用于治疗丙型肝炎的化合物 对相关申请的交叉参考
本申请要求2007年1月11日提交的美国临时申请60/884,459的优先权。
背景技术
丙型肝炎病毒(HCV)是主要的人类病原体，其在世界范围内感染估计一亿七千万人，大致是1型人类免疫缺陷病毒感染数量的5倍。这些HCV感染个体中相当大的部分发展成严重的进行性肝脏疾病，包括肝硬化和肝细胞癌(Lauer，G.M.；Walker，B.D.N.Engl.J.Med.2001，345，41-52)。
HCV是正链RNA病毒。基于对所推断氨基酸序列进行的比较和5’-非翻译区的广泛相似性，已经把HCV归类为黄病毒科中独立的属。黄病毒科的所有成员都具有包封的病毒体，其含有的正链RNA基因组通过翻译单一的连续的可读框而编码所有已知的病毒专属性蛋白质。
在整个HCV基因组的核苷酸和所编码的氨基酸序列中发现了相当程度的异质性。已经表征了至少6种主要的基因型，并且已经描述了多于50种的亚型。HCV的主要基因型在世界范围内的分布是不同的，并且HCV遗传异质性的临床重要性仍然是难以确定的，尽管对基因型对发病和治疗的可能影响行了大量的研究。
单链HCV RNA基因组的长度大约是9500个核苷酸，并且具有单一的可读框(ORF)，其编码由大约3000个氨基酸组成的单一的大的多蛋白。在被感染的细胞中，这种多蛋白在多个位点被细胞蛋白酶和病毒蛋白酶裂解，从而产生结构蛋白和非结构(NS)蛋白。就HCV来说，成熟的非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的产生受到两种病毒蛋白酶的影响。认为第一种病毒蛋白酶是金属蛋白酶，并且在NS2-NS3接合处进行裂解；第二种病毒蛋白酶是包含在NS3的N-末端区域内的丝氨酸蛋白酶(也称为NS3蛋白酶)，并且介导NS3下游的所有随后裂解，既在NS3-NS4A裂解位点以顺式进行裂解，又在其余的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位点以反式进行裂解。NS4A蛋白似乎具有多种功能，其充当NS3蛋白酶的辅因子，并且可能有助于NS3及其它病毒复制酶组分的膜定位。NS3蛋白与NS4A形成复合物，这似乎是在所有位点进行加工活动由此提高蛋白质水解效率所必需的。NS3蛋白还显示出三磷酸核苷酶和RNA解旋酶活性。NS5B(也称为HCV聚合酶)是依赖于RNA的RNA聚合酶，在HCV的复制中涉及所述酶。在“Structural Analysis ofthe Hepatitis C Virus RNA Polymerasein Complex with Ribonucleotides(Bressanelli；S.et al.，Journal of Virology 2002，3482-3492)和Defrancesco and Rice，Clinics in Liver Disease 2003，7，211-242中描述了HCV NS5B蛋白。
目前，最有效的HCV疗法使用α-干扰素和利巴韦林的组合，其在40％的患者中产生持续的效果(Poynard，T.et al.Lancet 1998，352，1426-1432)。最新的临床结果证明，作为单一疗法，PEG化的α-干扰素优于未修饰的α-干扰素(Zeuzem，S.et al.N.Engl.J.Med.2000，343，1666-1672)。然而，即使就涉及PEG化α-干扰素和利巴韦林组合的实验性治疗方案而言，相当多的患者也没有出现病毒载量的持续减少。因此，就开发用于治疗HCV感染的有效疗法而言，存在明显和迫切的需要。
【发明内容】
本发明一方面是式I化合物或其可药用盐：
其中
R1为-CO2R5或-CONR6R7；
R2为
R3为氢、卤素、烷基、烯基、羟基、苄基氧基、烷氧基或卤代烷氧基；
R4为环烷基；
R5为氢或烷基；
R6为氢、烷基、烷基SO2-、环烷基SO2-、卤代烷基SO2-、(R9)2NSO2-或(R10)SO2-；
R7为氢或烷基；
R8为氢、烷基、环烷基、(环烷基)烷基、烷基羰基、烷氧基羰基、苄基、苄基氧基羰基或吡啶基；
R9为氢或烷基；
R10为氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、N-(R11)哌嗪基(N-(R11)piperazinyl，N上取代有R11的哌嗪基)、吗啉基、硫吗啉基(thiomorpholinyl)、高哌啶基(homopiperidinyl)或高吗啉基(homomorpholinyl)；
R11为氢或烷基；以及
虚线表示单键或双键。
本发明另一方面是式I化合物，其中R1为-CONR6R7；R6为烷基SO2-、环烷基SO2-、卤代烷基SO2-、(R9)2NSO2-或(R10)SO2-；以及R7为氢。
本发明另一方面是式I化合物，其中R3为氢。
本发明另一方面是式I化合物，其中R3为甲氧基。
本发明另一方面是式I化合物，其中R4为环己基。
本发明另一方面是式I化合物，其中R6为(R9)2NSO2-或(R10)SO2-。
本发明另一方面是式I化合物，其中如在下面结构式中那样，虚线表示单键。
本发明另一方面是式I化合物，其具有如下立体化学。
本发明另一方面是式I化合物，其具有如下立体化合物。
本发明另一方面是式I化合物，其中如在下面结构式中那样，虚线表示双键。
任何变量(包括R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11和虚线)的任何范围可独立与任何其它变量地范围一起使用。
除非另有说明，这些术语具有下述意义。“烷基”的意思是由1至6个碳所组成的直链或支链烷基。“烯基”的意思是由2至6个碳所组成且具有至少一个双键的直链或支链烷基。“环烷基”的意思是由3至7个碳所组成的单环环系。“羟基烷基”、“烷氧基”及具有经取代烷基部份的其它术语包括由针对所述烷基部份的1至6个碳原子所组成的直链与支链异构体。“卤代烷基”与“卤代烷氧基”包括所有卤化异构体，从单卤素取代的烷基至全卤素取代的烷基。“芳基”包括碳环芳族取代基与杂环芳族取代基。括号与多重括号术语意在向本领域技术人员阐明键合关系。例如，如((R)烷基)那样的术语指进一步被取代基R取代的烷基取代基。
本发明包括所述化合物的所有可药用盐形式。可药用盐为其中抗衡离子不会显著地助长化合物的生理活性或毒性且其本身作为药理等价物的那些可药用盐。这些盐可根据一般有机技术使用商购试剂来制备。一些阴离子盐形式包括醋酸盐、醋硬脂酸盐(acistrate)、苯磺酸盐、溴化物、氯化物、柠檬酸盐、富马酸盐、葡萄糖醛酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、碘化物、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐及昔萘酸盐(xinofoate)。一些阳离子盐形式包括铵盐、铝盐、苄星(benzathine)盐、铋盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐、锂盐、镁盐、葡甲胺盐、4-苯基环己胺盐、哌嗪盐、钾盐、钠盐、丁三醇胺(tromethamine)盐及锌盐。
本发明的一些化合物具有不对称碳原子(例如下文结构)。本发明包括所有立体异构形式，包括对映异构体与非对映异构体以及立体异构体的混合物如外消旋体。一些立体异构体可使用本领域中已知的方法来制备。所述化合物的立体异构混合物与相关中间体的立体异构混合物可根据本领域中已知的方法来分离成单独的异构体。
合成方法
所述化合物可通过本领域已知的方法(包括如下所述的那些方法)来制备。一些试剂和中间体在本领域中是已知的。其它试剂和中间体可通过本领域已知的方法使用商购原料来制备。用于描述化合物合成的变量(例如所编号的“R”取代基)仅意在说明如何制备，而不应该与权利要求书中或本说明书其它段落中所使用的变量相混淆。方案中所使用的缩写通常符合本领域中所使用的惯用意义。
可将2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸甲酯水解成2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸(参见方案1)。该化合物可使用例如1，1’-羰基二咪唑(CDI)及1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)而在无水THF(四氢呋喃)中与各种磺酰脲(sulfonyl urea)缩合。所得到的酰基硫酰胺(acyl sulfamide)可使用例如苏楚基(Suzuki)偶联反应条件而与各种2-甲酰基苯基硼酸或2-甲酰基苯基硼酸酯进行已知的偶联反应，从而得到所绘类型的环状半缩醛胺中间体(cyclichemiaminal intermediate)。可通过如下方式将这些化合物转化为吲哚并苯并氮杂衍生物：这些化合物在DMF(二甲基甲酰胺)中用2-(二甲氧基磷酰基)丙烯酸甲酯在碳酸铯的影响下通过连续的麦克尔(Michael)反应和HornerEmmons反应进行处理。
方案1
也可使N经保护的哌嗪与中间体吲哚并苯并氮杂酸偶联，并且所得到的哌嗪甲酰胺可使用本领域已知的方法来进行脱保护和使用各种合成方案来进行衍生，其中一些示例性实例如下所示(参见方案2)。
方案2
可用于合成本发明一些化合物的中间体涉及方案3所示的吲哚并苯并氮杂叔丁酯的制备。
方案3
该方法学涉及对所示吲哚甲酯进行碱催化水解，然后形成叔丁酯(例如与亚硫酰氯和叔丁醇钾反应或用碳酸银和叔丁基溴进行烷基化)。所得到的化合物使用与先前所概述相似的化学方法来进行转化，得到如上所示的吲哚并苯并氮杂的混合酯。
这些中间体可用于如下可选择的方法，所述可选择的方法可如方案4所示用于制备酰基硫酰胺烷基桥接的哌嗪和酰基磺酰胺烷基桥接的哌嗪。叔丁酯基的断裂可产生酸，所述酸可与各种磺酰胺和磺酰脲偶联。随后进行水解，得到相关的脂肪酸，所述脂肪酸可与各种烷基桥接的哌嗪(alkyl-bridged piperazine)偶联。例如，O-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基-四氟硼酸盐和二异丙基乙胺于DMSO(二甲基亚砜)中的溶液可得到烷基桥接的哌嗪甲酰胺。
方案4
生物学方法
当在以下HCV RdRp检测中测定时，所述化合物展现了对抗HCV NS5B的活性。
对HCV NS5B RdRp进行克隆、表达及纯化
将对HCV基因型1b的NS5B蛋白进行编码的cDNA克隆至pET21a表达载体中。将所述蛋白质表达成截掉C末端的18个氨基酸(the protein wasexpressed with an 18amino acid C-terminal truncation)以提高溶解度。大肠杆菌活力细胞系BL21(DE3)用于所述蛋白质的表达。使培养物在37℃生长约4小时，直到培养物达到600纳米处的光密度为2.0。使培养物冷却至20℃，并用1mM IPTG进行诱导。加入新鲜的氨苄青霉素至最终浓度为50微克/毫升，并使细胞在20℃生长过夜。
使细胞沉淀(3升)溶解以供纯化，得到15-24毫克经纯化的NS5B。溶胞缓冲液由20mM Tris-HCl(pH 7.4)、500mM NaCl、0.5％Triton X-100、1mM DTT、1mM EDTA、20％甘油、0.5毫克/毫升溶菌酶、10mM MgCl2、15微克/毫升脱氧核糖核酸酶I及完全TM蛋白酶抑制剂药片(Roche)所组成。加入溶胞缓冲液后，使用组织匀浆器来使经冷冻的细胞沉淀重新悬浮。为了降低样品的粘度，使用与Branson超声波处理器相连的微尖头来使溶胞产物的等分液在冰上接受超声波处理。经超声处理的溶胞产物在4℃以100,000×g离心1小时，并过滤经过0.2微米滤器单元(Corning)。
使用三个连续的色谱步骤来纯化蛋白质：肝素琼脂糖CL-6B、PolyU琼脂糖4B及HiTrap SP琼脂糖(Pharmacia)。色谱缓冲液与溶胞缓冲液相同，但不含有溶菌酶、脱氧核糖核酸酶I、MgCl2或蛋白酶抑制剂，且缓冲液的NaCl浓度根据将蛋白质加载至色谱柱上的需要而调整。各色谱柱以NaCl梯度液洗脱，所述梯度液的长度在5至50个柱体积之间变化，这取决于色谱柱的类型。在最终色谱步骤后，所得到的酶纯度＞90％(基于SDS-PAGE分析)。将酶分成等分液，并贮存在-80℃。
标准HCV NS5B RdRp酶检测
