本发明涉及一类称为magainin的具有生理活性的肽。本发明尤其涉及肽中至少有一个氨基酸残基被另一个氨基酸残基取代的magainin肽类似物。上述类似物通常称为“取代类似物”。 按照本发明目的，提供包括Magainin Ⅰ肽或Maganin Ⅱ肽类似物的化合物。Magainin Ⅰ或MagaininⅡ肽呈端氨基或端羧基形式。Magainin Ⅰ由下面的结构式表示，式中使用单字母氨基酸符号，各氨基酸残基下面的数字指的是肽中残基的位置：
Magainin Ⅱ由下面的结构式表示，式中使用单字母氨基酸符号，各氨基酸残基下面的数字指的是肽中残基的位置：
在Magainin Ⅰ或MagaininⅡ肽的第1-23位上至少有一个位置被取代。可用于1-23位的各个位置的取代基列于下表：
残基号 取代基
1 Lys，Ala
2 Lys，Ala，D-Ile，Arg，Leu，Val，His，Met
3 Lys，Ala，Trp，Arg，His
4 D-Lys，Ala，Arg，His
5 D-Phe，Ala，Lys，Trp，Leu，Ile，Val，Met
6 D-Leu，Lys，Ala，Ile，Val，Met
7 Lys，D-His，Ala，Arg，Ile，Val，Met
8 Ala，Lys，D-Ser，Trp，Met，Ile，Arg，HIs，
Thr，Leu，Val
9 Lys，D-Ala，Trp，Arg，His，Leu，Ile，Val
10 D-Lys，Lys
Ala，Trp，Arg，His，Leu，Ile，Val
11 D-Lys，Arg，His
12 D-Phe，Lys，Trp，Arg，His
13 Ala，Lys，Trp，Met，Arg，His，Phe，Leu，
Ile，Val
14 Ala，D-Lys，Arg，His
15 Lys，Trp，D-Ala，Arg，His，Phe
16 Ala，Lys，D-Phe，Ile，Val，Met，Leu
17 Ala，Lys，D-Val，Trp，Arg，His，Met，Leu
18 Ala，Lys，Trp，Arg，His，Leu，Met
19 Ala，Lys，D-Glu，Gly，Arg，His，Leu
Ile，Phe，Asn
20 D-Ile，Ala，Lys，Trp，Leu，Phe，Val，Met
21 Lys，Pro，Ala，His，Leu，Arg，Ile，Phe
22 Lys，Ala，D-Asn，Gln，Arg，His
23 D-Ser，Lys，Ala，Thr，Gly，Leu，Ile，
Gln，Asn
下述取代基较好：
残基号 取代基
1 Lys，Ala
2 Lys，Ala，D-Ile
3 Lys，Ala，Trp
4 D-Lys，Ala
5 D-Phe，Ala，Lys，Trp
6 D-Leu，Lys，Ala
7 Lys，D-His，Ala
8 Ala，Lys，D-Ser，Trp
9 Lys，D-Ala，Trp
10 D-Lys，Lys
Ala，Trp
11 D-Lys
12 D-Phe，Lys，Trp
13 Ala，Lys，Trp
14 Ala，D-Lys
15 Lys，Trp，D-Ala
16 Ala，Lys，D-Phe
17 Ala，Lys，D-Val，Trp
18 Ala，Lys，Trp
19 Ala，Lys，D-Glu
20 D-Ile，Ala，Lys，Trp
21 Lys，Pro，Ala
22 Lys，Ala，D-Asn
23 D-Ser，Lys，Ala
当然，就本发明来说，色氨酸残基可以被甲酰基保护或者不保护。苯丙氨基残基，无论此残基存在于它的正常位置，或被用作取代残基，都可以是正常的苯丙氨酸残基或碘代苯丙氨酸残基。
按照一个实施例，肽是Magainin Ⅰ肽，并且氨基酸残基8、10、13、16、18和19中至少有一个被丙氨基残基取代。在另一实施例中，Magainin Ⅰ肽在氨基酸残基3、8、16、19和23上均有丙氨酸残基取代。
按照另一实施例，Magainin Ⅰ肽在氨基酸残基3、8、16、19和23中有四个被丙氨酸残基取代，这些残基中所余的那一个被赖氨酸残基取代。
还按照再一个实施例，Magainin Ⅰ肽的氨基酸21被脯氨酸残基取代。
按照另一实施例，Magainin Ⅰ的氨基酸残基3、7、8、10、18-21和23中至少有一个被赖氨酸残基取代。
按照另一实施例，Magainin Ⅰ的氨基酸残基3、8、9、19和23均被赖氨酸残基取代，并且氨基酸残基16被丙氨酸残基取代。
按照另一实施例，Magainin Ⅰ的氨基酸残基2，4，19或23中至少有一个是D-氨基酸残基，其结构相应于原始存在于MagaininⅠ中的L-氨基酸残基。
按照又一个实施例，Magainin Ⅰ的氨基酸残基3、5、8、10、12、13、15、18和20中至少有一个被保护了的色氨酸残基取代，其中保护基是甲酰基较好。按照另一实施例，Magainin Ⅰ地氨基酸残基9、13、15和17中至少有一个被未保护的色氨酸残基取代。
按照另一实施例，肽是Magainin Ⅱ肽，并且氨基酸残基1-8、10、13、14、16和18-23中至少有一个是丙氨酸残基。
按照另一实施例，Magainin Ⅱ的氨基酸残基1-3、5-9、12、13和15-23中至少有一个是赖氨酸残基。
还按照另一个实施例，Magainin Ⅱ的氨基酸残基2、4-12、15-17、19、20、22和23中至少有一个被D-氨基酸残基取代，其结构相应于原始存在于Magainin Ⅱ中的L-氨基酸残基。
按照本发明的另一目的，提供Magainin Ⅰ或MagaininⅡ肽类似物，所述Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ肽呈端氨基或端羧基形式并具有上述结构式，并且其中氨基酸残基15-23中至少有一个被除去，而且所余氨基酸残基中至少有一个被取代。能用于1-23位中至少一个位置上的取代基列于下表：
