一种新的青蒿素物理形态及其在药物制备中的应用 本发明涉及一种新的青蒿素物理形态及其在药物制备中的应用。更具体地说，本发明涉及青蒿素三斜晶型晶体的制备方法，及其在制备一种可提高患者体内生物利用度的固体口服药物剂型中的应用。
制成以固体剂型给药药物的关键常在于原料物质的纯度及其最终浓度的标定。另外，固体药物的物理化学性质也是值得引起重视的重要因素，因为其任何的变化都将影响它的吸收和治疗功效。
作为从植物青蒿annua中分离得出的抗疟药，青蒿素是一种具有内过氧化功能的倍半萜烯内酯，目前已被推荐用于治疗恶性疟原虫引起地多重抗药急性疟疾。青蒿素作为一种有效抗疟药的主要缺点是它的高复发率。在以往的报道中青蒿素不溶于水和油，但它溶于大多数的非质子传递有机溶剂(Klayman，1985)，其绝对构型是由中国科学家利用X-射线衍射分析法，将50％含水乙醇中重结晶得到的晶体进行测定而得到的，其单元晶胞是正交晶型的p21212空间基团(Qinghaosu ResearchGroup，1980)。迄今为止，虽然青蒿素作为药物可从不同溶剂中重结晶获得，但它的其它多晶型构型或晶体还未见报道。现在我们发现了从环己烷中重结晶得到的青蒿素可以三斜晶型晶体存在(Chan etal.，1996)。作为不同的多晶型构型或晶体，青蒿素表现出包括溶解度在内的不同的物理化学性质。由于青蒿素其它化合物在PH小于7时水溶解度低于1％或1mg ml-1，导致生物利用度极大的不同或问题(Kaplan，1972；Halebian，1975)，从而造成了治疗功效的极大损失。青蒿素的低水溶性及其短半衰期和首过代谢导致了它的高复发率。因此重要的是选择适当的具有良好水溶性的青蒿素晶型来制备口服药物。
在说本明书中，我们将会有时参见下述杂志文献，并附明文献作者：
引用文献
Beurskens，P.T(1984)Technical Report 1984/1 Crystallography
Laboratory，Toernooiveld，6525 ed.Nijmegan，Netherlands.
Brossi，A.，Venugopalan，B.，Dominguez Gerpe，L.，Yeh，H.J.C.，
Flippen-Anderson，J.L.，Buchs，P.，Luo，X.D.，Milhous，W.and
Peters，W.(1988)J.Med.Chem.31，645-650.
Chan，K.L.，Yuen，K.H.，Takayanagi，H.，Janadasa，S.，Peh，K.K.and Lim，L.Y.(1997)Submitted to Phytochemistry.
Cromer，D.T.(1974)International Tables for X-rayCrystallography，Vol.IV，The Kynoch press，Birmingham，England，Table 2.3.1.
Cromer，D.T.and Waber，J.T.(1974)International Tables forX-ray Crystallography，Vol.IV，The Kynoch Press，Birmingham，England，Table
2.2A.
Gilmore，C.J.(1984)J.Appl.Cryst.17，42-46
Halebian，J.K.(1975)J.Pharm.Sci.64，1269-1288.
Ibers，J.A.and Hamilton，W.C.(1964)Acta Crystallogr.17，781.
Kaplan，S.A.(1972)Drug Metab.Rev.1，15.
Klayman，D.L.(1985)Science 228，1049-1055.
Peh，K.K.and Yuen，K.H.(1996)Int.J.Pharm.139，95-103.
Qinghaosu Research Group(1980)Scientia Sinica 23，380-396.
TEXSAN(1985)TEXRAY Structure Analysis Package，Molecular
Structure Corporation.
Titulaer，H.A.C.，Zuidema，J.，Kager，P.A.，Wetsteyn，J.C.F.M.，Lugt，C.H.B.and Merkus，F.W.H.M.(1990)J.Pharm.Pharmacol.，43，810-813.
Wagner，J.G.(1975)Bioavailability.In Fundamentals ofClinical Pharmacokinetics，Illinois：Drug IntelligencePublications，p.337-358.
Yuen，K.H.，Peh，K.k.，Quah，Y.L.and Chan，K.L.(1997)
Drug Develop.Indust.Pharm.23(2)，231-234.
Zhao，S.S.and Zeng，M.Y.(1985).Planta Medica 51，233-237.