在96孔板(Costar 3912)中在最终体积为60微升的情况下进行HCV RdRp基因型1b检测。检测缓冲液由20mM Hepes(pH 7.5)、2.5mM KCl、2.5mMMgCl2、1mM DTT、1.6单位RNAse抑制剂(Promega N2515)、0.1毫克/毫升BSA(Promega R3961)及2％甘油所组成。所有化合物在DMSO中连续稀释(3倍)并在水中进一步稀释，以使DMSO在检测中的最终浓度为2％。HCV RdRp基因型1b酶在最终浓度为28nM时使用。聚A(polyA)模板在6nM时使用，且生物素化的寡dT12引物在最终浓度为180nM时使用。模板是商购得到的(Amersham 27-4110)。生物素化的引物由Sigma Genosys制备。3H-UTP在0.6μCi(0.29μM总UTP)时使用。通过加入酶来引发反应，在30℃孵育60分钟，并通过加入25微升含有SPA珠粒(4微克/微升，Amersham RNQ 0007)的50mM EDTA来停止。在室温孵育＞1小时后，将板在Packard Top Count NXT上读取。
经修改的HCV NS5B RdRp酶检测
经修改的酶检测基本上按照关于标准酶检测所描述的那样来进行，不同的是，将生物素化的寡dT12引物预捕获在链霉抗生物素(streptavidin)涂覆的SPA珠粒上，其方式是将引物与珠粒在检测缓冲液中混合，并在室温孵育一小时。离心除去未结合的引物。使与引物结合的珠粒重新悬浮在20mMHepes缓冲液(pH 7.5)中，并在引物的最终浓度为20nM以及珠粒的最终浓度为0.67微克/微升时用于检测。检测中的加入顺序如下：将酶(14nM)加到经稀释的化合物中，接着加入模板(0.2nM)、3H-UTP(0.6μCi，0.29μM)及与引物结合的珠粒的混合物，以引发反应，所给浓度为最终浓度。使反应在30℃进行4小时。
化合物的IC50值使用七种不同的[I]([I]为抑制浓度)来确定。使用方程式y＝A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))通过抑制作用来计算IC50值。
FRET检测制剂
为了进行HCV FRET筛选检测，使用96孔细胞培养板。FRET肽(Anaspec，Inc.)(Taliani et al.，Anal.Biochem.1996，240，60-67)在其一端附近含有荧光供体即EDANS，并且在另一端附近含有受体即DABCYL。通过供体与受体之间的分子间共振能量转移(RET)来使所述肽的荧光淬灭，但当NS3蛋白酶使所述肽裂解时，产物不再发生RET淬灭，且供体的荧光变得显而易见。检测试剂如下制备：将得自Promega(#E153A)的5×细胞荧光素酶细胞培养物溶胞试剂(cell Luciferase cell culture lysis reagent)用dH2O稀释至1×，加入NaCl至最终为150mM，并且将FRET肽自2mM储备液稀释至最终为20μM。
为了制备板，带有或不带有海紫罗兰属荧光素酶(Renilla luciferase)报告子基因的HCV复制子细胞用胰蛋白酶处理，并置于96孔板的各孔中，其中将经滴定的测试化合物加到第3列至第12列中；第1列和第2列含有对照化合物(HCV蛋白酶抑制剂)，且最底行含有不带有化合物的细胞。然后，将板置于37℃的CO2培养箱中。
检测
加入上述测试化合物(FRET检测制剂)后，在不同时间将板取出，且向每个孔中加入Alamar蓝色溶液(Trek Diagnostics，#00-100)，作为细胞毒性的测量方法。在Cytoflour 4000仪器(PE Biosystems)中读取后，将板以PBS冲洗，然后通过向每个孔中加入30微升上述FRET肽检测试剂(FRET检测制剂)而用于FRET检测。接着，将板置于Cytoflour 4000仪器中，其已被设定成激发波长为340nm/发射波长为490nm，以自动模式历时20次循环，且板在动态模式中读取。典型地，在读取后使用终点分析的信号对噪声为至少三倍。或者，在Alamar蓝色读取后，将板以PBS冲洗，加入不带有酚红的50微升DMEM(高葡萄糖)，然后使用Promega Dual-Glo Luciferase Assay System，将板用于荧光素酶检测。
通过对相对的HCV复制子抑制作用及相对的细胞毒性值进行定量而对化合物进行分析。为了计算细胞毒性值，将得自对照孔的平均Alamar蓝色荧光信号设定为100％无毒性。接着，将各化合物测试孔中的各个信号除以平均对照信号并乘以100％，以确定细胞毒性百分比。为了计算HCV复制子抑制值，平均背景值得自在检测结束时含有最高量HCV蛋白酶抑制剂的两个孔。这些值类似于得自天然Huh-7细胞的那些值。
然后，将背景值从得自对照孔的平均信号中扣除，且将此值用作100％活性。接着，将各化合物测试孔中的各个信号除以背景扣除后的平均对照值并乘以100％，以确定活性百分比。将蛋白酶抑制剂滴定的EC50值计算成可使FRET或荧光素酶活性降低50％的浓度。针对化合物板所得到的两个值即细胞毒性百分比与活性百分比用于确定有待进一步分析的重要化合物。
化合物的代表性数据报道在表1中。
表1
A＞0.5μM；B为0.001μM-0.5μM；C＜0.02μM，但没有确定确切值。
使用预孵育方案来确定IC50值；使用FRET检测来确定EC50值。
药物组合物和治疗方法
所述化合物展现出对抗HCV NS5B的活性，且可用于治疗HCV与HCV感染。因此，本发明的另一个方面为一种组合物，其包含本发明的化合物或其可药用盐及可药用载体。
本发明的另一个方面为一种组合物，其还包含具有抗HCV活性的化合物。
本发明的另一个方面为一种组合物，其中具有抗HCV活性的化合物为干扰素。在本发明的另一个方面，所述干扰素选自干扰素α2B、PEG化的(pegylated)干扰素α、同感干扰素(consensus interferon)、干扰素α2A及淋巴细胞样干扰素τ。
本发明的另一个方面为一种组合物，其中具有抗HCV活性的化合物为环孢菌素。在本发明的另一个方面，所述环孢菌素为环孢菌素A。
本发明的另一个方面为一种组合物，其中具有抗HCV活性的化合物选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、Imiqimod、利巴韦林、5’-单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺及金刚乙胺。
本发明的另一个方面为一种组合物，其中具有抗HCV活性的化合物可有效抑制靶标的功能以治疗HCV感染，所述靶标选自HCV金属蛋白酶(HCVmetalloprotease)、HCV丝氨酸蛋白酶(HCV serine protease)、HCV聚合酶(HCVpolymerase)、HCV解螺旋酶(HCV helicase)、HCV NS4B蛋白(HCV NS4Bprotein)、HCV进入(HCV entry)、HCV组装(HCV assembly)、HCV释出(HCVegress)、HCV NS5A蛋白(HCV NS5A protein)、IMPDH及核苷类似物(nucleoside analog)。
本发明的另一个方面为一种组合物，其包含本发明的化合物或其可药用盐、可药用载体、干扰素及利巴韦林。
本发明的另一个方面为一种抑制HCV复制子(HCV replicon)功能的方法，其包括使HCV复制子与式I化合物或其可药用盐接触。
本发明的另一个方面为一种抑制HCV NS5B蛋白功能的方法，其包括使HCV NS5B蛋白与式I化合物或其可药用盐接触。
本发明的另一个方面为治疗患者中HCV感染的方法，其包括向所述患者给予治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐。本发明的另一个方面是抑制HCV复制子功能的方法。本发明的另一个方面是抑制HCV NS5B蛋白功能的方法。
本发明的另一个方面为治疗患者中HCV感染的方法，其包括向所述患者给予治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐，并且给予(之前、之后或同时)另一种具有抗HCV活性的化合物。
本发明的另一个方面为其中其它具有抗HCV活性的化合物为干扰素的方法。
本发明的另一个方面为其中所述干扰素选自干扰素α2B、PEG化的干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A及淋巴细胞样干扰素τ的方法。
本发明的另一个方面为其中其它具有抗HCV活性的化合物为环孢菌素的方法。
本发明的另一个方面为其中所述环孢菌素为环孢菌素A的方法。
本发明的另一个方面为其中其它具有抗HCV活性的化合物选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、可提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、Imiqimod、利巴韦林、5’-单磷酸肌苷脱氢酶抑制剂、金刚烷胺及金刚乙胺的方法。
本发明的另一个方面为其中其它具有抗HCV活性的化合物可有效抑制靶标功能以治疗HCV感染的方法，所述靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白质、HCV进入、HCV组装、HCV释出、HCV NS5A蛋白质、IMPDH及核苷类似物。
本发明的另一个方面为其中其它具有抗HCV活性的化合物可有效抑制HCV生命循环中的靶标而非HCV NS5B蛋白的功能的方法。
“治疗有效”的意思是提供有意义的患者益处所需要的药物量，如肝炎与HCV感染领域中的执业医师所理解的那样。
“患者”的意思是被HCV病毒感染且适于治疗的人们，如肝炎与HCV感染领域中的执业医师所理解的那样。
“治疗”、“疗法”、“给药方案”、“HCV感染”及相关术语如肝炎与HCV感染领域中的执业医师所理解的那样来使用。
本发明的化合物一般以药物组合物的形式来给予，所述组合物包含治疗有效量的本发明化合物或其可药用盐及可药用载体，且可含有常规的赋形剂。治疗有效量为提供有意义的患者益处所需要的量。可药用载体为具有可接受安全性的常规已知载体。组合物涵盖所有常见的固体形式与液体形式，包括胶囊剂、片剂、锭剂与粉末剂以及液体混悬剂、糖浆剂、酏剂及溶液剂。组合物使用一般制剂技术来制备，且常规的赋形剂(诸如粘合剂与润湿剂)与介质(诸如水与醇)通常用于组合物。
固体组合物通常被配制成剂量单位，且每份剂量提供约1至1000毫克活性成份的组合物是优选的。剂量的一些实例为1毫克、10毫克、100毫克、250毫克、500毫克及1000毫克。一般而言，其它药物可按与临床上所使用的经典单位范围相似的单位范围存在。典型地，其为0.25-1000毫克/单位。
液体组合物通常在剂量单位范围内。一般而言，液体组合物的单位剂量范围可以是1-100毫克/毫升。剂量的一些实例为1毫克/毫升、10毫克/毫升、25毫克/毫升、50毫克/毫升及100毫克/毫升。一般而言，其它药物可按与临床上所使用的经典单位范围相似的单位范围存在。典型地，其为1-100毫克/毫升。
本发明涵盖所有常规的给药模式，且口服方法与肠胃外方法是优选的。一般而言，给药方案可类似于临床上所使用的其它药物。典型地，每日剂量可以是每日1-100毫克/公斤体重。一般而言，口服方式需要较多的化合物，而肠胃外方式需要较少的化合物。然而，具体的给药方案可由医师通过合理的医药判断来确定。
本发明也涵盖在组合疗法中给予所述化合物的方法。即所述化合物可与可用于治疗肝炎及HCV感染的其它药物一起使用，但所述化合物与所述其它药物分开使用。在这些组合方法中，所述化合物通常可搭配其它药物而以每日1-100毫克/公斤体重的每日剂量来给予。其它药物一般可按治疗上所使用的量来给予。然而，具体的给药方案可由医师通过合理的医药判断来确定。
适于组合物及方法的化合物的一些实例列在表2中。
表2