残基号 取代基
1 Lys，Ala
2 Lys，Ala，D-Ile，Arg，Leu，Val，His，Met
3 Lys，Ala，Trp，Arg，His
4 D-Lys，Ala，Arg，His
5 D-Phe，Ala，Lys，Trp，Leu，Ile，Val，Met
6 D-Leu，Lys，Ala，Ile，Val，Met
7 Lys，D-His，Ala，Arg，Ile，Val，Met
8 Ala，Lys，D-Ser，Trp，Met，Ile，Arg，His，
Thr，Leu，Val
9 Lys，D-Ala，Trp，Arg，His，Leu，Ile，Val
10 D-Lys，Lys
Ala，Trp，Arg，His，Leu，Ile，Val
11 D-Lys，Arg，His
12 D-Phe，Lys，Trp，Arg，His
13 Ala，Lys，Trp，Met，Arg，His，Phe，Leu，
Ile，Val
14 Ala，D-Lys，Arg，His
15 Lys，Trp，D-Ala，Arg，His，Phe
16 Ala，Lys，D-Phe，Ile，Val，Met，Leu
17 Ala，Lys，D-Val，Trp，Arg，His，Met，Leu
18 Ala，Lys，Trp，Arg，His，Leu，Met，Phe
19 Ala，Lys，D-Glu，Gly，Arg，His，Leu
Ile，Phe，Asn
20 D-Ile，Ala，Lys，Trp，Leu，Phe，Val，Met
21 Lys，Pro，Ala，His，Leu，Arg，Ile，Phe
22 Lys，Ala，D-Asn，Gln，Arg，His
23 D-Ser，Lys，Ala，Thr，Gly，Leu，Ile，
Gln，Asn
下述取代基较好：
残基号 取代基
1 Lys，Ala
2 Lys，Ala，D-Ile
3 Lys，Ala，Trp
4 D-Lys，Ala
5 D-Phe，Ala，Lys，Trp
6 D-Leu，Lys，Ala
7 Lys，D-His，Ala
8 Ala，Lys，D-Ser，Trp
9 Lys，D-Ala，Trp
10 D-Lys，Lys
Ala，Trp
11 D-Lys
12 D-Phe，Lys，Trp
13 Ala，Lys，Trp
14 Ala，D-Lys
15 Lys，Trp，D-Ala
16 Ala，Lys，D-Phe
17 Ala，Lys，D-Val，Trp
18 Ala，Lys，Trp
19 Ala，Lys，D-Glu
20 D-Ile，Ala，Lys，Trp
21 Lys，Pro，Ala
22 Lys，Ala，D-Asn
23 D-Ser，Lys，Ala
按照一具体实施例，Magainin Ⅰ的氨基酸残基16-23被除去，氨基酸残基3、8和10被丙氨酸残基取代。
再按照另一实施例，Magainin Ⅰ的氨基酸残基19被除去，而且较好是氨基酸残基5、8、9和16均被赖氨酸残基取代，氨基酸残基21被亮氨酸残基取代，氨基酸残基18和23被丙氨酸残基取代。
按照另一实施例，在端羧基或端氨基（端氨基较好）Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ肽中，氨基酸残基17-23或16-23或15-23被除去，氨基酸残基3、7和8均被赖氨酸残基取代，并且氨基酸残基13和/或氨基酸残基10任意的被丙氨酸残基取代。较好的肽如下：
GIKKFLKKAGKFGK-NH2；
GIKKFLKKAGKFGKAF-NH2；
GIKKFLKKAKKFGKA-NH2；
GIKKFLKKAKKFAKA-NH2；
GIKKFLKKAAKFAKA-NH2；
初步的研究说明上面提及的较好的肽具有低溶血活性。根据另一实施例，Magainin Ⅰ的氨基酸残基21可以被除去，并且较好的是氨基酸残基5，10，18和19均被赖氨酸残基取代，氨基酸残基7被苯丙氨酸残基取代，氨基酸残基22被丙氨酸残基取代。
根据另一实施例，在端羧基或端氨基（端氨基较好）Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ（优选Magainin Ⅱ）中，氨基酸残基19被略去，氨基酸残基3、7、8、10、13、15、16、18、21、22或23中至少有一个被下述的另一氨基酸取代：
残基号 取代基
3 Leu
7 Lys
8 Lys，Ala
10 Ala，Lys
13 Trp，Leu，Phe，Ala
15 Phe
16 Ala
18 Lys，Ala，Phe
21 Lys，Ile
22 Lys
23 Lys，D-Ser
具有代表性的肽在实施例14和21-23中公开。
在较佳实施例中，肽是Magainin Ⅱ肽，而且氨基酸19被除去了的取代类似物选自下列取代类似物组成的一组中：
GIGKFLHSAKKFGKAFVGIMKS；
GIGKFLHSAKKFGKAFVAIMNS；
GIGKFLHSAKKFGKAFVFIMNS＊，其中
S＊是D-丝氨酸;
GIGKFLHSAKKFFKAFVFIMNS；
GIGKFLKSAKKFGKAFVFIMNS；
GIGKFLHKAKKFAKAFVFIMNS；
GIGKFLKSAKKFAKAFVFIMNS；
GIGKFLHKAKKFAKAFVFIMNK；
GIGKFLKKAKKFGKAFVFIMKK；和
GIGKFLHSAKKFGKAFVK＊＊IMNS，其中
其中K＊＊是E-F-moc-赖氨酸。
初步的研究说明，这些较佳的类似物具有低溶血活性。
