含有环孢菌素的局部用药物组合物 本发明涉及含有环孢菌素作为活性组分的局部用药物组合物。更具体来说，本发明涉及通过一种方法制备的含有乳剂的水凝胶制剂，所述方法包括混合由环孢菌素作为活性组分、选自具有高于200℃沸点的两亲的非醇溶剂的增溶和吸收增强剂、表面活性剂和油组成的自乳化的乳剂预浓缩物(A)和由凝胶剂与纯化水组成的水凝胶(B)，并用碱化剂调节混合物的pH值。
环孢菌素是一种由11个氨基酸组成的特定的大分子(分子量1202.64)环肽化合物，它具有有用的药理活性，特别是免疫抑制活性和抗炎活性。所以，环孢菌素已知用作免疫抑制剂并广泛地用于抑制由器官移植(如肾移植)引起的活体排斥。
自从1984年以来，已经公开了环孢菌素对主要由自身免疫反应引起的各种疾病具有有用地药理活性以及在器官移植领域具有活性[见Christopher E.M.Griffiths：Systemic and Local administration of cyclosporin inthe treatment of psoriasis，J.Am.Acad.Dermatol.，23，(6 part 2)1242-1247(1990)]。
可使用环孢菌素的自身免疫疾病的具体例子包括关节炎、自身免疫性血液病、慢性支气管哮喘、系统性红斑狼疮、多肌炎、全身性硬皮病、Wegener综合征、重症肌无力、普通牛皮癣、脓疱性牛皮癣、自身免疫性肠疾病(特发性溃疡性肠炎、节段性回肠炎)、类肉瘤病、多发性硬化、青少年糖尿病、葡萄膜炎、牛皮癣关节炎、肾小球肾炎、簇状脱发、接触性皮炎、特应性皮炎等。
尤其是，环孢菌素是可用于患有几乎不能用常规治疗剂治疗的严重牛皮癣患者的药物之一。在1979年，Mueller，Hermann等首先报道了在治疗关节炎(牛皮癣关节炎)期间环孢菌素对皮肤疾病具有有益的作用，并在此后连续出版了许多类似的报告。由此认为环孢菌素对于治疗牛皮癣是特别有效的。另外，Zachariae等报道环孢菌素对脓疱性牛皮癣以及普通牛皮癣显示明显的作用，而且还公开了环孢菌素对于治疗Palmoplantar脓疱病也是有效的[参见：Zachariae H.和Olsen T.S.：Efficacy of Cyclosporin A in Psoriasis；An Overview of dose/response，indications，Contraindications andSide-effects.Clinical Nephrology，43(3)，154-158(1995)，Laburte C.，Grossman R.等：Efficacy and Safety of oral Cyclosporin A(CyA；SandimmunR)for long-term treatment of Chronic severe plaquepsoriasis Br.J.Dermatol.，130，366-375(1994)]。
根据常规用环孢菌素治疗牛皮癣的方法，短期治疗口服给予环孢菌素6mg/kg/天，共2个月，或者14mg/kg/天，共2周。另外，长期治疗时，给予环孢菌类1-4mg/kg/天，共12到25个月[参见，Christopher E.M Griffiths：Systemic and local administration of cyclosporin inthe treatment of psoriasis，J.Am.Acad.Dermatol.，23(6part2)1242-1247(1990)]。
