本发明涉及生物发酵工程赤霉素制取中一种新的生产方法。 目前国内外生产赤霉素有粉剂和乳剂两种剂型。生产这两种剂型赤霉素的方法是:将赤霉菌深层发酵后,发酵液经板框压滤机压滤,滤液真空浓缩后,加溶剂进行萃取,然后脱色,经离心机离心分离,将萃取液进行减压浓缩,再将结晶液真空抽滤,在冷却的情况下获得赤霉素湿晶体,然后将湿晶体洗涤,干燥,粉碎,即获得赤霉素结晶粉剂,包装后出厂。赤霉素乳剂的生产是利用在生产粉剂过程中抽滤结晶后的母液加入酒精、聚氧乙烯篦麻油配制而成。赤霉素乳剂中每毫升含赤霉素为4万微克。赤霉素结晶粉剂每克中含赤霉素在85万微克以上。现有生产赤霉素工艺流程见图1。目前应用的赤霉素生产方法存在着工艺流程长。工序多(15道以上工序),后处理设备复杂,设备投资大,因而导致生产成本较高,且产品收得率偏低(一般总收率只达60~70%)。另外,在溶剂萃取时需用大量的醋酸乙酯,车间必须防爆,再之,后处理的酸性废液排出需要处理,对环境是一个污染,不利于环境保护。总的,目前的生产方法存在的弱点很多。
本发明的目的在于改进传统的生产赤霉素的方法,提供一种简化工艺过程,节约设备投资,提高赤霉素生产收得率,降低生产成本,改善环境的新的生产方法。
赤霉素水剂的生产方法是将原传统生产赤霉粉剂或乳剂的工艺过程中在获得赤霉素浓缩液后面的7个工序全部去掉,只需再加一道工序即可获得成品。其新的生产方法是将赤霉菌通过发酵罐深层发酵后,发酵液用工业浓硫酸酸化调至液体PH值为2.5。酸化后的发酵液送入板框压滤机压滤,收集滤液。在滤液中用固体纯碱(粉末状碳酸钠)将溶液PH值回调至4.0~4.2,在温度50℃、600mmHg柱下进行浓缩,浓缩至含赤霉素为25000左右单位(微克/毫升)的浓溶液后,加入有效量的保护剂和有效量的乳化剂,而后再调节溶液PH值在3.0~4.5之间,即可获得赤霉素水剂,装瓶出厂。产品按检验实际效价折算成结晶粉剂,按各种规格进行包装。新地生产方法工艺流程见附图2。
应用本方法生产赤霉素水剂,它简化了传统的生产工艺,缩短了生产周期,节约了设备投资,降低了生产成本。由于赤霉素水剂生产是对传统的生产赤霉素粉剂或乳剂方法的改进,它不需要经过萃取,离心分离,减压浓缩回收等工序,因此也不需要萃取罐、高速离心机、氨压机、贮罐、接收罐、减压浓缩设备、醋酸乙酯回收设备、干燥设备、粉碎设备等九大生产设备。按年产5吨赤霉素粉剂计算,本生产方法与传统工艺生产比较,可节约设备投资约100万元。由于新的生产方法简化了工艺过程,也大幅度地提高了产品收得率,由传统工艺生产赤霉素的总收得率60~70%提高到了85~90%。由于生产设备大幅度减少,并减少了电力消耗,且产品总收得率的提高,使整个过程降低生产成本23.1%,显著地提高了企业的经济效益。此外,新的生产方法不使用醋酸乙酯和醋酸丁酯进行萃取和洗涤,因此生产工序中不需要防爆设施,也没有需要处理的酸性废液,有利于环境保护。用本方法生产的新剂型-赤霉素水剂,在田间使用时不需要用酒精溶解,可直接兑水使用,大大方便了用户,其效果与传统方法生产的同类产品粉剂或乳剂效果一致。因此,本方法有较多的优点。
通过附图2,详尽地叙述赤霉素水剂的生产方法,工艺流程包括下列各步:
一、制取斜面菌种