按照另一实施例，提供了Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ衍生物（端羧基或端氨基的），Magainin Ⅱ较好，其中碱性肽的部分被除去，并且如上所述所余氨基酸残基中至少有一个被取代;特别是，氨基酸残基19被略去，此外，或者氨基酸残基1-4或者3、5和6被略去。较佳的肽如下：
FLHSAKKFGKAFVFIMNS
GIKHSAKKFAKAFKAIMNS
FLKSAKKFGKAFVGIMNS
FLKSAKKFAKAFVGIMNS
申请人发现，当使用上述的Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ的取代类似物时，这些肽表现出与母体Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ肽相等的或较大的生理活性。这样的肽被称为“成功的取代类似物”。
包括按照本发明的Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ肽的取代类似物的这些化合物用作抗菌素是有效的，并可用于抑制，阻止或破坏微生物的生长或繁殖，这些微生物如细菌，真菌，病毒等。同样地，这些化合物也能用作抗病毒组合物，用以抑制，阻止或破坏这些病毒的生长或繁殖。
这里使用的术语“取代类似物”包括肽结构中至少一个氨基酸残基被不同的氨基酸残基取代了的magainin肽，以及magainin肽，其中，除上面提及的取代外，氨基酸残基15-23中至少还有一个从肽序列中被略去。此术语还包括具有D-氨基酸或碘代苯丙氨酸残基的magainin肽，这些残基是被取代进入肽序列的。
这样的化合物也能用作杀精子剂，用以抑制，阻止或破坏精子的游动。
这样的化合物还能用作抗肿瘤剂，用以抑制肿瘤生长或破坏肿瘤。
这些化合物具有宽范围抗多种微生物的有效抗菌活性，上述微生物包括格兰氏阳性和格兰氏阴性菌，真菌，原生动物等。这样的化合物能用于治疗或控制对这些化合物敏感的生物体所引起的细菌感染。
这些化合物也可用作对微生物污染易感染的物质的防腐剂或消毒剂。在下述的实施例3-27中例举了体外抗菌活性。
通常，当全身用药时，Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ肽的取代类似物的施用剂量为每公斤体重从约1mg至500mg。当局部用药时，这些肽的使用浓度为从约0.5%至约5%。
包括根据本发明的Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ的取代类似物的这些化合物可用于治疗多种宿主。按照较佳实施例，宿主可以是动物，并且这样的动物可以是人或非人动物。
这些包括Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ的取代类似物的化合物可用于多种药物组合物，它与下列成分结合：无毒药物载体或赋形剂例如填充剂，无毒缓冲剂，或生理盐水溶液。这样的药物组合物可局部或全身使用并可以任何合适的形式使用，例如液体、固体、半-固体、注射液、片剂、软膏、洗剂、糊剂、胶囊等。包括这些Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ的取代类似物的化合物也可与辅剂，蛋白酶抑制剂或相容的药物一起结合使用，这种结合在控制有害的微生物引起的感染时被认为是需要的或有益的，有害的微生物包括原生动物，病毒等。
包括本发明的Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ取代类似物的这些化合物可施用于宿主，特别是动物，以有效抗菌和/或抗肿瘤和/或抗病毒和/或抗微生物和/或杀精子量使用。
Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ，以及本发明的Magainin Ⅰ和Magainin Ⅱ的取代类似物（Magainin Ⅰ和Magainin Ⅱ的端氨基和端羧基两种形式）可用本专业熟练技术人员熟知的合成肽的一般方法来合成。固相合成法更好。
在此所述的肽由同步多肽合成法（SMPS）制备。此方法详述于下面的文献中：Houghten，R.A.，“General Method for Rapid Solid-Phase Synthesis of Large Numbers of Peptides;Specificity of Antigen-Antibody Interaction at the level of Individual Amino Acids”，Proc.Natl.Acad.Sci.，U.S.A.Vol.82，p.5131-5135（1985），和Houghten，R.A.，等“Simultaneous Multiple Peptide Synthesis;The Rapid Preparation of large Numbers of Discrete Peptides for Biological，Immunological，and Methodological studies”，Peptide chemistry，p.295-298（1987）。
就下述实施例来说，合成了这样的Magainin Ⅰ和Magainin Ⅱ取代类似物：其中多个氨基酸残基被取代和/或其它的氨基酸残基被除去。
为了比较，全Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ肽也可由SMPS方法合成。从Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ结构中略去一个或多个氨基酸残基的取代类似物也可由SMPS法制备，这也考虑在本发明范围中。
