天然珍珠蚌内脏全成分水解液及二十二碳六烯酸二十碳五烯的制备方法.pdf

天然珍珠蚌内脏全成份水解液及二十二碳六烯酸、 二十碳五烯酸的制备方法
    本发明涉及保健品的制备方法，尤其是天然珍珠蚌内脏全成份水解液及二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸的制备方法。

    珍珠，中国已有两千多年研究历史。明代医学家李时珍在《本草纲目》中详尽地论述了服用珍珠对人体具有清热、解毒、生肌、明目、镇惊、安神、护肤、抗衰老等诸多种神奇特效生理功能。但是，珍珠不溶于水，食用或外服中人体仅能直接消化吸收其7-9％，而91-93％的营养物质却被排出体外白白地浪费掉了。

    珍珠蚌内脏中的外套膜外表皮细胞经过生理变化而为中性所形成的珍珠囊才分泌出珍珠质，常说的珍珠是由珍珠囊不断分泌的珍珠质所形成的。产生珍珠的珍珠蚌内脏，特别其外套膜外表皮细胞和珍珠囊的营养成份类似天然珍珠。当今科技工作者普遍认为在钙离子存在下，蛋白质是无法水解的，因此，他们采用纯酸或纯碱或酶来水解珍珠，仅仅水解了占珍珠本身2-3％的珍珠壳角蛋白，而占珍珠本身97～98％的营养物质白白倒掉了，水解液中也仅得到15-17种氨基酸、913种微量元素，只有个别学者采用两步法才获得了维生素B₁和B₂。

    本发明的目的就是提供天然珍珠蚌内脏全成份水解液及二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸的制备方法，用该法可从天然珍珠蚌内脏中制得二十二碳六烯酸(DHA、又名脑黄金)、二十碳五烯酸(EPA)等不饱和脂肪酸，可在大量钙离子存在条件下使珍珠蚌内脏全部水解，制得含有天然珍珠蚌内脏所固有的18种氨基酸、24-25种无机盐类及其他微量元素和5种维生素等全部营养成份的全成份水解液。

    本发明的天然珍珠蚌内脏全成份水解液及二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸的制备方法，首先从天然珍珠蚌内脏制备二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸等高度不饱和脂肪酸，然后制备全成份水解液。

    二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)等高度不饱和脂肪酸地制备方法：

    (1)将珍珠蚌(三角帆蚌、或褶纹冠蚌、或背瘤丽蚌、或背角无齿蚌、或圆背角无齿蚌)洗净，取出内脏，特别要把采摘珍珠后的珍珠蚌内脏外套膜外表皮细胞与珍珠囊取下，打成肉浆物；

    (2)将肉浆物放入容器内，按肉浆物量一份，加入二份CHCL₃∶CH₃₀H＝1∶2的混合试剂，搅拌半小时，加入一份CHCL₃，又搅拌一小时，再加入一份蒸馏水，搅拌一小时；

    (3)真空抽滤，并用CHCL₃再次洗涤残渣；

    (4)将所得滤液放入分层漏斗中，静置24小时进行分层处理；

    CHCL₃的比重大于水，DHA和EPA等高度不饱和脂肪酸等脂肪油为CHCL₃所摔取处在漏斗的下层，其他物质与水等处在漏斗上层；

    (5)将所得的DHA、EPA等混合天然珍珠蚌内脏脂肪油置于真空、30～40℃温度、日光灯等条件下，让CHCL₃、CH₃₀H完全挥发掉，即得纯净天然珍珠蚌内脏DHA、EPA等脂肪油，再分离出DHA、EPA等高度不饱和脂肪酸；

    (6)将所得DHA、EPA等高度不饱和脂肪酸置于无菌室内，用紫外线灯光进行3-5小时消毒灭菌处理，之后，密封包装。

    天然珍珠蚌内脏全成份水解液的制备方法：

    (1)将上述天然珍珠蚌内脏提取DHA、EPA等之后的滤渣与分层漏斗中上层水溶液放入容器内，加入等量的浓盐酸，不断搅拌让其充分反应，使HCL完全挥发掉，剩下即为水溶性生成物；