斜面菌种是将赤霉菌接种在经高温消毒的大米饭培养基上后,置于28℃恒温条件下培养3~5天而成的,斜面菌种为浓密的白色绒毛状菌丝。可放入4℃左右的冰箱中保存备用。
二、制取摇瓶种子
摇瓶种子是将斜面菌种接种到灭菌的500毫升三角玻璃瓶培养液中,在220转/分的摇瓶机上,经28℃恒温振荡培养30小时而成。摇瓶种子液要求在1500倍显微镜下检查时,赤霉菌菌丝丝粗,交织成网状,无酒味酸味,菌液浓无杂菌生成。
三、制取种子罐种子
将摇瓶种子倒入无菌接种玻璃瓶内,用橡皮管插入种子罐上的接种管,利用压差将菌液接入盛有培养基的种子罐内。种子罐内种子液的培养全过程需要通气和搅拌,培养40~48小时,种子液由稀变浓。不分层,泡沫基本消失,显微镜检查菌丝丝粗,无杂菌生长即可。
四、用发酵罐制取赤霉素
将种子罐的种子液通过管道移入盛有培养基的发酵罐内。发酵要求在28℃温度下进行,空气流量要求1.1~1.2V/V,搅拌速度170转/分,发酵周期7~8天,在发酵过程中,因培养液易于增浓,影响赤霉菌生长。因此在培养50小时以前需要补充2~3次稀料;发酵80~100小时,培养液含糖量降至1.0%以下时,需补充饴糖。用发酵罐制取赤霉素放罐标准为发酵液开始变稀。赤霉素含量增长缓慢或停止,显微镜下检查菌丝着色浅,衰老自溶,溶液PH值为4.0。
五、发酵液的酸化、过滤及回调
用工业浓硫酸缓慢地加入到发酵液内,调节溶液PH值至2.5然后用耐酸泵或用空压机将酸化以后的发酵液压入板框压滤机中,压滤时压力为0.5~1.2kg/Cm2。压滤完毕,收集滤液,并用工业纯碱(粉末状碳酸钠)加入滤液中,将溶液PH由原来2.5调回至4~4.2。
六、薄膜浓缩
将回调后的滤液放入真空薄膜浓缩器内,在温度50℃、真空度600mmHg柱下,将滤液浓缩至含赤霉素25000左右单位(微克/毫升)的浓缩液。
七、制备赤霉素水剂
根据浓缩液中赤霉素的含量往浓缩液中加入有效量的保护剂和有效量的乳化剂,然后将温合液调节PH值在3.0~4.5之间。产品检验实际含量折算成结晶粉剂。然后按各种规格进行包装,即可出厂。
用下列实例进一步说明本发明:
湖南微生物制剂厂原生产土霉素碱、土霉素钙盐、井岗霉素等微生物制剂产品。一九八九年以前,生产成本高,企业不景气。工厂决定转产生产赤霉素。如果应用传统的制取赤霉素的生产方法,不仅需投资80万元进行设备填平补齐,而且所需设备一时难以购到,不可能迅速转产。确定应用赤霉素水剂生产方法后,没有增加设备投资,只改装了部分管道,就生产出了合格的赤霉素水剂。该厂用4个20吨和2个16吨发酵罐生产赤霉素水剂,一个月生产赤霉素水剂20吨。折合成85万微克的粉剂400公斤,创产值60万元,利税20万元,经济效益十分显著。
该厂生产的赤霉素水剂,经湖南省内、外七十多个单位在20万亩水稻、柑桔等作物上运用,效果良好,受到广大农户的欢迎。
-表3湖南省浏阳县农业局在水稻田间试验中获得的数据:
表中所列试验折合每亩稻田用赤霉素1克,株高和节间长新复极差测验,效果是显著的,无明显差异。
-表4湖南省长沙县农业局在水稻田间试验中所获数据
该试验折合每亩用赤霉素1克,赤霉素水剂对旱稻株高增长10.06%,茎杆增加8.1%。赤霉素粉剂与水剂的效果一致,差异不明显。