根据本发明的第一个方面，本发明提供了一种新的青蒿素物理形态，即三斜晶型青蒿素晶体。
本发明的三斜晶型青蒿素晶体与其正交晶型相比具有更好的水溶性，更快的溶解速率，并且更高的生物利用度。
本发明的第三个方面是具有良好生物利用度的三斜晶型青蒿素晶体在药物制备中的应用。
最后，具有较好生物利用度的三斜晶型青蒿素晶体作为抗疟药使用，将提高治疗功效及可能会减低复发率。
用正己烷或石油醚(40-60℃)萃取annua青蒿叶子的干燥粉末，接着按照以往Klayman(1985)描述的方法，利用连续柱色谱分离萃取液得到青蒿素。
按照本发明，将25g青蒿素完全溶解在热的环己烷(700ml)中，并将澄清热溶液缓慢地冷却至室温，此时三斜晶型晶体逐渐析出。晶体放置过夜使其充分结晶，然后减压过滤并用冷环己烷洗涤。从环己烷中重复重结晶两次直至得到确定熔点为156-157℃的晶体，产率为93.5％。
由此得到的三斜晶型晶体按照Chan等(1996)描述的方法，通过显微镜检验，密度测定，差示扫描量热法(dsc)，红外线分析法(ir)，和结晶学X-射线衍射法鉴定，并且与正交晶型晶体对比。
图1示出，三斜晶型青蒿素(A)与正交晶型青蒿素(B)的微观观察，放大率为10×40，两种青蒿素样品的显微镜检测表明显著的形态差异。三斜晶型晶体(A)薄而透明，正交晶型晶体(B)却密而厚。
青蒿素晶体在氮气保护的复式比重瓶中精确称重，并相对体积计算而算得密度结果如表1所示。正交晶型晶体的统计学平均密度明显高于三斜晶型晶体的平均密度，前者为1.300±0.001SD g cm-3，后者为1.293±0.003SD g cm-3。
图2为三斜晶型(A)和正交晶型(B)两种晶体形态标准差示扫描量热法的差示热分析图，表明它们是两种类型的多晶型。三斜晶型(A)只产生一个Tm为155.00±0.03℃的熔吸热点，而正交晶型(B)有两个熔吸热点，其Tm为154.88±0.2℃(表2)。两种样品的△H值表明它们具有相同的结晶度。差示热分析图熔吸热点后的下斜坡度表示青蒿素熔融降解。分析时仪器处于标准化，扫描速度为10.00度/分，所用三斜晶型(A)晶体重量为2.00毫克，正交晶型(B)晶体重量为2.30毫克。
图3表示三斜晶型(A)和正交晶型(B)两种青蒿素晶体样品的红外光谱。正如从晶体结构存在的差异可以预计的那样，在2845-3000cm-1和1300-1500cm-1区域，三斜晶型晶体(A)的红外光谱显示出明显比正交晶型晶体(B)更宽的吸收，这分别是由于饱和CH原子的伸缩和弯曲振动造成的。在1738cm-1，三斜晶型(A)内酯的C＝0的伸缩振动使其表现出比正交晶型(B)内酯中更宽的吸收。
图4为沿Z轴线观察的三斜晶型(A)和正交晶型(B)青蒿素分子排列的立体视图。
图4用X-射线衍射分析法表明了三斜晶型晶体(A)与正交晶型晶体(B)在形态学上的差异。前者在一个单元晶胞中具有四个独立的紧密排列的分子，而后者所含的相同数目的分子在排列上进一步彼此离散。一个P1的三斜晶型空间基团相应的晶胞常数是a＝9.891(4)A；b＝15.343(2)A；c＝9.881(2)A；v＝1458(1)A3；α＝90.92(1)°；β＝102.99(2)°和γ＝93.28(2)°。对于其它晶型来说，正交晶型晶体的P21212空间基团相应的大小是a＝9.450(3)A；b＝24.090(3)A；c＝6.364(2)A；v＝1449(1)A3，这一点与以往的公开文献中所描述的相同(Qinghaosu Research Group，1980)
由于z＝4和F.W.＝282.34，三斜晶型的计算密度为1.286g cm-3，而正交晶型的密度则较高，为1.294g cm-1。将该两种计算密度与用复式比重瓶方法测定的两种晶体的密度进行比较，发现它们的结果几乎相同(表1)。先前报道的正交晶型晶体的计算和测定的密度分别为1.296gcm-3和1.30g cm-3(Qinghaosu Research Group，1980)，其与现在我们的结果也是一致的。
