如口服给药、局部给药或非经肠道给药(静脉注射或肌肉注射)。该药物组合物可以是固态形式，如胶囊剂、片剂、粉末等，或者是液态形式，如溶液、悬浮体或乳液。注射用组合物可制备成安瓶中的或多剂量容器中的单位剂型，并且可以含添加剂如悬浮剂、稳定剂和分散剂。该组合物可以是即用的形式，或者是在递送时用适合的载体如无菌水进行再组成的粉末形式。
另一选择，本发明的化合物可以以栓剂或阴道剂的形式进行给药，或者它们可以洗液、溶液或乳膏的形式进行局部施用。另外，可以将它们并入(以高达10％的浓度)由白蜡或软、白石蜡碱与所需的稳定剂和/或防腐剂一起组成的软膏中。
本发明的化合物是有用的，因为它们在动物、特别是包括哺乳动物(最特别是人类)体内具有药理学活性。具体地说，本发明的化合物可用于治疗或预防局部真菌感染，包括由假丝酵母属、毛癣菌属、小袍子菌属或表皮癣菌属引起的那些感染.另外，它们可用于治疗由白色假丝酵母所引起的粘膜感染。它们还可以用于治疗由以下真菌引起的全身真菌感染：例如白色假丝酵母、新型隐球酵母、黄曲霉、烟曲霉、球袍子菌属、副球袍子菌属、组织胞浆菌属或芽生菌属。
因此，根据本发明的另一个方面，提供了一种治疗真菌感染的方法，该方法包括将治疗有效量的化合物向受体，特别是哺乳动物受体、最特别是人类患者进行给药。也提供了将本发明的化合物作为药物的用途，以及用本发明的化合物制造治疗真菌感染的药物的用途。
给药的剂量在很大程度上取决于所用的具体化合物、配制的具体组合物、给药途径、受体的属性和状况，以及治疗的具体部位和有机体。然后，由医生或兽医来判断对具体优选的剂量和施用路径的选择.然而，通常将该化合物以约5mg/天～1.0g/天的量对哺乳动物受体进行非经肠道给药或口服给药.这些剂量是平均情况的示范，可能在个别的情况中使用较高或较低的剂量，这类剂量在本发明的范围之内。而且，可以一次性或分成多份将本发明的化合物进行给药。
通过测定最低抑菌浓度(MIC)对由本发明方法制备的化合物的抗真菌活性进行体外评价。MIC是试验化合物能抑制试验微生物生长的浓度。在实践中，将真菌菌株植入一系列加入了特定浓度的试验化合物的琼脂平皿中，然后将每个平皿在37℃下培养48小时。检查这些平皿，看是否存在真菌生长，记录相关的浓度.可用于该试验的微生物包括白色念珠菌、烟曲霉、毛癣菌属、小袍子菌属、絮状表皮癣菌、粗球袍子菌和光滑球拟酵母。应该承认，本发明的一些化合物作为前药在体外试验中没有活性。
通过将本发明制备的化合物按一系列剂量水平对已植入了真菌(例如白色念珠菌)菌株的老鼠进行腹膜内注射或静脉注射或者口服给药，来对本发明制备的化合物进行体内评价。在未经治疗老鼠组死后通过比较使用了不同剂量水平进行治疗的老鼠组的存活率来测定活性。记录试验化合物对感染的致命效果能提供50％的保护时的剂量水平。
本发明的有益效果：本发明化合物是在目前临床应用及新药开发过程中发现的广谱，高效抗真菌化合物的结构基础上引入新的基团，从而增加其水溶性，降低毒性，是三唑类抗真菌药物的前药，具有抗真菌谱广，抗真菌活性强，安全性好等特点。
在上述内容的基础上，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想的前提下，还可以做出多种形式的修改，替换或变更。
具体实施方式
通过以下实施例形式的具体实施方案，对本发明的上述内容进一步进行详细说明。
实施例1
(a)4-[2-(2，4-二氟苯基)-1，3-双(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丙氧基]-4-氧代丁酸。

