本发明涉及具有血管扩张作用的新的吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物。 作为与本发明有关的现有技术，本发明人发现，各种N-氰基羧基亚氨酸酰胺化合物具有降压和血管扩张作用（见特开平3-163061、特开平3-218343），不过，考虑到各种各样的病态、生活质量（即患者日常生活的维持）的提高、以及药物的副作用等因素，需要有更好的新的降血压药和治疗心绞痛的药。
本发明旨在提供具有血管扩张作用的新的化合物，具体地说是提供具有降压作用或抗心绞痛作用的化合物。由于发现新的吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物具有血管扩张作用，从而完成了本发明。
本发明的吡啶羧基亚氨酸酰胺是由下面（Ⅰ）式所表示的化合物。
式中，R1为烷基、羟烷基、羧基、氨基、酰氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳烷基氨基、烷基氨磺酰基、双烷基磺酰氨基或羟基时，
R2表示氢原子，R3表示硝酰基、2-氯苯基或苯基;R1为氢原子时，R2表示烷基、羟烷基、羧基、氨基、酰氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳烷基氨基、烷基氨磺酰基、双烷基磺酰氨基、或羟基，R3表示硝酰基、2-氯苯基或苯基。
本发明的吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物是具有很强的血管扩张作用的新的化合物，具体地说，这种化合物具有降压作用、抗心绞痛作用。特别是5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺，在测定其降压作用随时间变化的情况时发现，降压作用非常强并且持久。另外还有5-氨基-N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺，通过测定其降压作用或冠状血管扩张作用随时间变化的情况，证实该作用非常强而且持久。这种效果是本发明人事先未曾料到的。
吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物
如上所述，本发明地吡啶羧基亚氨酸酰胺是由下面式（Ⅰ）所表示的化合物。
式中，R1为烷基、羟烷基、羧基、氨基、酰氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳烷基氨基、烷基氨磺酰基、双烷基磺酰氨基或羟基时，
R2表示氢原子，R3表示硝酰基、2-氯苯基或苯基;R1为氢原子时，R2表示烷基、羟烷基、羧基、氨基、酰氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳烷基氨基、烷基氨磺酰基、双烷基磺酰氨基或羟基，
R3表示硝酰基、2-氯苯基或苯基。
本发明的化合物具有碱性的氮原子，可以形成酸加成盐。作为适合于形成酸加成盐的酸，可以举出例如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，或者乙酸、丙酸、马来酸、油酸、棕榈酸、柠檬酸、琥珀酸、酒石酸、富马酸、谷氨酸、泛酸、甲磺酸、甲苯磺酸、十二烷基磺酸等有机酸。不言而喻，以酸加成盐作药用时，所用的酸必须是药学上允许的酸。
下面列举的是由（Ⅰ）式表示的本发明的吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物的有代表性的实例。
（1）R3是2-氯苯基或苯基时的情况
化合物No 化合物名称
1）N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-甲基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
2）N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-乙基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
3）N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-羟甲基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
4）5-羧基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
5）6-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
（N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-（2-氨基吡啶）羧基亚氨酸酰胺）
6）5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
（N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-（3-氨基吡啶）羧基亚氨酸酰胺）
7）5-乙酰氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
（N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-[3-（N-乙酰氨基）吡啶]羧基亚氨酸酰胺）
8）5-苯甲酰氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
9）N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-二甲氨基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
10）N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-乙氨基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
11）N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-异丙基氨基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
12）5-正丁基氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
13）5-苄氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
14）N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-甲磺酰基氨基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
（N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-[3-（N-甲磺酰基氨基）吡啶]羧基亚氨酸酰胺）
15）N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-双（甲磺酰基氨基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
（N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-[3-（N，N-双甲磺酰基氨基）吡啶]羧基亚氨酸酰胺）
16）5-氨基-N-氰基-N′-（2-苯乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
17）N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-羟基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
（2）R3是硝酰基时的情况
化合物No. 化合物名称
18）5-氨基-N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
（N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-5-（3-氨基吡啶）羧基亚氨酸酰胺）
19）N-氰基-5-乙氨基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
（N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-5-[3-（N-乙氨基）吡啶]羧基亚氨酸酰胺）
20）6-氨基-N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
（N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-5-（2-氨基吡啶）羧基亚氨酸酰胺）
21）N-氰基-6-二乙氨基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
（N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-5-[2-（N，N-二乙氨基）吡啶]羧基亚氨酸酰胺
22）5-正丁基氨基-N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
（N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-5-[3-（N-正丁基氨基）吡啶]羧基亚氨酸酰胺）
23）N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-5-异丙基氨基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
（N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-5-[3-N-异丙基氨基）吡啶]羧基亚氨酸酰胺）
24）5-乙酰氨基-N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
（N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-5-[3-（N-乙酰氨基）吡啶]羧基亚氨酸酰胺）
吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物的制备方法
本发明的吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物可以采用任何适宜的方法制备，例如可以按以下所述的方法制备。
A）（Ⅰ）式中R1是烷基、羟烷基、羧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳烷基氨基或羟基时R2是氢原子，或者R1是氢原子时R2是氨基或二烷基氨基的N-氰基-吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物及其酸加成盐的制备
如图1中所示的本发明的化合物，由具有上述（Ⅰ）式中的R1和R2的氰基吡啶（Ⅱ），经过吡啶羧基亚氨酸酯（Ⅲ），得到N-氰基吡啶羧基亚氨酸酯（Ⅳ），再使胺（Ⅴ）或胺（Ⅵ）发生作用，即可制得（Ⅰ）式中R1为烷基、羟烷基、羧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳烷基氨基或羟基时R2是氢原子，或者R1是氢原子时R2是氨基或烷基氨基的吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物。但是，在制备R1是羧基的吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物时，使用R1是甲酯基的氰基吡啶（Ⅱ）为原料，经吡啶羧基亚氨酸酯（Ⅲ）和N-氰基吡啶羧基亚氨酸酯（Ⅳ），得到吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物后，脱去甲基，即可得到R1是羧基的吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物。下面按工艺顺序加以说明。
1）氰基吡啶（Ⅱ）
前已述及，由（Ⅰ）式所表示的本发明化合物中，R1是烷基、羟烷基、羧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳烷基氨基或羟基时R2是氢原子，或者R1是氢原子时R2是氨基或烷基氨基的吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物，可以按图1中所示，由具有上述R1和R2的氰基吡啶（Ⅱ）合成。这些氰基吡啶可以是本身已经公知的化合物或者可以由文献中已知的方法，例如用Journal of Medicinal Chemistry 10，149-154（1967），Journal of Heterocyclic Chemistry 11，397-399（1974），或Heterocycles 22，117-124（1984）等中描述的方法制备。
2）吡啶羧基亚氨酸酯（Ⅲ）的制备
