本发明涉及含有适合于制备含环孢菌素的软胶囊的稳定的微滴乳状液浓缩物的软胶囊组合物。更具体地讲，本发明涉及一种适合于配制成软胶囊的微滴乳状液浓缩物，其含有环孢菌素作为活性成分，二甲基异山梨醇（dimethylisosorbide）作为辅助表面活性剂、油组分和表面活性剂，还涉及含有所述微滴乳状液浓缩物的软胶囊。 环孢菌素是一种特异的含11个氨基酸的大分子（分子量为1202.64）环肽化合物，它具有有用的药理活性，特别是免疫抑制活性和抗炎活性。因此，环孢菌素已用于抑制源于活体的免疫反应，此免疫反应由组织和器官移植例如心脏、肺、肝、肾、胰腺、骨髓、皮肤和角膜移植，特别是外源组织和器官的移植引起。另外，环孢菌素还可用于抑制自身免疫疾病和炎症如关节炎等。
环孢菌素亲脂性和疏水性高，在25℃水中的溶解度为每升水16-23mg环孢菌素。由于其低水溶性，环孢菌素的生物利用度特别低。另一方面，由于其高亲脂性特性，环孢菌素可很好地溶解在有机溶剂中，如甲醇、乙醇、丙酮、乙醚、氯仿等。
与其它在水中难溶的传统药物一样，由于其低水溶性和生物利用度，环孢菌素很难配制成口服制剂，另外，由于环孢菌素的生物利用度受每个具体病人的状况影响很大，它很难提供有效地治疗效果。
另外，提供统一剂量和适当生物利用度是很重要的，以使环孢菌素的有效性与其相当大的毒付作用如肾毒性、肝毒性等抗衡。因此，进行了大量广泛细致的研究以发现适合于环孢菌素有效口服的制剂。
现有技术中适合于难水溶的环孢菌素口服的制剂一般配制成微滴乳状液形式。在制备液体微滴乳状液制剂时，环孢菌素应与表面活性剂、油及辅助表面活性剂结合。一种利用这种结合的方法在1983年6月14日公开的美国专利No.4，388，307中有教导。此专利公开了一种用乙醇作为辅助表面活性剂的环孢菌素的液体制剂。这样环孢菌素与由作为辅助表面活性剂的乙醇、植物油和天然植物油酯基转移作用产品甘油三酯和聚亚烷基二醇作为表面活性剂所组成的载体结合，以形成液体制剂。但是，形成的液体制剂要以水稀释物形式服用，使得很难正确配制提供统一口服剂量的制剂。
为了减少口服前在水中稀释环孢菌素液体组合物的要求，将微滴乳状液浓缩物形式的液体组合物配制成软胶囊制剂，该软胶囊制剂现在以商标SandimmuneR在市场上出售。由于环孢菌素的溶解性要求，在这种环孢软胶囊制剂中含有大量乙醇作为辅助表面活性剂。但是，由于乙醇沸点低，它甚至在常温下也可以透过胶囊明胶膜挥发，所以软胶囊中成分的组成比例在贮存过程中变化。乙醇含量减少引起环孢菌素生物利用度的明显差异，更严重的问题是当软胶囊在低温下贮存时环孢菌素结晶。
为了防止贮存和分配过程中乙醇从软胶囊制剂中挥发，用包装材料如铝膜泡沫包装包裹软胶囊制剂。但是，这种特异性包装不能完全保持被包裹胶囊组合物的统一。通过实验已经说明，尽管环孢菌素软胶囊被包裹在铝膜泡沫包装中，一周后乙醇含量由开始的10.8%下降到7.9%。这引起生物利用度的很大差异，还可能增加其价格。
为了解决用乙醇作为辅助表面活性剂的上述缺点，提出了使用非乙醇成分作为辅助表面活性剂的方法。韩国专利公开No.90-4348（1990年4月12日）公开了一种含有非乙醇成分的微滴乳状液浓缩物形式的药物组合物。此非乙醇组分包括药用C1-5烷基或四氢化糠基与低分子量单-或聚-氧-亚烷基二醇的二醚或部分醚，例如二甘醇单乙醚〔如transcutol〕或聚乙二醇四氢化糠基醚〔如Glycofurol〕、或1，2-丙二醇作为辅助表面活性剂。但是，上述非乙醇辅助表面活性剂为在它们的结构中含有-OH基团的二醇。已经证实含OH基团的二醇在配制软胶囊时产生问题，因为它的强吸附性能足以从大气中吸附水分，还因为它对软胶囊的明胶膜有高度穿透性。