三口瓶中加入30.6g(0.1mol)的2-(2，4-二氟苯基)-1，3-双(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丙醇(氟康唑)，13g(1.3mol)的琥珀酸酐，5mL三乙胺，100mL丙酮。搅拌下升温至回流反应5hr，降温，反应混合液中加入100mL水，搅拌下析晶，过滤收集固体。75％乙醇中重结晶，得产品31.6g，收率：77.8％，[M+1]⁺：407.12，H-NMR(CDCI₃)δppm：8.15(m，2H)，8.11(m，2H)，7.16(d，1H)，6.67(d，1H)，6.56(m，1H)，4.26(s，4H)，2.63(t，2H)，2.55(t，2H).
(b)4-[2-(2，4-二氟苯基)-1，3-双(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丙氧基]-4-氧代丁酸钠。

取上步产物20.3g(0.05mol)，溶于200mL乙醇中，室温搅拌下滴加2gNaOH(0.05mol)的10mL水溶液，加完后室温搅拌2hr，0～5℃搅拌析晶，过滤收集固体，少量无水乙醇洗涤，40℃下真空干燥得成品18.7g，收率：87.1％。元素分析：实测值C％：47.11；H％：3.68；N％：19.13，理论值C％47.67；H％：3.53；N％：19.62。
实施例2
(a)L-2-氨基-4-[2-(2，4-二氟苯基)-1，3-双(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丙氧基]-4-氧代丁酸。

三口瓶中加入15g(0.11mol)的L-2-氨基丁二酸，150mL PCl₃升温至60℃反应3hr。减压回收过量的PCl₃，残留物中加入250mL丙酮，搅拌下加入30.6g(0.1mol)的2-(2，4-二氟苯基)-1，3-双(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丙醇(氟康唑)，搅拌下升温至回流反应5hr，降温，反应混合液中加入100mL水，搅拌下析晶，过滤收集固体。75％乙醇中重结晶，得产品28.9g，收率：68.6％，[M+1]⁺：422.1，H-NMR(CDCI₃)δppm：8.17(m，2H)，8.03(m，2H)，7.44(d，1H)，6.96(d，1H)，6.35(m，1H)，4.22(s，4H)，4.13(t，1H)，2.87(d，1H)，2.61(d，1H).
(b)L-2-氨基-4-[2-(2，4-二氟苯基)-1，3-双(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丙氧基]-4-氧代丁酸钠。

取上步产物21.1g(0.05mol)，溶于200mL乙醇中，室温搅拌下滴加2gNaOH(0.05mol)的10mL水溶液，加完后室温搅拌2hr，0～5℃搅拌析晶，过滤收集固体，少量无水乙醇洗涤，40℃下真空干燥得成品17g，收率：76.7％。元素分析：实测值C％：45.91；H％：3.72；N％：22.18，理论值C％46.06；H％：3.64；N％：22.12。
实施例3
(a)(2Z)-4-[2-(2，4-二氟苯基)-1，3-双(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丙氧基]-4-氧代2-丁烯酸。

三口瓶中加入30.6g(0.1mol)的2-(2，4-二氟苯基)-1，3-双(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丙醇(氟康唑)，13g(1.3mol)的顺丁烯二酸酐，5mL三乙胺，100mL丙酮。搅拌下升温至回流反应5hr，降温，反应混合液中加入100mL水，搅拌下析晶，过滤收集固体。75％乙醇中重结晶，得产品29.6g，收率：73.3％，[M+1]⁺：405.1，H-NMR(CDCl₃)δppm：8.21(m，2H)，8.14(m，2H)，7.25(d，1H)，6.88(d，1H)，6.79(m，1H)，6.51(s，1H)，6.35(s，1H)，4.31(s，4H).
(b)(2Z)-4-[2-(2，4-二氟苯基)-1，3-双(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丙氧基]-4-氧代2-丁烯酸钠。