作为由氰基吡啶（Ⅱ）制备吡啶羧基亚氨酸酯（Ⅲ）的方法之一，可以举出利用品纳（Pinner′s）法来制备吡啶羧基亚氨酸酯（Ⅲ）。即，使氯化氢在醇中对氰基吡啶（Ⅱ）发生作用，就可以得到与所用的醇对应的醇-吡啶羧基亚氨酸酯。可以用于这一反应的醇例如有甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、异丁醇、叔丁醇等。这些醇可以也作为反应溶剂使用，或者在同时存在其它溶剂的情况下只用来作为反应试剂。作为反应溶剂使用时，相对于1摩尔的氰基吡啶，其使用范围一般是50-200摩尔，在其它溶剂存在的情况下使用时，相对于1摩尔的氰基吡啶，其范围最好是1-5摩尔。可用于这一反应的溶剂例如有非质子传递溶剂，如己烷、苯、甲苯、乙醚、石油醚等。反应温度在-10-50℃范围，最好是0℃-室温。
在上述反应条件下，这一反应通常在1-24小时即可结束。
该反应生成的吡啶羧基亚氨酸酯（Ⅲ）是以盐酸盐的形式生成的，可以原封不动地以盐酸盐形式或者用碱将盐酸中和后供下一步反应使用。另外，这种吡啶羧基亚氨酸酯（Ⅲ）或其盐酸盐还可以分离提纯，分离提纯时可以采用有机合成化学领域中公知的提纯方法，例如结晶法、蒸馏法、以硅胶为载体的柱色谱法等。
此外，吡啶羧基亚氨酸酯（Ⅲ）也可以采用别的方法制备。在醇中使催化剂量的金属醇盐作用于氰基吡啶（Ⅱ），即可得到吡啶羧基亚氨酸酯（Ⅲ）。作为金属醇盐，可以举出醇钠、醇钾。适用的醇及其用量与采用上述品纳法制备的情况相同。另外，这一反应也可以在其它溶剂共存下进行，这与上面所述相同，适用的溶剂也与上面所述相同。反应温度在溶剂凝固点至30℃范围内，最好是0～10℃。这一反应一般在12～24小时就可以结束。
由这一反应制备的吡啶羧基亚氨酸酯，其分离提纯方法也与上面所述相同。
3）转变成N-氰基-吡啶羧基亚氨酸酯（Ⅳ）
将这样所得到的吡啶羧基亚氨酸酯（Ⅲ）或其盐酸盐，再利用氨基氰的作用，使之转变成N-氰基-吡啶羧基亚氨酸酯（Ⅳ）。
氨基氰的用量，相对于1摩尔吡啶羧基亚氨酸酯（Ⅲ），至少是1摩尔以上，最好是2-3摩尔。另外，这个反应还与反应液的PH值有关，适宜的PH范围是6.0-8.0，最好是6.5-7.5。为了保持上述适宜的PH范围，该反应要在磷酸缓冲液中进行，在用盐酸盐作为基质时，应添加碳酸钠等碱性物质。另外，这一反应也可以在其它溶剂共存的情况下进行。适宜的溶剂例如有乙腈、二噁烷、四氢呋喃、DMF等。反应温度在0-50℃范围，最好在室温附近。
在这样的反应条件下，该反应在5-30小时即可完成。
所得到的N-氰基-吡啶羧基亚氨酸酯（Ⅳ），其分离提纯可以采用与上述相同的方法，如结晶法、蒸馏法、以硅胶为载体的柱色谱法等。
4）制备N-氰基-吡啶羧基亚氨酸酰胺
使这样所得到的N-氰基-吡啶羧基亚氨酸酯（Ⅳ）与胺（Ⅴ）或胺（Ⅵ）反应，可分别制得（Ⅰ-a）式或（Ⅰ-b）式所示的N-氰基-吡啶羧基亚氨酸酰胺。胺的用量，相对于1摩尔（Ⅳ）式所示的N-氰基-吡啶羧基亚氨酸酯，至少是1摩尔以上，最好是1-2摩尔。另外，该反应一般可在溶剂中进行，适用的溶剂例如有甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二噁烷、四氢呋喃等有机溶剂，或者水。反应温度在0℃-溶剂沸点范围内，最好在室温附近。在上述反应条件下，通常这一反应在2-24小时即可结束。
由上述反应得到的反应混合物分离提纯（Ⅰ-a）和（Ⅰ-b）所示的N-氰基-吡啶羧基亚氨酸酰胺时使用的方法，与上面所述（Ⅲ）式所示吡啶羧基亚氨酸酯的分离提纯方法相同。
所制得的N-氰基-吡啶羧基亚氨酸酰胺（Ⅰ-a）和（Ⅰ-b）），通过使酸作用可以变成酸加成盐。适用的酸与前述相同。
B）（Ⅰ）式中R1是酰氨基、烷基氨磺酰基或双烷基磺酰氨基的N-氰基-吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物及其酸加成盐的制备
如图2所示，以由上述方法制得的、（Ⅰ）式中R1是氨基的N-氰基-吡啶羧基亚氨酸酰胺（Ⅰ-C）为原料，分别使与其吡啶键合的氨基酰化、烷基磺酰化、或双烷基磺酰化，即可制成本发明化合物中（Ⅰ）式的R1是酰氨基、烷基氨磺酰基或双烷基磺酰氨基的N-氰基-吡啶羧基亚氨酸酰胺。下面更具体地说明其制备方法。
使化合物（Ⅰ-C）的氨基进行N-酰化或N-烷基磺酰化，可以制得由（Ⅰ-d）式所表示的标题化合物。N-酰化或N-磺酰化的方法可以采用公知的各种生成方法，例如可以通过以下所述的方法N-酰化或N-烷基磺酰化。
使化合物（Ⅰ-C）的氨基与酰化剂或磺酰化剂如酰基卤、酸酐、活性酯等反应，或者加入缩合剂如1，3-二氯己基碳化二亚胺（DCC）、1-乙基-3-（3′-二乙氨基丙基）碳化二亚胺（WSCI）等，使化合物（Ⅰ-C）的氨基与羧酸反应，可以得到化合物（Ⅰ-d）。使用酰化剂时，相对于1摩尔的原料（Ⅰ-C），酰化剂的用量至少是1摩尔以上，最好是1-2摩尔。该反应通常在溶剂中进行，适用的溶剂例如有吡啶、N，N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷、氯仿、乙腈、四氢呋喃等有机溶剂。反应可以在有吡啶、三乙胺等有机碱、碳酸钾、碳酸氢钠等无机碱的情况下进行。反应温度在0℃至溶剂沸点的范围内，最好是在室温附近。在使用缩合剂的场合，相对于1摩尔原料（Ⅰ-C），羧酸及缩合剂的用量分别在1摩尔以上为宜，最好是用等摩尔量进行反应。在这一反应中，使用N-羟基琥珀酰亚胺或N-羟基苯并三唑等添加剂可使反应加速进行并可提高收率。这一反应通常在溶剂中进行，适用的溶剂例如有N，N-二甲基甲酰胺、乙腈、四氢呋喃等有机溶剂，在使用WSCI的情况下，可以在水溶液中进行反应。反应温度在0℃至溶剂沸点的范围内，最好是在室温附近。
在上述的两个反应条件下，这些反应通常在2-24小时即可结束。
由上述反应得到的反应混合物分离提纯（Ⅰ-d）式所示的吡啶羧基亚氨酸酰胺的方法，与上述（Ⅲ）式所示吡啶羧基亚氨酸酯的分离提纯方法相同。
这样所得到的N-氰基-吡啶羧基亚氨酸酰胺（Ⅰ-d），通过酸的作用可以转变成酸加成盐。适用的酸与上面所述的相同。
吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物的用途
（1）当（Ⅰ）式中的R3是2-氯苯基或苯基的情况
前已述及，本发明的吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物具有降压作用，因此，本发明的吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物适合作为降压药。
将本发明的吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物作为降压剂给药时，可以经口或不经口给药（肌肉内、皮下、静脉内、经皮肤），或者以含片、栓剂等形式给药。
本发明的吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物的用药量及给药方法，依患者的状况、性别、感受性、给药时间、并用的药剂、患者或其疾病的程度等而有所不同，在一定的条件下，适宜的用药量及给药次数必须根据上述原则由专门医生经过试验来确定，通常，成人每人的用药量约为0.1-200mg，优选的是0.3-100mg，最好是0.5-50mg。
将本发明的化合物作为药剂经口给药时，可以按片剂、粒剂、散剂、胶囊的形式给药，在非经口给药时，可以按针剂、悬浮剂的形式给药。在制造这些制剂时，可以添加赋形剂、粘结剂、崩解剂、润滑剂、稳定剂等。
赋形剂例如有乳糖、淀粉、结晶纤维素、甘露糖醇、麦芽糖、磷酸氢钙、轻质硅酸酐、碳酸钙等;粘结剂例如有淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、阿拉伯树胶;崩解剂例如有淀粉、羧甲基纤维素等;润滑剂例如有硬脂酸镁、滑石、硬化油等;稳定剂例如有乳糖、甘露糖醇、麦芽糖、聚山梨酸酯类、聚环氧乙烷硬化蓖麻油类。
可以用这些成分制成片剂、粒剂、胶囊、针剂等剂型。
（2）当（Ⅰ）式中的R3是硝酰基的情况
如上所述，本发明的吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物具有血管扩张作用，具体地说具有降压作用或抗心绞痛作用，因此本发明的吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物可用作降压药或治疗心绞痛的药。
将本发明的吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物作为降压药或治心绞痛药给药时，可以经口或不经口给药（肌肉内、皮、静脉内、经皮），或者以含片、栓剂形式给药。
本发明的吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物的用药量及给药方法，依患者状况、性别、感受性、用药时间、并用药剂、患者或其疾病的程度而有所不同，在一定的条件下，适宜的用药量和给药次数必须按上述方针由专门医生经试验决定，通常，成人每人的用药量约为0.1-200mg，优选的是0.5-100mg，最好是0.5-50mg。
将本发明的化合物作为医药经口给药时，可以按片剂、粒剂、散剂、胶囊的形式给药，在非经口给药时，可以按针剂、悬浮剂的形式给药。在制造这些制剂时，可以添加赋形剂、粘结剂、崩解剂、润滑剂、稳定剂等。
赋形剂例如有乳糖、淀粉、结晶纤维素、甘露糖醇、麦芽糖、磷酸氢钙、轻质硅酸酐、碳酸钙等;粘结剂例如有淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、阿拉伯树胶等;崩解剂例如有淀粉、羧甲基纤维素等;润滑剂例如有硬脂酸镁、滑石、硬化油等;稳定剂例如有乳糖、甘露糖醇、麦芽糖、聚山梨酸酯类、聚环氧乙烷硬化蓖麻油类。
用这些成分可以制成片剂、粒剂、胶囊、针剂等剂型。
实验例
下面的药理试验及实验例旨在更详细地说明本发明，而不是为了限定本发明。
（1）当（Ⅰ）式中的R3是2-氯苯基或苯基的情况
药理试验1 对高血压自然发症大鼠的降血压作用（静脉内给药）
用雄性的高血压自然发症大鼠（SHR）观察本发明化合物的降血压作用。
用氨基甲酸乙酯-α-氯醛糖将大鼠麻醉，在其颈动脉中插入插管，通过压力传感器测定其平均血压。由插入大腿静脉的插管将试验化合物对每只大鼠累积给药30分钟。以给药前的血压为100%，求出血压的改变（其降低率），由用药量-降压作用曲线计算出ED20（使血压下降20%的用药量）。
结果
本发明化合物中有代表性的化合物的ED20值示于表1中。
表1
化合物No. ED20值(mg/Kg静脉注射)
1 17.1
2 7.0
3 8.7
5 33.3
6 4.6
7 12.3
10 7.9
16 28.0
药理试验2 5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-（3-氨基吡啶）羧基亚氨酸酰胺）（化合物6）对小猎犬的降血压作用
将本发明的5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-（3-氨基吡啶）羧基亚氨酸酰胺）（化合物6）的降压作用与被认为是与本发明化合物最接近的公知化合物N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（特开平3-163061）进行比较。
使用体重9.2-10.4Kg的小猎犬，按30mg/Kg的用量将戊巴比妥钠往静脉内给药，在麻醉下进行实验。将插管插入其右大腿动脉中，测定血压。通过插入右大腿静脉中的插管将被实验物质给药。
结果
将5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺往静脉内给药，给药量为3～30μg/Kg，观察血压下降随用药量改变的情况。降压作用的持续时间随用药量增加而延长，在用药量为3、10或30μg/Kg的情况下，持续时间分别为10、45和60分钟以上。另一方面，将N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺以10和30μg/Kg的用量给药，证实血压确实下降了，但无论哪一种用药量均能在给药10分钟内回复原状（如表2所示）。
表2 将5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺按静脉内给药所产生的降血压效果
降压作用(%)
5-氨基-N-氰基 N-氰基-N′-[2-
-N′-[2-(2- (2-氯苯基)乙基]-
氯苯基)乙基]-3- 3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
吡啶羧基亚氨酸酰胺
给药后时间 用药量(μg/Kg) 用药量(μg/Kg)
(分) 3 10 30 3 10 30
0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0
1 -3.9 -16 -29.3 0.0 -23.4 -41.7
2 -12.8 -22.7 -40.0 1.9 -17.7 -39.8
3 -10.3 -26.7 -42.7 1.9 -13.1 -33.8
5 -6.4 -26.7 -46.7 -4.7 -16.7
7.5 -3.9 -26.7 -44.0 -2.8
10 -3.9 -26.7 -42.7 -0.9
15 -20.0 -40.0
20 -16.0 -36.0
30 -13.3 -33.3
45 -6.7 -24.0
60 -16.0
药理试验3 5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（N-氰基-N′-（2-氯苯基）乙基]-5-（3-氨基吡啶）羧基亚氨酸酰胺）对肾性高血压小猎犬的降压作用
