本发明一般涉及加入到动物饲料中的预混合物。更具体地说，本发明涉及包含有泰乐菌素或以泰乐菌素为基础的抗菌剂的预混组合物，还涉及制备此预混组合物的方法，及含有此预混组合物的动物饲料。 泰乐菌素及其衍生物的抗菌活性是为人们所熟知的。它们能有效地抑制多种细菌，故可用以治疗动物的多种细菌感染疾病。通过饲料将诸如泰乐菌素或以泰乐菌素为基础的抗菌剂给动物服用是非方便和经济的。通常的方法往往并不把抗菌素直接加入动物饲料中，而是将抗菌剂配制成含抗菌剂的浓缩预混合物。然后，再将该预混合物加入动物饲料中制成含有所需剂量抗菌剂的含药饲料。
制备好的浓缩预混合物在使用之前经常要贮存较长的时间，故预混合物中抗菌剂的长期稳定性是非常重要的。此外，在制备动物饲料的过程中，预混合物还要经受对抗菌剂不利的进一步的加工。例如，在制备颗粒状地饲料时，含抗菌剂的预混合物首先与动物饲料原料混合。所得混合物用造粒机（pellet mill）进行加工，该造粒机中通常包括有蒸汽调节器。此蒸汽调节器将新鲜蒸汽注入饲料混合物中使其中的淀粉水合。然后，混合物通过造粒机上的模具，把动物饲料加工成颗粒状。蒸汽调节器和模具中的温度均可高至约100℃。因此，这种极端的工艺条件对饲料中的抗菌剂会产生不利的影响。另外，含药动物饲料制备出来后，往往存放在未隔离处，比如说仓库中以备后用。动物饲料的这种贮放也会使其抗菌效力下降。
在有水分和/或其它的动物饲料成分存在下，泰乐菌素和以泰乐菌素为基础的抗菌剂缺乏对水解作用的长期稳定性。因此泰乐素菌（有时称为因子A）中含有易于水解的mycarosyl基团，它会解离生成活性较差的因子B，即脱碳霉糖泰乐菌素（desmycarosyl tylo-sin）。结果表明：当泰乐菌素和以泰乐菌素为基础的抗菌剂加入到预混合物中，该预混合物再被加入到动物饲料中时，抗菌剂的稳定性是非常重要的。本发明用玉米（玉蜀黍）穗作为载体来解决这个问题。
已发现，把泰乐菌素以及适宜的药物可接受的缓冲剂加入到轧碎的玉米穗载体中后，泰乐菌素和以泰乐菌素为基础的抗菌化合物以及它们的药物可接受的盐类（下文中统称为“泰乐菌素抗菌剂类”，或对单个称为“泰乐菌素抗菌剂”）获得了优异的水解稳定性。因此，本发明的一个优选方案即是提供一种动物饲料预混组合物，该组合物包括有玉米穗碎粒和加入到玉米穗碎粒中的泰乐菌素抗菌剂以及有效量的药物可接受的缓冲剂，该缓冲剂能提高泰乐菌素抗菌剂对水解作用的稳定性。
本发明的另一优选方案是制备动物饲料预混组合物的方法。该方法是：使轧碎的玉米穗载体与泰乐菌素抗菌剂溶液接触，使泰乐菌素抗菌剂结合到轧碎的玉米穗载体中;使轧碎的玉米穗载体与一种药物可接受的缓冲剂溶液接触，使缓冲剂结合到轧碎的玉米穗载体中;将结合有泰乐菌素抗菌剂和药物可接受的缓冲剂的玉米穗碎粒载体干燥。另外，药物可接受的缓冲剂要以有效剂量结合到轧碎的玉米穗载体中，以使泰乐菌素抗菌剂对水解作用的稳定性提高。
本发明还有一个优选的方案提供一种动物饲料组合物。该动物饲料组合物中包括掺有动物饲料预混合物的动物饲料，其中的预混合物包含有玉米穗碎粒和结合到玉米穗碎粒中的泰乐菌素抗菌剂和有效量的能提高泰乐菌素抗菌剂对水解作用稳定性的药物可接受的缓冲剂。
故本发明提供了动物饲料预混合物、含药的动物饲料及其制备方法。其中，泰乐菌素抗菌剂获得了优异的对水解作用的稳定性。此外，依照本发明制备的预混合物具有良好的加工和流动特性，并且无尘。本发明的预混合物具有弹性而且贮存期长，便于加工并掺加在动物饲料组合物中。本发明其它的目的、特征和优点从本文的叙述中可以明显地看到。
图1是含有本发明预混合物的动物饲料的稳定性曲线。曲线表示在受到湿热（37℃，75%相对湿度）时，动物饲料样品中泰乐菌素因子B的%含量与时间的函数关系。
在本文中，除非另有说明，所有的百分数和份数均为重量百分数和份数。同样，除非另有说明，温度均以摄氏度（℃）表示。