    (2)用碱性溶液调节PH值至6.5-7.5，即见蛋白质沉淀于底层；

    (3)在上述溶液及其蛋白质沉淀中，按总溶液量的0.8-1.2％加入木瓜蛋白酶，搅拌均匀，并置于真空、58～65℃恒温、日光灯照射的条件下水解24小时；

    (4)抽滤，将所得纯净滤液再置于上述恒温、真空、日光灯照射条件下浓缩，并进行含氮量测定，直至滤液中含氮量超过国家珍珠总含氮量标准2.4％即可；

    (5)在无菌室内，将上述水解液进行紫外线灯灭菌消毒3-5小时，并加入抗菌素防腐，之后，密封包装。

    天然珍珠蚌内脏全成份水解液还可由以下方法制备：

    (1)与上述制备方法相同；

    (2)用碱性溶液调节PH值至6.5-7.0，即见蛋白质沉淀于底层；

    (3)将上述溶液及其沉淀物置于真空、80～100℃恒温与日光灯照射条件下，使其水解24小时；

    (4)与上述制备方法(4)相同；

    (5)与上述制备方法(5)相同；

    本发明的天然珍珠蚌内脏全成份水解液及二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸的制备方法简单、可靠，具有以下优点：

    (1)在大量钙离子存在条件下，使珍珠蚌内脏营养成份全部水解，未丢失任何营养成份，可在同一时间同一产品一步到位获得天然珍珠蚌内脏本身所固有的18种氨基酸、24-25种无机盐类及其他微量元素和5种维生素等全部营养成份；

    (2)原材料来源广泛，三角帆蚌、褶纹冠蚌、背角无齿蚌、圆背角无齿蚌、和背瘤丽蚌的内脏均可作原材料，使原来采摘珍珠之后废弃的内脏变为有用之物，所得成品的成本比使用珍珠为原材料降低了近百倍之多；

    (3)本发明的制备方法可在占珍珠内脏仅0.9～3.3％的脂肪中制取DHA、EPA等高度不饱和脂肪酸。

    用本发明的制备方法制取的天然珍珠蚌内脏全成份水解液及二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸经江西省分析测试中心进行定性定量测定数理统计处理，结果如下表，其中氨基酸采用美国进口贝克曼System6300型氨基酸分析仪测定，DHA、EPA和脂肪性维生素、无机盐类等全部采用自动化进口仪器测定。

    表1：本发明制备方法所得“天然珍珠蚌内脏全成份水解液”中氨基酸含量     名称         含量(mg/100ml)  名称      含量(mg/100ml)    天门冬氨酸ASP  26.95±1    ※异亮氨酸ILE  43.05±1  ※苏氨酸THR      94.45±1    ※亮氨酸LEU    100.69±1    丝氨酸SER      微量          酪氨酸IYR    47.02±1    谷氨酸GLU      34.31±1    ※苯丙氨酸PHE  53.78±1    脯氨酸PRO      微量        ※※组氨酸HIS  32.94±1    甘氨酸GLY      8.84±1     ※赖氨酸LYS    63.71±1    丙氨酸ALA      33.81±1      精氨酸ARG    95.92±1  ※缬氨酸VAL      37.80±1      胱氨酸CYS    微量  ※蛋氨酸ME       20.73±1    ※色氨酸IRY    14.70±2  注(1)※为人体必需氨基酸；(2)※※为儿童必需氨基酸

    表2：本发明制备方法所得“天然珍珠蚌内脏全成份水解液”中无机盐类及其微量元素含量     名称    含量(mg/100ml)    名称       含量(mg/100ml)    ※钙Ca    149.08±1        锶Sr        4.45±0.1    ※镁Mg    23.02±1       ※磷P         14.5±1    ※锰Mn    0.25±0.1      ※氯Cl        1256±11      铝Al    3.4±0.2       ※氟F         0.001±0.0003    ※铜Co    0.45±0.1      ※碘I         0.013±0.001    ※铁Fe    0.60±0.1      ※钼Mo        0.052±0.001    ※钠Na    1098±12       ※硒Se        0.01±0.001    ※锌Zn    2.41±0.1        溴Br        5.8±0.11    ※硅Si    18.9±0.2      ※铬Cr        0.10±0.01    ※镉Cd    0.009±0.001     铷Rb        0.02±0.001    ※硫S     2.00±0.01       锡Sn        0.004±0.001      锂Li    0.09±0.01       钾K         5.8±0.01      钛Ti    0.83±0.01    注：※为人体必需量大一些的元素或必需微量元素