现在就下述实施例来阐述本发明，然而，并不意味着本发明范围被其限制。
实施例1-肽的合成
使用同步多肽合成的方法步骤来完成Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ取代类似物肽的合成。所有的溶剂和试剂是分析纯，使用时不需要进一步纯化。标准N-t-Boc（丁氧羰基）-保护的氨基酸用于合成。所使用的侧链官能团为：苄基（Ser，Glu），2-Cl-Z（Lys）（Z＝苄氧羰基），Nim-DNP（His）和亚砜（Met）。肽的合成始于或者每个树脂包装单位100mg Boc-氨基酸-Pam树脂去制备C-末端羧基肽（PAM购自Applied Biosystems，取代0.56meq/gm，是氨基聚苯乙烯的氨酰基-4-[氧甲基]苯乙酸衍生物），或者用每树脂包装单位100mg甲基二苯甲基胺（MBHA）树脂（取代0.65meq/gm）去制备C-末端氨基肽。
合成后，用DMF中0.5M的苯硫酚三次处理完全保护了的肽树脂以除去组氨酸中的Nim-二硝基苯基团。用TFA除去最终的Boc-基团，以避免最终的HF处理期间甲硫氨酰残基正丁基化。使用低-高HF方法完成分裂。Tam，等，J.Am.Chem.Soc.，105卷，6442页（1983）。对于Pam树脂上合成的肽，无需从该树脂包中移去树脂就进行低-HF，使用多容器HF装置于0℃进行2小时。对于使用MBHA树脂制备的肽，低HF步骤在一般反应器中在0℃下2小时完成。对于Pam树脂肽，用水吸气器，接着用机械泵从24个单独的反应器中吸出低-HF混合物。通过将液体倾入废物槽的方法使低-HF混合物从装有盛MBHA树脂包的低-HF反应器中排空。这些树脂立即用冷却的醚洗涤，接着用CH2Cl2，DMF，CH2Cl2，IPA，CH2Cl2交替洗涤。然后将上述树脂，进行干燥并投入24容器HF装置的各试管中，用0.7ml苯甲醚作净化剂。高-HF通过于-70℃冷凝干燥氟化氢来完成。反应于-10℃进行1小时，最后30分钟是-5℃-0℃。用强氮气流蒸出HF。最后，将残留的碳鎓离子净化剂用无水乙醚洗涤除去。
接着粗肽用10%乙酸萃取，并在分析用反向柱（Vidac ODS 25cm×4.6mm）上进行RP-HPLC分析，使用Beckman-Altek型421HPLC系统和两个110A型泵。溶剂系统由缓冲剂A和B组成，A为0.05%TFA/H2O，B为0.05%TFA/CH3CN，流速为1.0ml/min。这些肽用Hitachi100-20分光光度计于215nm测定。
用反向HPLC在Vidac C18（22mm×25cm），10μm填充柱上对这些肽进行纯化，用CH3CN和0.05%TFA进行梯度淋洗。将这些肽于110℃在恒定的（沸腾）6NHCl中进行24小时水解后，在Beckman 6300分析仪上进行氨基酸分析，这些分析在理论值的±10%以内。
实施例2-抗菌试验
抗菌试验在96阱细胞培养板上进行。每个阱中装有悬浮于LB培养基（实施例3-17），或TSB培养基（实施例18-27）中的给定微生物[大肠杆菌（Escherichia coli），葡萄球菌表皮菌素（Staphylococcus epidermidis），金色酿脓葡萄球菌（Staphylococcus aureus）或绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa）]，将其进行培养。加入Magainin Ⅰ或其取代类似物（溶于1×PBS，pH7.0）后，各阱含有最终细胞密度为1.0×106菌落形成单位（CFU）/ml。所使用的最终肽的浓度为100μg/ml，75.0μg/ml，50.0μg/ml，25μg/ml，12.5μg/ml，10μg/ml，5μg/ml，2.5μg/ml，和1.25μg/ml，。
肽加入阱时的时间定为零。在6小时时将板置入Titertek Multiskan装置并测定0.D620。这些板以及最初接种物于37℃时进行培养。
每板有五个阱只盛有培养基，同时另外五个阱盛有培养基和细胞。这些对照物用于消除培养基污染的可能性，并同时提供未抑制的微生物的生长程度。
通过在6小时期间，用对照细胞未抑制的生长与取代类似物比较来测定肽活性度。取代类似物的抑制生长有效率列于下述实施例和表中。
实施例3-丙氨酸取代的Magainin Ⅰ类似物
如上述实施例1，制备Magainin Ⅰ和用一个丙氨酸残基来取代Magainin Ⅰ中的不同氨基酸残基的类似物，并测试对大肠杆菌的抑制生长有效率%，其浓度如上述实施例2中给定的（μg/ml）。丙氨酸取代的Magainin Ⅰ类似物，于浓度μg/ml时的抑制生长有效率%列于下表Ⅰ中。在此使用的表头“被取代的氨基酸残基”是指被所期望的氨基酸残基取代了的肽中的氨基酸残基的顺序号。所有肽中的其他残基与正常肽序列保持一致。对术语“抑制生长有效率%”的说明如下：例如值“25时为100”，是指浓度为25μg/ml时抑制生长有效率为100%。
表1-丙氨酸取代的Magainin Ⅰ类似物
被取代的 浓度为μg/ml时的
氨基酸残基 抑制生长有效率%
无（Magainin Ⅰ） 25时为100
23 10时为100
22 50时为100
21 50时为100
20 50时为100
19 5时为100
18 25时为100
17 75时为100
16 25时为100
14 100时为100
13 25时为100
12 50时为100
11 100时为0
10 25时为100
8 5时为100
7 75时为100