然而，当以如比高的治疗量给予环孢菌素来治疗牛皮癣时，可产生严重的付作用如高血压或肾脏毒性[参见：Fry L：Cyclosporin A inthetreatment of psoriasis；Areview.J.Dermatol.Treat.，5(Suppl.1)52-54(1994)，Zachariae H.和Olsen T.S.：Efficacy of cyclosporin Ainpsoriasis；An Overview of dose/response，indications，contraindications and Side-effects.Clinical Nephrology，43(3)，154-158(1995)。另外，已经公开了甚至以高剂量14mg/kg/天给予环孢菌素，分布在皮肤中的环孢菌素浓度也仅为3.5ng/mg。所以，不能认为口服环孢菌素对治疗牛皮癣是有效的。
用环孢菌素治疗牛皮癣的另一给药方法是皮下注射。按照此方法，将环孢菌素浓度为1.7mg/ml的制剂以每次2ml每周三次的量皮下注射4周时，可有效地治疗牛皮癣。然而，该方法有某些缺陷，可因注射而引起疼痛和包括轻度浮肿的副作用，所以，使被治疗病人对注射适应是非常困难的(参见：V.C.Ho，C.E.M.Griffiths，C.N.Ellis，A.K.Gupta，C.C.McCuaig，B.J.Nickoloff，K.D.Cooper，T.A.Hamilton.和J.J.Voorhees：Intralesionalcyclosporin in the treatment of psoriasis，J.Am.Acad.Dermatol.，22(1)，94-100(1990)]。
而且，已经知道长期口服使用环孢菌素时，可引起严重的副作用。所以，当疾病局限于皮肤时，优选局部给予环孢菌素而不是系统给药，使其直接对靶向损害部位起作用，由此可减小给予环孢菌素的剂量，增加环孢菌素的局部浓度而提高药效并可进一步减小系统副作用。
然而，与水溶性或低分子量药物相反，将环孢菌素配成局部用制剂是非常困难的。原因是环孢菌素是具有大于1200分子量的高分子肽化合物，因此难以通过角质层渗透进入损害部位。由于环孢菌素的这种特性，已经报道大多数现有的环孢菌素局部用制剂因缺乏皮肤渗透性而不能透过角质层，所以不足以产生所需的临床作用[参见：R.C.Hermann，R.S.Taylor，C.N.Ellis，N.A.Williams，N.D.Weiner，G.L.Flynn，T.M.Annesley和J.J.Voorhees.Topical Cyclosporin for psoriasis，In vitro skinpenetration and Clinical Study，Skin Pharmacol.，1，246-249(1988)，J.I.Duncan，R.A.Wakeel，A.J.Winfield，A.D.Ormerod和A.W.Thomson：Immunomodulation of psoriasis with a topical cyclosporin Aformulation，Acta.Derm.Venereol.(stockh)，73(2)，84-87(1993)，Heule F.，Laijendecker R.和Van Joost Topical cyclosporin Atreatment in psoriasis and other dermatological diseases；theoretical and practical aspects.J.Dermatol.Treat.，2，149-153(1992)]。
所以，很难断定在各种现有文献和专利中所描述的所有环孢菌素局部用制剂对上文所述的皮肤疾病显示明显的治疗作用。其原因是：尽管可以说环孢菌素对皮肤疾病是有效的，但未能测出任何药理作用，除非局部用制剂穿过角质层到达靶向损害部位。
日本公开特许公报No.(Hei)5-310591(1993年，11月22日)公开了用挥发性低级醇制备的环孢菌素局部用制剂。然而，该制剂有缺陷，在长期的贮存中，该制剂的稳定性是低的，并且将该制剂用于皮肤时，醇快速挥发而引起环孢菌素沉淀，导致药效改变。
