无支原体新生牛血清生产工艺.pdf

本发明涉及一种新生牛血清的生产工艺，特别是一种能可靠去除支原体的新生牛血清生产工艺。
    新生牛血清是一种用于科学研究和疫苗生产的重要原辅材料。现有技术中用于生产牛血清的生产工艺为：用消毒的血清瓶对新生小公牛进行采血，待其自然凝固析出血清后倒入已消毒的离心杯内进行分离，收集上层血清。待收集到一定数量的血清后，先用石棉滤板澄清过滤，再用孔径为0.45和0.22微米的石棉滤板除菌过滤，然后进行分装，冷藏保存。上述技术仅用0.45和0.22微米孔径的石棉滤板进行除菌过滤，而0.45和0.22微米孔径的滤板只能去除细菌和真菌。由于在操作过程中的感染牛血清中还存在一种个体最小直径仅为0.125微米的微生物-支原体，它能通过0.22微米孔径的滤板而继续存在于牛血清中，使得牛血清的质量品位下降，无法满足生物工程技术研究的需要。

    本发明的目的是要提供一种生产牛血清的新工艺通过该工艺的实施，可有效地去除牛血清中的支原体。

    本发明工艺在工业生产中是这样实施的：将出生12小时之内的小公牛送到经消毒后地采血间内，用自来水清洗净牛身，然后将牛固定在采血台上，并对颈动脉手术部位进行严格消毒，做好术前准备工作。从颈动脉切口处插入消毒采血管，并将采血管的另一头通入无菌室内的无菌箱内，用250毫升盐水瓶接血。采得的牛血在常温下进行自然凝固析出血清，再移入温度为4摄氏度的冰箱内冷藏12小时，以进一步析出血清。小瓶全血用天平平衡后以3000转/分速度离心分离30分钟，收集上层血清，装入已消毒的1万毫升血清瓶内并在零下30摄氏度中冷藏。本发明的澄清过滤和除菌过滤分别用新华滤纸和滤膜来取代石棉滤板，以防毒性物质浸入血清内。先用新华滤纸进行澄清过滤，再用0.45微米和0.22微米孔径的滤膜进行除菌过滤。本发明技术在除菌过滤工序后，再增加一道去除支原体过滤工序，该工序采用孔径小于支原体个体最小直径的滤膜过滤支原体。如孔径为0.08～0.12微米的滤膜。从工艺上考虑，采用0.1微米的聚亚乙烯氟滤膜。为了加快过滤速度，在过滤支原体工序中，采用密闭容器，并在滤膜的上腔加低压过滤。其压力以不损坏容器、不破坏血清生物成份为好。本发明采用1～2公斤/厘米2压力进行去除支原体过滤。由于支原体的个体最小直径为0.125微米，因此本过滤工序能可靠地去除支原体。经中国药品生物制品检定所抽检24批做支原体检定，其结果均为阴性。经去除支原体过滤后的血清进行分装后在零下30摄氏度温度下冷藏待用。

    本发明采用0.1微米滤膜去除牛血清中的支原体，工艺简单，操作方便，而去除率高达百分之百。效果明显，对生物工程技术研究提供了可靠的保证。