DAPHMALENINEA衍生物在制备防治肝脏损伤药物中的应用.pdf

本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物、制备方法及其在制备防治肝脏损伤药物上的用途。本发明合成了一个新的Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物，并公开了其制备方法。药理学实验表明，本发明的Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物具有防治肝脏损伤的作用，具有开发防治肝脏损伤药物的价值。

1.  一种具有式III所示结构的Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物及其药学上可接受的盐在防治肝脏损伤药物中的应用，


2.  如权利要求1所述的Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物及其药学上可接受的盐在防治肝脏损伤药物中的应用，其特征为：所述肝脏损伤为化学物质诱导所致的肝脏损伤。

3.  如权利要求2所述的Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物及其药学上可接受的盐在治疗肝脏损伤药物中的应用，其特征为：所述化学物质为D-氨基半乳糖胺。

4.  如权利要求2所述的Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物及其药学上可接受的盐在治疗肝脏损伤药物中的应用，其特征为：所述化学物质为四氯化碳。

Daphmalenine A衍生物在制备防治肝脏损伤药物中的应用
技术领域
本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物、制备方法及其用途。
背景技术
引起肝损伤的原因有多个：1、病毒感染：由多种肝炎病毒引起，具有传染性强，传播途径复杂，流行面广泛，发病率高等特点。2、药物或化学毒物：许多药物和化学毒物都可引起肝脏损伤，发生药物性肝炎或中毒性肝炎。3、酗酒：酒精对肝脏的损害是很严重的，损害的后果包括酒精性肝炎、酒精性脂肪肝、酒精性肝硬化，主要是由于酒精(乙醇)及其代谢产物乙醛的毒性对肝细胞直接损害造成的。4、其他原因：原发和继发的肝脏肿瘤、心功能不全导致肝脏淤血、某些先天性肝脏疾病、静脉高价营养等，都可以造成不同程度的肝损害，这些肝损害的早期表现往往是ALT(转氨酶)或胆红素的升高，不祛除病因，肝脏的损害会进一步加重。目前在我国由于上述原因每年发生肝损伤的人数众多，形势不容乐观。急需研发高效低毒的防治肝脏损伤药物。
肝脏损伤的治疗目前已有的药物存在毒性大、安全性低的问题，从天然产物中寻找化合物或先导化合物并进行结构修饰获得其衍生物，从而得到高效低毒的潜在药物具有重要价值。
本发明涉及的化合物Daphmalenine A是一个2011年发表(Yu Zhang et al.,2011.Daphmalenines A and B:Two New Alkaloids with Unusual Skeletons from Daphniphyllum himalense.Eur.J.Org.Chem.2011,4103–4107)的化合物，我们对化合物Daphmalenine A进行了结构修饰，获得了一个新的Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物，并对其抗肝脏损伤活性进行了评价，其具有抗肝脏损伤活性。
发明内容
本发明公开了一个Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物，其结构为：

本发明Daphmalenine A衍生物(III)可通过下面方法制备：
(1)Daphmalenine A(I)与1,2-二溴乙烷反应得到Daphmalenine A的O-溴乙基衍生物(II)；
(2)Daphmalenine A的O-溴乙基衍生物(II)与吡咯烷发生取代反应制得Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物(III)。


进一步的Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物(III)的制备方法为：
(1)将419mg化合物Daphmalenine A(I)溶于10mL苯，向溶液中加入0.08g的四丁基溴化铵，7.520g的1,2-二溴乙烷和6mL的50％氢氧化钠溶液；混合物在35摄氏度搅拌12h；12h之后将反应液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取两次，合并有机相溶液；然后对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涤4次，再用无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩去除溶剂得到产物粗品；产物粗品用硅胶柱层析纯化，流动相为：石油醚/丙酮＝100:1.5，v/v，收集黄色集中洗脱带即得到Daphmalenine A的O-溴乙基衍生物(II)的黄色固体。
(2)将263mg的Daphmalenine A的O-溴乙基衍生物(II)溶于20mL乙腈当中，向其中加入345mg的无水碳酸钾，84mg的碘化钾和2840mg的吡咯烷，混合物加热回流12h；反应结束后将反应液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取四次，合并有机相；依次用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品；产物粗品用硅胶柱层析纯化，流动相为：石油醚/丙酮＝100:1.5，v/v，收集棕色集中洗脱带即得到Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物(III)的棕色胶状固体183.2mg。
本发明公开的化合物可以制成药学上可接受的盐或药学上可接受的载体。
药效学实验表明，本发明的Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物(III)具有较好的抗肝脏损伤作用。本发明的药学上可接受的盐与其化合物具有同样的药效。
以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
具体实施方式
实施例1 化合物Daphmalenine A的制备
化合物Daphmalenine A(I)的制备方法参照Yu Zhang等人发表的文献(Yu Zhang et al.,2011.Daphmalenines A and B:Two New Alkaloids with Unusual Skeletons from Daphniphyllum himalense.Eur.J.Org.Chem.2011,4103–4107) 的方法。