WO9520379公开了使用脂质体的环孢菌素局部用制剂。然而，该制剂基本上不可能实际应用，因为使用难以工业应用的方法来制备脂质体。
此外，英国专利2218334B教导了含有C12-24单或多脂肪酸或醇作为吸收增强剂的环孢菌素局部用制剂。该制剂不具有达到所需作用的足够的皮肤渗透性。
也就是说，上述现有专利中所提出的环孢菌素局部用制剂不能以局部用制剂形式达到有效利用环孢菌素的目的，也没有系统地构思改善环孢菌素皮肤渗透性的目的。
因此，本发明人进行了广泛的研究，开发了一种局部用制剂，它具有最好的皮肤渗透性以便环孢菌类可穿过角质层有效地到达靶向损害部位，即皮肤部分，并且是药理有用的和稳定的。通过多次实验，我们断定由下述特定组合物组成的环孢菌素局部用制剂显示好的皮肤渗透性和稳定性并可达到上文所述目的，因此，完成了本发明。
所以，本发明的一个目的是提供一种含有环孢菌素的局部用药物组合物，其中将含有环孢菌素的自乳化乳剂分散在水凝胶中。
本发明的再一目的是提供一种含环孢菌素的局部用药物组合物，其特征在于含有200℃或更高的高沸点两亲性非醇溶剂作为增溶剂和吸收增强剂。
本发明的另一目的是提供一种通过下述方法制备的含乳剂的水凝胶制剂，该方法包括混合由环孢菌素作为活性组分、选自200℃或更高的高沸点两亲性非醇溶剂的增溶和吸收增强剂、表面活性剂和油的自乳化乳剂预浓缩物(A)，和由胶凝剂与纯化水组成的水凝胶(B)，并用碱化剂调节混合物的pH值。
本发明的另一目的是提供一种制备上文所定义的含有环孢菌素的局部用药物组合物的方法。
上文概述了本发明某些十分相关的目的。这些目的对于本发明的某些十分相关的特征和应用来说仅仅是说明性的。通过以不同方式使用本发明或在本发明范围内对本发明进行修饰可获得许多其它有益的结果。因此，除权利要求所定义的本发明范围之外，通过参考本发明的公开内容和附图可以了解本发明的其它目的和更彻底地理解本发明。
为了彻底地了解本发明的特征和目的，应当参考与附图相关的下文的详细说明，其中：
图1显示随油的种类而定的环孢菌素局部用制剂的透皮渗透性曲线[●实施例5制剂，○实施例8制剂，■实施例1制剂，□实施例6制剂，△实施例7制剂]；
图2显示随增溶和吸收增强剂种类而定的环孢菌素局部用制剂的透皮渗透性曲线[●实施例2制剂，○实施例1制剂，■对比实施例2制剂，□对照制剂A]；
图3显示随水的含量而定的环孢菌素局部用制剂的透皮渗透性曲线[●实施例8制剂(85％水)，○实施例9制剂(75％水)，■实施例10制剂(90％水)，□对比实施例1制剂(0％水)]；和
图4显示使用无毛小鼠进行的环孢菌素局部用制剂活体上透皮渗透试验结果的曲线[■实施例2制剂(环孢菌素1％)，□对照制剂(环孢菌素5％)]。
一方面，本发明涉及一种含有环孢菌素的局部用药物组合物，其中将含有环孢菌素的自乳化乳剂分散在水凝胶中。
尤其是，本发明涉及一种含有环孢菌素的局部用药物组合物，其特征在于含有200℃或更高的高沸点两亲性非醇溶剂作为增溶和吸收增强剂。
更具体来说，本发明涉及一种通过下述方法制备的含乳剂的水凝胶制剂，该方法包括混合由环孢菌素作为活性组分、选自200℃或更高的高沸点两亲性非醇溶剂的增溶和吸收增强剂、表面活性剂和油组成的自乳化乳剂预浓缩物(A)和由胶凝剂与纯化水组成的水凝胶(B)，并有碱化剂调节混合物的pH值。
下文将更具体地解释本发明局部用药物制剂的每一组分。
(i)环孢菌素
用于本发明组合物中的药理活性组分为环孢菌素。尽管环孢菌素A、B、C、D、G等都可用作本发明的环孢菌素成分，但环孢菌素A是最优选的，因为在本领域中很好地建立了它的临床效率和药理特性。
(ii)增溶和吸收增强剂