图5为沿Z轴观察的三斜晶型(A)和正交晶型(B)晶体的ORTEP视图。图6为青蒿素的原子标示。图5中两种晶体分子构象的对比表明它们几乎相同。三斜晶型(A)的键长与正交晶型(B)的几乎相似(表3-4)。然而，两种多晶型的键角和扭角不同，在表5-7中以asterik值表示。
我们的研究还表明所选的三斜晶型青蒿素具有比正交晶型青蒿素更好的水溶性。在研究中，精确称重30mg青蒿素晶体，加入100ml的水中，并且在24℃下声处理6小时。带有还原电化学检测的高效液相色谱(hplc)来分析溶液中的药物浓度。所得结果表明，青蒿素的三斜晶型晶体(44.3μg ml-1±1.2SD)比正交晶型晶体(17.7μg ml-1±1.0SD)在水中具有更高的溶解度。
青蒿素晶体的体外溶解曲线是在非沉降条件下，由USP溶解实验仪(AT7型，Sotax CH-4008，Basel，Switzerland)的轮式搅拌法测定的。用实验室用筛(Endecotts Ltd.，England)将青蒿素晶体过筛得到大小在300-710μm的颗粒。若颗粒小于250μm，晶体会附聚并在溶解介质中难以分散，导致溶解速率的降低。实验中，在轮式搅拌速率为100rpm，温度为24℃(室温)的条件下，将150mg青蒿素晶体溶解于900ml蒸馏水的溶剂介质中。24小时中在不同的间隔用自动组分收集器(Model CY7-50，Sotax，Switzerland)取出1ml样品。使用处于还原模式的电化学检测器，通过hplc测出适当稀释了的药物的浓度。每项检测重复四次，得到青蒿素在溶液中的平均浓度值，将浓度值相对时间计算并划出曲线。
图7表示出三斜晶型(A)和正交晶型(B)两种形态的青蒿素晶体在非沉降条件下的体外溶解曲线。三斜晶型曲线(A)显示出很快的溶解速率，即可在3小时内达到饱和浓度，而另一种曲线(B)在10-14小时后才达到饱和。而且，前者(A)的饱和浓度显著地高于正交晶型(B)的，它们分别是48.0和18.0μg ml-1。
将青蒿素三斜晶型晶体与适当的药用载体混合，制成不同的药物剂型。本发明的一个优选实施例是三斜晶型青蒿素片剂的制备。青蒿素片剂的组成如下： 青蒿素(三斜晶型) 250mg 乳糖一水化合物 45mg 微晶纤维素 45mg 交联聚乙烯吡咯烷酮 19mg 硬脂酸镁 0.25％
首先将微晶纤维素和交联聚乙烯吡咯烷酮在行星式拌和机中混合，然后加入乳糖和青蒿素。混合5分钟。将足量的蒸馏水加入到粉末混合物中并颗粒化。湿颗粒用孔径1.00mm的滤筛筛分，再在60℃下干燥1小时。再用710μm孔径滤筛筛分颗粒。在进行压片之前，将硬脂酸镁作为润滑剂加入至其中。用直径8mm平面冲压机的旋转制片机来压制平均硬度为7kg(Erweka片剂硬度测试仪)和厚度为3.8mm的片剂。
青蒿素晶体的体外溶解度研究通过USP23溶解测试仪的轮式搅拌法来完成。测试是在温度为37.0±0.5℃转速100rpm的900ml蒸馏水中进行的。2ml样品按预设的时间间隔在3，6，10，15，20，25，30分钟，1，2，3，4，12小时取出。药物浓度用Zhao和Zeng(1985)论述的反相hplc法检测。流动相是含50％甲醇的0.01M正磷酸氢二钠缓冲液，其PH用冰醋酸调节至6.5。流速为0.8ml min-1，用UV检测仪在260nm下检测。在分析前，精确量取1ml样品于玻璃试管中并用4ml蒸馏水稀释。然后将1ml溶液转移至反应瓶中，并向其中加入200μl的10％NaOH，涡旋混合1分钟后，在加热器中，在45℃下加热30分钟。再加入150ml冰醋酸后涡旋混合。取100μl样品注射入色谱柱。三斜晶型片剂的溶解曲线如表8所示。