因此，本发明者研究了大量添加剂包括各种溶剂，以发现能够提供适合于将环孢菌素配制成软胶囊制剂的微滴乳状液浓缩物的辅助表面活性剂。结果，发现一种药用溶剂二甲基异山梨醇〔商标名：ArlasoveRDMI，ICI Specicality Chemicals有售〕为达到此目的完成本发明的适当溶剂。
因此，本发明的目的是提供含二甲基异山梨醇作为辅助表面活性剂的微滴乳状液浓缩物，其适合于配制成口服软胶囊。
本发明的另一个目的是提供适合于配制成软胶囊的微滴乳状液浓缩物，其含有环孢菌素作为活性成分、二甲基异山梨醇作为辅助表面活性剂、油成分和表面活性剂。
另外，本发明的另一个目的是提供本发明的软明胶胶囊组合物，其贮存稳定性高，因此组合物随时间的变化很小。
为了更好地理解以下本发明的详细描述和本发明对本领域的贡献，以上描述了本发明更相关及更重要的性质。本领域技术人员会认识到这里公开的概念和具体方案可容易地用作为达到本发明的相同目的而进行修饰或设计其它结构的基础。另外，本领域技术人员会意识到不脱离权利要求中提出的本发明的精神和范围的等价组成。
为了彻底理解本发明的性质和目的，应该参考以下详细描述和附图。
其中图1为表明口服实施例1中含有二甲基异山梨醇作为辅助表面活性剂的环孢菌素微滴乳状液浓缩物（△-△）和含有乙醇作为辅助表面活性剂的环孢菌素微滴乳状液浓缩物（○-○）后血液浓度随时间的变化曲线，及
图2为表明口服实施例6中含有二甲基异山梨醇作为辅助表面活性剂的环孢菌素微滴乳状液浓缩物（●-●）和含有乙醇作为辅助表面活性剂的环孢菌素乳状液浓缩物（○-○）（SandimmunR）后血液浓度随时间的变化曲线。
一方面，本发明涉及含有环孢菌素作为活性成分、二甲基异山梨醇作为辅助表面活性剂、油成分和适合于配制口服软胶囊的表面活性剂的微滴乳状液浓缩物。
第一主要成分环孢菌素是本发明的微滴乳状液浓缩物的活性成分。如上所述本领域已知的那样，环孢菌素是具有有用的免疫抑制活性和抗炎活性的环肽化合物。虽然环孢菌素A、B、C、D、G等都可在本发明中作为环孢菌素成分，但最优选环孢菌素A，因为本领域已确立了它的临床有效性和药理性质。
本发明的微滴乳状液浓缩物中的第二主要组分二甲基异山梨醇辅助表面活性剂是下面的结构式代表的化合物。二甲基异山梨醇已被用作局部用药药物组合物中的皮肤通透刺激剂。二甲基异山梨醇的化学名是1，4∶3，6-二脱水-2，5-二甲基-D-葡糖醇。
〔1，4∶3，6-二脱水-2，5-二甲基-D-葡糖醇〕
因为二甲基异山梨醇沸点高（234℃），它既使在如制备软胶囊所需高温下也不挥发。另外，二甲基异山梨醇不含任何羟基（-OH），因此其吸湿性能很低并且不会穿透软胶囊的明胶膜。最重要的是环孢菌素在二甲基异山梨醇中溶解良好，这是对制备如上定义的适当的微滴乳状液的贡献。
因此，在本发明的微滴乳状液浓缩物中使用二甲基异山梨醇作为辅助表面活性剂提供了一些优势。即当将微滴乳孔状液浓缩物配制成软胶囊时，在贮存过程中浓缩物的组成不变，保持其中所含组分的含量基本一致，从而比基于乙醇的组合物保证组合物含量一致的时间长。
在本发明的微滴乳状液浓缩物中，所用二甲基异山梨醇的比例为每重量份环孢菌素1-3重量份，优选1.5-2重量份，最优选1.8重量份。