本发明组合物的第二个必要组分是增溶和吸收增强剂。在本发明中，如果能增加环孢菌素的透皮渗透性，任何具有200℃或更高沸点的两亲性(具有既亲水又亲脂的特性)非醇溶剂都适于用作增溶和吸收增强剂。具体来说，作为本发明的增溶和吸收增强剂，满足下列要求的溶剂均可优选使用：对环孢菌素具有合适的增溶作用和起具有亲水和亲脂特性的辅助表面活性剂的作用来帮助制剂乳化。另外，与高挥发性低级醇相反，它具有高沸点，以便在贮存期间其含量保持恒定，所以可保证组合物的均匀性。而且，甚至在用于皮肤时也不挥发而保持始终如一的组合物并增加环孢菌素的透皮渗透性。
作为具有200℃或更高的高沸点两亲性(即既亲水又亲脂)的非醇溶剂，它可用作适于本发明环孢菌素皮肤渗透的增溶和吸收增强剂，认为dimethylisosorbide(沸点234℃)、丙烯碳酸酯(propylene carbonate，沸点242℃)和N-烷基-2-吡咯烷酮(其中烷基为C16烷基，如N-甲基-2-吡咯烷酮，沸点202℃)是优选的。
在这些增溶和吸收增强剂中，N-甲基-2-吡咯烷酮和dimethylisosorbide是最优选的。
另外，为了达到控制透皮渗透性的目的，也可使用两种或多种增溶和吸收增强剂的组合物。
(iii)表面活性剂
作为本发明组合物的表面活性剂，可使用的是各种能够在水凝胶中稳定地乳化亲脂成分(包括环孢菌素、油成分和增溶与吸收增强剂以形成均匀乳剂的表面活性剂)的表面活性剂，包括可药用的阴离子、阳离子、非离子或两性离子表面活性剂。在这些各种表面活性剂中，非离子表面活性剂因其对皮肤的低刺激性而是特别优选的。
可用于本发明的特别优选的表面活性剂是天然植物油甘油三酯和聚亚烷基多羟基化合物的反式酯化产物、聚氧乙烯甘醇酸酯化的天然或氢化的植物油、聚氧乙烯-脱水山梨糖醇脂肪酸酯、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯烷基醚等。其典型实例为天然植物油和聚氧乙烯1，2-乙二醇的酯化产物(商品名为Labrafil，Gattefosse)、蓖麻油和环氧乙烷的反应产物(商品名为Cremophor，BASF)、聚氧乙烯-脱水山梨糖醇单和三-月桂基、棕榈基、硬脂基和油基(oleyl)酯(商品名为Tween，ICI)、脱水山梨糖醇脂肪酸酯(商品名为Span，ICI)和聚氧乙烯烷基醚(商吕名为Brij，BASF)。最优选的表面活性剂主要为Labrafil M 1944CS(杏油PEG-6酯)。在本发明的组合物中，尽管上述表面活性剂的任何一种都可单独使用，但优选使用两种或两种以上表面活性剂的组合物来提高乳化状态。例如，可优选地使用Labrafil M 1944 CS和Cremophor EL(聚氧乙烯-35-蓖麻油)的组合物。
(iv)油
作为本发明可使用的油组分，可使用在水包油(O/W)型乳剂中所需HLB值低于10的任何油。例如，可使用中链脂肪酸甘油三酯(所需HLB：约5)如辛酸/癸酸甘油三酯或天然植物油(所需HLB：6-8)如玉米油、椰子油、棉花籽油、豆油、菜子油、红花油、葵花油等。另外，也可使用作为动物油的精制鱼油。而且，为了达到提高环孢菌素溶解性的目的，也可加入所需HLB为10或大于10的任何其它表面活性剂如蓖麻油(所需HLB：约14)或硬液体石蜡(所需HLB：10-11)。
(v)胶凝剂
作为本发明组合物的胶凝剂，可使用任何一旦与水混合即能形成凝胶的添加剂。例如，可优选地使用纤维素衍生物如羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、羧甲基纤维素钠(NaCMC)等、羧乙烯基聚合物(商品名称：Carbopol，BF Goodrich Chemical)、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(商品名称：Pluronic，BASF)等。其中，羧乙烯基聚合物是特别优选的。
(vi)纯化水
本发明可使用的纯化水是药用级水。
(vii)碱化剂