按30mg/Kg的用量将戊巴比妥钠对小猎犬（体重9.0-11.0Kg）静脉给药，将其麻醉，然后切开其左侧腹部，从后腹膜侧暴露出左肾。小心地剥离左动脉后，吊2根丝线，与18G的注射针（外径1.2mm）一起以5mm间隔使2处狭窄。由大腿动脉插入聚乙烯管（IMG、PE-100）用于测定血压，管的另一端通过皮下伸出到颈背部。用含有肝素500U/ml的生理食盐水灌满该聚乙烯管，在不测血压时用金属塞子塞住。为防止感染，手术后3天内将抗生素（青霉素和链霉素，明治制药公司产品）按肌肉内给药。
手术后经过1个月，将平均血压超过120mmHg的动物作为二肾性高血压犬供实验使用。
将5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺填充到3号胶囊中，用100目的乳糖填充空隙，然后经口给药。给药后24小时内测定血压。测定是在无麻醉、吊链悬垂下进行。将测定血压用的管子接到压力传感器（日本光电公司生产，TP-400T）上，测量血压，记录在多种描记器上。
结果
将本发明的5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺以0.25mg/Kg和0.5mg/Kg的用量经口给药，观察持续的血压下降情况（见表3）。
表3 5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-（3-氨基吡啶）羧基亚氨酸酰胺）对肾性高血压小猎犬的降血压作用
平均血压(mmHg)
用药量(mg/Kg,经口给药)
给药后时间(小时) 0.25 0.50
0 122.4±4.4 126.6±0.5
1 100.9±7.4 68.1±7.4
2 85.7±0.3 84.8±6.1
4 102.8±3.9 99.7±12.3
6 110.1±2.6 106.2±9.5
8 112.6±3.4 114.4±7.3
24 118.8±4.8 111.8±3.9
药理试验4 对于SHR的随时间变化的降压作用
调查5-氨基-N-氰基-N′-（2-苯乙基）-吡啶羧基亚氨酸酰胺（化合物No.16）的降压作用随时间变化的情况。
（1）试验方法
对未麻醉的雄性高血压自然发症大鼠（SHR）观测本发明化合物的降血压作用。用tail cuff法非观血地测定收缩期血压（SBP）。
将化合物（16）溶解于聚乙二醇200与生理食盐水的等量混合液中。使用经口的探头，强制经口给药。给药前及给药后的1、2、4、6、8、12、24小时分别测定SBP。以给药前的数据为100%，所得结果以其变化率（%）表示。
（2）结果
按3.0mg/Kg的用量将化合物（16）给药，观测血压降低情况，其持续时间为12小时以上（见表4）。
表4 给与5-氨基-N-氰基-N′-（2-苯乙基）-吡啶羧基亚氨酸酰胺（化合物No.16）时产生的血压降低作用（SHR）（以相对于给药前的数值变化率表示）
给药后的时间（小时）
化合物No. 1 2 4 6 8 12 24
(16) -45.8 -23.9 -42.3 -27.9 -22.8 -15.1 -8.2
药理试验5 急性毒性
使用SD系雄鼠（5周龄）来研究当向其经口给与本发明的5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（化合物No.6）时所引起的急性毒性。结果表明，在给药量为50mg/Kg的一组鼠中没有发现死亡。LD50在50mg/Kg以上。
实施例1
3-氰基-5-甲基吡啶的制备
3-氰基5-甲基吡啶是一种公知的化合物，例如，它可以按欧洲专利申请公开公报253360号（1988年）记载的方法，Europian Journal of Biochemistry，118卷，第3期，479-486页（1981年）记载的方法，或者Chemical and Pharmaceutical Bulletin，22卷，第10期，2402-2406页（1974年）记载的方法等来制备。
N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-甲基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的合成
将3-氰基-5-甲基吡啶（2g，16.9mmol）溶解于1-丙醇（100ml）中，然后加入甲醇钠（46mg，0.85mmol），于0℃搅拌20小时。反应后，向反应液中加入乙酸（56mg，0.93mmol），以中和反应液，然后减压浓缩。浓缩后，向残渣中加入乙醚（50ml），滤去不溶的乙酸钠，将滤液减压浓缩，获得5-甲基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯的粗提纯物。
接着往该5-甲基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯中加入氨基氰（1.42g，33.8mmol）、Na2HPO4（2.40g，16.9mmol）和NaH2PO4·2H2O（10.56g，67.7mmol）的水溶液（100ml）并在室温下搅拌5小时，用氯仿（100ml×3）萃取，氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩，获得N-氰基-5-甲基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯的粗提纯物（2.54g）。
IR（neat）cm-12200，1610，1320，730然后，将所获的N-氰基-5-甲基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（0.77g，3.8mmol）溶解于甲醇（5ml）中，然后加入2-（2-氯苯基）乙胺（0.59g，3.8mmol），在室温下搅拌30分钟。将反应液减压浓缩后，用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶（WaKogel）C-200，30g，用氯仿∶甲醇＝100∶1洗脱）提纯，再由甲醇/乙醚中结晶出，获得无色结晶的标题化合物（0.62g，2.1mmol）。（收率55%）。
IR（KBr）cm-12160，1580，1540，1440，1210，740，720.
1H-NMR（100MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.98（1H，d.J＝2.7Hz，H-6），8.67（1H，d，J＝1.8Hz，H-2），8.27（1H，m，H-4），7.4-7.2（4H，C6H4Cl），3.82（2H，dd，J＝6.7，12.8Hz，NHCH2CH2C6H4Cl），3.12（2H，t，J＝6.7Hz，NHCH2CH2C6H4Cl），2.47（3H，s，Pyridine-CH3）.
实施例2
3-氰基-5-乙基吡啶的制备
将5-溴-3-氰基吡啶（6.5g）溶解于三乙胺（15ml）中，然后加入双（三苯膦）氯化钯[（Ph3P）2PdCl2]（600mg）、碘化铜（CuI）（350mg）和三甲基甲硅烷基乙炔（TMS-CCH）（7.5ml），然后在密封容器中于100℃搅拌60分钟。待反应冷却后，向其中加水（50ml），用乙醚（50ml×3）萃取。乙醚层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩，获得浓缩残渣（6.87g）。然后将该浓缩残渣（4g）溶解于四氢呋喃（30ml）中，在5℃下向其中加入氟化四丁铵（Bu4NF）的1N四氢呋喃溶液（20ml），一边使其回复到室温，一边搅拌10分钟。向反应液中加入1N氢氧化钠水溶液（50ml），用乙醚（50ml×3）萃取。乙醚层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩，再将其用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200，40g，用乙醚∶己烷＝1∶1洗脱）提纯，获得淡黄色的固体物3-氰基-5-乙炔基吡啶（1.84g）。（收率70%）
将所获的3-氰基-5-乙炔基吡啶（1g）溶解于四氢呋喃（30ml）中，向其中加入10%披钯木炭（100mg）作为催化剂，在氢气流中进行催化还原，在滤去催化剂后，减压浓缩滤液，获得3-氰基-5-乙基吡啶（0.87g）。（收率84%）
1H-NMR（90MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.58（1H，H-2），8.39（1H，H-6），7.77（1H，H-4），2.72（2H，q，J＝7.5Hz，吡啶-CH2CH3），1.26（3H，t，J＝7.5Hz，吡啶-CH2CH3）.
N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-乙基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的合成
将3-氰基-5-乙基吡啶（2.07g，15.7mmol）溶解于1-丙醇（80ml）中，向其中吹入氯化氢气体30分钟，然后用密封塞密封，在室温下搅拌30小时。反应后，减压浓缩反应液，用饱和碳酸钠水溶液中和浓缩残渣后，用氯仿（100ml×3）萃取。氯仿层用饱和食盐水洗净后，用无水硫酸钠脱水，减压浓缩后，获得5-乙基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（2.94g）的粗提纯产物。
然后，将该5-乙基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯溶解于乙腈（5ml）中，向其中加入氨基氰（1.13g，26.9mmol）、Na2HPO4（1.29g，9.1mmol）和NaH2PO4·2H2O（8.45g，54.2mmol）的水溶液（30ml）并在室温下搅拌19小时。反应后，反应液用氯仿（50ml×2）萃取。氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩，然后用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200，50g，己烷∶乙酸乙酯＝5∶1洗脱）提纯，以收率44%获得N-氰基-5-乙基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（1.51g，7.0mmol）。
接着将N-氰基-5-乙基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（276mg，1.27mmol）溶解于甲醇（2ml）中，向其中加入2-（2-氯苯基）乙胺（238mg，1.53mmol）并在室温下搅拌1小时15分钟。反应后，减压浓缩反应液，使所获浓缩残渣由甲醇/乙醚中结晶出，以收率55%获得无色结晶的标题化合物（217g，0.69mmol）。
熔点118℃
IR（KBr）cm-13230，2290，1580.
FD-MS m/z 312（M.C17H17N4Cl）
1H-NMR（500MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.51（1H，s，H-2），8.43（1H，s，H-6），7.77（1H，s，H-4），7.4-7.2（4H，C6H4Cl），6.56（1H，brs，NH），3.81（2H，dd，J＝6.7，12.8Hz，NHCH2CH2C6H4Cl），3.15（2H，t，J＝6.7Hz，NHCH2CH2C6H4Cl），2.70（2H，q，J＝7.6Hz，吡啶-CH2CH3），1.26（3H，t，J＝7.6Hz，吡啶-CH2CH3）.
实施例3
3-氰基-5-羟甲基吡啶的制备
3-氰基-5-羟甲基吡啶是公知的化合物，例如，可以按照美国专利US5002949说明书中记载的方法来制备。
N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-羟甲基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的合成
将3-氰基-5-羟甲基吡啶（0.79g，5.9mmol）溶解于1-丙醇（30ml）中，在冰冷下吹入氯化氢气体30分钟，然后用密封塞密封，在室温下搅拌20小时。反应后，减压浓缩反应液，用饱和碳酸钠水溶液中和后，用氯仿（30ml×3）萃取。氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩。将获得的浓缩残渣溶于乙腈（20ml）中，向其中加入氨基氰（0.50g，11.9mmol）、Na2HPO4（0.84g，5.9mmol）和NaH2PO4·2H2O（3.7g，23.7mmol）的水溶液（30ml），在室温下搅拌10小时。反应后，反应液用氯仿（100ml×3）萃取，氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩，获得N-氰基-5-羟甲基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯的粗提纯物。
然后，将该粗提纯物溶解于甲醇（10ml）中，向其中加入2-（氯苯基）乙胺（0.5g，3.2mmol），在室温下搅拌3小时。反应后，减压浓缩反应液，所获的浓缩残渣用硅胶薄层色谱法（メルク社，No.5744，用氯仿∶甲醇＝10∶1展开）提纯，再由甲醇/乙醚中结晶出，获得无色粉末状的标题化合物（0.12g，0.38mmol）。（根据3-氰基-5-羟甲基吡啶计的收率是6%）
IR（KBr）cm-13350，2200，1580.