取上步产物21.3g(0.05mol)，溶于200mL乙醇中，室温搅拌下滴加2gNaOH(0.05mol)的10mL水溶液，加完后室温搅拌2hr，0～5℃搅拌析晶，过滤收集固体，少量无水乙醇洗涤，40℃下真空干燥得成品18.7g，收率：87.1％。元素分析：实测值C％：47.31；H％：3.14；N％：19.15，理论值C％47.90；H％：3.07；N％：19.71。
实施例4
(a)(2E)-4-[2-(2，4-二氟苯基)-1，3-双(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丙氧基]-4-氧代2-丁烯酸。

三口瓶中加入30.6g(0.1mol)的2-(2，4-二氟苯基)-1，3-双(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丙醇(氟康唑)，13g(1.3mol)的顺丁烯二酸酐，5mL三乙胺，100mL丙酮。搅拌下升温至回流反应5hr，降温，反应混合液中加入100mL水，搅拌下析晶，过滤收集固体。所得产品中加入150mL二氯甲烷，20g三氯化铝升温至回流反应6hr，减压回收溶剂至干，残留物中加入6mol/L的盐酸150mL，室温搅拌30min，过滤收集固体，75％乙醇中重结晶，得产品27.1g，收率：67.1％，[M+1]⁺：405.1，H-NMR(CDCI₃)δppm：8.19(m，2H)，8.12(m，2H)，7.36(d，1H)，7.01(d，1H)，6.68(m，1H)，6.65(s，1H)，6.58(s，1H)，4.29(s，4H).
(b)(2E)-4-[2-(2，4-二氟苯基)-1，3-双(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丙氧基]-4-氧代2-丁烯酸钠。

取上步产物21.3g(0.05mol)，溶于200mL乙醇中，室温搅拌下滴加2gNaOH(0.05mol)的10mL水溶液，加完后室温搅拌2hr，0～5℃搅拌析晶，过滤收集固体，少量无水乙醇洗涤，40℃下真空干燥得成品19.4g，收率：90.1％。元素分析：实测值C％：47.27；H％：3.10；N％：19.96，理论值C％47.90；H％：3.07；0％：19.71。
实施例5
(a)4-[(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-[4-(4-氰基苯基)-3-噻唑基]-2-丁氧基]-4-氧代丁酸。

三口瓶中加入21.8g(0.05mol)的(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-[4-(4-氰基苯基)-3-噻唑基]-2-丁醇，10g(1.0mol)的琥珀酸酐，5mL三乙胺，100mL丙酮。搅拌下升温至回流反应5hr，降温，反应混合液中加入100mL水，搅拌下析晶，过滤收集固体。75％乙醇中重结晶，得产品18.7g，收率：69.6％，[M+1]⁺：538.1，H-NMR(CDCI₃)δppm：8.33(m，1H)，8.21(m，1H)，7.81(m，1H)，7.66(d，2H)，7.57(d，2H)，7.15(d，1H)，6.67(d，1H)，6.61(m，1H)，4.38(d，1H)，4.14(d，1H)，3.91(m，1H)2.66(t，2H)，2.59(t，2H)，1.42(d，3H)
(b)4-[(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-[4-(4-氰基苯基)-3-噻唑基]-2-丁氧基]-4-氧代丁酸钠。

取上步产物13.4g(0.025mol)，溶于200mL乙醇中，室温搅拌下滴加1gNaOH(0.025mol)的10mL水溶液，加完后室温搅拌2hr，0～5℃搅拌析晶，过滤收集固体，少量无水乙醇洗涤，40℃下真空干燥得成品11.7g，收率：83.7％。元素分析：实测值C％：56.11；H％：3.66；N％：12.12，理论值C％55.81；H％：3.60；N％：12.52
实施例6
(a)L-2-氨基-4-[(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三三唑-1-基)-3-[4-(4-氰基苯基)-3-噻唑基]-2-丁氧基]-4-氧代丁酸。