在本发明组合物中，可加入碱化剂来调节pH值，优选为调节到3到9。为了此目的，可使用任何无机碱性物质(如，Na2HPO4、NaHCO3、Na2CO3、NaOH等)、有机碱性物质(如，碱式氨基酸和胺)。
在本发明的组合物中，以下列比例含有各组分：(i)环孢菌素0.1到10％，(ii)增溶和吸收增强剂0.5到50％，(iii)表面活性剂0.4到40％；(iv)油0.4到40％，(v)胶凝剂0.1到5％，(vi)纯化水0.1到90％和(vii)碱化剂0.01到3.5％，优选其配比为(i)环孢菌素0.1到5％，(ii)增溶和吸收增强剂0.5到25％，(iii)表面活性剂0.4到20％，(iv)油0.4到20％，(v)胶凝剂0.1到2.5％，(vi)纯化水40到90％和(vii)碱化剂0.05到1.8％，以上均依据组合物的总重量来计算。含有上述配比各组分的本发明组合物为一种含乳剂水凝胶形式的具有3到9pH值的局部用制剂。
可如下制备本发明含有环孢菌素的局部用药物制剂：
首先，将环孢菌素(i)溶于增溶和吸收增强剂(ii)并与表面活性剂(iii)和油(iv)混合均匀来制备自乳化乳剂预浓缩物(A)。另外，将胶凝剂(V)均匀搅拌溶于纯化水来制备水凝胶(B)。然后，将乳剂预浓缩物(A)分批加到水凝胶(B)中并搅拌均匀而制备乳剂，然后与碱化剂(vii)混合来制备含乳剂水凝胶形式的所需含环孢菌素局部用药物组合物。
本发明制备的含环孢菌素的局部用药物组合物具有下列优点：
首先，本发明组合物具有好的稳定性和皮肤渗透性。由于现有技术中所公开的环孢菌素局部用制剂含有挥发性低级醇(乙醇、异丙醇等)作为溶剂[参见，日本公开特许公报No.CHei)5-310591(1993年11月22日)]，因溶剂醇的挥发性，长期贮存期间制剂的稳定性是低的，而且环孢菌素可从溶液中沉淀出来，这样就不能透皮吸收而导致制剂药效的改变。与此相反，通过用特定的增溶和吸收增强剂来制备具有低挥发性和好的稳定性并能持续增加活性组分环孢菌素皮肤渗透性的局部用药物组合物，本发明解决了现有制剂中所存在的问题，所述增溶和吸收增强剂(1)具有高的沸点，(2)对环孢菌素具有好的增溶作用和(3)显著增加环孢菌素的皮肤渗透性。
其次，将本发明组合物涂于皮肤时感觉是满意的。由于本发明组合物是含乳剂的水凝胶制剂，因此可很好地分布在皮肤上。另外，由于增溶和吸收增强剂本身的保湿作用，感觉令人愉快并当涂于皮肤时对被治疗病人有好的适应性。
第三，环孢菌素被很均匀地分散在制剂中。一般地，已知均匀分散为具有1到3μm直径的乳剂颗粒是很困难的。然而，由于本发明组合物被设计为自乳化水凝胶制剂形式，乳剂颗粒可容易地且非常均匀地分散在粘性的水凝胶基质中而不用对温度进行任何特殊的控制。所以，本发明提供长期稳定的并具有好的皮肤渗透性的制剂。
第四，制备局部用组合物的方法是非常简单和方便的。除上文所述药物优点外，由于本发明组合物可自行乳化而形成与水混合的乳剂，因此本发明的方法具有以下优点：该组合物可通过简单搅拌就容易地乳化而对制备条件如温度没有任何限制，这样即可使乳剂颗粒均匀地分布在水凝胶基质中，所以可不断地制备均匀的制剂。
通过下列实施例将更具体地说明本发明，然而，应该理解到这些实施例不以任何方式限制本发明。实施例1
(A)乳剂预浓缩物
环孢菌素 10mg
Dimethylisosorbide 50mg
Labrafil M 1944 CS 37.5mg
辛酸/癸酸甘油三酯 34.25mg
(B)水凝胶
Carbopol 940 13.5mg
纯化水 854.1mg
(C)氢氧化钠 0.675mg
将乳剂预浓缩物(A)搅拌下与水凝胶(B)混合，然后加入氢氧化钠水溶液(C)来制备凝胶制剂。实施例2
基本上按照实施例1的方法，使用下列组分来制备局部用药物制剂。
(A)乳剂预浓缩物
环孢菌素 10mg
N-甲基-2-吡咯烷酮 50mg
Labrafil M 1944 CS 37.5mg
辛酸/癸酸甘油三酯 34.25mg