6 100时为0
5 100时为0
4 100时为0
3 75时为100
2 100时为100
1 100时为100
还制备了氨基酸残基19、16或8分别被丙氨酸残基取代的Magainin Ⅰ类似物，并与未取代的Magainin Ⅰ比较测试了这些取代类似物对葡萄球菌表皮菌素和/或金色酿脓葡萄球菌的抑制生长有效率（%）。MagaininⅠ浓度为25μg/mL时对葡萄球菌表皮毒素的抑制生长有效率为100%，浓度100μg/ml时对金色酿脓葡萄球菌的抑制生长有效率为80%。对葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率，氨基酸残基19被丙氨酸取代的Magainin Ⅰ类似物在25μg/ml时为100%，氨基酸残基16被丙氨酸取代的Magainin Ⅰ类似物在100μg/ml时为75%。对金色酿脓葡萄球菌的抑制生长有效率，氨基酸残基19被丙氨酸取代的Magainin Ⅰ类似物在25μg/ml时为100%，氨基酸残基8被丙氨酸取代的Magainin Ⅰ类似物在50μg/ml时为100%。
实施例4-脯氨酸取代的Magainin Ⅰ类似物
制备用脯氨酸残基取代Magainin Ⅰ上不同氨基酸残基的Magainin Ⅰ类似物，并如上所述试验在给定浓度（μg/ml）下对大肠杆菌的抑制生长有效率%。各种腈氨酸取代的Magainin Ⅰ类似物的抑制生长有效率%列于下表Ⅱ中。
表Ⅱ-脯氨酸取代的Magainin Ⅰ类似物
被取代的 浓度为μg/ml时的
氨基酸残基 抑制生长有效率%
22 100时为0
21 25时为100
20 100时为100
19 50时为100
18 75时为100
17 100时为0
16 100时为0
15 100时为50
14 100时为0
13 100时为100
12 100时为0
11 100时为0
10 100时为0
9 100时为100
8 75时为100
7 100时为0
6 100时为0
4 100时为0
3 75时为100
2 100时为0
1 100时为100
实施例5-赖氨酸取代的MagaininⅠ类似物
制备了用赖氨酸残基取代Magainin Ⅰ中的不同氨基酸残基的Magainin Ⅰ类似物，并如上述检测给定浓度（μg/ml）时对大肠杆菌的抑制生长有效率%。各种赖氨酸取代的Magainin Ⅰ类似物的抑制生长有效率%列于下表Ⅲ中。
表Ⅲ-赖氨酸取代的Magainin Ⅰ类似物
被取代的 浓度为μg/ml时的
氨基酸残基 抑制生长有效率%
23 5时为100
21 25时为100
20 25时为100
19 2.5时为100
18 25时为100
17 100时为100
16 100时为0
15 50时为100
13 50时为100
12 100时为100
10 25时为100
9 100时为100
8 5时为100
7 5时为100
6 100时为0
5 100时为0
3 25时为100
2 100时为100
1 50时为100
测试氨基酸残基23、19、8或7分别被赖氨酸残基取代的Magainin Ⅰ类似物对葡萄球菌表皮菌素和/或金色酿脓葡萄球菌的抑制生长有效率%。氨基酸残基23被赖氨酸残基取代的Magainin Ⅰ取代类似物对金色酿脓葡萄球菌的抑制生长有效率%在浓度为100μg/ml时为30%。氨基酸残基19被赖氨酸取代的Magainin Ⅰ类似物对葡萄球菌表皮毒素的抑制生长有效率%在浓度25μg/ml时为100%，对金色酿脓葡萄球菌在浓度100μg/ml时为50%。氨基酸残基8被赖氨酸取代的Magainin Ⅰ对金色酿脓葡萄球菌的抑制生长有效率%在100μg/ml时为70%。氨基酸残基7被赖氨酸取代的Magainin Ⅰ对葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率%在25μg/ml时为100%，对金色酿脓葡萄球菌在50μg/ml时为100%。
实施例6-谷氨酸取代Magainin Ⅰ类似物
制备了用谷氨酸残基取代Magainin Ⅰ中不同氨基酸残基的Magainin Ⅰ类似物，并按上述方法测试对大肠杆菌的抑制生长有效率%。对于各种谷氨酸取代的Magainin Ⅰ类似物其抑制生长有效率%列于下表Ⅳ中。
表Ⅳ-谷氨酸取代的Magainin Ⅰ类似物
被取代的 浓度为μg/ml时的
氨基酸残基 抑制生长有效率%
22 100时为0
21 75时为100
20 100时为0
18 75时为100
17 100时为0
16 100时为0
15 100时为0
14 100时为0
13 100时为0
12 100时为0
11 100时为0
10 75时为100
9 100时为0
8 75时为100
7 100时为32
3 100时为0
实施例7-含D-氨基酸残基的Magainin Ⅰ肽
合成多种Magainin Ⅰ肽，其中，各肽中氨基酸残基23，19，17，16，14，4或2之一分别被D-氨基酸残基所取代。然后按上文所述测试各种Magainin Ⅰ肽类似物在一定浓度（μg/ml）时对大肠杆菌的抑制生长有效率%。对每种D-氨基酸残基取代的Magainin Ⅰ类似物，其抑制生长有效率%列于下表Ⅴ中。
表Ⅴ-D-氨基酸残基取代的Magainin Ⅰ类似物
被取代的 浓度为μg/ml时的
氨基酸残基 抑制生长有效率%
23 10时为100
19 25时为100
17 50时为100
16 50时为100
14 50时为100
4 25时为100
2 25时为100
实施例8
在本例中，制备了Magainin Ⅰ取代类似物，其中氨基酸残基19（E，或谷氨酸）被除去，并且氨基酸残基5，8，9和16各被赖氨酸残基所取代，氨基酸残基21被亮氨酸残基取代，氨基酸残基18和23各被丙氨酸残基取代。这些取代类似物具有下述结构：
