本发明属于杂交稻种子纯度的室内鉴定方法，专用于杂交籼稻、杂交粳稻种子纯度的室内苗期快速鉴定。 多年来杂交稻生产在我国水稻生产中一直占有举足轻重的地位。目前生产上推广应用的杂交稻分为杂交籼稻和杂交粳稻两种，由于杂交水稻为三系制种，混杂种经常出现，为当前生产上的一大问题，尤其是大青棵，田间混杂造成长势混乱不堪。目前国内已有几种种子纯度室内鉴定法的报导，如同功酶法（见《种子》1984年第3期P15～18），操作麻烦，需进行电泳过程的制胶、灌胶等复杂程序，操作中专业性强等，另一种室内鉴定法是荧光扫描法（见《北京农业》1991年第7期P.11），用于种子鉴定速度较快，但所用的仪器较昂贵，成本高，而且只能用于籼稻。目前的室内鉴定法都不能鉴定出大青棵，只能鉴定小样，无法适应大面积种子鉴定的需要，因此，到目前为止，一直是把种子运到海南岛进行田间鉴定，时间达6个月，耗资也大，仅1990年江苏省杂交稻种子赴海南岛进行种子纯度鉴定国家补贴费达30万元。因而种子成本增加，而且调种速度也受到很大影响。
本发明的目的是提供一种杂交稻种子纯度的室内鉴定法，用该方法鉴定种子纯度速度快，成本低，操作简单，能鉴定籼稻和粳稻的各种类型混杂株，适应大面积种子鉴定的需要。
实现本发明所提供的杂交稻种子纯度的室内鉴定法，步骤如下：
1）计量杂交稻种子，
2）将杂交稻种子置于30～50℃条件下20～30小时，
3）30～35℃条件下浸种催芽3天，
4）将催芽后的种子播在湿纱布上，以保持湿度，温度控制在30～40℃，见光10～15小时/天，4～5天后，
5）测量苗高，观察第一真叶：叶长、叶宽、叶色及第二真叶出叶速度，
6）对照表1，将苗分类计数，再计算其杂交稻种子的纯度。
表1 杂交籼稻、杂交粳稻及其混杂株性状比较
不同类型的水稻对环境条件的反映有不同的差异，在特殊的光温条件下可以引起各种类型水稻特征性状地表现，据此，本发明首先研究并试验了苗期快速鉴定的环境条件。
杂交稻的混杂株主要为它们的（1）不育系，（2）保持系，（3）大青棵（籼型杂种中为籼A×粳不育株，粳型杂交种中为粳A×籼不育株）（4）常规稻或其它。针对以上当前生产上杂种水稻的混杂株，分别进行温度反应试验，光照时间试验，光温处理开始和结束时间试验，大青棵的鉴定试验以及常规稻等的鉴定试验。试验结果表明，
1）杂交稻和不育系、保持系在不同的温度条件下叶片长度有明显差异，以30℃为分界点，30℃以下第一片叶片长差异不大，30℃以上差异明显，杂交籼稻和杂交粳稻也与其不育系、保持系的差异均在4cm以上。
2）相同温度下，长时间光照，杂交稻与其不育系、保持系的差异较为明显，由此建立了鉴定方法的室内光照适合条件为10～15小时/天。
3）高温处理不同芽长、苗长的水稻苗，杂种和不育系、保持系的第一片真叶叶长差异都是明显的，但是，为了避免高温对发芽率、发芽势和出苗率的影响，以芽长1mm时（即催芽3天后）处理最佳，处理延续时间可以至第一片真叶生长到10～15cm（即处理4～5天）。处理后的杂种、不育系、保持系除了叶片生长量的差异外，籼型杂交稻还有叶色淡、叶片开展度，基部紫色深淡等特征，杂交粳稻幼苗处理后的不育系、保持系和杂种在生长量上也有明显差异，所以幼苗快速鉴定是苗的生长量（苗高）、第一真叶的叶长、叶色、第二真叶出叶速度等指标的综合鉴定，由此建立了鉴定方法的光温条件。
4）在杂交稻的栽培中，大青棵的混杂是影响产量的一个重要原因，这多半是由于制种时隔离不当产生的，为此人工配制了籼A×粳或粳A×籼进行以上处理与鉴定，并与杂种不育系、保持系相比较，看出籼A×粳的大青棵不育株，第一真叶都比杂种短，与不育系、保持系相仿，但是要比不育系、保持系窄。苗高比不育系、保持系稍矮，基部叶鞘紫色无或偏淡，偏向父本粳型，但粒型为籼型;粳型杂交稻中大青棵则相反，幼苗第一真叶长、叶宽、出叶速度明显表现父本籼型特征，但粒型为粳型，说明大青棵的叶型是偏父本的，由此获得了表1中在本发明鉴定方法中大青棵的幼苗特征。
5）处理后的常规稻和籼A×籼、粳A×粳等的特征表现为叶长、宽均低于杂种，常规籼稻基部无色，这些特征也体现在表1中，可以用于区别杂种。