如上所述，本发明优选的方案是利用轧碎的玉米穗载体制备适于掺加到动物饲料中的动物饲料预混合物。关于这一点，轧碎的玉米穗载体是已知的可食用的饲料添加剂，且对于用于本发明的具体的轧碎玉米穗载体并无严格要求。合适的轧碎玉米穗载体可以用已知的技术制得，也可以商购得到。另外，本发明所用的轧碎玉米穗载体的颗粒大小可以按所需任意决定;但是对于本发明来说，轧碎玉米穗载体的平均粒度优选为约20-100目（美国系列），更优选为约40-60目。
本发明对所用的具体的缓冲剂同样没有严格的要求，只要它是众多已知药物可接受的缓冲剂中的一种且对轧碎玉米穗载体的酸性有中和作用（即，升高pH值），从而使泰乐菌素抗菌剂对水解作用的稳定性有所提高即可。本发明优选的药物可接受缓冲剂是磷酸盐缓冲剂，例如：K2HPO4（磷酸氢二钾）、偏磷酸钾、磷酸钠和磷酸氢二钠。
在本预混组合物中药物可接受的缓冲剂的含量应是能有效提高泰乐菌素抗菌剂对水解作用的稳定性为准。这个量可以通过监测在整个过程中预混组合物中泰乐菌素因子B的存在量来确定，因为泰乐菌素因子B是所需的泰乐菌素因子A的水解产物。
本发明优选的预混组合物中，药物可接受的缓冲剂成分约占重量的1%-20%，更为优选是的占重量的约3%-15%。另外，药物可接受的缓冲剂的加入量优选使轧碎玉米穗的pH值达到约6-9.5，此pH值可以通过把5g轧碎的玉米穗悬浮于100ml水中，测量悬浮液的pH值来测得。如此选定的缓冲剂含量和pH值使得泰乐菌素抗菌剂在被加入到本发明预混合物时，及该预混合物被加到动物饲料中时稳定性有所增加。
本发明所使用的泰乐菌素抗菌剂可以是泰乐菌素或以泰乐菌素为基础的抗菌剂或它们的药物可接受的盐中的一种。这些泰乐菌素抗菌剂类在有水分和酸的条件下具有水解不稳定性，而在轧碎的玉米穗载体和包含有轧碎的玉米穗载体的动物饲料组合物中恰是有水分存在的酸性条件。本发明中优选使用泰乐菌素或以泰乐菌素为基础的抗菌剂的药物可接受的盐类。
具代表性的药物可接受的盐类包括：由无毒无机酸，如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚磷酸和其它的酸得到的盐，还有由无毒有机酸，如脂肪族单和双羧酸，苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸和羟基链烷双酸、芳香酸、脂肪族和芳香族的磺酸及类似酸所得到的盐。故这些药物可接受的盐包括：硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、辛酸盐、庚酸盐、丙酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、氯苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、β-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、马来酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、甲磺酸盐，等等。
制备本发明优选预混合物所用的溶剂或溶剂类应能溶解泰乐菌素抗菌剂和/或药物可接受的缓冲剂，这样，当玉米穗碎粒与溶液接触或吸附溶液的时候，抗菌剂和缓冲剂才能有效地结合到玉米穗碎粒中去。对于药物可接受的缓冲剂和泰乐菌素抗菌剂来说，优选溶剂为水和/或挥发性的有机溶剂，如醇类，特别是低级醇如甲醇、乙醇和丙醇及其它同类醇。