用于本发明的微滴乳状液浓缩物中的第三个组分是油。适合用于本发明的油组分包括任何可药用的动物或植物油。因此优选使用中性动物油和植物油，例如蓖麻油或玉米油，特别是富含不饱和脂肪酸的碘价为100-200的动物油，例如纯化鱼油和羟基价为150的植物油，例如蓖麻油。在这些油中，最优选纯化鱼油或蓖麻油。纯化鱼油最适合吸收环孢菌素，因为它含有高度不饱和脂肪酸EPA（二十碳五烯酸）和DHA（二十二碳六烯酸），含量分别为18%或更多和12%或更多，不饱和脂肪酸总含量为30%或更多，这使得可以吸收环孢菌素。含有羟基（-OH）比例为80%或更多的蓖麻油酸的蓖麻油，具有增加环孢菌素溶解度的作用，因此可以防止在长期贮存过程中环孢菌素沉淀。
本发明的油组分可包括选自上述油的单一油或选自上述油的混合物。但优选两种或多种上述油的混合物。当使用两种或多种油成分的混合物时，优选在所述混合物中有至少一种动物油和至少一种植物油。最优选含纯化鱼油和蓖麻油（重量比为5-7∶3-5）的油混合物。
另外，必要时油组分中可包括适量的饱和脂肪酸如辛酸/癸酸甘油三酯〔商标：Miglyol 812;Dynamit Nobel Chemikalien〕以控制环孢菌素的吸收。当向油组分中加入这种饱和脂肪酸时，可以调节环孢菌素的吸收方式，以减少与环孢菌素制剂有关的典型付作用的发生。
用于本发明微滴乳状液浓缩物的第四种主要组分是表面活性剂。适用于本发明的表面活性剂包括能够稳定地乳化包括含环孢菌素的油成分的亲脂性部分和包括水中辅助表面活性剂的亲水性部分以形成稳定的微滴乳状液的任何药用表面活性剂。本发明最优选的表面活性剂包括聚氧亚乙基甘醇酸酯化的天然或氢化的植物油、天然植物油的转酯基反应产物甘油三酯和聚亚烷基聚醇、脱水山梨醇脂肪酸酯、聚氧亚乙基-脱水山梨醇脂肪酸酯、聚氧亚乙基醇等，例如蓖麻油与环氧乙烷的反应产物（其以商标CREMOPHOR（BASF）在市场上有售）、2摩尔天然植物油和1摩尔聚乙二醇的转酯基反应产物（其在市场上以商标LABRAFIL（Etablissement Gatte-fosse）出售）、单和三月桂酰基、棕榈酸基、硬脂酰基和油酰基酯（在市场上以商标TWEEN（Lippo Chemicals）出售）、脱水山梨醇脂肪酸酯（其在市场上的商标SPAN（Lippo Chemicals）出售）和聚氧亚乙基醇（其在市场上以商标BRIJ（BASF）出售）。在这些表面活性剂中，最优选Labrafil M 1944CS（apricot kernel oil PEG-6酯）和HLB值为14.0-15.0的Tweens。表面活性剂可包括上述表面活性剂的单独一种，优选与选自上述表面活性剂的一种或多种表面活性剂结合使用。
在本发明的微滴乳状液浓缩物中，四种主要组分的比例优选为环孢菌素：辅助表面活性剂∶油∶表面活性剂=1∶1-3∶1-5∶2-10，更优选比例为环孢菌素：辅助表面活性剂∶油∶表面活性剂=1∶1.5-2∶3-5∶2-7（重量）。本发明最优选的微滴乳状液浓缩物组成为环孢菌素、二甲基异山梨醇、Labrafil和纯化鱼油，其比例为1∶1.8∶3∶4.6（重量），除此组成外，还可提及在以下实施例中说明的组成进一步作为本发明的优选组成。
为了口服，根据本发明，具有上述组成的微滴乳状液浓缩物可配制成软胶囊形式。在配制软胶囊时，除上述微滴乳状液外，该胶囊制剂需要时进一步还可含有通常用于软胶囊制剂中的药用佐剂、赋形剂和添加剂。这种添加剂包括如卵磷脂、粘度调节剂、香料（如薄荷油等）、抗氧化剂（如生育酚等）、防腐剂（如熊去氧胆酸等）、着色剂、甘油、山梨醇、明胶等。