在杂交稻纯度苗期鉴定方法确定以后，1989年冬起，连续3年对汕优63（籼型杂交稻）种子样品221份和六优1号（粳型杂交稻种子样本）30余份进行了种子纯度的室内鉴定，与此同时，由镇江地区农科所在海南和江苏句容两地进行田间种植鉴定，每份样品鉴定500～1000苗，表2说明室内鉴定结果与海南岛及本省田间鉴定结果都比较一致，误差小，杂株平均误差在±1%左右，大青棵鉴定平均误差在+0.15%以内。
表2：汕优63、六优一号室内纯度鉴定结果与田间种植结果比较
本反映所提供的室内种子纯度鉴定方法除鉴定结果准确外，还具有如下优点：
1）方法简便，一般工作人员即可操作，
2）速度快，一批样品只需7～8天即可拿出纯度鉴定结果，
3）成本低廉，由于不需购置特殊仪器设备，只需一个温室或保温箱即可，自制一只一次能鉴定30～35个样本的保温箱，每样品鉴定400～500苗，温度误差±2℃，光照200～300lx，由于每处理一批样品需3天浸种催芽，5天保温箱培养幼苗，5只保温箱一月可鉴定800～900个样本，操作2～3人，连续工作5个月可鉴定4000～5000个样本与海南岛鉴定样本费用比，本法只占南繁费用的1/3，大大节约了人力、财力。
4）不受季节、气候限制，适合于大面积种子纯度鉴定，及时为调种提供依据，保证了种子质量。
5）本法不仅用于籼稻，也可用于粳稻，对照表1，还可查出其不育系，保持系，及大青棵的温杂状况，从中找到混杂原因，及时返回到生产上加以纠正。
图1为杂交稻种子纯度室内鉴定方法步骤图
实施例1：1989年冬季，对江苏镇江农科所提供的汕优63种子样品进行鉴定，共数70份样本，每份样本1000粒，将所取种子样本放在30℃温箱内预处理30小时，取出样本在35℃温箱内浸种催芽3天后，已达到匀苗的程度，芽长1mm左右。在温箱内铁丝网架上铺上5层湿纱布，将催芽种子播在温箱内湿沙布上，温箱内温度控制在30℃，光照控制在10小时/天，4天后取出幼苗进行检查苗高及第一真叶的叶长、叶宽、叶色，第二真叶速度，对照表1所提供的数据将幼苗进行分类计数，再将杂种幼苗数除以总幼苗数，则得到该样本的纯度，70个样本的纯度平均值为98.14%，同时在海南进行鉴定纯度平均值为97.5%，相差+0.64%，结果一致。
实施例2：1990年春采用上述汕优63种子样本49份，每份样本500粒，将选取的种子样本放在恒温箱内50℃预处理20小时后，将种子样本置于30℃恒温箱内进行浸种催芽3天，达到苗匀齐，芽长1mm左右，取出幼苗播于温箱内铺好的8层湿沙布上，温度控制40℃，见光15小时/天，4天后观察苗高，第一真叶的叶长、叶宽、叶色，第二真叶出叶速等，对照表1，将幼苗分类、计数，计算得到样品种子纯度平均为97.6%，与此同时在江苏句容田间种植的鉴定纯度平均值98.35%相比，相差-0.75%，结果一致。
实施例3：1990年冬，选用上述汕优63样品71份，样品种子预处理温度为40℃，24小时后，将种子在32℃恒温箱内浸种催芽3天，然后将种子播在温箱内的湿沙布上，温度控制在36℃，光照控制在12小时/天，4天后取出幼苗观察，查表，得到纯度的计均值为96.6%，与海南鉴定的平均值97.8%相差-1.24%，差异不明显。
实施例4：1991年冬，选用上述汕优63样本30份，将样本种量于45℃预处理28小时，将种子在34℃恒温箱内浸种催芽3天，将种子播在温箱内的湿沙布上，温度控制在36℃，见光14小时/天，4天后观察幼苗，并查得纯度平均值为97.1%，与海南鉴定纯度平均值96.14%相差0.96%，大青棵鉴定差异+0.13%，结果一致。
实放施例5：1991年冬，选用由江苏省泗洪县原种场提供的杂交粳稻六优一号种子样本，称量样本30余份，每份25克，将称取的样本50℃预处理24小时后，在33℃恒温箱内浸种催芽3天，将种子播在温箱内的湿纱布上，温箱温度控制34℃，光照控制在15小时/天，5天后，查苗，对照表1得出种子纯度平均值96.2%，与田间鉴定平均值97.1%相差-0.9%，大青棵差异在-0.11%，说明鉴定结果比较理想。