(B)水凝胶
Carbopol 940 13.5mg
纯化水 854.1mg
(C)氢氧化钠 0.675mg实施例3
基本上按实施例1的方法，使用下列组分来制备局部用药物制剂。
(A)乳剂预浓缩物
环孢菌素 10mg
Dimethylisosorbide 50mg
Labrafil M 1944 CS 37.5mg
玉米油 34.25mg
(B)水凝胶
Carbopol 934 0.3mg
纯化水 854.1mg
(C)氢氧化钠 0.675mg实施例4
基本上按照实施例1的方法，使用下列组分来制备局部用药物组合物。
(A)乳剂预浓缩物
环孢菌素 50mg
N-甲基-2-吡咯烷酮 200mg
Labrafil M 1944 CS 100mg
棉籽油 100mg
(B)水凝胶
Carbopol 940 20.0mg
纯化水 528.5mg
(C)氢氧化钠 1.5mg实施例5
基本上按实施例1的方法，使用下列组分来制备局部用药物制剂。
(A)乳剂预浓缩物
环孢菌素 10mg
Dimethylisosorbide 50mg
Labrafil M 1944 CS 37.5mg
精制鱼油 34.25mg
(B)水凝胶
Carbopol 934 13.5mg
纯化水 843.4mg
(C)碳酸钠 11.4mg实施例6
基本上按照实施例1的方法，使用下列组分来制备局部用药物制剂。
(A)乳剂预浓缩物
环孢菌素 10mg
Dimethylisosorbide 50mg
Labrafil M 1944 CS 37.5mg
蓖麻油 34.25mg
(B)水凝胶
Carbopol 940 13.5mg
纯化水 843.4mg
(C)碳酸钠 11.4mg实施例7
基本上按照实施例1的方法，使用下列组分来制备局部用药物制剂。
(A)乳剂预浓缩物
环孢菌素 10mg
Dimethylisosorbide 50mg
Labrafil M 1944 CS 50mg
硬液体石蜡 20mg
(B)水凝胶
Carbopol 940 13.5mg
纯化水 845.1mg
(C)碳酸钠 11.4mg实施例8
基本上按照实施例1的方法，使用下列组分来制备局部用药物制剂。
(A)乳剂预浓缩物
环孢菌素 10mg
Dimethylisosorbide 50mg
Labrafil M 1944 CS 37.5mg
玉米油 34.25mg
(B)水凝胶
Carbopol 940 13.5mg
纯化水 843.4mg
(C)碳酸钠 11.4mg实施例9
基本上按照实施例1的方法，使用下列组分来制备局部用药物制剂。
(A)乳剂预浓缩物
环孢菌素 10mg
Dimethylisosorbide 50mg
Labrafil M 1944 CS 37.5mg
玉米油 34.25mg
(B)水凝胶
Carbopol 940 13.5mg
纯化水 470.0mg
(C)碳酸钠 11.4mg实施例10
基本上按实施例1的方法，使用下列组分来制备局部用药物制剂。
(A)乳剂预浓缩物
环孢菌素 10mg
Dimethylisosorbide 50mg
Labrafil M 1944 CS 37.5mg
玉米油 34.25mg
(B)水凝胶
Carbopol 940 13.5mg
纯化水 1410mg
(C)碳酸钠 11.4mg实施例11
基本上按实施例1的方法，使用下列组分来制备局部用药物制剂。
(A)乳剂预浓缩物
环孢菌素 10mg
N-甲基-2-吡咯烷酮 100mg
Labrafil M 1944 CS 50mg
辛酸/癸酸甘油三酯 40mg
Cremophor EL 30mg
(B)水凝胶
Carbopol 940 10mg
纯化水 759.5mg
(C)氢氧化钠 0.5mg实施例12
基本上按实施例1的方法，使用下列组分来制备局部用药物制剂。
(A)乳剂预浓缩物
环孢菌素 10mg
N-甲基-2-吡咯烷酮 100mg