商品名 抑制剂的类型或靶标的类型 来源公司 Omega IFN IFN-ω Intarcia Therapeutics BILN-2061 丝氨酸蛋白酶抑制剂 BoehringerIngelheim Pharma KG， Ingelheim，Germany Summetrel 抗病毒 Endo Pharmaceuticals Holdings Inc.， Chadds Ford，PA Roferon A IFN-α2a F.Hoffmann-La Roche LTD，Basel， Switzerland Pegasys PEG化的IFN-α2a F.Hoffmann-La Roche LTD，Basel， Switzerland Pegasys and Ribavirin PEG化的IFN-α2a/利巴韦林 F.Hoffmann-La Roche LTD，Basel， Switzerland CellCept HCV IgG免疫抑制剂 F.Hoffmann-La Roche LTD，Basel， Switzerland Wellferon 淋巴细胞样IFN-αn1 GlaxoSmithKline plc，Uxbridge，UK Albuferon-α 白蛋白IFN-α2b Human Genome Sciences Inc.，Rockville， MD Levovirin 利巴韦林 ICN Pharmaceuticals，Costa Mesa，CA IDN-6556 胱天蛋白酶(caspase)抑制剂 Idun Pharmaceuticals Inc.，San Diego，CA IP-501 抗纤维变性 Indevus Pharmaceuticals Inc.，Lexington， MA Actimmune INF-γ InterMune Inc.，Brisbane，CA Infergen A IFN干扰素α-1(IFN alfacon-1) InterMune Pharmaceuticals Inc.，Brisbane， CA ISIS 14803 反义 ISIS Pharmaceuticals Inc，Carlsbad， CA/Elan Phamaceuticals Inc.，New York， NY JTK-003 RdRp抑制剂 Japan Tobacco Inc.，Tokyo，Japan Pegasys and Ceplene PEG化的IFN-α2a/免疫调节剂 Maxim Pharmaceuticals Inc.，San Diego， CA Ceplene 免疫调节剂 Maxim Pharmaceuticals Inc.，San Diego， CA Civacir HCV IgG免疫抑制剂 Nabi Biopharmaceuticals Inc.，Boca Raton， FL Intron A and Zadaxin IFN-α2b/α1-胸腺素 RegeneRx Biopharmiceuticals Inc.， Bethesda，MD/SciClone Pharmaceuticals Inc，San Mateo，CA Levovirin IMPDH抑制剂 Ribapharm Inc.，Costa Mesa，CA Viramidine 利巴韦林前药 Ribapharm Inc.，Costa Mesa，CA Heptazyme 核酶 Ribozyme Pharmaceuticals Inc.，Boulder， CO
商品名 抑制剂的类型或靶标的类型 来源公司 IntronA IFN-α2b Schering-Plough Corporation，Kenilworth， NJ PEG-Intron PEG化的IFN-α2b Schering-Plough Corporation，Kenilworth， NJ Rebetron IFN-α2b/利巴韦林 Schering-Plough Corporation，Kenilworth， NJ Rebavirin 利巴韦林 Schering-Plough Corporation，Kenilworth， NJ PEG-Intron/Rebavirin PEG化的IFN-α2b/利巴韦林 Schering-Plough Corporation，Kenilworth， NJ Zadazim 免疫调节剂 SciClone Pharmaceuticals Inc.，San Mateo， CA Rebif IFN-β1a Serono，Geneva，Switzerland IFN-βand EMZ701 IFN-β和EMZ701 Transition Therapeutics Inc.，Ontario， Canada Batabulin(T67) β-微管蛋白抑制剂 Tularik Inc.，South San Francisco，CA Merimepodib(VX-497) IMPDH抑制剂 Vertex Pharmaceuticals Inc.，Cambridge， MA Telaprevir(VX-950， LY-570310) NS3丝氨酸蛋白酶抑制剂 Vertex Pharmaceuticals Inc.，Cambridge， MA/Eli Lilly and Co.Inc.，Indianapolis，IN Omniferon 天然IFN-α Viragen Inc.，Plantation，FL XTL-6865(XTL-002) 单克隆抗体 XTL Biopharmaceuticals Ltd.，Rehovot， Isreal HCV-796 NS5B复制酶抑制剂 Wyeth/Viropharma NM-283 NS5B复制酶抑制剂 Idenix/Novartis GL-59728 NS5B复制酶抑制剂 Gene Labs/Novartis GL-60667 NS5B复制酶抑制剂 Gene Labs/Novartis 2’C MeA NS5B复制酶抑制剂 Gilead PSI 6130 NS5B复制酶抑制剂 Roche R1626 NS5B复制酶抑制剂 Roche SCH 503034 丝氨酸蛋白酶抑制剂 Schering Plough NIM811 亲环蛋白抑制剂 Novartis Suvus 亚甲蓝 Bioenvision Multiferon 长效(long lasting)IFN Viragen/Valentis Actilon(CPG10101) TLR9激动剂 Coley Interferon-β 干扰素-β-1a Serono Zadaxin 免疫调节剂 Sciclone 来自WO 2005047288 的吡唑并嘧啶化合物 和盐 HCV抑制剂 Arrow Therapeutics Ltd. 2’C甲基腺苷 NS5B复制酶抑制剂 Merck GS-9132(ACH-806) HCV抑制剂 Achillion/Gilead
【具体实施方式】
使用下述柱和条件得到下述中间体和实施例的分析性LCMS数据。停止时间：梯度时间+1分钟；起始浓度：0％B，除非另有说明；洗脱剂A：5％CH3CN/95％H2O(含有10mM NH4OAc(乙酸铵))(对于柱A、D和E)，10％MeOH/90％H2O(含有0.1％TFA(三氟乙酸))(对于柱B和C)；洗脱剂B：95％CH3CN/5％H2O(含有10mM NH4OAc)(对于柱A、D和E)，90％MeOH/10％H2O(含有0.1％TFA)(对于柱B和C)；柱A：Phenomenex 10μ4.6×50mm C18；柱B：Phenomenex C1810μ3.0×50mm；柱C：Phenomenex4.6×50mm C1810μ；柱D：Phenomenex Lina C185μ3.0×50mm；柱E：Phenomenex 5μ4.6×50mm C18。制备性HPLC数据。梯度：历时20分钟线性变化，除非另有说明；起始浓度：15％B，除非另有说明；结束浓度：100％B；洗脱剂A：5％CH3CN/95％H2O(含有10mM NH4OAc)；洗脱剂B：95％CH3CN/5％H2O(含有10mM NH4OAc)；柱：Sunfire Prep C18OBD 5μ30×100mm。
中间体1
2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸甲酯
在2℃将新重结晶的三溴化吡啶鎓(pyridinium tribromide)(在热AcOH(乙酸)(5mL/1g)中重结晶，用冷AcOH冲洗，并在高真空下用KOH干燥)逐份(历时10分钟)加到搅拌的3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(60g，233mmol)(使用在WO2004/065367中描述的方法来制备)于CHCl3/THF(四氢呋喃)(1∶1，1.25L)中的溶液中。将反应溶液在0-5℃搅拌2.5小时，并用饱和NaHSO3水溶液(1L)、1N HCl(1L)和盐水(1L)洗涤。干燥(MgSO4)有机层并浓缩。将所得红色油状物用Et2O(乙醚)稀释并浓缩。将所得粉色固体溶解在Et2O(200mL)中，用己烷(300mL)处理并部分浓缩。过滤收集固体，用己烷冲洗。将母液浓缩至干，并重复上述操作。合并固体，得到2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(64g，190mmol，82％)，其为蓬松粉色固体，所述固体不经进一步纯化即使用。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.47(宽单峰，1H)，8.03(d，J＝1.4Hz，1H)，7.74(dd，J＝1.4，8.8Hz，1H)，7.69(d，J＝8.8Hz，1H)，3.92(s，3H)，2.82(tt，J＝3.7，11.7Hz，1H)，1.98-1.72(m，7H)，1.50-1.27(m，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ168.2，135.6，130.2，123.1，120.8，120.3，118.7，112.8，110.7，52.1，37.0，32.2(2)，27.0(2)，26.1。LCMS：m/e 334(M-H)-，保留时间：3.34分钟，柱A，4分钟梯度。
中间体2
2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸
将2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(20g，60mmol)和LiOH(3.8g，160mmol)于MeOH/THF/H2O(1∶1∶1，300mL)中的溶液在90℃加热2小时。反应混合物在冰/水浴中冷却，用浓度为1M的HCl溶液(约160mL)中和，用水(250mL)稀释，并在室温搅拌1小时。过滤收集沉淀物，用水冲洗，干燥，得到2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸(定量)，其不经进一步纯化即使用。
可用来提供2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸的可选择方法如下所述。
将2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(117g，349mmol)和LiOH·H2O(26.4g，629mmol)于MeOH/THF/H2O(1∶1∶1，1.8L)中的溶液回流加热3小时。将反应混合物在冰/水浴中冷却至约2℃，用1M HCl(约650mL)中和(加入速度使温度不超过5℃)，用水(1L)稀释，并搅拌，同时温热至环境温度。过滤收集沉淀物，用水冲洗，干燥，得到2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸的单THF溶剂化物(135.5g，345mmol，99％)，其为黄色固体，所述固体不经进一步纯化即使用。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ11.01(宽单峰，1H)，8.77(s，1H)，8.07(d，J＝1.5Hz，1H)，7.82(dd，J＝1.5，8.8Hz，1H)，7.72(d，J＝8.8Hz，1H)，3.84-3.74(m，4H)，2.89(m，1H)，1.98-1.72(m，11H)，1.50-1.24(m，3H)。13CNMR(75MHz，CDCl3)δ172.7，135.5，130.7，122.3，120.9(2)，118.8，113.3，111.1，67.9(2)，37.0，32.2(2)，27.0(2)，26.1，25.5(2)。LCMS：m/e 320(M-H)-，保留时间：2.21分钟，柱A，4分钟梯度。
中间体3
2-溴-3-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-1H-吲哚-6-甲酰胺
