本发明涉及微生物液体发酵领域。 微量元素锗（Ge）对人体健康影响极大。无机锗是很难被人直接利用和吸收的，只有存在于灵芝、人参、枸杞子等生物有机体中的锗才能很好地被人吸收利用。但上述生物有机体中锗的含量有限，且上述生物有机体的栽培比较麻烦，生长周期也较长，不适合于工业化大生产。而目前利用液体发酵（又称液体培养、深层发酵和深层培养）大量培养大型真菌的菌丝体工艺已很成熟。（中国专利CN 1034957A）这使迅速、经济地获得大量富含锗的有机体细胞成为可能。
本发明的目的就是利用液体发酵方法大量繁殖某些能吸收、富集锗元素，并为人体所食用的生物有机体细胞，如灵芝菌丝体，以解决人类食物结构中锗元素摄入不足的问题。
本发明所采用的工艺步骤如下：
一、发酵菌种的选择
已知一些名贵中药材如灵芝子实体、人参、枸杞子等的细胞中都含有一定数量的锗。这表明它们的细胞具有从环境中吸收、富集锗的能力。通过测定又得知这几种药材中以灵芝含锗量最高（是人参地3-6倍），说明灵芝细胞吸收锗的能力相对较强。另外灵芝属微生物中的大型真菌，它的菌丝体是可以通过液体发酵繁殖的，便于工业化大生产，因此我们选择了灵芝属的菌株作为发酵菌种。
二、锗源的选择、发酵培养基中锗元素的加入量及锗的测定
1.锗源的选择：单质锗（锗粉或锗块）或锗的化合物（如锗的氧化物及锗盐、锗酸），只要能直接溶于水或经过氧化剂或酸、碱处理后能溶于水的，都可选作为锗源。
如锗粉不溶于水，可用10%的过氧化氢在pH7-8的条件下促使其溶于水。
又如，二氧化锗有一定的溶解度，可直接溶于水形成一定浓度的溶液。也可用0.5～5.0N的氢氧化钠溶液溶解，或用1N的硫酸、酒石酸、草酸溶液溶解后配成一定浓度的溶液。
2.发酵培养基中锗元素的加入量：
根据含锗溶液锗元素的浓度，取一定体积的溶液，加入到发酵培养基中，使发酵培养基中按重量计锗元素的浓度为8ppm-12ppm。
3.锗的测定：采用日本岛津AA-670型原子吸收仪石墨炉原子吸收法测定。
三、液体发酵操作步骤如下：
a.菌种活化：将冷藏的菌种接种到斜面培养基上，于24-28℃温箱中培养活化7-10天，直到斜面长满菌丝为止。
要求斜面培养基中应含有适合灵芝菌丝体利用的碳源（如葡萄糖、蔗糖、淀粉、麦夫皮等）、氮源（如豆饼、蛋白胨、麦夫皮、铵盐等）、维生素（如酵母膏、VB1）、钾和磷等。
b.一级摇瓶培养（500ml）：在500ml的三角瓶中装入100ml摇瓶培养基，灭菌后，冷却至室温，在无菌条件下移入斜面菌种，于24°-28℃摇床培养7-10天，摇床为往复式，每分钟振动100-200次。摇瓶培养基成份要求含有碳源（如葡萄糖、蔗糖、麦夫皮、马铃薯浸出液等）、氮源（如豆饼粉、麦夫皮浸出液、铵盐等）、钾离子及维生素（如VB1等），PH6.0-6.5。
c.二级摇瓶培养（500ml）
在5000ml的三角瓶中装入1000-1500ml培养基（成份同“b”），灭菌，接入“b”培养物，然后于24°-28℃摇床培养2-3天。
d.一级种子罐培养菌种（50L）
在50L不锈钢种子罐中注入30-35L培养基（成份同“b”），实罐消毒后冷却至24°-28℃，利用压差法接入“c”培养物，然后通元菌空气（通气量为1∶0.3～0.6），培养温度为24°-28℃，搅拌转速100-200r.p.m，培养2天。
e.二级种子罐进一步增殖菌种（500L）
在500L罐中装入300L-350L培养基（成份同“b”），实罐消毒后冷却至24°-28℃，然后将一级种子罐培养物压入罐中，随后进行通气培养。通气比为1∶0.3-0.6，搅拌速度100-200r.p.m，温度为24°-28℃，时间为2天。
f.5000L发酵罐大量培养富锗菌丝体
发酵罐容积5000L，装料3000-3500L，培养基中碳源尽可能采用廉价原料，如淀粉、麦夫皮等，其它成份同“b”，PH6.0～6.5。实罐消毒后冷却至24°-28℃，然后从接种口以无菌操作注入含锗元素的溶液，使锗在发酵液总量中浓度达8-12p.p.m，开动搅拌几分钟，取样检查PH值，用稀硫酸或稀氢氧化钠溶液将PH值调到6.0-6.5，然后用无菌压缩空气将“e”培养物压入发酵罐，接着进行通气培养。培养温度、搅拌速度、通气比、发酵时间均同“e”。