Labrafil M 1944 CS 40mg
蓖麻油 50mg
Cremophor EL 40mg
(B)水凝胶
Carbopol 940 10mg
纯化水 749.5mg
(C)氢氧化钠 0.5mg实施例13
基本上按实施例1的方法，使用下列组分来制备局部用药物制剂。
(A)乳剂预浓缩物
环孢菌素 30mg
N-甲基-2-吡咯烷酮 150mg
Labrafil M 1944 CS 105mg
辛酸/癸酸甘油三酯 90mg
Cremophor EL 30mg
蓖麻油 30mg
(B)水凝胶
Carbopol 940 10mg
纯化水 554.5mg
(C)氢氧化钠 0.5mg实施例14
基本上按实施例1的方法，使用下列组分来制备局部用药物制剂。
(A)乳剂预浓缩物
环孢菌素 10mg
N-甲基-2-吡咯烷酮 50mg
丙烯碳酸酯 10mg
Labrafil M 1944 CS 35mg
辛酸/癸酸甘油三酯 30mg
Cremophor EL 10mg
蓖麻油 10mg
(B)水凝胶
Carbopol 940 10mg
纯化水 834.5mg
(C)氢氧化钠 0.5mg比较实施例1
基本上按实施例1的方法，使用下列组分来制备局部用药物制剂。
(A)乳剂预浓缩物
环孢菌素 10.0mg
Dimethylisosorbide 406.6mg
Labrafil M 1944 CS 304.9mg
玉米油 278.5mg比较实施例2
基本上按实施例1的方法，使用下列组分来制备局部用药物制剂。
(A)乳剂预浓缩物
环孢菌素 10mg
Labrafil M 1944 CS 62mg
玉米油 56mg
(B)水凝胶
Carbopol 940 13.5mg
纯化水 847.1mg
(C)碳酸钠 11.4mg实施1用无毛小鼠进行离体透皮渗透试验：
为了确定本发明含环孢菌素局部用制剂的皮肤渗透性，使用无毛小鼠在Franz测定池中，以预定时间间隔测定接受溶液中环孢菌素的浓度。具体实验过程描述如下：
以1.29/kg的量皮下注射20％氨基甲酸乙酯溶液来麻醉无毛小鼠(5周龄雄性小鼠)，然后切下腹部皮肤并用作Franz测定池的膜(表面积：3.14cm2，接受器体积：13ml)。40％丙二醇溶液用作接受溶液。以相当于500μg环孢菌素的量将被试验的局部用制剂涂于无毛小鼠皮肤上，然后在600rpm条件下，以预定的时间间隔取出300μl接受溶液，并且每一次都补充300μl新鲜接受液。用HPLC在下列条件下分析各个接受溶液：
柱：μ-BondapakC18(3.9×300mm，Waters)
检测器：UV210nm
流动相：乙腈∶甲醇∶水-70∶15∶35
流连：1.2ml/min
柱温：70℃
注射体积：100μl1、就油的种类而进行的透皮渗透试验：
通过按上述方法测量含环孢菌素局部用制剂的透皮渗透性随油种类的变化来确定油对透皮渗透性的影响。在该试验中，实施例1、5、6、7和8的局部用制剂被用作试验制剂。
将所测量的结果绘制在图1中。由图1所绘制的结果可见，在使用精制鱼油(实施例5)、玉米油(实施例8)、蓖麻油(实施例6)、硬液体石蜡(实施例7)和中链脂肪酸甘油三酯(实施例1)作为油组分进行的透皮渗透试验中，在水包油(O/W)型乳剂中具有低的所需HLB值的油(例如，精制鱼油、玉米油和中链脂肪酸甘油三酯)比蓖麻油和硬液体石蜡显示更好的皮肤渗透性。2、就增溶和吸收增强剂的种类而进行的透皮渗透试验
通过按上述方法测量含环孢菌素局部用制剂的透皮渗透性随增溶和吸收增强剂的种类变化来确定增溶和吸收增强剂对透皮渗透性的影响。在该试验中，实施例1、2、11和12的局部用制剂被用作试验制剂。作为对照制剂，使用比较实施例2的制剂和接英国专利2218334 B实施例1.1制备的具有下列组分的对照制剂A：
对照制剂A：
组分 含量(重量％)
环孢菌素 20
Vaccenyl alcohol 20