在22℃将1，1’-羰基二咪唑(1.17g，7.2mmol)加到搅拌的2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸(2.03g，6.3mmol)于THF(6mL)中的溶液中。立即有CO2放出，当放出减慢时，将溶液在50℃加热1小时，然后冷却到22℃。加入N，N-二甲基硫酰胺(0.94g，7.56mmol)，然后滴加DBU(1.34g，8.8mmol)于THF(4mL)中的溶液。继续搅拌24小时。将混合物在乙酸乙酯和稀HCl之间分配。乙酸乙酯层先后用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥。将萃取物浓缩至干，留下标题化合物，其为浅黄色易碎泡沫状物(2.0g，74％，通过NMR估计纯度＞90％)。1H NMR(300MHz，DMSO-D6)δppm 1.28-1.49(m，3H)1.59-2.04(m，7H)2.74-2.82(m，1H)2.88(s，6H)7.57(dd，J＝8.42，1.46Hz，1H)7.74(d，J＝8.78Hz，1H)7.91(s，1H)11.71(s，1H)12.08(s，1H)。
制备2-溴-3-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-1H-吲哚-6-甲酰胺的可选择方法描述如下。
在氮气气氛下向配备有机械搅拌器、温度控制器、氮气进口和冷凝器的1L四颈圆底烧瓶中加入2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸(102.0g，0.259摩尔)和无水THF(300mL)。搅拌10分钟后，逐份加入CDI(50.3g，0.31摩尔)。然后将反应混合物加热至50℃并保持2小时。冷却到30℃后，一次性加入N，N-二甲基氨基磺酰胺(41.7g，0.336摩尔)，然后历时1小时滴加DBU(54.1mL，0.362摩尔)。然后将反应混合物在室温搅拌20小时。真空除去溶剂，将残余物在EtOAc(乙酸乙酯)和1N HCl(1∶1，2L)之间分配。分离有机层，水层用EtOAc(500mL)萃取。合并的有机层用盐水(1.5L)洗涤并用MgSO4干燥。过滤溶液，真空浓缩，得到粗产物(111.0g)。在60℃将粗产物悬浮在EtOAc(400mL)中。向悬浮液中缓慢加入庚烷(2L)。搅拌所得悬浮液并冷却到0℃。然后对其进行过滤。滤饼用少量庚烷冲洗，并真空风干(housevacuum air dried)2天。收集产物，其为白色固体(92.0g，83％)。1H NMR(MeOD，300MHz)δ7.89(s，H)，7.77(d，J＝8.4Hz，1H)，7.55(dd，J＝8.4和1.8Hz，1H)，3.01(s，6H)，2.73-2.95(m，1H)，1.81-2.05(m，8H)，1.39-1.50(m，2H)；m/z 429(M+H)+。
中间体4
3-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-2-(2-甲酰基-4-甲氧基苯基)-1H-吲哚-6-甲酰胺
将2-溴-3-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-1H-吲哚-6-甲酰胺(4.28g，0.01摩尔)、4-甲氧基-2-甲酰基苯基硼酸(2.7g，0.015摩尔)、2-二环己基膦基-2’，6’-二甲氧基-联苯(41mg，0.0001摩尔)、乙酸钯(11.2mg)和微细研磨的碳酸钾(4.24g，0.02摩尔)于甲苯(30mL)中的混合物在氮气气氛下回流搅拌30分钟，此时LC/MS分析显示反应完成。然后反应混合物用乙酸乙酯和水稀释，然后用过量稀HCl酸化。然后收集乙酸乙酯层，用稀HCl、水和盐水洗涤。然后干燥(硫酸镁)有机溶液，过滤并浓缩，得到胶状物。胶状物用己烷(250ml)和乙酸乙酯(25mL)稀释，并将混合物在22℃搅拌20小时，在此期间产物转化成亮黄色颗粒状固体(4.8g)，所述固体不经进一步纯化即使用。
制备3-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-2-(2-甲酰基-4-甲氧基苯基)-1H-吲哚-6-甲酰胺的可选择方法如下提供。
向浆化的2-溴-3-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-吲哚-6-甲酰胺(54.0g，126mmol)、4-甲氧基-2-甲酰基苯基硼酸(29.5g，164mmol)和LiCl(13.3g，315mmol)于EtOH(乙醇)/甲苯(1∶1，1L)中的溶液中加入Na2CO3(40.1g，379mmol)的水(380mL)溶液。将反应混合物搅拌10分钟，然后加入Pd(PPh3)4(四(三苯基膦)钯)(11.3g，10.0mmol)。反应溶液用氮气冲洗，并在70℃(内部监测)加热过夜，然后冷却至室温。反应混合物用EtOAc(1L)和EtOH(100mL)稀释，用1N HCl水溶液(1L)和盐水(500mL)小心洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。将残余固体与Et2O(乙醚)(600mL)一起搅拌1小时，过滤收集，得到3-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-2-(2-甲酰基-4-甲氧基苯基)-1H-吲哚-6-甲酰胺(52.8g，109mmol，87％)，其为黄色粉末，所述粉末不经进一步纯化即使用。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ11.66(s，1H)，8.17(s，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.74(d，J＝8.4Hz，1H)，7.59(dd，J＝1.4，8.4Hz，1H)，7.23-7.16(m，2H)，7.08(dd，J＝2.6，8.4Hz，1H)，6.54(d，J＝8.8Hz，1H)，3.86(s，3H)，3.22-3.08(m，1H)，2.91(s，6H)，2.00-1.74(m，7H)，1.60-1.38(m，3H)。13CNMR(75MHz，CDCl3)δ165.7，158.8，147.2，139.1，134.3，132.0，123.4，122.0，119.2，118.2，114.8，112.3，110.4，109.8，79.6，45.9，37.2(2)，34.7，32.0(2)，25.9(2)，24.9。LCMS：m/e 482(M-H)-，保留时间：2.56分钟，柱A，4分钟梯度。
中间体5
11-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-6-乙氧基-8-甲氧基-6H-异吲哚并[2，1-a]吲哚-3-甲酰胺
向配备有温度控制器、冷凝器、氮气进口和机械搅拌器的5L四颈圆底烧瓶中加入甲苯(900mL)、EtOH(900mL)、2-溴-3-环己基-N-(N，N-二甲基氨磺酰基)-1H-吲哚-6-甲酰胺(90g，0.21摩尔)、2-甲酰基-4-甲氧基苯基硼酸(49.2g，0.273摩尔)和LiCl(22.1g，0.525摩尔)。所得溶液用氮气鼓泡15分钟。加入Na2CO3(66.8g，0.63摩尔)的水(675mL)溶液，并且反应混合物用氮气再鼓泡10分钟。加入Pd(PPh3)4(7.0g，6.3mmol)，将反应混合物加热至70℃并保持20小时。冷却至35℃后，缓慢加入1N HCl溶液(1.5L)。将所得混合物转移到6L分液漏斗中，用EtOAc(2×1.5L)萃取。合并的有机萃取物用盐水(2L)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到黄色固体，所述黄色固体用20％EtOAc/己烷(450mL，50℃至0℃)研磨，得到3-环己基-N-(N，N-二甲基氨磺酰基)-2-(2-甲酰基-4-甲氧基苯基)-1H-吲哚-6-甲酰胺(65.9g)，其为黄色固体。HPLC纯度为98％。
将来自研磨的母液真空浓缩。残余物与EtOH(50mL)回流3小时。然后将溶液冷却至0℃。过滤沉淀物，用经冷却的TBME(叔丁基甲基醚)(5℃)(20mL)洗涤。将滤饼真空风干，得到额外量的标题化合物，其为白色固体(16.0g)。HPLC纯度为99％。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.75(s，1H)，7.96(s，1H)，7.73(d，J＝8.4Hz，1H)，7.67(d，J＝8.4Hz，1H)，7.45(dd，J＝8.4和1.4Hz，1H)，7.09(d，J＝2.2Hz，1H)，6.98(dd，J＝8.4和2.2Hz，1H)，6.50(s，1H)，3.86(s，3H)，3.05(s，6H)，2.92-3.13(m，3H)，1.85-1.93(m，7H)，1.40-1.42(m，3H)，1.05(t，J＝7.1Hz，3H)。m/z 512(M+H)+。
中间体6
3-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-2-(2-甲酰基-4-甲氧基苯基)-1H-吲哚-6-甲酰胺
将11-环己基-N-(N，N-二甲基氨磺酰基)-6-乙氧基-8-甲氧基-6H-异吲哚并[2，1-a]吲哚-3-甲酰胺溶解在THF(75mL)中。向溶液中加入2N HCl溶液(300mL)。在室温将混合物在氮气气氛下剧烈搅拌16小时。过滤所得悬浮液，用经冷却的TBME(2×30mL)洗涤。将滤饼真空风干(vacuum dry)过夜，得到标题化合物，其为黄色固体。HPLC纯度为99％。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ11.65(s，1H)，8.16(s，1H)，7.76(d，J＝5.9Hz，1H)，7.73(d，J＝5.9Hz，1H)，7.58(dd，J＝8.5和1.5Hz，1H)，7.17-7.20(m，2H)，7.08(dd，J＝8.5和1.4Hz，1H)，6.55(d，J＝8.6Hz，1H)，3.86(s，3H)，3.14-3.18(m，1H)，2.91(s，6H)，1.75-1.99(m，7H)，1.48-1.60(m，3H)；m/z 484(M+H)+。
中间体7
13-环己基-10-[[[(二甲基氨基)磺酰基]氨基]羰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-6-甲酸甲酯
将3-环己基-N-(N，N-二甲基氨磺酰基)-2-(2-甲酰基-4-甲氧基苯基)-1H-吲哚-6-甲酰胺(4.8g，0.01摩尔)、2-(二甲氧基磷酰基)丙烯酸甲酯(9.7g，0.02摩尔)和碳酸铯(7.1g，0.02摩尔)于DMF(28mL)中的混合物在油浴温度55℃搅拌20小时。将混合物倒入冰-水中并用稀HCl酸化，从而使粗产物沉淀。收集固体，干燥并进行硅胶(110g)快速色谱(使用含有2％乙酸的乙酸乙酯和二氯甲烷(1∶10)溶液)。合并均一的馏分(homogeneous fraction)并蒸发，得到标题化合物，其为浅黄色固体(3.9g，71％收率)。MS：552(M＝H+)。
制备13-环己基-10-[[[(二甲基氨基)磺酰基]氨基]羰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-6-甲酸甲酯的可选择方法如下提供。
将11-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-6-羟基-8-甲氧基-6H-异吲哚并[2，1-a]吲哚-3-甲酰胺(环状半缩醛胺)(63.0g，130mmol)、2-(二甲氧基磷酰基)丙烯酸甲酯(60g，261mmol)、碳酸铯(106g，326mmol)于DMF(400mL)中的溶液在60℃(浴温)加热4.5小时。加入额外的2-(二甲氧基磷酰基)丙烯酸甲酯(15g，65mmol)和碳酸铯(21.2g，65mmol)，将反应混合物在60℃加热过夜，然后冷却至室温。搅拌的反应混合物用H2O(1L)稀释，用1N HCl水溶液(800mL)缓慢中和，搅拌3小时，然后过滤收集沉淀物。固体用Et2O(800mL)研磨，干燥，得到13-环己基-10-[[[(二甲基氨基)磺酰基]氨基]羰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-6-甲酸甲酯(70.2g，127mmol，98％)，其为黄色固体，所述固体不经进一步纯化即使用。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.67(s，1H)，8.09(s，1H)，7.86(d，J＝8.4Hz，1H)，7.80(s，1H)，7.50(d，J＝8.4Hz，1H)，7.42(d，J＝8.8Hz，1H)，7.08(dd，J＝2.6，8.8Hz，1H)，6.98(d，J＝2.6Hz，1H)，5.75-5.51(m，1H)，4.29-4.01(m，1H)，3.89(s，3H)，3.82(s，3H)，3.05(s，6H)，2.87-2.73(m，1H)，2.11-1.12(m，10H)。LCMS：m/e 550(M-H)-，保留时间：3.21分钟，柱A，4分钟梯度。