    表3：本发明制备方法所得“天然珍珠蚌内脏全成份水解液”中维生素含量    名称            含量(mg/100ml)    名称      含量(mg/100ml)    维生素A(VA)       ＜0.002       维生素C(VC)    ＜0.250    维生素B₁(VB₁)  ＜0.001       维生素E(VE)    ＜0.005    维生素B₂(VB₂)    0.025       维生素PP(VPP)    0.4

    表4：天然珍珠蚌内脏中DHA、EPA含量(克/100克湿样品中)    项目    EPA    DHA  珍珠蚌内脏中    0.162    0.178    说明    n～3不饱和脂肪酸占41.11％而饱和    脂肪酸仅占1.013％表5：天然珍珠内脏全成份样品蛋白质、脂肪、碳水化合物测定资料    项目    含量(克/100克样中)    食部(％)    40～60    水份(克)    80.8～83.6    蛋白质(克)    6.6～15.0    脂肪(克)    0.9～3.3    碳水化合物(克)    0.5～5.0    灰分(克)    1.5～2.5

    下面结合实施例对本发明作详细说明。

    实施例1：

    二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)等高度不饱和脂肪酸的制备方法：

    (1)将三角帆蚌洗净，取出内脏100克，打成肉浆物；

    (2)将肉浆物放入容器内，加入CHCL₃∶CH₃₀H＝1∶2的混合试剂200ml，搅拌半小时，加入100ml CHCL₃，又搅拌一小时，再加入蒸馏水100ml，搅拌一小时；

    (3)真空抽滤，并用10ml CHCL₃再次洗涤残渣；

    (4)将所得滤液放入分层漏斗之中，静置24小时进行分层处理；

    CHCL₃的比重大于水，DHA和EPA等高度不饱和脂肪酸等脂肪油为CHCL₃所摔取处在漏斗的下层，其他物质与水处在漏斗上层；

    (5)将所得的DHA、EPA等混合天然珍珠蚌内脏脂肪油置于真空、35℃恒温、日光灯等条件下，让CHCL₃、CH₃₀H完全挥发掉，即得纯净天然珍珠蚌内脏DHA、EPA等脂肪油，再分离出DHA、EPA等高度不饱和脂肪酸；

    (6)将所得DHA、EPA等高度不饱和脂肪酸置于无菌室内，用紫外线灯光进行5小时消毒灭菌处理，之后，密封包装。

    天然珍珠蚌内脏全成份水解液的制备方法：

    (1)将上述天然珍珠蚌内脏提取DHA、EPA等之后的滤渣与分层漏斗中上层水溶液100克放入容器内，加入100ml浓盐酸，不断搅拌让其充分反应，并使HCL完全挥发掉，剩下即为水溶性生成物；

    (2)用氨水来调节PH值至7.5，即见蛋白质沉淀于底层；

    (3)在上述溶液及其蛋白质沉淀中，加入总溶液量1％的木瓜蛋白酶，搅拌均匀，并置于真空、60℃恒温、日光灯照射条件下水解24小时；

    (4)抽滤，将所得纯净滤液再置于上述恒温、真空、日光灯照射条件下浓缩，并进行含氮量测定，直至滤液中含氮量超过国家珍珠总含氮量标准2.4％即可；

    (5)在无菌室内，将上述水解液进行紫外线灯灭菌消毒5小时，并加入30国际单位膏霉素防腐，之后，密封包装。

    实施例2：

    二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)等高度不饱和脂肪酸的制备方法与实施例1相同。

    天然珍珠蚌内脏全成份水解液的制备方法：

    (1)与实施例1相同；

    (2)用氨水来调节PH值至6.8，即见蛋白质沉淀于底层；

    (3)将上述溶液及其沉淀物置于真空、90℃恒温、日光灯照射条件下，使其水解24小时；

    (4)与实施例1(4)相同；

    (5)与实施例1(5)相同；