泰乐菌素抗菌剂和药物可接受的缓冲剂既可以在同一溶液中，也可以分别在不同溶液中与轧碎的玉米穗载体接触。当分别与不同的溶液接触时，泰乐菌素抗菌剂或缓冲剂谁先被提供给玉米穗碎粒并不重要，故缓冲溶液可以在抗菌剂溶液之前、同时或之后供给。但是，优选方案是：缓冲溶液在泰乐菌素抗菌剂溶液之前供给。当两种成分均结合到轧碎的玉米穗载体中之后，将载体干燥，最好使水分含量低于约10%，目的是抑制霉菌的生长，防止发霉，所得动物饲料预混组合物掺混有药物可接受的缓冲剂和泰乐菌素抗菌剂，经验证其中的泰乐菌素抗菌剂保持着很好的水解稳定性，在下文具体实施例中将有证明。
本发明中泰乐菌素抗菌剂化合物在预混合物中的浓度不太重要。最终动物饲料的抗菌效力可通过改变混入的预混合物的量和/或改变预混合物中抗菌剂的浓度来调节。含有效浓度为约10-300mg/g（以干重计）的泰乐菌素抗菌剂的预混合物既经济又方便，因此也是优选的。更加优选的是含有效浓度为约100-300mg/g（以干重计）的泰乐菌素抗菌剂的预混合物。
在使用中，将本发明预混合物掺混到动物饲料如牛或猪的饲料中，以便制得具有所需抗菌效力的含药动物饲料。要做到这一点，首先是把预混组合物与动物饲料混合。动物饲料中的成分以及这些成分之间的比例范围很宽。但是，典型的动物饲料包括颗粒状的来自动物/或植物的蛋白质物质，还有动物和/或植物脂肪或油脂。例如，动物饲料可包含有动物粉如鱼粉、动物脂肪、磨碎的谷物颗粒如小麦、燕麦、黑麦或大麦、大豆粉、碎玉米和/或磨碎的油料种籽如葵花籽。动物饲料中还可以含有少量的维生素和矿物质，如以石灰石或磷酸二氢钙形式存在的矿物质，维生素A、D和/或E，以及其它的物质。
本发明预混合物加入到动物饲料中后，该混合物经常规加工制成动物饲料的各种典型形式中的一种。例如，象前文背景技术中所叙述的那样，用普通的造粒技术即可制备本发明的颗粒状动物饲料。
如上所述，本发明预混合物可被掺加到动物饲料中制得一种含有所需剂量的泰乐菌素抗菌剂的动物饲料。典型地，预混合物掺入到动物饲料的量要使得所得的每吨（U.S.）饲料中含有约1-50g泰乐菌素抗菌剂。例如，优选的牛饲料为每吨饲料中含约5-10g的泰乐菌素抗菌剂，而优选的猪饲料为每吨饲料中含约20-40g泰乐菌素抗菌剂。
为了便于进一步理解本发明及其优选的特征，下面提供几个具体的实施例。应当理解的是，这些实施例只是解释本发明，并不限制本发明。
实施例
预混合物和饲料组合物的制备
依据本发明制备泰乐菌素含量约为275mg/g的动物饲料预混合物。将42.6份轧碎的玉米穗、49.4份的浓度为37.3mg/g的泰乐菌菌素（磷酸盐）的水溶液和8.0份50%K2HPO4水溶液充分地混合，所得物料经干燥制成含有约275mg/g泰乐菌素和6%K2HPO4的含药预混组合物。更具体地说，首先将3175g40-60目的轧碎玉米穗（Anderson′s Cob Division Processing Group，Maumee，Ohio，U.S.A）送入螺旋叶片式搅拌机，然后把3686g 37.3mg/g的泰乐菌素磷酸盐水溶液（相当于约1375g泰乐菌素）加入到搅拌机中的轧碎玉米穗中，将物料混合10分钟，再加入600g 50%的K2HPO4溶液，所得的含有轧碎玉米穗、泰乐菌素和缓冲剂的物料再混合10分钟以确保物料充分打散。所得制品可装盘在干燥箱中干燥或者在流化床干燥器中干燥。将干燥后的饲料过筛除去大块的颗粒，而这些大块的颗粒经加工例如经Fitz磨处理破碎后返回到物料中。
其它的预混合物用类似的方法制造，只是轧碎的玉米穗、37.3mg/g的泰乐菌素磷酸盐溶液和50%K2HPO4缓冲溶液的比例有所改变。按下列比例混合原料，可制得泰乐菌素含量为275mg/g、缓冲剂含量分别为3、5、8、10和12%（重量百分比）的预混合物：46.6份轧碎玉米穗/49.4份泰乐菌素磷酸盐溶液/4.0份K2HPO4溶液;44.6份轧碎玉米穗/48.8份泰乐菌素磷酸盐溶液/6.6份K2HPO4溶液;41.8份轧碎的玉米穗/47.8份泰乐菌素磷酸盐溶液/10.4份K2HPO4溶液;41.9份轧碎玉米穗/45.7份泰乐菌素磷酸盐溶液/12.4份K2HPO4溶液;38.2份轧碎玉米穗/46.6份泰乐菌素磷酸盐溶液/15.2份K2HPO4溶液。所得物料如上述那样干燥和加工，并用于下面的稳定性试验。