中间体8
2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸(1，1-二甲基乙基)酯
向机械搅拌的2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸(80g，0.24mmol)于无水二氯甲烷(1.2L)和THF(100mL)中的溶液中加入活化的分子筛(80g)和碳酸银(275g，0.99mmol)。将反应混合物冷却至0℃，滴加叔丁基溴(142g，1.04mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，通过TLC(己烷-乙酸乙酯80∶20，Rf(产物)＝0.7)进行监测。如果留有任何溴代酸未发生转化，则加入额外的10％碳酸银，并再继续机械搅拌2-4小时。结束后，将反应混合物过滤通过薄的硅藻土床。过滤介质(filtrand)用二氯甲烷(500mL)洗涤。真空浓缩合并的滤液，由此得到的粗产物通过硅胶色谱(230-400目)(用0-2％乙酸乙酯/石油醚的梯度进行洗脱)进行纯化。合并均一的馏分，减压蒸发，得到80g(85％)标题化合物。HPLC：90.1％(RT＝6.56分钟)，柱：C18BDS，(50×4.6mm)，流动相：0.1％TFA/水：ACN(30→100→30)的梯度，流速：0.8mL/分钟。LCMS：99.8％(RT＝4.44min)，柱：Geneis，C1850×4.6mm，流动相：0.1％甲酸/水：ACN(70→95→70)的梯度，流速：0.8mL/分钟，M-1＝376.5。1HNMR(CDCl3)(400MHz)δ1.37-1.40(m，3H，环己基)，1.62(s，9H，叔丁基)，1.80-1.94(两组多重峰，分别是3H和4H，环己基部分)，2.81(m，1H，环己基-苯甲酰基的CH(CH of cyc.Hexyl-benzylic))，7.70-7.75(m，2H，吲哚-H4和H5)，8.04(s，1H，吲哚-H7)，8.52(s，1H，吲哚-NH)。
中间体9
3-环己基-2-(2-甲酰基-4-甲氧基苯基)-1H-吲哚-6-甲酸(1，1-二甲基乙基)酯
将2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸叔丁酯(72g，0.19mmol)溶解在甲苯和乙醇的1∶1混合物(720mL)中并脱气。然后加入LiCl(23.9g，0.51mmol)，接着加入碳酸钠(720mL，经单独脱气的浓度为1.0M的溶液)和Pd-tetrakis(13.1g，0.011mmol)。搅拌0.25小时后，加入2-甲酰基-4-甲氧基苯基硼酸(41.1g，0.22mmol)，将反应混合物加热至85℃并保持4小时。然后通过TLC(己烷-乙酸乙酯80∶20，Rf(产物)＝0.55)监测反应。结束后，将反应混合物冷却至室温，加入水(1.0L)，然后加入乙酸乙酯(1.0L)。有机层用盐水洗涤，干燥并真空浓缩，得到标题化合物，其为黄色固体。收率：75g(74％)。HPLC：99.7％(RT＝6.30min)，柱：C18BDS(4.6×50mm)，SC-307，流动相：0.1％TFA/水：ACN(30→100→30)的梯度，流速：0.8mL/分钟。LCMS：98.0％(RT＝5.28min)，柱：Geneis，C18(50×4.6mm)，流动相：0.1％甲酸/水：ACN(70→95→70)的梯度，流速：0.8mL/分钟，M-1＝432.2。1HNMR(DMSO-d6)(400MHz)δ1.40-1.48(m，3H，环己基)，1.57(s，9H，叔丁基)，1.84-1.90(m，7H，环己基部分)，3.09(m，1H，环己基-苯甲酰基的CH)，3.84(s，3H，OCH3)，6.55(d，J＝4Hz，1H，芳基H2’)，7.06(d，1H，芳基H3’)，7.08(s，1H，芳基H6’)，7.23(d，1H，吲哚-H5)，7.53(d，J＝8Hz，1H，吲哚-H4)，7.70-7.75(m，2H，NH+吲哚-H7)，8.06(s，1H，CHO)。
中间体10
13-环己基-3-甲氧基7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-6，10-二甲酸10-(1，1-二甲基乙基)酯·6-甲酯
将3-环己基-2-(2-甲酰基-4-甲氧基苯基)-1H-吲哚-6-甲酸叔丁酯(62.5g，0.144mmol)溶解在无水DMF(1.2L)中并机械搅拌。然后加入碳酸铯(84g，0.17mmol)和2-(二甲氧基磷酰基)丙烯酸甲酯(GC纯度为65-70％，56.2g，0.18mmol)，将反应混合物加热至65℃并保持4小时，并且通过TLC(己烷-乙酸乙酯80∶20，Rf(产物)＝0.7)监测反应。结束后，将混合物冷却至室温，然后用水(1.0L)淬灭。黄色固体沉淀出来，过滤收集所述固体并风干。然后将该物质在甲醇中浆化，过滤，真空干燥，得到产物，其为黄色粉末(70g，90％)。HPLC：99.1％(RT＝6.45分钟)，柱：C18BDS(4.6×50mm)，流动相：0.1％TFA/水：ACN(30→100→30)的梯度，流速：0.8毫升/分钟。LCMS：100％(RT＝7.00分钟)，柱：Geneis，C18(50×4.6mm)，流动相：0.1％甲酸/水：ACN(70→95→70)的梯度，流速：0.8毫升/分钟，M+1＝502.2。1HNMR(CDCl3)(400MHz)δ1.10-1.30(m，3H，环己基)，1.64(s，9H，叔丁基)，1.77-2.07(m，7H，环己基部分)，2.80(m，1H，环己基-苯甲酰基的CH)，3.84(s，3H，OCH3)，3.93(s，3H，COOCH3)，4.15和5.65(两个宽峰，各为1H，烯丙酰基的CH2(allylic CH2))，6.95(s，1H，芳基H6’)，7.01(d，1H，芳基H2’)，7.53(d，J＝8Hz，1H，芳基H3’)，7.70(d，J＝4Hz，1H，吲哚-H5)，7.84(s+d，2H，烯基的H+吲哚-H4)，8.24(s，1H，吲哚-H7)；13C NMR(CDCl3)(100.0MHz)δ166.92，165.71，158.96，142.28，136.47，13.50，134.61，132.43，132.01，129.73，124.78，124.68，120.33，119.39，119.04，115.62，115.05，111.27，80.27，55.49，52.50，39.09，36.81，33.40，28.38，27.15，26.28。
中间体11
2-(二甲氧基氧膦基)-2-丙烯酸甲酯
向配备有机械搅拌器、冷凝器、温度控制器和氮气进口的5L四颈圆底烧瓶中加入低聚甲醛(40.5g，1.35摩尔)、MeOH(甲醇)(2L)和哌啶(2mL)。将反应混合物在氮气气氛下加热至回流并保持3小时。冷却到50℃后，一次性加入2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(150g，0.824摩尔)。将反应混合物继续回流18小时。冷却到室温后，真空浓缩反应溶液，得到透明无色油状物。在配备有温度控制器、氮气进口、磁力搅拌器和迪安-斯托克分水器(Dean-Stark apparatus)的3L四颈圆底烧瓶中将上述油状物溶解在无水甲苯(1L)中。向溶液中加入TsOH·H2O(甲磺酸水合物)(5.2g)。然后将反应混合物共沸回流18小时，从而除去甲醇。冷却到室温后，将溶液真空浓缩，得到黄色油状物，将其在150-155℃/0.2mmHg的条件下真空蒸馏，得到产物，其为无色油状物(135.0g)。根据1H NMR确定纯度为90％。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.0(dd，J＝42.4和1.5Hz，1H)，6.73(dd，J＝20.5和1.8Hz，1H)，3.80(s，6H)，3.76(s，3H)。
中间体12
3-甲基-8-(苯基甲基)-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷
在安装有机械搅拌器、回流冷凝器和温度计的5L三颈圆底烧瓶中将顺式-1-苄基-2，5-二(氯甲基)吡咯烷盐酸盐(37.5g，0.13摩尔)(如在公开的PCT专利申请WO200232902中所描述的那样来制备)悬浮在CH3CN(900mL)中。将搅拌的悬浮液温热至50℃，加入NaHCO3(97g，1.1摩尔)，并将悬浮液温热至70℃。加入NaI(50g，0.33摩尔)并在70℃搅拌5分钟，此时将加料漏斗固定在冷凝器的顶部。向加料漏斗中加入48mL 40％含水MeNH2(甲胺)(0.55摩尔)于850mL CH3CN中的溶液，并且将该溶液逐滴加入(加入速率保持在10-15ml/分钟)。75分钟后，加入完成，此时将反应混合物冷却到室温，过滤出固体，并将溶剂浓缩至约800mL。将反应混合物倒入EtOAc(800mL)中，用1N NaOH(2×100mL)洗涤。水相用EtOAc(2×100mL)再次萃取，合并的有机相用Na2SO4干燥并浓缩。将所得残余物加载到硅胶(620g)上，用2.8％MeOH/0.4％浓NH4OH/CHCl3(总共6L)洗脱。收集纯的馏分(从2L至4L)。浓缩，得到8.76g(32％收率)标题化合物，其为棕色油状物。1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm 1.79-1.87(m，2H)1.92-1.99(m，2H)2.23(s，3H)2.27-2.37(m，2H)2.54-2.63(m，2H)3.10(s，2H)3.52(s，2H)7.20-7.26(m，1H)7.30(t，J＝7.30Hz，2H)7.36-7.42(m，2H)。LC方法：溶剂A＝10％MeOH/90％H2O/0.1％TFA，溶剂B＝90％MeOH/10％H2O/0.1％TFA，起始％B＝0％，最终％B＝100，流速＝4毫升/分钟，梯度时间＝2分钟，运行时间＝3分钟，柱：Phenomenex-Luna 10μm C 1850mm×3.0mm，Rt＝0.23min；MS：(ES+)m/z(M+H)+＝217.3。通过柱还得到6.1g混合馏分(通过1H NMR积分确定纯度为＞80％)。
中间体13
3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷二盐酸盐
将N-甲基-N-苄基二环二胺(14.22g，65.7mmol)溶解在650ml甲醇中，加入17ml浓度为12M的盐酸水溶液。在氮气气氛下将溶液置于2L帕尔瓶(Parrbottle)中，并向反应混合物中加入3.66g 20％氢氧化钯/炭。将混合物置于帕尔振荡器(Parr shaker)上在60psig的氢气下保持17小时。通过TLC分析(硅胶板，用10体积份2M氨/甲醇的90体积份氯仿溶液洗脱)判断反应完成。将反应混合物过滤通过硅藻土塞，然后先后用水和甲醇对所述塞进行冲洗。将合并的滤液真空浓缩，加入甲醇和苯直到得到均一的溶液。然后加入75mL浓度为2.0M的盐酸/乙醚。从产物溶液中真空除去挥发物。使用甲醇/苯混合物在产物溶液中反复对水进行共沸，由此最终得到浅黄色固体。将固体产物即3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷真空干燥过夜，得到11.98g(91％)吸湿性固体。将产物从烧瓶中取出并由于其吸湿性而将其装在氮气气氛下的手套式袋子(glove bag)中。1H NMR(500MHz，DMSO-D6)δppm1.96-2.14(m，2H)2.34(d，J＝8.24Hz，2H)2.66(s，3H)3.46(d，J＝11.90Hz，2H)3.58(s，3H，含有H2O)4.17(s，2H)9.92(s，1H)10.21(s，1H)11.39(s，1H)；13CNMR(126MHz，DMSO-D6)δppm 24.04(s，1C)43.49(s，1C)52.50(s，1C)54.47(s，1C)。