异丙醇 40
Tween 80 20
Aerosil(SiO2) 适量
将所测量的结果绘制在图2中。由图2所绘制的结果可见，使用增溶和吸收增强剂(如，dimethyliso sorbide(实施例1)和N-甲基-2-吡咯烷酮(实施例2))的本发明制剂的皮肤渗透性明显好于比较实施例2的制剂和使用C12-24脂肪酸和脂肪醇的对照制剂。因此，可以确定本发明所选择的增溶和吸收增强剂对制备环孢菌素局部用制剂是必需的。3、就水的含量而进行的透皮渗透试验：
通过按上述方法测量含环孢菌素局部用制剂随水含量的变化来确定水的含量对透皮渗透性的影响。在该试验中，实施例8、9和10的局部用制剂被用作试验制剂且将比较实施例1的制剂用作对照制剂。
将所测量的结果绘制在图3中。由图3所绘制的结果可见，不含水的比较实施例1制剂显示极低的皮肤渗透性。因此，可认为皮肤渗透需要至少一定量的水，该水对于皮肤的水合是必需的，所以，乳剂被均匀分散在含水的水凝胶中的本发明组合物适于皮肤渗透。实验2用无毛小鼠进行活体透皮渗透试验：
将本发明含环孢菌素局部用制剂的皮肤渗透性与作为对照制剂的日本公开特许公报(Hei)5-310591的含5％环孢菌素制剂(号称具有好的皮肤穿透能力和角质层渗透能力而显示所需的药理活性)在活体上进行比较。在该试验中，用无毛小鼠以预定时间间隔来测量活皮肤组织中环孢菌素的浓度。具体实验方法如下：为了防止制剂渗漏，将硅(ShjnEtsu聚硅氧烷、普通的RTV橡胶、KE45W、deoxime lype 100g，韩国)以仰卧位涂于无毛小鼠的腹部皮肤以使制剂的涂覆面为1cm2(1cm×1cm)，然后以大约0.04g/cm2的量，将每一试验制剂和对照制剂均匀涂于其上。
在涂覆制剂后的2、8、14和24小时之后，用浸有乙醇的棉花擦揩皮肤两次，然后用于棉花擦揩。用浸有水的棉花擦揩皮肤一次，然后用苏格兰带(3M苏格兰810带)，将角质层剥离20次。切下其上涂有制剂的活组织，用HPLC按下列分析法测定吸收制剂的量。
按下列方法分析活组织中活性成分的量。具体来说，将分离的活组织引入10ml 0.15M Tris缓冲液(pH7.6)并用Teflon碾槌以10,000rpm匀化10分钟。将所获得的匀浆以10,000rpm离心5分钟并取出3ml上清液。在该上清液中加入100μl内标液(每ml含有20μg环孢菌素D)，然后加入2ml乙醚。将混合物搅拌2分钟并取出1.5ml上清液，在活化的Bakerbond硅胶柱(J.T.Baker，U.S.A)上展开。用3ml正己烷洗涤该柱并用3ml甲醇洗脱活性成分。在氮气下干燥洗脱液并加入200μl流动相。取100μl溶液进行HPLC。HPLC的条件如下：
柱：μ-BondapakC18(3.9×300mm，Waters)
检测器：UV210nm
流动相：乙腈∶甲醇∶水＝58∶15∶40
流速：1.0ml/min
柱温：70℃
注射体积：100μl
在该试验中，用实施例2制备的局部用制剂(制剂含有1％环孢菌素)作为试验制剂，用日本公开特许公报(Hei)5-310591(1993年11月22日)实施例6(3)的具有下列组分的局部用制剂作为对照制剂：
组分 含量(wt％)
环孢菌素 5
95％乙醇 2
肉豆蔻酸异丙酯 5
橄榄油 48
聚氧乙烯乙二醇(5)单硬脂酸酯 35
Aerosil 5
将所测量的结果绘制在图4中，由图4所绘制的结果可见，使用本发明局部用制剂(含1％环孢菌素的制剂)处理的活组织中环孢菌素的浓度远远高于对照制剂(含5％环孢菌素制剂)的浓度。因此，可断定可发明含环孢菌素的局部用制剂与现有的制剂相比，显示明显优良的透皮渗透性。
尽管以某种程度特殊性的优选形式描述了本发明，但本领域技术人员会意识到仅是以实施例的方式来公开优选的形式，而且在不背离本发明的主题和范围的情况下，可采取某种方法对各部分的构成、组合和安排进行各种改变。