FD-MS m/z 314（M，C16H15N4OCl）.
1H-NMR（90MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.72（1H，brs，H-6），8.68（1H，brs，H-2），7.99（1H，m，H-4），7.4-7.0（4H，C6H4Cl），6.82（1H，brs，NH），4.78（2H，CH2OH），3.82（2H，m，NHCH2CH2C6H4Cl），3.12（2H，t，NHCH2CH2C6H4Cl）.
实施例4
3-甲酯基-5-氨基吡啶的制备
将3-氰基-5-乙基吡啶（1.28g）（参照实施例2）溶解于丙酮（20ml）中，向其中慢慢地滴入高锰酸钾（350mg）水溶液（40ml）。滴加完毕后，将反应液加热至100℃，然后过滤。减压浓缩滤液，将所获得的浓缩残渣溶解于DMF（20ml）中，向其中加入碳酸钾（1.6g）和硫酸二甲酯（1ml），在室温下搅拌10分钟。向反应液中加水（10ml），然后用乙醚（30ml×3）萃取。乙醚层用无水硫酸钠脱水后再减压浓缩，用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200，10g，用己烷∶乙醚＝1∶1洗脱）提纯，获得无色固体状的3-甲酯基-5-氰基吡啶（670mg，收率41%）。
IR（KBr）cm-12210，1730。
5-羧基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的合成
将3-甲酯基-5-氰基吡啶（1.2g，7.4mmol）溶解于1-丙醇（40ml）中，在冰冷下向其中吹入氯化氢气体20分钟，将反应容器密封并在0℃下搅拌22小时。反应后，减压浓缩反应液，所获的浓缩残渣用饱和碳酸钠水溶液中和，用氯仿（50ml×3）萃取。氯仿层用饱和食盐水洗净后，用无水硫酸钠脱水并减压浓缩。将所获的浓缩物溶解于乙腈（3ml）中，向其中加入氨基氰（682mg，16.2mmol）、Na2HPO4（1.15g，8.1mmol）和NaH2PO4·H2O（5.07g，32.5mmol）的水溶液（16.5ml），在室温下搅拌18小时再用氯仿（50ml×3）萃取。氯仿层用无水硫酸钠脱水后再减压浓缩。所获的浓缩残渣用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200，40g，己烷∶乙酸乙酯＝3∶1洗脱）提纯，获得N-氰基-5-（3-甲酯基吡啶）羧基亚氨酸丙酯（1.39g，0.56mmol）。（收率76%）。
IR（neat）cm-12960，2180，1730，1610，1280.
FD-MS m/z 247（M.C12H13N3O3）.
1H-NMR（500MHz，CDCl3）：δ（ppm）9.41（1H，d，J＝1.8Hz，H-6），9.39（1H，d，J＝1.8Hz，H-2），8.94（1H，t，J＝1.8Hz，H-4），4.48（2H，t，J＝6.4Hz，OCH2CH2CH3），4.01（3H，s，COOCH3），1.91（2H，m，OCH2CH2CH3），1.08（3H，t，J＝7.6Hz，OCH2CH2CH3）.
将N-氰基-5-（3-甲酯基吡啶）羧基亚氨酸丙酯（448mg，1.81mmol）溶解于甲醇（10ml）中，向其中加入2-（2-氯苯基）乙胺（340mg，2.19mmol），在室温下搅拌1小时45分钟。反应结束后，向反应液中加入乙醚（30ml），滤取析出的白色沉淀。接着将该白色沉淀溶解于甲醇（30ml）中，向其中加入40%的氢氧化钠水溶液（2ml），在室温下搅拌16小时，反应液用酸性离子交换树脂Dowex 50W×8（H+）中和后，滤出树脂，减压浓缩滤液，得到无色粉末状的标题化合物（509mg，收率86%）。
IR（KBr）cm-13220，2160，1590，1435，1380，750.
1H-NMR（90MHz，DMSO）：δ（ppm）9.62（1H，m，NH），9.16（1H，d，J＝1.76Hz，H-2），8.75（1H，d，J＝2.19Hz，H-6），7.40（1H，dd，J＝1.76，2.19Hz，H-4），7.2-7.2（4H，C6H4Cl），3.70（2H，m，NHCH2CH2C6H4Cl），3.07（2H，t，J＝6.82Hz，NHCH2CH2C6H4Cl）.
实施例5
6-氨基-3-氰基吡啶的制备
6-氨基-5-氰基吡啶是公知的化合物，例如，可以按照Heterocycles 22卷，第1期，117-124页，（1984）和Journal of Heterocyclic Chemistry 11卷，第3期，397-399页，（1974年）中记载的方法来制备。
6-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-（2-氨基吡啶）羧基亚氨酸酰胺）的合成
将6-氨基-3-氰基吡啶（1.0g，8.4mmol）溶解于1-丙醇（50ml）中，于0-10℃下向其中吹入氯化氢气体30分钟，然后用密封塞密封并在0℃下搅拌21小时。反应后，减压蒸去溶剂，向浓缩物中加入饱和碳酸氢钠水溶液（50ml），使其变成碱性，然后用氯仿（50ml×3）萃取。氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩，获得6-氨基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯的粗提纯产物（1.56g）。
然后将该粗提纯产物溶解于乙腈（6ml）和DMF（2ml）中，向其中加入溶解于水（20ml）中的NaH2PO4·2H2O（5.24g，33.6mmol）、Na2HPO4（1.19g，8.38mmol）和氨基氰（706mg，16.8mmol），在室温下搅拌18小时。反应后，过滤析出的无色粉末，水洗后，获得N-氰基-6-氨基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（1.45g，收率85%）。
熔点150℃
IR（KBr）cm-13380，2180，1650，1580，1295.
1H-NMR（500MHz，DMSO）：δ（ppm）8.74（1H，d，J＝2.4Hz，H-6），8.04（1H，dd，J＝2.4，9.2Hz，H-4），7.20（1H，br s，NH2），6.53（1H，d，J＝9.2Hz，H-3），4.27（2H，t，J＝8.7Hz，OCH2CH2CH3），1.75（2H，m，OCH2CH2CH3），0.97（3H，t，J＝7.3Hz，OCH2CH2CH3）.
将N-氰基-6-氨基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（200mg，0.98mmol）和2-（2-氯苯基）乙胺（170mg，1.09mmol）溶解于甲醇（10ml）和DMF（1.5ml）中，在室温下搅拌2.5小时。减压浓缩反应液后，用硅胶柱色谱法（Wakogel C-200，25g），使用氯仿∶甲醇（30∶1）洗脱，得到无色粉末状的标题化合物（250mg，收率85%）。
熔点222℃
IR（KBr）cm-13220，2160，1570，740.
1H-NMR（90MHz，DMSO）：δ（ppm）8.91（1H，br s，NH），8.13（1H，d，J＝2.5Hz，H-6），7.60（1H，dd，J＝2.5，8.6Hz，H-4），7.45-7.2（4H，C6H4Cl），6.60（2H，brs，NH2），6.48（1H，d，J＝8.6Hz，H-3），3.56（2H，m，NHCH2CH2C6H4Cl），3.02（2H，t，J＝7.0Hz，NHCH2CH2C6H4Cl）.
实施例6
5-氨基-3-氰基吡啶的制备
5-氨基-3-氰基吡啶是公知的化合物，例如，可按照Journalof Medicinal Chemistry，10卷，2期，149-154页（1967年）记载的方法来制备。
5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-（3-氨基吡啶）羧基亚氨酸酰胺）的合成
将5-氨基-3-氰基吡啶（380ml，3.19mmol）溶解于1-丙醇（15ml）中，在0～5℃下向其中吹入氯化氢气体15分钟，然后用密封塞密封，在室温下搅拌22小时。反应后减压蒸去溶剂，向浓缩物中加入饱和碳酸氢钠水溶液（50ml），使其变成碱性后，用氯仿（50ml×3）萃取。氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩，然后用硅胶柱色谱法（Wakogel C-200，25g），使用氯仿∶甲醇（8∶1）洗脱，得到无色油状的5-氨基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（526mg，收率92%）。
IR（neat）cm-13330，3200，1630，1590，1080.
1H-NMR（90MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.37（1H，br s，H-2），8.14（1H，d，J＝2.6Hz，H-6），7.31（1H，m，H-4），4.18（2H，t，J＝6.6Hz，OCH2CH2CH3），1.77（2H，m，OCH2CH2CH3），1.03（3H，t，J＝7.0Hz，OCH2CH2CH3）.
接着将5-氨基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（110mg，0.6mmol）溶解于乙腈（1ml）中，向其中加入溶解于水（2ml）中的NaH2PO4·2H2O（375mg，2.4mmol）、Na2HPO4（85mg，0.6mmol）、NH2CN（50mg，1.2mmol），在室温下搅拌19小时。反应后，反应液用氯仿（20ml×3）萃取，氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩，得到粗提纯的油状5-氨基-N-氰基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（100mg，收率82%）。
IR（neat）cm-13350，2220，1610，1320，760.
1H-NMR（90MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.51（1H，d，J＝2.0Hz，H-2），8.27（1H，d，J＝2.8Hz，H-6），7.72（1H，dd，J＝2.0，2.6Hz，H-4），4.39（2H，t，J＝6.6Hz，OCH2CH2CH3），4.12（2H，br s，NH2），1.83（2H，m，OCH2CH2CH3），1.05（3H，t，J＝7.7Hz，OCH2CH2CH3）.
将5-氨基-N-氰基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（100mg，0.49mmol）溶解于甲醇（1ml）中，向其中加入2-（2-氯苯基）乙胺（155mg，1.0mmol），在室温下搅拌20小时。反应后，减压浓缩反应液，将所获残渣由乙醚/乙酸乙酯中结晶出，得到无色结晶的标题化合物（100mg，0.33mmol，收率68%）。熔点184℃
IR（neat）cm-13200，2170，1570.
FD-MS m/z 299（M，C15H14N5Cl）.
1H-NMR（90MHz，CD3OD）：δ（ppm）8.08（1H，d，J＝2.6Hz，H-6），7.83（1H，br s，H-2），7.5-7.2（5H，H-4，C6H4Cl），3.73（2H，t，J＝7.3Hz，NHCH2CH2C6H4Cl），3.13（2H，t，J＝7.3Hz，NHCH2CH2C6H4Cl）.