中间体14和15
3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-甲酸苯基甲酯和3-(苯基甲基)-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷
将三乙胺(1.44mL，10.363mmol)加到8-叔丁氧羰基-3，8-二氮杂-二环[3.2.1]辛烷(2.0g，9.421mmol)于CH2Cl2(20mL)中的溶液中，在0℃滴加氯甲酸苄酯(1.46mL，10.363mmol)，并将反应混合物在0℃搅拌0.5小时，然后使其温热至室温，继续搅拌3天。然后用水将反应混合物淬灭，并用1N HCl溶液酸化。分离有机层，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩，得到无色稠厚油状物，其为粗产物。然后将70mg该物质溶解在1，2-二氯乙烷(2mL)和TFA(0.5mL)中。将反应混合物在室温搅拌2小时。然后蒸发溶剂和TFA，得到两种标题化合物的混合物，其为无色稠厚油状物。
中间体16
3-环己烯基-1H-吲哚-6-甲酸
在22℃将环己酮(96mL，0.926摩尔)加到搅拌的吲哚-6-甲酸甲酯(50.0g，0.335摩尔)于甲醇(920mL)中的溶液中。历时10分钟逐份加入甲醇钠的甲醇溶液(methanolic sodium methoxide)(416mL，浓度为25％w/w，1.82摩尔)。将混合物回流搅拌18小时，冷却到室温，浓缩，用冷水稀释和用36％HCl溶液酸化。过滤收集所得沉淀物，用冷水洗涤，并用五氧化二磷(0.1mm)干燥，得到标题化合物，其为褐色固体(80.9g，97.5％收率)。
中间体17
3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸
将3-环己烯基-1H-吲哚-6-甲酸(38g)加到帕尔瓶中，然后加入甲醇(100mL)和THF(100mL)。瓶用氩气冲洗，并加入10％钯/炭(1.2g)。然后将烧瓶抽空，随后再次充入氢气至压力为55psi，将所得混合物在室温振荡18小时。然后通过过滤经过硅藻土来除去催化剂。浓缩滤液，得到所期望的产物，其为浅紫色固体(30.6g，79％)。ESI-MS m/z 244(MH+)。
中间体18
3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸甲酯
将亚硫酰氯(1mL)加到搅拌的3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸(30.4g，0.125摩尔)于甲醇(300mL)中的混合物中。将混合物回流搅拌18小时，用脱色炭处理并过滤。将滤液浓缩至约150mL，此时发生结晶。将滤液冷却至室温，并过滤。固体先后用冷甲醇和乙醚洗涤，得到所期望的产物，其为浅紫色固体(22.2g，69％收率)。ESI-MS m/z 258(MH+)；1H NMR(300MHz，CDCl3.)δ1.35(m，4H)，1.63(s，1H)，1.78(m，3H)，2.06(d，J＝8.05Hz，2H)，3.90(m，1H)，7.08(d，J＝1.83Hz，1H)，7.62(s，1H)，7.65(s，1H)，7.74(d，J＝1.46Hz，1H)，7.77(d，J＝1.46Hz，1H)，8.08(s，1H)。
中间体19
1H-吲哚-6-甲酸甲酯
将重氮甲烷的乙醚溶液(620mL)缓慢加到经冷却的(-15℃)搅拌的吲哚-6-甲酸(45g，0.27摩尔)于乙醚(250mL)中的悬浮液中。加入后，将反应混合物在-15℃再搅拌1小时，之后通过缓慢加入乙酸(50mL)将反应淬灭。然后将所得混合物减压浓缩，并使用硅胶(60-120)快速色谱(使用MDC(二氯甲烷)作为洗脱剂)对残余物进行纯化。
中间体20
3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸甲酯
将环己酮(42.46mL，0.40摩尔)一次性加到搅拌的吲哚-6-甲酸甲酯(47.8g，0.27mmol)于无水二氯甲烷(500mL)中的溶液中。然后将反应混合物冷却至10℃，滴加三氟乙酸(63.13mL，0.8mmol)，然后加入三乙基甲硅烷(174.5mL，1.09mmol)。加入后，使温度升至室温，之后将其再搅拌12小时。然后加入二氯甲烷(200mL)，反应混合物先后用10％碳酸氢钠溶液和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶(60-120)快速色谱(使用己烷-乙酸乙酯(9.5∶0.5)混合物作为洗脱剂)对所得残余物进行纯化。合并均一的馏分，蒸发，得到60g所期望的产物(85％)。有关该物质的分析性数据与通过上面描述的可选择路线制备的样品的分析性数据相一致。
中间体21
2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸甲酯
将无水三溴化吡啶鎓(12.0g，38mmol)一次性加到搅拌的经冷却的(冰/水浴)3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(7.71g，30mmol)于THF(80mL)和氯仿(80mL)的混合物中的溶液中。从冷却浴移开烧瓶，在室温继续搅拌2小时。混合物先后用1M NaHSO3溶液(2×50mL)和1N HCl溶液(50mL)洗涤。然后其用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。浓缩物用己烷处理，过滤收集所得沉淀物，得到所期望的产物，其为灰白色固体(5.8g，58％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.38(m，3H)，1.85(m，7H)，2.81(m，1H)，7.71(m，2H)，8.03(s，1H)，8.47(s，1H)。
将己烷母液浓缩，将残余物溶解在己烷/乙酸乙酯(5∶1)中。使溶液通过硅胶垫(用相同的溶剂)。浓缩洗脱液，然后加入己烷(10mL)，使额外的产物沉淀出来，过滤收集所述额外的产物，得到2.8g(28％)所期望的产物。
中间体22
11-环己基-6-羟基-6H-异吲哚并[2，1-a]吲哚-3-甲酸甲酯
在氮气气氛下将搅拌的2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(10.1g，30mmol)、2-甲酰基苯基硼酸(5.4g，36mmol)、LiCl(3.8g，90mmol)和Pd(PPh3)4(1.6g，1.38mmol)于浓度为1M的Na2CO3溶液(40mL)和1∶1EtOH-甲苯(180mL)中的混合物在85℃加热3小时。然后将反应混合物冷却至室温，并用EtOAc(2×100mL)萃取。萃取物先后用水和盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩，得到13.3g粗产物。该物质用DCM(二氯甲烷)和己烷研磨，得到纯的所期望的产物(7.52g，70％)。LC-MS：m/e 360(M-H)；344(M-17)+。1H NMR(400MHz，氯仿-D)δppm 1.33-1.60(m，4H)1.77-2.01(m，6H)2.80(d，J＝11.83Hz，1H)3.02-3.18(m，1H)3.89(s，3H)6.49(d，J＝11.33Hz，1H)7.34(t，J＝7.55Hz，1H)7.46(t，J＝7.55Hz，1H)7.62(d，J＝7.30Hz，1H)7.66-7.74(m，2H)7.77(d，J＝7.81Hz，1H)8.21(s，1H)。
中间体23
13-环己基-6-(甲氧基羰基)-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酸甲酯
在氮气气氛下将搅拌的11-环己基-6-羟基-6H-异吲哚并[2，1-a]吲哚-3-甲酸甲酯(3.61g，10mmol)、Cs2CO3(3.91g，12mmol)和2-膦酰基乙酸三甲酯(trimethyl 2-phosphonoacetate)(2.86g，14mmol)于无水DMF(40mL)中的悬浮液在60℃加热3小时。将所得黄色悬浮液冷却至室温，并在剧烈搅拌下加入水。形成黄色沉淀物，过滤收集所述沉淀物。固体用水洗涤，然后风干过夜，得到标题化合物，其为黄色粉末(4.124g，96％)。LC/MS：m/e 430(MH+)；1H NMR(400MHz，氯仿-D)δppm 1.30-1.46(m，J＝14.86Hz，2H)1.55(s，2H)1.77(s，2H)1.85-2.18(m，4H)2.76-2.89(m，1H)3.84(s，3H)3.95(s，3H)4.19(s，1H)5.68(s，1H)7.38-7.63(m，4H)7.74(dd，J＝8.44，1.39Hz，1H)7.81-7.98(m，2H)8.29(d，J＝1.01Hz，1H)。
中间体24
13-环己基-6-(羧基)-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酸甲酯
将13-环己基-6-(甲氧基羰基)-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酸甲酯(308mg，0.72mmol)溶解在N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中，用LiOH(173mg，7.2mmol)处理。将混合物在50℃加热4小时，之后真空除去溶剂。将残余物溶解在H2O(5mL)中，通过加入10％HCl水溶液对所得混合物进行酸化。形成沉淀物，过滤收集所述沉淀物，风干，得到标题化合物，其为亮黄色固体(290mg，97％)。ESI-MS m/z[M+1]＝415。
除非另有说明，以下一般方法与下述实验操作一起使用：LCMS数据：停止时间：梯度时间+1分钟；起始浓度：除非另有说明，0％B；洗脱剂A：5％CH3CN/95％H2O(含有10mM NH4OAc(乙酸铵))(对于柱A和D)，10％MeOH/90％H2O(含有0.1％TFA(三氟乙酸))(对于柱B和C)；洗脱剂B：95％CH3CN/5％H2O(含有10mM NH4OAc)(对于柱A和D)，90％MeOH/10％H2O(含有0.1％TFA)(对于柱B和C)；柱A：Phenomenex 10μ4.6×50mm C18；柱B：Phenomenex C1810μ3.0×50mm；柱C：Phenomenex4.6×50mm C1810μ；柱D：Phenomenex Lina C185μ3.0×50mm；柱E：Phenomenex 5μ4.6×5.0mm C18。
向浆化的2-溴-3-环己基-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(4.3g，13mmol)、4-甲氧基-2-甲酰基苯基硼酸(3.0g，17mmol)和LiCl(2.2g，51mmol)于EtOH(乙醇)/甲苯(1∶1，100mL)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(1.4g，1.3mmol)，然后加入浓度为1M的Na2CO3(水溶液)(32mL，32mmol)。反应溶液用氮气冲洗，并在100℃加热3小时，冷却至室温。浓缩反应混合物，从而除去EtOH，用H2O(200mL)稀释，并用EtOAc(2×150mL)萃取。合并的有机物用盐水(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩至干。残余物用CH2Cl2研磨，过滤收集固体，并用Et2O和CH2Cl2洗涤，得到11-环己基-6-羟基-8-甲氧基-6H-异吲哚并[2，1-a]吲哚-3-甲酸甲酯(3.0g，8.0mmol，63％)，其为黄色固体，所述固体不经进一步纯化即使用。LCMS：m/e 374(M+H)+，保留时间：3.09分钟，柱B，3分钟梯度。
中间体25