G I G K K L H K K G K F G K F K G A I L K A
测试这种肽对大肠杆菌的抑制生长有效率%，5μg/ml时为100%。
实施例9
在本例中，制备了Magainin Ⅰ取代类似物，其中，氨基酸21被除去，并且氨基酸残基5，10，18和19各被赖氨酸残基取代，氨基酸残基7被苯丙氨酸残基取代，氨基酸残基22被丙氨酸残基取代。此肽具有下列结构：
G I G K K L F S A K K F G K A F V K K I A S
测试此肽对大肠杆菌的抑制生长有效率%，2.5μg/ml时为100%。
实施例10
制备多种Magainin Ⅰ和Magainin Ⅱ肽，其中，各肽中的苯丙氨酸残基5和12被碘化。测试含碘化苯丙氨酸残基的各肽对大肠杆菌的抑制生长有效率%。对Magainin Ⅰ肽，10μg/ml时，抑制生长有效率为100%。对Magainin Ⅱ肽，5μg/ml时，抑制生长有效率为100%。
实施例11-色氨酸（除去了甲酰基）取代的Magainin Ⅰ类似物
制备了Magainin Ⅰ类似物，其中，用色氨酸残基取代了Magainin Ⅰ的不同氨基酸残基。此色氨酸已除去了甲酰基，这导致未保护的色氨酸残基取代进入这些Magainin Ⅰ类似物中。测试这些类似物对大肠杆菌和葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率%，一定浓度（μg/ml）时对大肠杆菌和葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率%列于下列Ⅵ中。
表Ⅵ-色氨酸（除去了甲酰基）取代的Magainin Ⅰ类似物
被取代的 浓度为μg/ml时的
氨基酸残基 抑制生长有效率%
大肠杆菌 葡萄球菌表皮菌素
1 50时为100 75时为80
3 25时为100 50时为100
4 100时为90 100时为0
5 25时为100 100时为80
6 50时为100 75时为50
8 100时为100 50时为100
9 25时为100 100时为40
10 25时为100 50时为100
11 100时为0 100时为0
12 25时为100 100时为0
13 25时为100 50时为100
14 N/A 100时为0
15 10时为96 100时为90
16 50时为95 100时为0
17 25时为100 100时为100
18 25时为93 100时为90
19 10时为100 75时为100
20 25时为90 100时为30
21 50时为100 100时为0
22 75时为40 100时为0
实施例12-色氨酸（含甲酰基）取代的Magainin Ⅰ类似物
制备了多种Magainin Ⅰ类似物，其中，如实施例11中一样用色氨酸残基取代了Magainin Ⅰ的不同的氨基酸残基，不同的是在本例中甲酰基保留在色氨酸残基上，这导致了被保护的色氨酸残基取代进入Magainin Ⅰ类似物中。测试这些类似物对大肠杆菌和葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率%。浓度μg/ml时对大肠杆菌和葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率%列于下表Ⅶ中。
表Ⅶ-色氨酸（含甲酰基）取代的Magainin Ⅰ类似物
被取代的 浓度为μg/ml时的
氨基酸残基 抑制生长有效率%
大肠杆菌 葡萄球菌表皮菌素
1 50时为100 75时为100
3 50时为100 75时为100
4 100时为70 100时为0
5 50时为100 100时为100
6 50时为100 100时为100
7 75时为100 100时为90
8 25时为100 75时为100
9 50时为100 100时为44
10 25时为100 75时为100
11 100时为0 100时为0
12 25时为100 75时为90
13 10时为100 50时为100
14 100时为0 100时为0
15 10时为100 75时为100
16 50时为100 100时为0
17 50时为100 75时为100
18 25时为100 100时为63
19 75时为100 N/A
20 25时为100 100时为55
21 50时为92 100时为36
22 75时为80 100时为0
实施例13-用赖氨酸和/或丙氨酸残基多取代的Magainin Ⅰ类似物
制备了多种Magainin Ⅰ类似物，其中氨基酸残基3，8，9，16，19和/或23被丙氨酸（A）或赖氨酸（K）残基所取代。测试了各取代类似物对大肠杆菌、葡萄球菌表皮菌素和/或金色酿脓葡萄球菌的抑制生长有效率%。各种合成的取代类似物的结构以及在浓度μg/ml时对大肠杆菌、葡萄球菌表皮菌素和金色酿脓葡萄球菌的抑制生长有效率%列于下表Ⅷ中。
实施例14-除去了谷氨酸并有丙氨酸或赖氨酸取代的Magainin Ⅰ类似物
制备了Magainin Ⅰ类似物，其中氨基酸残基19（E，或谷氨酸）被除去，并用或者丙氨酸或者赖氨酸去取代肽中其余的氨基酸残基之一。丙氨酸取代或者残基16、10或者8，或者赖氨酸取代或者残基18，8或者7。对这些取代衍生物均测试对大肠杆菌，葡萄球菌表皮菌素，和/或金色酿脓葡萄球菌的抑制生长有效率%。各肽的结构和在各种浓度（μg/ml）时对大肠杆菌，葡萄球菌表皮菌素或金色酿脓葡萄球的抑制生长有效率%列于下表Ⅸ中。
实施例15