三口瓶中加入15g(0.11mol)的L-2-氨基丁二酸，150mL PCl₃升温至60℃反应3hr。减压回收过量的PCl₃，残留物中加入250mL丙酮，搅拌下加入21.8g(0.05mol)的(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-[4-(4-氰基苯基)-3-噻唑基]-2-丁醇，升温至回流反应5hr，降温，反应混合液中加入100mL水，搅拌下析晶，过滤收集固体。75％乙醇中重结晶，得产品18.7g，收率：69.6％，[M+1]⁺：538.1，H-NMR(CDCI ₃)δppm：8.31(m，1H)，8.21(m，1H)，7.73(m，1H)，7.65(d，2H)，7.52(d，2H)，7.17(d，1H)，6.69(d，1H)，6.60(m，1H)，4.38(d，1H)，4.14(d，1H)，4.13(t，1H)，3.91(m，1H)，2.87(d，2H)，2.59(d，2H)，1.42(d，3H)
(b)L-2-氨基-4-[(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-[4-(4-氰基苯基)-3-噻唑基]-2-丁氧基]-4-氧代丁酸钠。

取上步产物11.3g(0.025mol)，溶于100mL乙醇中，室温搅拌下滴加1gNaOH(0.025mol)的5mL水溶液，加完后室温搅拌2hr，0～5℃搅拌析晶，过滤收集固体，少量无水乙醇洗涤，40℃下真空干燥得成品10.7g，收率：74.6％。元素分析：实测值C％：54.11；H％：3.68；N％：14.19，理论值C％54.35；H％：3.68；N％：14.63
实施例7
(a)(2Z)-4-[(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-[4-(4-氰基苯基)-3-噻唑基]-2-丁氧基]-4-氧代-2-丁烯酸。

三口瓶中加入21.8g(0.05mol)的(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-[4-(4-氰基苯基)-3-噻唑基]-2-丁醇，6g(0.06mol)的顺丁烯二酸酐，5mL三乙胺，100mL丙酮。搅拌下升温至回流反应5hr，降温，反应混合液中加入100mL水，搅拌下析晶，过滤收集固体。75％乙醇中重结晶，得产品17.9g，收率：66.8％，[M+1]⁺：536.1，H-NMR(CDCI₃)6ppm：8.30(m，1H)，8.19(m，1H)，7.71(m，1H)，7.66(d，2H)，7.57(d，2H)，7.19(d，1H)，6.69(m，1H)，6.61(d，1H)，6.54(d，1H)，6.31(d，1H)，4.38(d，1H)，4.14(d，1H)，3.91(m，1H)，1.42(d，3H)
(b)(2Z)-4-[(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-[4-(4-氰基苯基)-3-噻唑基]-2-丁氧基]-4-氧代-2-丁烯酸钠。

取上步产物13.9g(0.025mol)，溶于200mL乙醇中，室温搅拌下滴加1gNaOH(0.025mol)的10mL水溶液，加完后室温搅拌2hr，0～5℃搅拌析晶，过滤收集固体，少量无水乙醇洗涤，40℃下真空干燥得成品11.7g，收率：83.7％。元素分析：实测值C％：56.15；H％：3.36；N％：12.52，理论值C％56.01；H％：3.25；N％：12.56
实施例8
(a)(2E)-4-[(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-[4-(4-氰基苯基)-3-噻唑基]-2-丁氧基]-4-氧代-2-丁烯酸。

三口瓶中加入21.8g(0.05mol)的(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-[4-(4-氰基苯基)-3-噻唑基]-2-丁醇，6g(0.06mol)的顺丁烯二酸酐，5mL三乙胺，100mL丙酮。搅拌下升温至回流反应5hr，降温，反应混合液中加入100mL水，搅拌下析晶，过滤收集固体。所得产品中加入150mL二氯甲烷，20g三氯化铝升温至回流反应6hr，减压回收溶剂至干，残留物中加入6mol/L的盐酸150mL，室温搅拌30min，过滤收集固体，75％乙醇中重结晶，得产品18.6g，收率：69.4％，[M+1]⁺：536.1，H-NMR(CDCI₃)δppm：8.28(m，1H)，8.17(m，1H)，7.81(m，1H)，7.62(d，2H)，7.60(d，2H)，7.21(d，1H)，6.71(m，1H)，6.68(d，1H)，6.55(d，1H)，6.33(d，1H)，4.41(d，1H)，4.16(d，1H)，3.87(m，1H)，1.47(d，3H)
(b)(2E)-4-[(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-[4-(4-氰基苯基)-3-噻唑基]-2-丁氧基]-4-氧代-2-丁烯酸钠。