将11-环己基-6-羟基-8-甲氧基-6H-异吲哚并[2，1-a]吲哚-3-甲酸甲酯(2.9g，7.4mmol)、2-(二甲氧基磷酰基)丙烯酸甲酯(2.6g，11mmol)、碳酸铯(3.6g，11mmol)于DMF(20mL)中的溶液在60℃加热2小时，冷却至室温。搅拌的反应混合物用H2O(50mL)稀释，过滤收集沉淀物，得到13-环己基-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-6，10-二甲酸二甲酯(3.3g，7.1mmol，97％)，其为黄色固体，所述固体不经进一步纯化即使用。LCMS：m/e 460(M+H)+，保留时间：3.35分钟，柱B，3分钟梯度。
中间体26
将四丁基氢氧化铵溶液(浓度为1M的MeOH溶液，2.2mL，2.2mmol)加到搅拌的13-环己基-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-6，10-二甲酸二甲酯(1.0g，2.2mmol)于THF(75mL)中的溶液中，在室温搅拌过夜。将反应混合物浓缩至约30mL，用EtOAc(120mL)稀释，用浓度为0.5M的HCl(水溶液)(2×50mL)和盐水(40mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩至干，得到13-环己基-3-甲氧基-6-羧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酸甲酯(1.0g，2.2mmol，定量)，其为黄色固体，所述固体不经进一步纯化即使用。LCMS：m/e 446(M+H)+，保留时间：1.54分钟，柱A，2分钟梯度。
中间体27
将浓度为1M的NaOH(水溶液)(5mL，5mmol)加到13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-6-甲酸甲酯·10-甲酰胺(900mg，1.6mmol)于THF/MeOH(1∶1，14mL)中的溶液中，将反应混合物在封闭的管中用微波辐射在85℃加热30分钟。将反应混合物冷却，用1MHCl(水溶液)(5mL，5.0mmol)中和，浓缩除去有机溶剂。残余物用H2O浆化，过滤收集固体，用H2O冲洗，干燥，得到13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺·6-甲酸(807mg，1.5mmol，92％)，其为黄色固体。LCMS：m/e 536(M-H)-，保留时间：2.18分钟，柱A，4分钟梯度。
下面描述的一般方法涉及表3中化合物的实验数据。LCMS数据：梯度时间：2分钟；流速：4毫升/分钟；停止时间：梯度时间+2分钟；起始浓度：0％B；洗脱剂A：10％MeOH/90％H2O(含有0.1％TFA)；洗脱剂B：90％MeOH/10％H2O(含有0.1％TFA)；柱1：Phenomenex 10μC184.6×50mm。
表3
10-(叔丁氧基羰基)-13-环己基-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-6-甲酸
将四丁基氢氧化铵(40％的水溶液，14.4mL，22mmol)加到13-环己基-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-6，10-二甲酸10-叔丁酯·6-甲酯(5.0g，10mmol)于MeOH(40mL)和THF(40mL)中的浆液中，将反应混合物在室温搅拌过夜(通过LCMS确定完成)。反应混合物用1N HCl(水溶液)(24mL)中和，浓缩，从而除去有机溶剂。淤渣(sludge)用水稀释，搅拌，并过滤收集固体。将湿的固体溶解在EtOAc(约250mL)中，用盐水(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到10-(叔丁氧基羰基)-13-环己基-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-6-甲酸(5.73g，11.8mmol，118％收率)，其为亮黄色固体。产物似乎混合有四丁基铵副产物。所述物质不经进一步纯化即使用。1HNMR(300MHz，CDCl3)δppm 1.14-2.13(m，10H)，1.60(s，9H)，2.73-2.86(m，1H)，3.89(s，3H)，4.03-4.26(m，1H)，5.49-5.80(m，1H)，6.98(d，J＝2.6Hz，1H)，7.07(dd，J＝8.4，2.6Hz，1H)，7.56(d，J＝8.4Hz，1H)，7.64(dd，J＝8.4，1.1Hz，1H)，7.79(d，J＝8.4Hz，1H)，7.89(宽单峰，1H)，8.19(s，1H)。LC-MS：保留时间为4.32分钟；488m/z(MH+)。在Shimadzu LC-10AS液相色谱上记录LC数据，所述色谱配备有Phenomenex-Luna 10μC183.0×50mm柱，使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用以下洗脱条件：流速为5毫升/分钟，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间(hold time)为1分钟，以及分析时间为5分钟，其中溶剂A为10％MeOH/90％H2O/0.1％三氟乙酸，溶剂B为10％H2O/90％MeOH/0.1％三氟乙酸。使用Micromass Platform用于LC以电喷雾模式确定MS数据。
实施例1
13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-6-[(3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基]-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺
向搅拌的13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺·6-甲酸(51mg，0.095mmol)、3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷二盐酸盐(34mg，0.17mmol)和三乙胺(0.06mL)于DMF(1.0mL)中的溶液中加入HATU(50mg，0.13mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时，用MeOH(约1mL)稀释，并通过制备性HPLC(CH3CN/H2O(含有10mM NH4OAc))纯化，得到13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-6-[(3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基]-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺(52mg，0.08mmol，85％)，其为黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.31(s，1H)，7.83(d，J＝8.4Hz，1H)，7.59(br d，J＝8.4Hz，1H)，7.45(d，J＝8.8Hz，1H)，7.02(dd，J＝2.6，8.8Hz，1H)，6.91-6.86(m，2H)，5.35-5.16(m，1H)，4.34-4.16(m，1H)，3.87(s，3H)，3.01(s，6H)，2.85-1.03(m，24H)。LCMS：m/e644(M-H)-，保留时间为2.89分钟，柱A，4分钟梯度。
实施例2
3-[[13-环己基-10-[[[(二甲基氨基)磺酰基]氨基]羰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-6-基]羰基]-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸(1，1-二甲基乙基)酯
向搅拌的13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺·6-甲酸(300mg，0.56mmol)、3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(150mg，0.71mmol)和三乙胺(0.25mL)于DMF(2.5mL)中的溶液中加入HATU(2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基六氟磷酸盐)(250mg，0.66mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时，用H2O(约10mL)稀释，用浓度为1M的HCl(水溶液)(约0.5mL)酸化，过滤收集沉淀物并用H2O冲洗。将固体溶解在MeOH/DMF(1∶1)中，通过制备性HPLC(CH3CN/H2O(含有10mM NH4OAc))进行纯化，得到3-[[13-环己基-10-[[[(二甲基氨基)磺酰基]氨基]羰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-6-基]羰基]-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸(1，1-二甲基乙基)酯(130mg，0.18mmol，32％)，其为黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.85(宽单峰，1H)，8.08(s，1H)，7.85(d，J＝8.4Hz，1H)，7.47(d，J＝8.4Hz，1H)，7.44(d，J＝8.8Hz，1H)，7.03(dd，J＝2.6，8.8Hz，1H)，6.86(d，J＝2.6Hz，1H)，6.75(s，1H)，5.25-5.00(m，1H)，4.49-4.01(m，3H)，3.88(s，3H)，3.35-2.90(m，2H)，3.03(s，6H)，2.86-2.72(m，1H)，2.12-1.12(m，16H)，1.41(s，9H)。LCMS：m/e 730(M-H)-，保留时间为3.41分钟，柱A，4分钟梯度。
实施例3
13-环己基-6-(3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-3-基羰基)-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺
向3-[[13-环己基-10-[[[(二甲基氨基)磺酰基]氨基]羰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-6-基]羰基]-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸(1，1-二甲基乙基)酯(103mg，0.14mmol)于CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入三氟乙酸(2mL)。将反应混合物在室温搅拌2小时，浓缩，溶解在MeOH(2mL)中，并通过制备性HPLC(CH3CN/H2O(含有10mM NH4OAc))进行纯化，得到13-环己基-6-(3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-3-基羰基)-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺(77mg，0.12mmol，87％)，其为浅黄色固体。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.24(s，1H)，7.78(d，J＝8.4Hz，1H)，7.67(d，J＝8.4Hz，1H)，7.50(d，J＝8.4Hz，1H)，7.22-7.14(m，2H)，6.95(s，1H)，5.19-4.95(m，1H)，4.42-4.20(m，1H)，3.87(s，3H)，3.82-2.98(m，7H)，2.82-2.68(m，1H)，2.75(s，6H)，2.14-0.93(m，14H)，1.41(s，9H)。LCMS：m/e 630(M-H)-，保留时间：2.54分钟，柱A，4分钟梯度。
实施例4