实施例7
5-乙酰胺基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-[3-（N-乙酰胺基）吡啶]羧基亚氨酸酰胺的合成
将5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（100mg，0.33mmol）溶解于吡啶（1ml）中，向其中加入无水乙酸（20mg，0.34mmol），在室温下搅拌5.5小时。反应后，将反应液倒入冰水中，过滤所生成的沉淀，用冷水洗净。将该沉淀由甲醇/乙醚中结晶出，得到无色粉末状的标题化合物（86mg，收率75%）。
熔点230℃
IR（KBr）cm-13230，2160，1700，1580，720.
FD-MS m/z 341（M，C17H16N5OCl）.
1H-NMR（90MHz，DMSO）：δ（ppm）10.43（1H，br s，NHCOCH3），9.41（1H，br s，NH），8.87（1H，d，J＝2.4Hz，H-6），8.33（1H，d，J＝2.0Hz，H-2），8.24（1H，dd，J＝2.0，2.4Hz，H-4），7.5-7.3（4H，C6H4Cl），3.63（2H，m，NHCH2CH2C6H4Cl），3.08（2H，t，J＝3.2Hz，NHCH2CH2C6H4Cl），2.12（3H，s，NHCOCH3）.
实施例8
5-苯甲酰胺基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
将5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（100mg，0.33mmol）溶解于DMF（3ml）中，向其中加入三乙胺（101mg，1mmol）和苄基氯（94mg，0.67mmol），在室温下搅拌3小时。反应后，向反应液中加入冰和饱和碳酸钠水溶液进行中和，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯层用饱和食盐水洗净，用无水硫酸钠脱水，然后减压浓缩。所得的浓缩残渣用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200，30g，用氯仿∶甲醇＝200∶1洗脱）提纯，以收率29%得到标题化合物（38mg，0.09mmol）。
熔点220℃
IR（KBr）cm-13260，2160，1655，1555，1430.
FD-MS m/z 404（M+1，C22H18N5OCl）.
1H-NMR（90MHz，DMSO）：δ（ppm）10.71（1H，brs，NHCOPh），9.46（1H，brs，NHCH2CH2C6H4Cl），9.11（1H，d，J＝2.2Hz，H-6），8.5-8.3（2H，H-2，H-4），8.1-7.3（9H，Ph，C6H4Cl），3.63（2H，m，NHCH2CH2C6H4Cl），3.08（2H，t，J＝7.2Hz，NHCH2CH2C6H4Cl）.
实施例9
3-氰基-5-二甲氨基吡啶的制备
将5-氨基-3-氰基吡啶（0.50g，4.20mmol）溶解于DMF（5ml）中，在冰冷下向其中加入NaH（60%在油中）（0.37g，9.26mmol）并搅拌20分钟。然后在冰冷下向其中滴入甲基碘（0.58ml，9.31mmol）的DMF（2ml）溶液。边使其回复到室温，边搅拌2小时，向反应液中加冰后，用乙醚（30ml×3）萃取。乙醚层用饱和食盐水洗净，用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩。所得的残渣用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200，20g，用氯仿∶甲醇＝200∶1洗脱）提纯，得到3-氰基-5-二甲氨基吡啶（145mg，收率23%）。
熔点104℃
IR（KBr）cm-12230，1595，1450，1375，1235，695.
1H-NMR（90MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.28（1H，d，J＝8.1Hz，H-6），8.18（1H，d，J＝1.5Hz，H-2），7.09（1H，dd，J＝1.5，3.1Hz，H-4），3.03（6H，s，N（CH3）2）.
N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-二甲氨基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的合成
将3-氰基-5-二甲氨基吡啶（140mg，0.95mmol）溶解于1-丙醇（15ml）中，在冰冷下向其中吹入氯化氢气体30分钟，用密封塞密封，在室温下搅拌20小时。反应后，减压浓缩反应液，浓缩残渣用碳酸钠中和后，用氯仿（50ml×3）萃取。氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩。将浓缩残渣溶于乙腈（5ml）中，向其中加入氨基氰（80mg，1.9mmol）、Na2HPO4（135mg，0.95mmol）和NaH2PO4·2H2O（593mg，3.80mmol）的水溶液（10ml），在室温下搅拌10小时。反应后，用氯仿（30ml）萃取，氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩，获得淡黄色的浆。
接着，将此浆溶于甲醇（10ml）中，向其中加入2-（2-氯苯基）乙胺（170mg，1.09mmol）并在室温下搅拌4小时。反应后，减压浓缩反应液，所获的浓缩残渣用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200，20g，用氯仿∶甲醇＝100∶1洗脱）提纯，再由甲醇/乙醚中结晶出，以收率70%获得标题化合物（219mg，0.67mmol）。
熔点158℃
IR（KBr）cm-13400，2160，1575，1430.
FD-MS m/z 327（M，C17H18N5Cl）.
1H-NMR（90MHz，DMSO）：δ（ppm）9.25（1H，brs，NHCH2CH2C6H4Cl），8.26（1H，d，J＝2.9Hz，H-6），7.95（1H，d，J＝1.8Hz，H-2），7.5-7.2（4H，C6H4Cl），7.11（1H，dd，J＝1.8，2.9Hz，H-4），3.63（2H，m，NHCH2CH2C6H4Cl），3.05（2H，m，NHCH2CH2C6H4Cl），2.98（8H，s，N（CH3）2）.
实施例10
3-氰基-5-乙氨基吡啶的制备
将5-氨基-3-氰基吡啶（300mg，2.52mmol）溶解于甲醇（10ml）中，向其中加入乙醛（1.42ml，25，1mmol）并在室温下搅拌10分钟。然后向其中加入氰基氢硼化钠（950mg，15.1mmol），再加入乙酸将反应液的pH值调节至6附近，然后搅拌5小时。反应后，用碳酸钠水溶液中和反应液，用乙醚（30ml×3）萃取。乙醚层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩。所获的浓缩残渣用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200，20g，用氯仿∶甲醇＝200∶1洗脱）提纯，获得3-氰基-5-乙氨基吡啶（200mg，1.36mmol，收率54%）。
熔点110℃
IR（neat）cm-12210，1585，1450，1180，690.
1H-NMR（90 MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.2-8.1（2H，H-2，H-6），6.99（1H，dd，J＝1.8，2.9Hz，H-4），4.08（1H，brs，NH），3.61（2H，m，NHCH2CH3），1.25（6H，d，J＝6.4Hz，NHCH2CH3）.
N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-乙氨基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的合成
将3-氰基-5-乙氨基吡啶（380mg，2.59mmol）溶于1-丙醇（40ml）中，在冰冷下向其中吹入氯化氢气体30分钟，然后将反应容器密封并在室温下搅拌20小时，减压浓缩。所获的浓缩残渣用饱和碳酸钠水溶液中和后，用氯仿（50ml×3）萃取。氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩，获得5-乙氨基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯的粗提纯产物。然后将此粗提纯产物溶于乙腈（5ml）中，向其中加入氨基氰（210mg，5.0mmol）、Na2HPO4（355mg，2.5mmol）和NaH2PO4·2H2O（1.56g，10mmol）的水溶液（18ml），在室温下搅拌一夜。反应后，用氯仿（30ml×3）萃取，氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩。所获的浓缩残渣用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200，30g，用己烷/乙酸乙酯洗脱）提纯，获得无色油状的N-氰基-5-乙氨基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（322mg，1.38mmol）。（收率54%）
IR（KBr）cm-12960，2200，1600，1460，1330.
1H-NMR（90 MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.41（1H，d，J＝2.0Hz，H-6），8.18（1H，d，J＝2.9Hz，H-2），7.61（1H，dd，J＝2.0，2.9Hz，H-4），4.39（2H，t，J＝6.5Hz，OCH2CH2CH3），3.95（1H，brs，NH），3.22（2H，m，NHCH2CH3），1.82（2H，m，OCH2CH2CH3），1.31（3H，t，J＝7.2Hz，NHCH2CH3），1.06（3H，t，J＝6.8Hz，OCH2CH2CH3）.
接着，将N-氰基-5-乙氨基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（98mg，0.42mmol）溶于甲醇（3ml）中，向其中加入2-（氯苯基）乙胺（79mg，0.51mmol）并搅拌1小时45分钟。减压浓缩反应液，所获的残渣用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200，30g，用氯仿∶甲醇＝100∶1洗脱）提纯，再由乙醚中结晶出，获得无色结晶的标题化合物（110mg，0.34mmol）。（收率80%）
熔点168℃
IR（KBr）cm-13230，2170，1560，1445，750.
FD-MS m/z 827（M，C17H18N5Cl）.
1H-NMR（90MHz，CDCl3）：δ（ppm）7.95（1H，d，J＝2.6Hz，H-6），7.79（1H，d，J＝1.8Hz，H-2），7.4-7.0（5H，H-4，C6H4Cl），4.35（1H，brs，NHCH2CH2C6H4Cl），3.76（2H，m，NHCH2CH2C6H4Cl），3.3-2.9（4H，NHCH2CH2C6H4Cl，NHCH2CH3），2.88（1H，brs，NHCH2CH3），1.26（3H，t，J＝7.1Hz，NHCH2CH3）.
实施例11
3-氰基-5-异丙氨基吡啶的制备
按照与制备3-氰基-5-乙氨基吡啶相同的方法制得3-氰基-5-异丙氨基吡啶。
熔点82℃
IR（neat）cm-12210，1585，1450，1180，690.
1H-NMR（90MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.2-8.1（2H，H-2，H-6），6.99（1H，dd，J＝1.8，2.9Hz，H-4），4.08（1H，brs，NH），3.61（1H，m，NHCH（CH3）2），1.25（6H，d，J＝6.4Hz，NHCH（CH3）2）.
N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-异丙氨基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺
将3-氰基-5-异丙氨基吡啶（118mg，0.73mmol）溶解于1-丙醇（20ml）中，在冰冷下向其中吹入氯化氢气体30分钟，用密封塞密封，在室温下搅拌17小时。反应后，减压浓缩反应液，所获的浓缩残渣用饱碳酸钠水溶液中和，再用氯仿（50ml×3）萃取。氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩，获得黄色的浆。然后向此浆中加入氨基氰（61mg，1.45mmol）、Na2HPO4（104mg，0.73mmol）和NaH2PO4·2H2O（456mg，2.92mmol）的水溶液（6ml），在室温下搅拌22小时。反应后，反应液用氯仿（30ml×3）萃取，氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩，获得黄色浆状的N-氰基-5-异丙氨基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（80mg，0.33mmol）。（收率44%）
IR（neat）cm-12950，2180，1580，1445，1310.