本发明的软胶囊制剂可用软胶囊制剂的传统方法制备。例如，先将环孢菌素溶解在二甲基异山梨醇中，同时温和加热至大约60℃，然后将油组分和表面活性剂加到形成的混合物中，将整个混合物混合均匀。然后将形成的微滴乳状液浓缩物引入制备软胶囊的机器中，同时加入或不加入上述传统用于软胶囊制剂中的药用添加剂，以制备目标产品适当的环孢菌素软胶囊。根据本发明如此制备的软胶囊组合物，当口服时出现与现有技术含乙醇软胶囊制剂可比的环孢菌素血药水平。另外，本发明的软胶囊组合物在长期贮存中保持稳定无变化。因此，很明显本发明提供了环孢菌素软胶囊制剂方面的明显改进。
通过下列实施例更具体地说明本发明。但这些实施例不应理解为对本发明任何方面的限制。
实施例1
将2.5g环孢菌素A加到4.5g二甲基异山梨醇（ArlasolveRDMI）中。搅拌下加热混合物至60℃以溶解环孢菌素。向形成的溶液中加入7.5g Labrafil M 1944CS（apricot kernel oil PEG-6酯）和11.5g纯化鱼油，充分搅拌混合物直到形成均一的微滴乳状液浓缩物。将这样得到的微滴乳状液浓缩物引入到制备软胶囊的机器中，调节该机器使每个软胶囊中注入0.26g向滴乳状液浓缩物，制备在明胶壳内含有环孢菌素微滴乳状液浓缩物的软明胶胶囊。
实施例2
按照实施例1中相同步骤制备具有下列组成的软明胶胶囊，只是作为辅助表面活性剂的二甲基异山梨醇的用量不同。
2-A 组分 含量（mg/胶囊）
环孢菌素 25
二甲基异山梨醇（ArlasolveRDMI） 25
Labrafil M 1944 CS 75
纯化鱼油 115
总计 240mg
2-B 组分 含量（mg/胶囊）
环孢菌素 25
二甲基异山梨醇（ArlasolveRDMI） 65
Labrafil M 1944 CS 75
纯化鱼油 115
总计 280mg
实施例3
按照实施例1相同的步骤制备具有下列组成的软明胶胶囊，只是表面活性剂用Labrafil和另一表面活性剂的混合物代替单独Labrafil。
3-A 组分 含量（mg/胶囊）
环孢菌素 25
二甲基异山梨醇（ArlasolveRDMI） 45
Labrafil M 1944 CS 75
Tween 80 5
纯化鱼油 115
总计 265mg
3-B 组分 含量（mg/胶囊）
环孢菌素 25
二甲基异山梨醇（ArlasolveRDMI） 45
Labrafil M 1944 CS 75
Cremophor EL 5
纯化鱼油 115
总计 265mg
3-C 组分 含量（mg/胶囊）
环孢菌素 25
二甲基异山梨醇（ArlasolveRDMI） 45
Labrafil M 1944 CS 75
Span 20 5
纯化鱼油 115
总计 265mg
3-D 组分 含量（mg/胶囊）
环孢菌素 25
二甲基异山梨醇（ArlasolveRDMI） 45
Labrafil M 1944 CS 75
Brij 35 5
纯化鱼油 115
总计 265mg
实施例4
按照产施例1的相同步骤制备具有下列组成的软明胶胶囊，只是油成分和它的含量变化。
4-A 组分 含量（mg/胶囊）
环孢菌素 25
二甲基异山梨醇（ArlasolveRDMI） 45
Labrafil M 1944 CS 75