13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-6，7-二氢-3-甲氧基-6-[(3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基]-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺
将10％钯/炭(47mg，0.05mmol)加到13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-6-[(3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基]-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺(52mg，0.086mmol)于MeOH(3mL)中的溶液中，反应混合物用氮气(3×)真空冲洗，然后用氢气(4×)冲洗。将反应混合物在氢气气囊下搅拌过夜。反应混合物用CH2Cl2(1mL)稀释，加入额外的10％钯/炭(30mg，0.03mmol)，反应混合物用氮气(3×)真空冲洗，然后用氢气(4×)冲洗。将反应混合物在氢气气囊下搅拌2天，过滤通过硅藻土垫并浓缩。将残余物溶解在MeOH中，通过制备性HPLC(CH3CN/H2O(含有10mMNH4OAc))纯化，得到13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-6，7-二氢-3-甲氧基-6-[(3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基]-5H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺(17mg，0.026mmol，40％)，其为黄色固体。阻转非对映异构体(atrope diastereomer)的混合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.16-7.77(m，2H)，7.51-7.41(m，1H)，7.37-7.27(m，1H)，7.07-6.74(m，2H)，4.77-4.05(m，3H)，3.91-3.81(m，3H)，3.77-3.17(m，1H)，3.07-2.99(m，6H)，2.95-1.09(m，25H)。LCMS：m/e 648(M-H)-，保留时间：2.93分钟，柱A，4分钟梯度。
实施例5
13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-6-[(8-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)羰基]-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺
在室温向搅拌的13-环己基-6-(3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-3-基羰基)-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺(44mg，0.070mmol)于MeOH/CH2Cl2(1∶1，4mL)中的溶液中加入NaCNBH3(氰基硼氢化钠)(30mg 0.48mmol)，然后加入甲醛(37wt％的H2O溶液，0.10mL，3.6mmol)。将反应混合物搅拌30分钟，然后浓缩至干。将残余物溶解在MeOH中，通过制备性HPLC(CH3CN/H2O(含有10mM NH4OAc))进行纯化，得到13-环己基-N-[(二甲基氨基)磺酰基]-3-甲氧基-6-[(8-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)羰基]-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺(31mg，0.047mmol，68％)，其为黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.11(s，1H)，7.79(d，J＝8.4Hz，1H)，7.66-7.60(m，2H)，7.52(d，J＝8.8Hz，1H)，7.11(dd，J＝2.6，8.8Hz，1H)，7.00(d，J＝2.6Hz，1H)，6.87(s，1H)，5.23-5.04(m，1H)，4.48-4.26(m，1H)，3.92(s，3H)，3.38-2.77(m，7H)，3.03(s，6H)，2.25(宽单峰，3H)，2.16-1.15(m，14H)。LCMS：m/e 644(M-H)-，保留时间：2.69分钟，柱A，4分钟梯度。
实施例6
13-环己基-3-甲氧基-6-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酸叔丁酯
将HATU(680mg，1.8mmol)加到搅拌的10-(叔丁氧基羰基)-13-环己基-3-甲氧基-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-6-甲酸(670mg，1.37mmol)和3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷二盐酸盐(560mg，2.81mmol)于DMF(6mL)和TEA(1.2mL，8.2mmol)中的溶液中，将反应混合物搅拌30分钟(通过LCMS确定完成)。反应混合物用水(约35mL)稀释(形成沉淀物)并搅拌过夜。过滤收集沉淀物，用水冲洗，在55℃高真空干燥，得到13-环己基-3-甲氧基-6-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酸叔丁酯(775mg，1.30mmol，95％收率)，其为浅黄色固体。该物质不经进一步纯化即使用。1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm 1.14-3.95(m，24H)，1.59(s，9H)，3.86(s，3H)，4.21-5.26(m，2H)，6.82(s，1H)，6.88(d，J＝2.6Hz，1H)，7.01(dd，J＝8.8，2.6Hz，1H)，7.47(d，J＝8.8Hz，1H)，7.66(dd，J＝8.4，1.1Hz，1H)，7.80(d，J＝8.4Hz，1H)，8.02(宽单峰，1H)。LC-MS：保留时间为3.72分钟；m/z596(MH+)。在Shimadzu LC-10AS液相色谱上记录LC数据，所述色谱配备有Phenomenex-Luna 10μC 183.0×50mm柱，使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用如下洗脱条件：流速为5毫升/分钟，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为5分钟，其中溶剂A为10％MeOH/90％H2O/0.1％三氟乙酸，溶剂B为10％H2O/90％MeOH/0.1％三氟乙酸。使用Micromass Platform用于LC以电喷雾模式确定MS数据。
实施例7
13-环己基-3-甲氧基-6-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酸三氟乙酸盐
将13-环己基-3-甲氧基-6-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酸叔丁酯(300mg，0.504mmol)溶解在DCE(5mL)中，然后加入TFA(700μl，9.09mmol)(反应混合物变为绿色)，将反应混合物在室温搅拌1小时(通过LCMS确定约70％转化)。加入更多的TFA(700μl，9.09mmol)并将反应混合物搅拌1小时(通过LCMS确定完成)。将反应混合物在旋转蒸发仪上浓缩，用乙醚稀释并再次浓缩，如此重复两次，得到13-环己基-3-甲氧基-6-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酸三氟乙酸盐(362mg，0.55mmol，定量)，其为深黄色固体。该物质不经进一步纯化即使用。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 1.06-2.13(m，21H)，2.68-2.86(m，1H)，3.36-3.50(m，2H)，3.90(s，3H)，4.11-5.35(m，2H)，7.14(s，1H)，7.18-7.28(m，2H)，7.53(d，J＝8.4Hz，1H)，7.61(dd，J＝8.4，1.1Hz，1H)，7.87(d，J＝8.4Hz，1H)，8.21(宽单峰，1H)，9.55(宽单峰，1H)。LC-MS：保留时间为3.72分钟；m/z 596(MH+)。LC-MS：保留时间为2.50分钟；538m/z(MH-)。在Shimadzu LC-10AS液相色谱上记录LC数据，所述色谱配备有Phenomenex-Luna 10μC184.6×50mm柱，使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用如下洗脱条件：流速为5毫升/分钟，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为5分钟，其中溶剂A为5％乙腈/95％H2O/10mM乙酸铵，溶剂B为5％H2O/95％乙腈/10mM乙酸铵。使用Micromass Platform用于LC以电喷雾模式确定MS数据。
实施例8
13-环己基-N-(异丙基磺酰基)-3-甲氧基-6-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺
将CDI(80mg，0.49mmol)加到13-环己基-3-甲氧基-6-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酸叔丁酯三氟乙酸盐(200mg，0.30mmol)于THF(1.5mL)中的溶液中，将反应混合物在60℃搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，然后将反应溶液的1/3(约0.55mL)加到搅拌的丙-2-磺酰胺(40mg，0.33mmol)于DBU(0.20mL，1.3mmol)和THF(0.20mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌过夜(通过LCMS确定完成)，浓缩成油状物，用1N HCl溶液(约1mL)淬灭(形成沉淀物)，并用EtOAc(2×1mL)萃取。将合并的有机物浓缩至干，溶解在MeOH(1.5mL)中，并通过制备性HPLC(CH3CN/H2O(含有10mM NH4OAc))进行纯化，得到13-环己基-N-(异丙基磺酰基)-3-甲氧基-6-((3-甲基-3，8-二氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)羰基)-7H-吲哚并[2，1-a][2]苯并氮杂-10-甲酰胺(28.5mg，0.044mmol，43％收率)，其为黄色固体。1H NMR(300MHz，CD3OD)δppm 1.13-2.77(m，28H)，2.80-2.93(m，1H)，3.93(s，3H)，3.90-4.02(m，1H)，4.27-4.65(m，2H)，5.11-5.31(m，1H)，7.04(s，1H)，7.11(d，J＝2.6Hz，1H)，7.16(dd，J＝8.4，2.6Hz，1H)，7.56(d，J＝8.4Hz，1H)，7.67(dd，J＝8.4，1.5Hz，1H)，7.88(d，J＝8.4Hz，1H)，8.18(宽单峰，1H)。LC-MS：保留时间为2.55分钟；m/z 643(MH-)。在ShimadzuLC-10AS液相色谱上记录LC数据，所述色谱配备有Phenomenex-Luna 10μC 184.6×50mm柱，使用检测器波长为220nm的SPD-10AV UV-Vis检测器。使用如下洗脱条件：流速为5毫升/分钟，梯度为100％溶剂A/0％溶剂B至0％溶剂A/100％溶剂B，梯度时间为4分钟，保持时间为1分钟，以及分析时间为5分钟，其中溶剂A为5％乙腈/95％H2O/10mM乙酸铵，溶剂B为5％H2O/95％乙腈/10mM乙酸铵。使用Micromass Platrorm用于LC以电喷雾模式确定MS数据。