预混合饲料组合物的稳定性试验
测定上述制得的动物饲料预混合物的稳定性，测定条件为干热或湿热，单独或与高脂猪饲料“SW 90”混合后测定。含药预混合物中泰乐菌素的稳定性可通过监测整个时间内试样中泰乐菌素因子B的%量来测定，或者通过自动浊度分析（autoturbidometric analysis）监测试样生物产量的保留值（bio yield values）来测定。图1和表1至5列出了试验的结果，表明依本发明制备的预混合物和饲料组合物获得了优异的稳定性。
图1列出了按上述方法制备并与SW 90混合，分别含3%、5%、6%和10%的缓冲剂的预混合物，为期9周的（37℃，75%相对湿度）稳定性试验的结果。如图所示，在湿热条件下，泰乐菌素的稳定性随着缓冲剂含量的增加而增加（即，在预混合物中，较高的缓冲剂含量使得在试验期间泰乐菌素因子B的产生量降低）。
表1和表2列出了含3%、6%和12%缓冲剂的预混合物（如上制备）中泰乐菌素的稳定性。测定结果是分别在80℃和120℃下监测整个过程中预混合物中泰乐菌素因子B的%含量得到的。可以看出，获得了很好的稳定性，且预混合物中泰乐菌素的干热稳定性随着缓冲剂含量的增加而增加。
表1在80℃下干热5小时
试样ID 处理前因子B% 处理后因子B%
玉米穗上的泰乐菌素 4.8 7.5
含3%重量的缓冲剂
玉米穗上的泰乐菌素 4.4 4.8
含6%重量的缓冲剂
玉米穗上的泰乐菌素 3.4 3.5
含12%重量的缓冲剂
表2在120℃下干热21/2小时
试样ID 处理前因子B% 处理后因子B%
玉米穗上的泰乐菌素 4.8 37.9
含3%重量的缓冲剂
玉米穗上的泰乐菌素 4.4 16.1
含6%重量的缓冲剂
玉米穗上的泰乐菌素 3.4 7.4
含12%重量的缓冲剂
下面的表3、4和5列出了试样的干热稳定性（在80℃下6小时），试样是本发明的预混合物及其与SW 90混合制得的动物饲料组合物。具体地说，表3列出了在干热处理6小时之前和之后试样的生物产量值。更具体地说，表3记录的是经过6小时干热处理之后，含有3%缓冲剂的预混合物（如上述制备）所保持的生物产量占初始生物产量值的百分数。对于将含3%缓冲剂的预混合物和SW 90混合而得到的泰乐菌素最终浓度为13.8mg/g的动物饲料，记录了类似的百分数。
表4和5列出了类似的稳定性试验结果，试样是含5%缓冲剂的预混合物（如上述制备）及其与SW 90混合制得的泰乐菌素最终浓度为13.8mg/g的动物饲料。表4列出的是在干热处理6小时之前和之后预混合物中及动物饲料中泰乐菌素因子B的%量，而表5列出的是在处理之后此试样中所保持的生物产量占初始生物产量值的百分数。结果进一步表明本发明的预混合物和动物饲料组合物中的泰乐菌素具有优异的稳定性。同样，随着缓冲剂含量的增加泰乐菌素的稳定性也有所增长。
表3干热箱，80℃，6小时
样品 保持的生物产量%
玉米穗上的泰乐菌素 97.6
含3%重量的缓冲剂
玉米穗上的泰乐菌素 86.8
含3%重量的缓冲剂与
SW 90混合(13.8mg/g)
表4干热箱，80℃，6小时
试样 处理前的因子B% 处理后的因子B%
玉米穗上的泰乐菌素 4.2 4.7
含5%重量的缓冲剂
玉米穗上的泰乐菌素 4.6 4.6
含5%重量的缓冲剂与
SW 90混合(13.8mg/g)
表5干热箱，80℃，6小时
试样 保持的生物产量%
玉米穗上的泰乐菌素 100+
含5%重量的缓冲剂
玉米穗上的泰乐菌素 98.3
含5%重量的缓冲剂与
SW 90混合(13.8mg/g)