制备了Magainin Ⅰ取代类似物，其中，在一种类似物中，氨基酸残基8、19和23均被赖氨酸取代，在另一种类似物的，氨基酸残基7、8、19和23均被赖氨酸取代。然后测量浓度为μg/ml时对大肠杆菌和葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率%。对于氨基酸残基8、19和23被赖氨酸所取代了的类似物，对大肠杆菌，浓度为2.5μg/ml时，抑制生长有效率为100%，对葡萄球菌表皮菌素，浓度为12.5μg/ml时为100%;而对氨基酸残基7、8、19、23被赖氨酸取代了的类似物，对大肠杆菌，浓度为1.25μg/ml时，为100%，对葡萄球菌表皮菌素，浓度为5μg/ml时，为100%。
实施例16
在本例中，制备了Magainin Ⅰ类似物，其中，氨基酸残基16-23被除去，残基3、7、8被赖氨酸残基取代。所得的肽具有如下结构：
G I K K F L K K A G K F G K A
然后测试了这种肽对大肠杆菌的抑制生长有效率%。这种肽对大肠杆菌的抑制生长有效率于5μg/ml时为100%。
实施例17
在本例中，制备了Magainin Ⅰ类似物，其中，氨基酸残基16-23被除去，并且氨基酸残基3、8和10被丙氨酸取代。所得的肽具有如下结构：
G I A K F L H A A A K F G K A
测试了此肽对大肠杆菌的抑制生长有效率%。此肽浓度为25μg/ml时对大肠杆菌的抑制生长有效率为100%。
实施例18-丙氨酸取代的Magainin Ⅱ类似物
如上实施例1所述制备了Magainin Ⅱ和其中用丙氨酸残基取代了Magainin Ⅱ的不同氨基酸残基的类似物，并如上实施例2所述测试了对大肠杆菌，绿脓杆菌和葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率%。丙氨酸取代的Magainin Ⅱ类似物浓度为μg/ml时抑制生长有效率%列于下表Ⅹ中。
实施例19-赖氨酸取代的Magainin Ⅱ类似物
制备Magainin Ⅱ类似物，其中，赖氨酸残基取代了Magainin Ⅱ的不同氨基酸残基，并如上述测试在给定的浓度μg/ml时对大肠杆菌，绿脓杆菌和葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率。各赖氨酸取代的Magainin Ⅱ类似物的抑制生长有效率列于下表Ⅺ。
实施例20-具有D-氨基酸残基的Magainin Ⅱ肽
合成Magainin Ⅱ肽，其中不同的氨基酸残基被D-氨基酸残基取代，其结构相当于最初存在于Magainin Ⅱ中的残基的结构。如上述测试所有这些Magainin Ⅱ肽类似物于浓度μg/ml时，对大肠杆菌，绿脓杆菌和葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率%。各D-氨基酸残基取代的Magainin Ⅱ类似物的抑制生长有效率%列于下表Ⅻ中。
实施例21-除去了谷氨酸的Magainin Ⅱ类似物
在本例中，合成了Magainin Ⅱ类似物，所述类似物的氨基酸残基19（谷氨酸）从肽结构中除去，并且其中一个或多个其它的氨基酸残基被不同于正常氨基酸残基的氨基酸残基所取代。然后按照实施例1所述的方法合成下式结构的类似物。
类似物结构
1 GIGKFLHSAKKFWKAFVGIMNS
2 GIGKFLHSAKKFLKAFVGILNS
3 GILKFLHSAKKFLKAFVGILNS
4 GILKFLHSAKKFFKAFVKILNS
5 GIGKFLHSAKKFFKAFVFILNS
6 GIGKFLHSAKKFGKAFVGIMKS
7 GIGKFLHSAKKFGKAFVAIMKS
8 GIGKFLHSAKKFGKAFVFIMNS＊
9 GIGKFLHSAKKFAKAFVFIMNS
10 GIGKFLHSAKKFFKAFVFIMNS
11 GIGKFLKSAKKFGKAFVFIMNS
12 GIGKFLHKAKKFAKAFVFIMNS
13 GIGKFLKSAKKFAKAFVFIMNS
14 GIGKFLHKAKKFFKAFVFIMNS
15 GIGKFLKSAKKFFKAFVFIMNS
16 GIGKFLHKAKKFAKAFVFIMNK
17 GIGKFLKSAKKFAKFFVFIMNK
18 GIGKFLKKAKKFGKAFVFIMKK
19 GIGKFLHSAKKFGKAFVK＊＊IMNS
20 GIGKFLHSAKKFGKAFVKIMNS
21 GIGKFLHKAKKFGKAFVKIMNS
＊D-丝氨酸
＊＊-ε-Fmoc-赖氨酸
然后如上述测试μg/ml浓度下各肽对大肠杆菌、绿脓杆菌和葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率%。各类似物的抑制生长有效率%列于下表ⅩⅢ中。
实施例22
端氨基（NH2）Magainin Ⅱ类似物，其中氨基酸残基19（谷氨酸）被除去，其他氨基酸残基被取代。这些类似物如下：
类似物 1 GIGKFLKKAKKFAKAFVKIINN-NH2
类似物 2 GIGKFLKKAAKFAKAFVKIINN-NH2
然后如上述测试这些类似物对大肠杆菌，绿脓杆菌和葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率%。类似物1的浓度1.25μg/ml时对大肠杆菌的抑制生长有效率为100%，浓度为2.5μg/ml时对绿脓杆菌的抑制生长有效率为100%，浓度为1.25μg/ml时对葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率为100%。类似物2的浓度为1.25μg/ml时对绿脓杆菌的抑制生长有效率为100%，浓度为1.25μg/ml时对葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率为100%。