取上步产物13.3g(0.025mol)，溶于100mL乙醇中，室温搅拌下滴加1gNaOH(0.025mol)的5mL水溶液，加完后室温搅拌2hr，0～5℃搅拌析晶，过滤收集固体，少量无水乙醇洗涤，40℃下真空干燥得成品11.4g，收率：89.4％。元素分析：实测值C％：56.27；H％：3.18；N％：12.86，理论值C％56.01；H％：3.25；N％：12.56。
实施例9
(a)4-[(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-(5-氟-4-嘧啶基)-2-丁氧基]-4-氧代丁酸。

三口瓶中加入17.5g(0.05mol)的(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-(5-氟-4-嘧啶基)-2-丁醇，10g(1.0mol)的琥珀酸酐，5mL三乙胺，100mL丙酮。搅拌下升温至回流反应5hr，降温，反应混合液中加入100mL水，搅拌下析晶，过滤收集固体。75％乙醇中重结晶，得产品16.2g，收率：72.1％，[M+1]⁺：450.1，H-NMR(CDCI₃)δppm：8.91(m，1H)，8.37(m，1H)，8.17(m，1H)，8.12(m，1H)，7.17(d，1H)，6.69(d，1H)，6.63(m，1H)，4.39(d，1H)，4.11(d，1H)，3.93(m，1H)2.61(t，2H)，2.57(t，2H)，1.42(d，3H)
(b)4-[(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-(5-氟-4-嘧啶基)-2-丁氧基]-4-氧代丁酸钠

取上步产物11.2g(0.025mol)，溶于200mL乙醇中，室温搅拌下滴加1gNaOH(0.025mol)的10mL水溶液，加完后室温搅拌2hr，0～5℃搅拌析晶，过滤收集固体，少量无水乙醇洗涤，40℃下真空干燥得成品10.5g，收率：89.1％。元素分析：实测值C％：51.11；H％：3.66；N％：14.12，理论值C％50.96；H％：3.64；N％：14.86
实施例10
(a)L-2-氨基-4-[(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-(5-氟-4-嘧啶基)-2-丁氧基]-4-氧代丁酸。

三口瓶中加入15g(0.11mol)的L-2-氨基丁二酸，150mL PCl₃升温至60℃反应3hr。减压回收过量的PCl₃，残留物中加入250mL丙酮，搅拌下加入17.5g(0.05mol)的(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-[4-(4-氰基苯基)-3-噻唑基]-2-丁醇，升温至回流反应5hr，降温，反应混合液中加入100mL水，搅拌下析晶，过滤收集固体。75％乙醇中重结晶，得产品16.6g，收率：71.6％，[M+1]⁺：465.1，H-NMR(CDCI₃)δppm：8.84(m，1H)，8.31(m，1H)，8.22(m，1H)，8.17(m，1H)，7.13(d，1H)，6.72(d，1H)，6.68(m，1H)，4.39(d，1H)，4.16(d，1H)，4.11(t，1H)，3.97(m，1H)，2.87(d，1H)，2.61(d，1H)，1.42(d，3H)
(b)L-2-氨基-4-[(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-(5-氟-4-嘧啶基)-2-丁氧基]-4-氧代丁酸钠。

取上步产物11.6g(0.025mol)，溶于100mL乙醇中，室温搅拌下滴加1gNaOH(0.025mol)的5mL水溶液，加完后室温搅拌2hr，0～5℃搅拌析晶，过滤收集固体，少量无水乙醇洗涤，40℃下真空干燥得成品10.1g，收率：82.1％。元素分析：实测值C％：49.11；H％：3.78；N％：17.21，理论值C％49.39；H％：3.73；N％：17.28
实施例11
(a)(2Z)-4-[(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-(5-氟-4-嘧啶基)-2-丁氧基]-4-氧代-2-丁烯酸。