实施例2 Daphmalenine A的O-溴乙基衍生物(II)的合成
将化合物I(419mg，1.00mmol)溶于10mL苯，向溶液中加入四丁基溴化铵(TBAB)(0.08g)，1,2-二溴乙烷(7.520g，40.00mmol)和6mL的50％氢氧化钠溶液。混合物在35摄氏度搅拌12h。12h之后将反应液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取两次，合并有机相溶液。然后对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涤4次，再用无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为：石油醚/丙酮＝100:1.5，v/v)，收集黄色集中洗脱带即得到化合物II的黄色固体(320mg，61％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ3.84(d,J＝1.6Hz,2H),3.76–3.50(m,5H),3.42(s,2H),3.09(s,1H),2.99(s,1H),2.88(s,1H),2.70(s,1H),2.64(d,J＝19.1Hz,3H),2.45(d,J＝5.6Hz,3H),2.33(s,1H),2.19–2.12(m,5H),2.07(s,1H),1.97(d,J＝9.2Hz,3H),1.84–1.76(m,3H),1.69(s,1H),1.15(s,1H),1.04(s,3H)。
13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ219.71(s),211.07(s),176.65(s),66.24(s),65.38(s),63.59(s),59.42(s),54.79(s),52.18(s),46.22(s),46.01(s),45.50(s),45.27(s),40.33(s),37.86(s),37.61(s),36.27(s),34.26(s),30.89(s),28.52(s),26.04(s),25.24(s),8.50(s)。
HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd for C₂₅H₃₇BrNO₆:526.1804；found 526.1801.


实施例3 Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物(III)的合成
将化合物II(263mg，0.5mmol)溶于20mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾(345mg，2.5mmol)，碘化钾(84mg，0.5mmol)和吡咯烷(2840mg，40mmol)，混合物加热回流12h。反应结束后将反应液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取四次，合并有机相。依次用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为：石油醚/丙酮＝100:1.5，v/v)，收集棕色集中洗脱带即得到Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物(III)的棕色胶状固体(183.2mg,71％)。
¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ3.80(s,1H),3.71(s,3H),3.50(s,2H),3.14(s,1H),3.06(s,1H),2.86(s,1H),2.73(d,J＝2.7Hz,2H),2.67(d,J＝5.3Hz,4H),2.55(s,4H),2.53–2.36(m,4H),2.21–2.15(m,5H),2.16–1.86(m,4H),1.85(d,J＝7.5Hz,2H),1.78(s,1H),1.72(d,J＝10.7Hz,5H),1.14(s,1H),1.08(s,3H)。
¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ219.76(s),211.10(s),176.66(s),66.23(s),63.55(s),61.51(s),59.41(s),54.83(s),54.50(s),53.87(s),52.18(s),46.20(s),46.04(s),45.53(s),45.24(s),40.32(s),37.87(s),37.64(s),36.26(s),30.85(s),28.50(s),25.95(s),25.18(d,J＝8.8Hz),8.42(s)。
HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₂₉H₄₅N₂O₆:517.3278；found:517.3271。

实施例4 Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物防治肝损伤的作用
(一)Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物对D-氨基半乳糖胺(D-galactosamine，D-GalN)诱导的小鼠急性肝损伤的防护作用
1-乙基吡咯烷(化合物IV)为市售分析纯。

小鼠分5组。对照组以生理盐水灌胃(0.3mL·d^-1)，连续7d；且于第7d还要腹腔注射生理盐水(0.15mL·10g^-1)，腹腔注射16h后取血，测AST及ALT活力。D-GalN组、Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物(化合物III)3.0mg·kg^-1组、化合物I组和1-乙基吡咯烷组分别以生理盐水、化合物III、化合物I组和1-乙基吡咯烷灌胃(0.3mL·d^-1)，连续7d；且于第7d还要腹腔注射D-GalN(800mg·kg^-1，0.15mL·10g^-1)，腹腔注射16h后取血，测AST及ALT活力。
表1 Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物对D-GalN诱导的急性肝损伤的防护作用

注：¹⁾p<0.01vs对照组，²⁾p<0.01vs D-GalN组
由表1可知，Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物能有效抑制D-GalN引起的小鼠AST及ALT活性的显著上升。化合物I和1-乙基吡咯烷无此作用。
(二)Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物对CCl₄诱导的小鼠急性肝损伤的防护作用
小鼠分5组，对照组以生理盐水灌胃(0.3mL·d^-1)，连续5d，第6d腹腔注射植物油每只0.1mL·10g^-1；CCl₄组及Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍 生物(化合物III)、化合物I和1-乙基吡咯烷给药组(3.0mg·kg^-1)分别以生理盐水及化合物III、化合物I和1-乙基吡咯烷灌胃(0.3mL·d^-1)，连续5d，于第6d腹腔注射0.1％CCl₄0.1mL·10g^-1。24h后处死动物，取血清测AST及ALT活力。
表2 Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物对CCl₄诱导的急性肝损伤的防护作用

注：¹⁾p<0.01vs对照组，²⁾p<0.01vs CCl₄组
由表2可知，Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物能抑制CCl₄引起的小鼠AST及ALT活性的显著上升。化合物I和1-乙基吡咯烷无此作用。
结论：Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物能有效保护D-GalN引起的小鼠肝损伤，Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物能有效保护CCl₄引起的小鼠肝损伤，可以用来制备抗肝损伤药物。化合物I和1-乙基吡咯烷不能有效保护D-GalN引起的小鼠肝损伤不能有效保护CCl₄引起的小鼠肝损伤，不可以用来制备抗肝损伤药物。
实施例5 本发明所涉及Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物片剂的制备
取20克Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物或者其药学上可接受的盐当中的一种，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。
实施例6 本发明所涉及Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物胶囊的制备
取20克Daphmalenine A的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物或者其药学上可接受的盐当中的一种，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000粒。