1H-NMR（500MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.38（1H，d，J＝1.8Hz，H-6），8.16（1H，d，J＝3.1Hz，H-2），7.58（1H，dd，J＝1.8，3.1Hz，H-4），4.38（2H，t，J＝6.4Hz，OCH2CH2CH3），4.09（1H，brs，NH），3.66（1H，m，NHCH（CH3）2），1.86（2H，m，OCH2CH2CH3），1.26（6H，d，J＝6.1Hz，NCH（CH3）2），1.05（3H，t，J＝7.3Hz，OCH2CH2CH3）.
然后，将制得的N-氰基-5-异丙氨基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（98mg，0.42mmol）溶于甲醇（3ml）中，向其中加入2-（2-氯苯基）乙胺（79mg，0.51mmol），在室温下搅拌1小时45分钟。反应后，减压浓缩反应液，所获的浓缩残渣用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200，30g，用氯仿∶甲醇＝100∶1洗脱）提纯，再由乙醚中结晶出，获得无色结晶的标题化合物（110mg，0.34mmol）。（收率80%）
IR（KBr）cm-12960，2160，1555，1440.
1H-NMR（90MHz，CDCl3）：δ（ppm）7.98（1H，d，J＝2.6Hz，H-6），7.78（1H，d，J＝1.8Hz，H-2），7.5-7.2（4H，C6H4Cl），7.12（1H，dd，J＝1.8，2.6Hz，H-4），6.62（1H，brt，NHCH2CH2C6H4Cl），4.11（1H，NHCH（CH3）2），3.76（2H，m，NHCH2CH2C6H4Cl），3.46（1H，m，NHCH（CH3）2），3.14（2H，t，J＝6.6Hz，NHCH2CH2C6H4Cl），1.24（3H，d，J＝6.4Hz，NHCH（CH3）2）.
实施例12
5-正丁基-3-氰基吡啶的制备
按照与制备3-氰基-5-乙氨基吡啶相同的方法制得5-正丁氨基-3-氰基吡啶。
熔点73℃
IR（KBr）cm-1 3270，2240，1590，1440，690。
1H-NMR（90MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.2-8.1（2H，H-2，H-6），6.99（1H，dd，J＝2.0，2.6Hz，H-4），3.96（1H，brs，NH），3.13（2H，m，NHCH2CH2CH2CH3），1.6-1.3（4H，NHCH2CH2CH2CH3），0.98（3H，t，J＝6.4Hz，NHCH2CH2CH2CH3）.
5-正丁氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的合成
将5-正丁氨基-3-氰基吡啶（255mg，1.46mmol）溶于1-丙醇（30ml）中，在冰冷下向其中吹入氯化氢气体30分钟，将反应容器密封，在室温下搅拌16小时。反应后，减压浓缩反应液，所获得的残渣用碳酸钠水溶液中和，再用氯仿（50ml×3）萃取。氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩，获得浆。
然后，将该浆溶于乙腈（3ml）中，向其中加入氨基氰（123mg，2.93mmol）、Na2HPO4（207mg，1.46mmol）和NaH2PO4·2H2O（911mg，5.84mmol）的水溶液（20ml），在室温下搅拌22小时。反应液用氯仿（30ml×3）萃取，氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩。所获的浓缩残渣用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200，30g，用己烷∶乙酸乙酯＝4∶1洗脱）提纯，获得黄色浆状的5-正丁氨基-N-氰基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（252mg，0.97mmol）。
IR（neat）cm-12950，2170，1590，1460，1320.
1H-NMR（90MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.40（1H，d，J＝2.0Hz，H-6），8.19（1H，d，J＝2.9Hz，H-2），7.57（1H，dd，J＝2.0，2.9Hz，H-4），4.39（2H，t，J＝6.6Hz，OCH2CH2CH3），3.16（2H，m，NHCH2CH2CH2CH3），2.0-1.2（6H，3 x CH2），1.1-0.8（6H，2 x CH3）.
将5-正丁氨基-N-氰基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（99mg，0.38mmol）溶于甲醇（2ml）中，向其中加入2-（2-氯苯基）乙胺（71mg，0.46mmol）并搅拌2小时。反应后，减压浓缩反应液，所获的浓缩残渣用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200，30g，用氯仿∶甲醇＝200∶1洗脱）提纯，再由乙醚中结晶出，获得无色结晶的标题化合物（90mg，0.25mmol）。（收率67%）
熔点122℃
IR（KBr）cm-12950，2160，1560，1460，750.
FD-MS m/z 355（M，C19H22N5Cl）.
1H-NMR（90MHz，CDCl3）：δ（ppm）7.92（1H，d，J＝2.6Hz，H-6），7.77（1H，d，J＝1.8Hz，H-2），7.5-7.1（4H，C6H4Cl），7.07（1H，dd，J＝1.8，2.6Hz，H-4），4.46（1H，brt，NH），8.75（2H，m，NHCH2CH2C6H4Cl），3.2-2.8（4H，2 x CH2），1.7-1.2（4H，2 x CH2），0.95（3H，t，J＝6.8Hz，CH3）.
实施例13
5-苄氨基-3-氰基吡啶的制备
按照与制备3-氰基-5-乙氨基吡啶相同的方法制备5-苄氨基-3-氰基吡啶。
熔点131℃
IR（KBr）cm-1 3220，2220，1610，1580，700.
1H-NMR（90MHz，CD3OD）：δ（ppm）8.36（1H，d，J＝1.5Hz，H-2），8.23（1H，d，J＝2.9Hz，H-6），7.91（1H，dd，J＝1.5，2.9Hz，H-4），7.5-7.2（5H，CH2Ph），4.48（2H，s，CH2Ph）.
5-苄氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的合成
将5-苄氨基-3-氰基吡啶（250mg，1.19mmol）溶于1-丙醇（30ml）中，在冰冷下向其中吹入氯化氢气体30分钟，将反应容器密封并在室温下搅拌16小时。反应后，减压浓缩反应液，所获的残渣用碳酸钠水溶液中和，用氯仿（50ml×3）萃取。氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩。
然后，将所获浓缩残渣溶于乙腈（2ml）中，向其中加入氨基氰（100mg，2.38mmol）、Na2HPO4（170mg，1.20mmol）和NaH2PO4·2H2O（743mg，4.76mmol）的水溶液（20ml），在室温下搅拌24小时。反应液用氯仿（50ml×3）萃取，氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩。所获的浓缩残渣用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200，30g，用己烷∶乙酸乙酯＝4∶1洗脱）提纯，获得浆状的5-苄氨基-N-氰基-5-吡啶羧基亚氨酸丙酯（206mg，0.7mmol）。
将5-苄氨基-N-氰基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（14mg，0.38mmol）溶于甲醇（2ml）中，向其中加入2-（氯苯基）乙胺（72mg，0.46mmol），在室温下搅拌1小时45分钟。反应后，反应液减压浓缩，所获的浓缩残渣用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200，20g，用氯仿∶甲醇＝200∶1洗脱）提纯，再由乙醚中结晶出，获得无色结晶的标题化合物（126mg，0.32mmol）。（收率85%）
熔点146℃
IR（KBr）cm-12180，1560，1445，750.
FD-MS m/z 389（M，C22H20N5Cl）.
1H-NMR（90MHz，CDCl3）：δ（ppm）7.94（1H，d，J＝2.6Hz，H-6），7.82（1H，d，J＝1.8Hz，H-2），7.4-7.0（10H），4.92（1H，brs，NH），4.29（2H，brd，J＝5.5Hz，NHCH2Ph），3.8-3.6（3H，NH，NHCH2CH2C6H4Cl），3.09（2H，t，J＝6.6Hz，NHCH2CH2C6H4Cl）.
实施例14
N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-甲磺酰氨基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-[3-（N-甲磺酰氨基）吡啶]羧基亚氨酸酰胺）的合成
将5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（110mg，0.37mmol）溶于吡啶（2ml）中，向其中加入无水甲磺酸（65mg，0.37mmol），在室温下搅拌5小时。反应后，向反应液中加冰和饱和碳酸钠水溶液（20ml），用乙酸乙酯（30ml×3）萃取。乙酸乙酯层用食盐水洗净，用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩。所获的浓缩残渣用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200，20g），使用氯仿∶甲醇＝（50∶1）洗脱，获得无色粉末状的标题化合物（45mg，收率32%）
熔点205℃
IR（KBr）cm-13400，2150，1590，1555，1150.
FD-MS m/z 378（M+1，C16H16N5O2SCl）.
1H-NMR（90MHz，DMSO）：δ（ppm）10.42（1H，br s，NHSO2CH3），9.46（1H，br s，NH），8.87（1H，d，J＝2.4Hz，H-6），8.39（1H，d，J＝2.0Hz，H-2），7.76（1H，dd，J＝2.0，2.4Hz，H-4），7.5-7.8（4H，Ph），3.66（5H，NHCH2CH2Ph，NHSO2CH3），3.16（2H，NHCH2CH2Ph）.
实施例15
N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-双（甲磺酰氨基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-[3-（N，N-双甲磺酰氨基）吡啶]羧基亚氨酸酰胺）的合成
将5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（108mg，0.36mmol）溶于乙腈（1ml）、DMF（1ml）中，向其中加入三乙胺（144mg，1.43mmol）和甲磺酰氯（88mg，0.77mmol），在室温下搅拌2.5小时。反应后，向反应液中注入冰和食盐水，用乙酸乙酯（30ml×3）萃取。乙酸乙酯层用食盐水洗净，用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩。浓缩残渣用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200，20g），使用氯仿∶甲醇＝（100∶1）洗脱，获得无色粉末状的标题化合物（89mg，收率54%）。
熔点210℃
IR（KBr）cm-13230，2160，1580.
1H-NMR（90MHz，DMSO）：δ（ppm）9.60（1H，br s，NH），8.94（1H，d，J＝2.4Hz，H-6），8.83（1H，d，J＝1.8Hz，H-2），8.23（1H，dd，J＝1.8，2.4Hz，H-4），7.4-7.2（4H，Ph），3.83（8H，2 x NHSO2CH3，NHCH2CH2Ph），3.08（2H，t，J＝7.8Hz，NHCH2CH2Ph）.
实施例16
5-氨基-N-氰基-N′-（2-苯乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的合成
将5-氨基-N-氰基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（310mg，1.51mmol）溶于甲醇（5ml）中，向其中加入苯乙胺（230mg，1.90mmol），在室温下搅拌2小时。反应后，反应液减压浓缩，再由甲醇/乙醚中结晶出，获得淡黄色结晶的标题化合物（222mg，0.84mmol）。（收率56%）
熔点158℃
IR（KBr）cm-13200，2160，1580，1550，1430.