g.菌丝体的收集与处理：
发酵醪用离心或板框压滤的方法收集菌丝体，并用无离子水洗去菌丝体表面吸附的无机锗，然后使菌丝于50°-70℃烘干，并粉碎到一定粒度（可过80-200目的铜筛网）。所得粉末即为含锗量达3000ppm以上的菌丝体。该产物可直接用作保健食品的添加剂。
本发明由于采用了适于工业化大生产的工艺路线，简单地将无机锗溶液加入到灵芝菌丝体的发酵培养基中，发酵培养基廉价易得，经过培养可迅速得到大量富含有机锗的灵芝菌丝体，并能为人食用。这与天然中草药灵芝子实体、人参、枸杞子相比，不仅在有机锗含量上还是在生产周期上皆具有明显优势。从而为人类更经济、迅速地获得富含锗的营养保健品提供了可能。
下面结合实施例，进一步说明本发明方法的技术与步骤。
实施例1：
一、菌种的选择：以大型真菌中灵芝属（Ganoderma）的灵芝种（G、lucidum）作为发酵菌株。
二、锗溶液的配制及发酵液中锗的含量：
选锗粉为锗源，按发酵液总体积3500L，锗浓度10ppm计，称出需加入锗粉的重量35克，用足量的10%过氧化氢溶解后，全部按步骤加入到5000L发酵罐中。
三、液体发酵的步骤：
a.菌种活化：将冷藏的灵芝种菌株接于试管斜面培养基上，于28℃培养10天，至斜面长满菌丝，待用。
斜面培养基成份：葡萄糖2%，酵母膏0.2%，蛋白胨0.2%，KH2PO40.1%，琼脂2%，其余为自来水，PH自然。
b.在500ml的三角瓶中装入100ml摇瓶培养基（其成份为：葡萄糖2%，麦夫皮浸出液10%，硫酸铵0.2%，KH2PO40.2%，PH6.3）。灭菌后冷却至室温，在无菌操作下接入斜面菌种。置于往复式摇床上以每分钟振动150次的频率在26℃下培养8天。
c.在5000ml三角瓶中装入1500ml摇瓶培养基（成份同实施例1中“b”），灭菌冷却后，在无菌室中接入上一步培养的菌液，然后在26℃于150p.p.m的往复式摇床上培养3天。
d.往50L不锈钢一级种子罐中注入35L种子罐培养基（成份同实施例1中“b”），实罐消毒后冷却至26℃，利用压差法接入前一步“c”的培养物，然后通入无菌空气，通气比是1∶0.5，搅拌转速150r.p.m，26℃下培养2天。
e.在500L二级种子罐中，装料350L（成份同实施例1中“b”），实罐消毒后，冷却至26℃，然后用无菌空气将一级种子罐培养物压入，通无菌空气培养，通气比为1∶0.5，温度26℃，搅拌速度150r.p.m，时间2天。
f.在5000L发酵罐中装入3500L发酵培养基（其成份为葡萄糖1.5%，麦夫皮浸出液10%，红薯粉0.5%，KH2PO40.2%，（NH4）2SO40.2%，PH6.5），实罐消毒后冷却至26℃，然后从接种口以无菌操作注入该实施例配制的含锗溶液，使发酵培养基总量中锗含量达10p.p.m。开动搅拌几分钟，取样测PH为7.1，用0.05N硫酸溶液调至PH6.5，然后用无菌空气将二级种子罐中培养物压入，并进行通气培养，温度始终保持26℃，搅拌转速150r.p.m，通气比1∶0.5，培养2天。
g.将发酵醪泵入板框压滤机过滤除去水份，过滤完毕后再泵入少量70℃无离子水洗涤菌丝，当流出液中检查不出锗元素以后停止洗涤，用无菌压缩空气吹干滤饼，拆开板框收集滤饼，摊在搪瓷盘中用远红外线加热干燥，待水分降至5%以下停止加热。收集干菌丝，得到本发明方法生产的发酵产品，含锗3000ppm以上的灵芝菌丝体。将此干菌丝用粉碎机粉碎，过120目筛网，网下粉末可作为保健食品添加剂。
实施例2
除采用的锗源和菌种不同外，其余皆同实施例1。
该实施例采用灵芝属中的紫芝（G·joponicum），锗源用二氧化锗。由于二氧化锗在水中有一定的溶解度，所以可以固体形态直接投入发酵罐中。