三口瓶中加入17.5g(0.05mol)的(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-(5-氟-4-嘧啶基)-2-丁醇，6g(0.06mol)的顺丁烯二酸酐，5mL三乙胺，100mL丙酮。搅拌下升温至回流反应5hr，降温，反应混合液中加入100mL水，搅拌下析晶，过滤收集固体。75％乙醇中重结晶，得产品15.6g，收率：69.8％，[M+1]⁺：448.1，H-NMR(CDCI₃)δppm：8.86(m，1H)，8.40(m，1H)，8.31(m，1H)，8.21(m，1H)，7.11(d，1H)，6.82(d，1H)，6.71(m，1H)，6.59(d，1H)，6.26(d，1H)，4.39(d，1H)，4.16(d，1H)，3.92(m，1H)，1.42(d，3H)
(b)(2Z)-4-[(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-(5-氟-4-嘧啶基)-2-丁氧基]-4-氧代-2-丁烯酸钠。

取上步产物11.2g(0.025mol)，溶于200mL乙醇中，室温搅拌下滴加1gNaOH(0.025mol)的5mL水溶液，加完后室温搅拌2hr，0～5℃搅拌析晶，过滤收集固体，少量无水乙醇洗涤，40℃下真空干燥得成品9.87g，收率：81.1％。元素分析：实测值C％：51.15；H％：3.16；N％：14.52，理论值C％51.18；H％：3.22；N％：14.92
实施例12
(a)(2E)-4-[(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-(5-氟-4-嘧啶基)-2-丁氧基]-4-氧代-2-丁烯酸。

三口瓶中加入17.5g(0.05mol)的(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-(5-氟-4-嘧啶基)-2-丁醇，6g(0.06mol)的顺丁烯二酸酐，5mL三乙胺，100mL丙酮。搅拌下升温至回流反应5hr，降温，反应混合液中加入100mL水，搅拌下析晶，过滤收集固体。所得产品中加入150mL二氯甲烷，20g三氯化铝升温至回流反应6hr，减压回收溶剂至干，残留物中加入6mol/L的盐酸150mL，室温搅拌30min，过滤收集固体，75％乙醇中重结晶，得产品17.2g，收率：73.4％，[M+1]⁺：448.1，H-NMR(CDCI₃)δppm：8.87(m，1H)，8.46(m，1H)，8.33(m，1H)，8.25(m，1H)，7.16(d，1H)，7.10(d，1H)，7.03(d，1H)，6.71(m，1H)，6.59(d，1H)，，4.44(d，1H)，4.12(d，1H)，3.91(m，1H)，1.43(d，3H)
(b)(2E)-4-[(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-(5-氟-4-嘧啶基)-2-丁氧基]-4-氧代-2-丁烯酸钠。

取上步产物11.2g(0.025mol)，溶于100mL乙醇中，室温搅拌下滴加1gNaOH(0.025mol)的5mL水溶液，加完后室温搅拌2hr，0～5℃搅拌析晶，过滤收集固体，少量无水乙醇洗涤，40℃下真空干燥得成品10.1g，收率：86.1％。元素分析：实测值C％：51.21；H％：3.19；N％：14.67，理论值C％51.18；H％：3.22；N％：14.92。
实施例13
对上述实施例1至例12所对应的单酯钠盐化合物，在室温25℃按常规方法进行水中溶解度试验，并和未进行单酯化反应的母体化合物进行对比，其中，母体化合物1为：2-(2，4-二氟苯基)-1，3-双(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-丙醇、母体化合物2为：(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-[4-(4-氰基苯基)-3-噻唑基]-2-丁醇、母体化合物3为：(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-3-(5-氟-4-嘧啶基)-2-丁醇。其结果见表1、表2和表3。
表1：