1H-NMR（90MHz，DMSO）：δ（ppm）9.21（1H，brd，NH），8.07（1H，d，J＝2.6Hz，H-6），7.76（1H，d，J＝2.0Hz，H-2），7.4-7.2（5H，Ph），7.00（1H，dd，J＝2.0，2.6Hz，H-4），5.70（2H，brs，NH2），3.58（2H，m，NHCH2CH2Ph），2.88（2H，t，J＝6.9Hz，NHCH2CH2Ph）.
实施例17
3-氰基-5-羟基吡啶的制备
将按照国际专利申请公开WO8606628号说明书记载的方法制备的5-羟基烟酰胺（0.69g，5mmol）悬浮于吡啶（50ml）中，向其中加入无水三氟乙酸（2.52g，12mmol），在0℃下搅拌20小时。向反应液中加水（20ml）后，减压浓缩，再用氯仿（50ml×3）萃取。氯仿层用水（50ml）洗净，用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩，获得浓缩残渣。这种浓缩残渣用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶（Wakogel）C-200 20g、用氯仿∶甲醇＝100∶1洗提）进行提纯，得到3-氰基-5-羟基吡啶（0.42g，3.5mmol）。（收率70%）
IR（neat）cm-13250，2920，2180.
1H-NMR（90MHz，CDCl3-CD3OD）：δ（ppm）8.86（1H，d，J＝1.9Hz，H-2），8.40（1H，d，J＝2.5Hz，H-6），7.42（1H，dd，J＝1.9，2.5Hz，H-4）.
N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-羟基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的合成
将3-氰基-5-羟基吡啶（0.42g、3.50mmol）溶解在1-丙醇（40ml）中，在冰冷却下，吹入氯化氢气体30分钟，然后用塞子密封并在室温下搅拌20小时。反应后减压浓缩反应液。接着将该浓缩物溶解在乙腈（20ml）中，加入氨基氰（0.88g、20.9mmol）、Na2HPO4（1.5g、10.6mmol）和NaH2PO4·2H2O（3.27g、21.0mmol）的水溶液（30ml），在室温下搅拌6小时，用饱和碳酸氢钠将反应液调节至PH7.0后，用氯仿（50ml×3）进行萃取。氯仿层用无水硫酸钠脱水后进行减压浓缩，得到N-氰基-5-羟基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯的粗提纯物（0.26g）。
接着将N-氰基-5-羟基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯的粗提纯物（0.26g）溶解在甲醇（5ml）中，然后添加2-（2-氯苯基）乙胺（0.22g、1.4mmol），在室温下搅拌4小时。反应后，减压浓缩反应液，用氯仿（50ml×3）萃取所得的浓缩残渣。用水（100ml）洗涤氯仿层后，用无水硫酸钠脱水，然后进行减压浓缩。用硅胶柱色谱法（ヮコ-凝胶C-200、30g，氯仿∶甲醇＝50∶1洗提）提纯浓缩物，由二乙醚结晶化得到无色结晶的标题化合物（0.16g、0.53mmol）。（按3-氰基-5-羟基吡啶，收率15%）
IR（KBr）cm-13250，2200，1590.
FD-MS m/z 300（M，C15H13N4OCl）.
1H-NMR（90MHz，CD3OD）：δ（ppm）8.35（1H，d，J＝1.8Hz，H-6），8.22（1H，J＝2.6Hz，H-2），7.54（1H，dd，J＝1.8，2.6Hz，H-4），7.4-7.1（4H，C6H4Cl），3.70（2H，m，NHCH2CH2C6H4Cl），3.08（2H，t，J＝7.3Hz，NHCH2CH2C6H4Cl）.
实施例18（片剂/1片中）
5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-（3-氨基吡啶）羧基亚氨酸酰胺） 2mg
乳糖 75.5mg
玉米淀粉 18mg
滑石 4mg
硬脂酸钠 0.5mg
计 100（mg）
混合上述成份，加压制成片剂。
实施例19（胶囊剂/1个胶囊中）
5-氨基-N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（N-氰基-N′-[2-（2-氯苯基）乙基]-5-（3-氨基吡啶）羧基亚氨酸酰胺） 5mg
乳糖 94mg
硬脂酸钠 1mg
计 100（mg）
混合上述成分，填充在胶囊中制成胶囊剂。
（2）式（Ⅰ）中的R3是硝酰基的场合
药理试验1 对鼠大动脉标本的血管的松驰作用
（1）试验方法
使用摘出的大鼠大动脉，进行本发明化合物的生理活性试验。
由放血致死的体重250-350g的Whist系雄性鼠迅速摘出胸部大动脉，作成宽3mm的切成圆片的标本。将标本悬垂在通入95%O2-5%CO2的混合气的装满37℃的克富布斯林-林格氏（Krebs-Ringer）溶液的器官浴中。使负荷1g静止张力，待标本的引力稳定后，将器官浴内交换成含40mM KCl的渗压营养液，使标本的张力增加。在由KCl产生的张力恒定后，将试验化合物累积地加入器官浴中，使标本松驰。以KCl产生的张力作为100%，求出作为其抑制率的松驰反应，IC50值（使由KCl产生的张力为50%的浓度）由平均用量-作用曲线，按照普罗比特疲劳强度推算法计算出。
（2）结果
在本发明化合物中，代表性的化合物的IC50值示于表1中。
表1
化合物No IC50值(M)
(18) 2.2×10-5
(19) 1.0×10-5
(20) 2.7×10-6
(21) 4.6×10-6
药理试验2 对SHR的降低血压作用
将本发明的5-氨基-N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-5-（3-氨基吡啶）羧基亚氨酸酰胺）（化合物No.18）、N-氰基-5-乙氨基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-5-[3-（N-乙氨基吡啶）]羧基亚氨酸酰胺）（化合物No.19）的降压作用与认为最接近本发明化合物的公知化合物N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的甲磺酸盐（特开平3-163061的化合物）作为对比化合物进行比较研究。
（1）试验方法
在无麻醉的雄性高血压自然发病的鼠（SHR）上观察本发明化合物的降低血压作用。用tail cuff法、非观血地测量收缩期血压（SBP）。
化合物（18）、化合物（19）溶解在聚乙二醇200和生理食盐水的等量混合液中，对比化合物溶解在生理食盐水中。以使用经口给药导管的强制给药进行给药。给药前和给药1、2、4、6、8、12、24小时后测量SBP。以给药前作为100%、用其变化率（%）表示结果。
（2）结果
投给3.0mg/Kg的化合物（18）、化合物（19）、观测血压降低，其持续时间在12小时以上。另一方面，对比化合物也以3.0mg/Kg给药，虽然观察到血压降低，但其持续时间约6小时。（表2中所示）
表2 由5-氨基-N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（化合物No.18）、和N-氰基-5-乙氨基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（化合物No.19）和N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的甲磺酸盐（对比化合物）的给药产生的血压降低作用（SHR大鼠）（该值以相对于给药前值的变化率表示）
给药后时间（小时）
化合物No 1 2 4 6 8 12 14
对比化合物 -55.9 -41.5 -10.6 -6.8
(18) -56.9 -49.2 -42.6 -17.9 -20.5 -22.2 -3.7
(19) -60.2 -47.2 -24.3 -23.9 -25.9 -27.7 -9.8
药理试验3 5-氨基-N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺）（化合物No.18）对小猎犬冠状血管的扩张作用
将本发明的5-氨基-N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（化合物No.18）的冠状血管扩张作用与被认为与本发明的化合物最近似的公知化合物N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的甲磺酸盐（特开平3-163061的化合物）作为对比化合物进行比较研究。
（1）试验方法
以30mg/Kg戊巴比妥钠静脉内给药使犬（体重8.3Kg）麻醉后，插入气管导管进行人工呼吸。由大腿静脉投给药物，在左冠状动脉回旋支路上安装非观血型血流探测器测量冠血流量。
（2）结果
以10mg/Kg在静脉内投给5-氨基-N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（化合物No.18），观察到冠血流量增加，其持续时间在15分钟以上。另一方面，也以10mg/Kg投给N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的甲磺酸盐（对比化合物），虽然观察到冠血流量增加，但其持续时间在10分钟以下。（表3中所示）
表3 以10mg/Kg在静脉内投给5-氨基-N-氰基-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（化合物No.18）和N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的甲磺酸盐（对比化合物）对冠血流量产生的影响（麻醉犬）（该值以相对于投药前的变化率表示）
给药后时间（分钟）
化合物No. 1 3 5 10 15 20
(18) 200.0 123.8 71.4 19.0 19.0 0.0
对比化合物 219.0 42.9 14.9 0.0
药理试验4 急性毒性
使用SD系雄性鼠（5周龄），检验经口投给本发明的5-氨基-N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（化合物No.18）时的急性毒性。其结果，LD50是约600mg/Kg。
实验例1 5-氨基-N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的制造
用DMF（1ml）溶解2-硝酰基乙胺·盐酸盐（140mg、0.98mmol），然后添加甲醇钠（42mg、0.78mmol）。接着添加实验例1的实施例6中记载的5-氨基-N-氰基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（100mg、0.49mmol）的甲醇溶液（1ml），在室温搅拌3小时。反应结束后，减压干固反应液。残渣悬浮于水中，用氯仿抽提。氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩。利用以甲醇和氯仿的混合溶剂作为洗提溶剂的硅胶柱色谱法提纯所得的残渣，得到作为无色结晶的标题化合物（77mg、收率63%）。
熔点121℃
IR（KBr disk）cm-13230，2160，1640，1570，1280
1H-NMR（90MHz，CD3OD）：δ（ppm）8.12（1H，d，J＝2.6Hz），7.93（1H，d，J＝2.0Hz），7.24（1H，dd，J＝2.6，2.0Hz），4.74（2H，t，J＝5.2Hz），3.80（1H，t，J＝5.2Hz）
MS 250（M+），188[（M-ONO2）+]
实施例2 N-氰基-5-乙氨基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的制造
用DMF（1ml）溶解2-硝酰基乙胺·盐酸盐（659mg、4.62mmol），然后添加甲醇钠（227mg、4.20mmol）。接着添加实验例1的实施例10中记载的N-氰基-5-乙氨基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（195mg、0.84mmol）的DMF（1ml）溶液，在室温搅拌3小时。反应结束后，减压干固反应液。残渣悬浮于水中，用氯仿抽提。氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩。利用以甲醇和氯仿的混合溶剂作为洗提溶剂的硅胶柱色谱法提纯所得的残渣，得到作为无色结晶的标题化合物（208mg、收率89%）。