纯化鱼油 55
总计 200mg
4-B 组分 含量（mg/胶囊）
环孢菌素 25
二甲基异山梨醇（ArlasolveRDMI） 45
Labrafil M 1944 CS 75
纯化鱼油 115
总计 320mg
4-C 组分 含量（mg/胶囊）
环孢菌素 25
二甲基异山梨醇（ArlasolveRDMI） 45
Labrafil M 1944 CS 75
纯化鱼油 115
辛酸/癸酸甘油三酯 40
总计 300mg
4-D 组分 含量（mg/胶囊）
环孢菌素 25
二甲基异山梨醇（ArlasolveRDMI） 45
Labrafil M 1944 CS 75
玉米油 115
总计 260mg
4-E 组分 含量（mg/胶囊）
环孢菌素 25
二甲基异山梨醇（ArlasolveRDMI） 45
Labrafil M 1944 CS 100
蓖麻油 115
总计 285mg
4-F 组分 含量（mg/胶囊）
环孢菌素 25
二甲基异山梨醇（ArlasolveRDMI） 45
Labrafil M 1944 CS 80
纯化鱼油 69
蓖麻油 46
总计 265mg
实施例5
按照实施例1的相同步骤制备具有下列组成的软明胶胶囊，只是在配制成软胶囊以前另外向微滴乳状液中加入薄荷油（香料）和生育酚（抗氧化剂）。
组分 含量（mg/胶囊）
环孢菌素 25
二甲基异山梨醇（ArlasolveRDMI） 45
Labrafil M 1944 CS 75
纯化鱼油 115
薄荷油 20
生育酚 5
总计 285mg
实施例6
按照实施例1相同的步骤制备具有下列组成的软明胶胶囊。
组分 含量（mg/胶囊）
环孢菌素 25
二甲基异山梨醇（ArlasolveRDMI） 50
Labrafil M 1944 CS 75
纯化鱼油 115
蓖麻油 3.5
d-a-生育酚 1.5
总计 270mg
实施例7
室温贮存一段时间后检测根据本发明用二甲基异山梨醇（ArlasolveRDMZ）作为辅助表面活性剂制备的软胶囊中二甲基异山梨醇的膜穿透性能，然后与乙醇、丙二醇、transcutol（二甘醇单乙醚）和glycofurol（聚乙二醇四氢化糠基醚）的膜穿透性能比较。用气相色谱分析每个软胶囊制剂中辅助表面活性剂的含量。用于此实验的组合物中的成分和它们的组成比例列在下表1中，实验结果列在下表2中。
注：每种辅助表面活性剂的气相色谱条件
1）二甲基异山梨醇-
柱：ultra2（交联的2%苯基甲基聚硅氧烷相，25m×0.32mm，厚度0.52μm）
柱温：230℃（等温的）
检测器：FID（温度：270℃）
进样温度：275℃
载气：He（分压比80∶1）
进样体积：5μl
内标：辛醇
2）乙醇-
柱：HP-20M（Carbowax 20M）
（25m×0.32mm，膜厚度0.3μm）
柱温：30℃（等温的）
检测器：FID（温度：270℃）
进样温度：150℃
载气：He（分压比80∶1）
进样体积：5μl
内标：乙醚
3）丙二醇-
柱：HP-20M（Carbowax 20M）
（25m×0.32mm，膜厚0.3μm）
柱温：180℃（等温的）
检测器：FID（温度：240℃）
进样温度：240℃
载气：He（分压比80∶1）
进样体积：5μl
内标：十五烷酸甲酯
4）Transcutol-
柱：ultra 2（交联的2%苯基甲基聚硅氧烷相，25m×0.32mm，厚度0.52μm）