实施例23
合成了端氨基（NH2）类似物，按其结构可以是Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ的类似物，其中氨基酸残基19（谷氨酸）被除去，而其他氨基酸残基被取代。这些类似物如下：
类似物 1 GIGKFLKKAKKFGKAFVKIMKK-NH2
类似物 2 GIGKFLKKAKKFAKAFVKIMKK-NH2
类似物 3 GIGKFLKKAKKFAKAFVKIIKK-NH2
然后测试这些类似物对大肠杆菌、绿脓杆菌和葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率%。类似物1于浓度1.25μg/ml时对大肠杆菌的抑制生长有效率为100%，浓度为2.5μg/ml时对绿脓杆菌的抑制生长有效率为100%，浓度为1.25μg/ml时对葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率为100%。类似物2于浓度为2.5μg/ml时对大肠杆菌的抑制生长有效率为100%，浓度为2.5μg/ml时对绿脓杆菌的抑制生长有效率为100%，于浓度为1.25μg/ml时对葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率为100%。类似物3于浓度为1.25μg/ml时对大肠杆菌的抑制生长有效率为100%，浓度为2.5μg/ml时对绿脓杆菌的抑制生长有效率为100%，浓度为1.25μg/ml时对葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率为100%。
实施例24
合成了端氨基（NH2）Magainin Ⅰ类似物，其中至少氨基酸残基17-23被除去，并且氨基酸残基3，7和8被赖氨酸残基取代。这些类似物具有如下结构：
类似物 1 GIKKFLKKAGKFGK-NH2
类似物 2 GIKKFLKKAGKFGKAF-NH2
然后测试这些类似物的抑制生长有效率。类似物1于浓度为10μg/ml时对大肠杆菌的抑制生长有效率为100%，浓度为10μg/ml时对绿浓杆菌的抑制生长有效率为100%，脓度为10μg/ml时对葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率为100%。类似物2于浓度为2.5μg/ml时对大肠杆菌的抑制生长有效率为100%，浓度为5μg/ml时对绿脓杆菌的抑制生长有效率为100%，浓度为5μg/ml时对葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率为100%。
实施例25
合成了端氨基（NH2）Magainin Ⅱ类似物，其中至少氨基酸残基16-23被除去，并且对其他残基进行了取代。这些类似物具有以下结构：
类似物 1 GIKKFLKKAKKFGKA-NH2
类似物 2 GIKKFLKKAKKFAKA-NH2
然后测试这些类似物的抑制生长有效率。类似物1于浓度为10μg/ml对绿脓杆菌的抑制生长有效率为100%，浓度为5.0μg/ml时对葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率为100%。类似物2于5μg/ml浓度时对大肠杆菌的抑制生长有效率为100%，浓度为5μg/ml时对绿脓杆菌的抑制生长有效率为100%，浓度为5μg/ml时对葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率为100%。
实施例26
合成了端氨基（NH2）类似物，按其结构可以是Magainin Ⅰ或Magainin Ⅱ的类似物，其中氨基酸16-23被除去，氨基酸残基3、7和8被赖氨酸残基取代，而氨基酸残基10和13被丙氨酸残基取代。这种类似物具有以下结构：
GIKKFLKKAAKFAKA-NH2
然后测试这种类似物的抑制生长有效率%。这种类似物于浓度为5μg/ml时对大肠杆菌的抑制生长有效率为100%，浓度为5μg/ml时对绿脓杆菌的抑制生长有效率为100%，浓度为5μg/ml时对葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率为100%。
实施例27
合成Magainin Ⅱ类似物，其中氨基酸残基19（谷氨酸）被除去，并且氨基酸1-4或3、5和6被除去，并且所余的氨基酸残基中至少有一个被取代。这些类似物具有如下结构：
类似物 1:FLKSAKKFGKAFVGIMNS
类似物 2:FLKSAKKFAKAFVGIMNS
类似物 3:FLHSAKKFGKAFVFIMNS
类似物 4:GIKHSAKKFAKAFKAIMNS
然后测试这些类似物对大肠杆菌，绿脓杆菌和葡萄球菌表皮菌素的抑制生长有效率%。各个类似物的抑制生长有效率列于下表ⅩⅣ。
表ⅩⅣ
μg/ml浓度下的抑制生长有效率%
类似物 大肠杆菌 绿脓杆菌 葡萄球菌表皮菌素
1 25时为100 25时为100 50时为100
2 10时为100 25时为100 50时为100
3 25时为100 25时为100 10时为100
4 10时为100 25时为100 5时为100
按照上面的讲述，本发明可能有多种改进和变种，因此，本发明可以在同时提交的权利要求的范围内实施，而不是作为特定的描述。