熔点100℃
IR（KBr disk）cm-13230，2170，1630，1550，1275
1H-NMR（90MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.28（1H，brt），7.97（1H，d，J＝2.6Hz），7.89（1H，d，J＝1.8Hz），7.12（1H，dd，J＝2.6，1.8Hz），4.70（2H，t，J＝5.0Hz），3.83（2H，m），3.15（2H，m），1.25（3H，t，J＝7.2Hz）
MS 278（M+），216[（M-ONO2）+]
实施例3 6-氨基-N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的制造
用DMF（3.5ml）溶解2-硝酰基乙胺·盐酸盐（1.36mg、9.54mmol），然后添加甲醇钠（470mg、8.7mmol）。接着添加实验例1的实施例5中记载的N-氰基-6-氨基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（355mg、1.74mmol）的DMF（2ml）溶液，在室温搅拌3小时。反应结束后，减压干固反应液。残渣悬浮于水中，用氯仿抽提。氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩。利用以甲醇和氯仿的混合溶剂作为洗提溶剂的硅胶柱色谱法提纯所得的残渣，得到作为无色结晶的标题化合物（284mg、收率74%）。
熔点108℃
IR（KBr disk）cm-13230，2160，1640，1570，1280
1H-NMR（90MHz，DMSO）：δ（ppm）9.00（1H，brt），8.23（1H，dd，J＝2.42，0.66Hz），7.66（1H，dd，J＝8.79，2.64Hz），6.72（2H，brs），6.50（1H，dd，J＝8.79，0.88Hz），4.70（2H，t，J＝5.27Hz），3.68（2H，m）
MS 250（M+），188[（M-ONO2）+]
实施例4 N-氰基-6-二乙氨基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的制造
a）6-二乙氨基-3-氰基吡啶的制备
向6-氯-3-氰基吡啶（500mg、3.60mmol）的DMF（5ml）溶液中加入碳酸钾（500mg、3.62mmol）、碘化钠（催化量）和二乙胺（400mg、5.50mmol），在120℃搅拌3小时。向反应液中加入水（5ml）后，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠脱水，然后减压浓缩。利用以乙酸乙酯和己烷的混合溶剂作为洗提溶剂的硅胶柱法提纯所得的残渣，得到作为白色结晶的6-乙氨基-3-氰基吡啶（560mg、收率89%）。
IR（neat）cm-12200、1600、1540、1510
1H-NMR（90MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.39（1H，d，J＝2.44Hz），7.55（1H，dd，J＝9.16，2.44Hz），6.45（1H，d，J＝9.16Hz），3.55（4H，q，J＝7.30Hz），1.20（6H，t，J＝7.30Hz）
b）在0-5℃，向6-二乙氧基-3-氰基吡啶（460mg、2.63mmol）的1-丙醇（15ml）溶液中吹入氯化氢气体30分钟后，将反应容器密封并在0℃搅拌1夜。反应后，减压浓缩反应液，将所得的残渣加入浓碳酸钠溶液中。确认溶液的PH是碱性（PH＝9以上）后，用氯仿进行萃取。氯仿层用无水硫酸钠脱水后，利用减压浓缩得到的油状的粗6-二乙氨基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯。将所得的油溶解在乙腈（2ml）中，加入磷酸二氢钠二水合物（1.62mg、10.4mmol）、磷酸二钠（370mg、2.61mmol）和氨基氰（220mg、5.24mmol）的水（5ml）溶液，在室温搅拌1夜。反应后，用氯仿萃取。氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩。利用以甲醇和氯仿的混合溶剂作为洗提溶剂的硅胶柱色谱法提纯所得的残渣，得到作为无色油的N-氰基-6-乙氨基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（630mg、收率92%）。
IR（neat）cm-12960，2180，1580，1280
1H-NMR（500MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.90（1H，d，J＝2.45Hz），8.38（1H，d，J＝2.44Hz），7.55（1H，dd，J＝9.16，2.44Hz），6.47（1H，d，J＝9.16Hz），4.31（2H，t，J＝6.41Hz），3.59（4H，q，J＝7.33Hz），1.81（2H，m），1.22（6H，t，J＝7.33Hz），1.03（3H，t，J＝7.21Hz）
c）用甲醇（3ml）溶解2-硝酰基乙胺·盐酸盐（314mg、2.20mmol），加入甲醇钠（115mg、2.13mmol）。接着添加N-氰基-6-二乙氨基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（370mg、1.42mmol）的甲醇（2ml）溶液，在室温搅拌5小时。反应结束后，反应液减压干固。残渣悬浮于水中，用乙酸乙酯抽提。乙酸乙酯层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠脱水，然后减压浓缩。利用以乙酸乙酯和己烷的混合溶剂作为洗提溶剂的硅胶柱色谱法提纯所得的残渣，得到作为无色结晶的标题化合物（183mg、收率42%）。
熔点119℃
IR（KBr disk）cm-12160，1635，1565，1275
1H-NMR（500MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.41（1H，d，J＝3.05Hz），7.84（1H，dd，J＝9.15，3.05Hz），8.52（1H，brs），6.50（1H，d，J＝9.15Hz），4.68（2H，t，J＝5.18Hz），3.82（2H，m），3.55（4H，q，J＝7.32Hz），1.20（6H，t，J＝7.33Hz）
MS 306（M+），244[（M-ONO2）+]
实施例5 5-正丁氨基-N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的制造
用DMF（2ml）溶解2-硝酰基乙胺·盐酸盐（443mg、3.11mmol），然后添加甲醇钠（153mg、2.83mmol）。接着添加实验例1的实施例12中记载的5-正丁氨基-N-氰基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（147mg、0.56mmol）的DMF（1ml）溶液，在室温搅拌4小时。反应结束后，反应液减压干固。残渣悬浮于水中，用氯仿抽提。氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩。利用以甲醇和氯仿的混合溶剂作为洗提溶剂的硅胶柱色谱法提纯所得的残渣，得到作为无色结晶的标题化合物（145mg、收率83%）。
熔点103.5℃
IR（KBr disk）cm-13230，2170，1630，1580，1555，1275
1H-NMR（90MHz，CDCl3）：δ（ppm）8.01（1H，d，J＝2.6Hz），7.91（1H，d，J＝1.8Hz），7.80（1H，brt），7.15（1H，dd，J＝2.6，1.8Hz），4.71（2H，t，J＝5.1Hz），4.49（1H，brs），3.82（2H，m），3.12（2H，m），1.8-1.2（4H，m），0.96（3H，t，J＝6.36）
MS 306（M+），244[（M-ONO2）+]
实施例6 N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-5-异丙氨基-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的制造
用DMF（1ml）溶解2-硝酰基乙胺·盐酸盐（95mg、0.67mmol），然后添加甲醇钠（25mg、0.46mmol）。接着添加实验例1的实验例11中记载的N-氰基-5-异丙基氨基-3-吡啶羧基亚氨酸丙酯（80mg、0.33mmol）的DMF（1ml）溶液，在室温搅拌3小时。反应结束后，反应液减压干固。残渣悬浮于水中，用氯仿抽提。氯仿层用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩。利用甲醇和氯仿的混合溶剂作为洗提溶剂的硅胶柱色谱法提纯所得的残渣，得到作为无色结晶的标题化合物（26mg、收率27%）。
熔点123℃
IR（KBr disk）cm-13220、2200、1640、1590、1560、1280、1000、845
1H-NMR（90MHz，CDCl3-CD3OD）：δ（ppm）7.97（1H，d，J＝3.9Hz），7.86（1H，d，J＝1.5Hz），7.03（1H，dd，J＝3.9，1.5Hz），4.62（2H，t，J＝5.0Hz），3.80（1H，m），3.57（1H，m），1.25（6H，d，J＝6.4Hz）
MS 292（M+），230[（M-ONO2）+]
实施例7 5-乙酰氨基-N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺的制造
向5-氨基-N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（参照实施例1）（105mg、0.42mmol）的吡啶（1ml）溶液中加入乙酰氯（45μl，0.63mmol），在室温下反应1小时。反应后，加入冷碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯层用食盐水洗涤，用无水硫酸钠脱水后，减压浓缩。利用以甲醇和氯仿的混合溶剂作为洗提溶剂的硅胶柱色谱法提纯所得的残渣，得到作为吸湿性粉体的5-乙酰氨基-N-氰基-N′-（2-硝酰基乙基）-3-吡啶羧基亚氨酸酰胺（116mg、收率95%）。
IR（KBr disk）cm-12180，1680，1635，1565，1450，1280
1H-NMR（90MHz，CDCl3）：δ（ppm）10.5（1H，brs），9.54（1H，brt），8.90（1H，d，J＝2.4Hz），8.42（1H，d，J＝2.0Hz），8.27（1H，dd，J＝2.4，2.0Hz），4.75（2H，t，J＝5.1Hz），3.73（2H，m），3.31（3H，s）
MS 292（M+），230[（M-ONO2）+]
实施例8（片剂/1片中）
本发明的化合物 2mg
乳糖 75.5mg
玉米淀粉 18mg
滑石 4mg
硬脂酸镁 0.5mg
合计 100mg
混合上述成分，加压制成片剂。
实施例9（胶囊剂/1个胶囊中）
本发明的化合物 5mg
乳糖 94mg
硬脂酸镁 1mg
合计 100mg
混合上述成分，填充到胶囊中制成胶囊剂。
实施例10（注射剂/1管形瓶中）
本发明的化合物 1mg
麦芽糖 25mg
注射用蒸馏水 适量
合计 2ml
混合上述成分，过滤后装入管形瓶中。用常规方法冻干后密封而形成注射剂。
附图的简单说明
图1是为了制造（Ⅰ）式所示的本发明化合物的反应路线图，即表示（Ⅰ）式中的R1是烷基、羟烷基、羧基、氨基、烷氨基、二烷氨基、芳烷基氨基或羟基时，R2是氢原子，或者R1是氢原子时，R2是氨基或二烷基氨基的N-氰基-吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物及其酸加成盐的制造。
图2是为了制造（Ⅰ）式所示的本发明化合物的反应路线图，即表示（Ⅰ）式的R1是酰氨基、烷基磺酰氨基或双烷基磺酰氨基的N-氰基-吡啶羧基亚氨酸酰胺化合物及其酸加成盐的制造。