柱温：230℃（等温的）
检测器：FID（温度：270℃）
进样温度：270℃
载气：He（分压比80∶1）
进样体积：5μl
内标：十五烷酸甲酯
5）Glycofurol-
柱：ultra 2（交联的2%苯基甲基聚硅氧烷相，25m×0.32mm，厚度0.52μm）
柱温：230℃（等温的）
检测器：FID（温度：270℃）
进样温度：270℃
载气：He（分压比80∶1）
进样体积：5μl
内标：二甲基异山梨醇
从示于表2中的结果可以看出，根据本发明用作辅助表面活性剂的二甲基异山梨醇的含量甚至50天后仍无变化，而现有技术所用其它辅助表面活性剂仅2天后降至原含量的50%。因此，很容易得出结论，当根据本发明二甲基异山梨醇用作辅助表面活性剂时，它基本不表现膜穿透性，因为在组合物中其含量无明显变化。所以二甲基异山梨醇最适合用于配制本发明的软胶囊制剂。
实施例8
将根据本发明用二甲基异山梨醇作为辅助表面活性剂的微滴乳状液的生物利用度与根据现有技术的含乙醇制剂的生物利用度作比较，以估价二甲基异山梨醇对环孢菌素生物利用度的影响。在此实验中，用兔子作为实验动物。分别用实施例1和实施例6制备软胶囊和用乙醇作为辅助表面活性剂的商品SANDIMMUNER作为实验制剂和对照制剂。在此实验中，实验制剂和对照制剂都以300mg环孢菌素/kg兔的量口服。在相同条件下用传统兔固体饲料组合物统一喂养铁丝笼中兔子计4天或更多。当服用口服制剂后，兔子在木制笼中禁食48小时，在此期间兔子可自由摄取10%的右旋糖溶液。为了减小摩擦在列文氏管表面涂上凡士林后，将直径5mm的列文氏管插入食管30cm深处。将每种实验制剂和对照制剂用50ml水乳化后置于连接在列文氏管上的注射器中。用二甲苯扩张兔耳静脉，然后用肝素处理过的一次性注射器从每只兔的耳静采血，间隔时间为5、15、30、60、90、150和270分钟。向1ml所采血液中加入0.5ml氯化钠饱和水溶液和2ml乙醚，然后振荡混合物5分钟，用5000rpm离心10分钟，分离上清液。收集1ml上清液。然后在活化硅胶Sep-pakR（Waters）中展开。用5ml正己烷洗涤展开的Sep-pak，用2ml甲醇洗脱。在氮气下减压蒸发洗脱液至干。用HPLC（高效液相色谱）分析残余物。HPLC条件：柱μ-BondapakRC18（Waters），流动相CH3CN∶MeOH∶H2O=55∶15∶30，检测210nm，流速1.0ml/min，柱温70℃，灵敏度0.01Aufs（满刻度吸光度单位），进样体积100μl。
结果示于图1和2中，从图1和图2可以看出，因为本发明的软胶囊制剂表现与现有技术中含乙醇制剂基本相同的血药水平，很明显用于本发明的二甲基异山梨醇对软胶囊制剂的稳定性有优越的作用而不影响环孢菌素的生物利用度。
因此，本发明的含环孢菌素软胶囊用二甲基异山梨醇作为辅助表面活性剂有效地延长了胶囊的保存期，而对生物利用度没有不利影响。另外，本发明的环孢菌素的药物制剂克服了含有常规辅助表面活性剂如乙醇、丙二醇、transcutol、glycofurol等的软胶囊的主要问题。也说是说，本发明减小了辅助表面活性剂的膜穿透和由此产生的软胶囊中的组成变化，这种变化可能导致环孢菌素结晶。
虽然在一定详细程度上描述了本发明的优选形式，但本领域技术人员应认识到这样优选形式的公开只是作为例子，在不脱离本发明的精神和范围的情况下还有大量在各部分的详细构成、结合和安排方面的变化。