通过青蒿素三斜晶型和正交晶型在体内生物利用度评估值的对比来测定药物在人体内的生物利用度。实验中，将筛分成300-710μ大小的青蒿素晶体颗粒的口服悬浮水溶液给药予8名健康男性志愿者，他们的年龄在30-43岁(平均35.6岁±4.4SD)，体重50-71kg(平均62.3kg±7.5SD)，并且签订了书面协议书，实验协议由Joint Review Boardon Bioavailability Studies of the Penang General Hospital and theSchool of Pharmaceutical Sciences，Univercity Sains Malaysia证明的。依据交叉随机程序设计，两期中间隔1周。志愿者随机分为每组四人的两组，并且按照下列时间表给药： 组 第一周 第二周 1 正交晶型和柳氮磺胺吡啶 三斜晶型 2 三斜晶型和柳氮磺胺吡啶 正交晶型
每个志愿者给予的青蒿素口服单剂量为10mgkg-1，即以含150ml水的悬浮水溶液的形式，在过夜(12小时)的禁食后给药。悬浮液的盲囊口传导时间是由第一组和第二组两组志愿者在第一周同时服用的1g柳氮磺胺吡啶所决定的(Peh and Yuen，1996)。在服药后至少两小时内不能饮食。所用志愿者在实验中步行运动，禁止剧烈运动和饮用酒精饮料。经插入的前臂静脉内导管，在0(服药前)，和服药后的0.25，0.5，1，2，3，4，6，8，10，14，18和24小时从每个志愿者身上取8ml体积血样。所用血样收集在肝素化的真空容器中(Becton，Dickinson，NewJersey，USA)，在转速3500rpm下离心分离1分钟。血浆样品冷冻储存直至分析。柳氮磺胺吡啶在大肠群中水解成磺胺吡啶。在血中吸收的磺胺吡啶将作为盲囊到达的指示物。根据Yuan等(1997)所用的hplc方法测定血清磺胺吡啶水平。
使用hplc-ecd技术分析血浆样品中的青蒿素水平。在用hplc-ecd分析前，样品制备如下：1.00ml等份的血浆样品中精确加入100μl的200ng ml-1二氢青蒿素(内标)的乙腈溶液。在试管旋转机(Model34528 Sinjders)上用3×3ml甲基叔丁基醚(Merck，USA)旋转萃取混合物30分钟，然后再在转速3500rpm下离心分离15分钟。在45℃下用氮气干燥合并的萃取液，再加100μl流动相，然后在转速12800rpm下离心分离10分钟。上清液收集进入0.1ml的反应管中(PierceReactivialTM，USA)，在用由去离子蒸馏水饱和的氩气吹扫洗涤10分钟后注射进样。
下面将详细描述样品制备后，检测青蒿素的具体分析方法。将Jasco Pu-960溶液输送系统全部用不锈钢接管连接于一个数字式电化学电流检测器(DECADE)。后者包括一个由脉冲气流调节器调节的高度屏蔽箱室，一个带有20μl样品环管的Rheodyne 7161进样器，一个与一内径为250×4.6mm的Supelcosil LC-CN5μ柱相连的可再填充Upchurch防护色谱柱，一个装有玻璃碳工作电极和用KCl饱和的Ag/AgCl参比电极(R&M Marketing，Essex，UK)的流动池。流动相由PH调至5.5的75％0.10M乙酸铵(Merk，Darmstadt)的乙腈缓冲液组成，流速保持在1.5ml min-1。在整个分析过程中，在连续通入氩气的同时，通过先在50℃加热2小时，然后保持在30℃以将流动相加热来进行剧烈脱氧。检测器在处于应用电位为-10V，灵敏度为10nA fs.的还原模式下进行操作。信号经0.1s滤出后达到记录输出端。所有青蒿素(Aldrich Chemical Co..USA)的标准储备液(100μg ml)，和二氢青蒿素(按照Brossi等人所述的方法(1984)合成，其纯度与University of Sydney的Dr.Simone C.Vonwiller所提供的标准样品相当)在hplc级纯乙腈中处理(Labscan limited，Ireland)。
通过测定药物与内标物的峰高比值来测量青蒿素含量。每天的分析测试都要作标准曲线，标准曲线绘制是通过将不同浓度的青蒿素和常量内标物(200ng ml-1)加入人的空白血浆中来完成。青蒿素浓度范围在12.5-800ng ml-1。当天的准确度和精密度是将一天内每个浓度反复测量6次。同时相邻两天的数值由连续6天的研究测定。准确度是表示为所测平均浓度相对确定值的百分比，精密度用变异系数(CV)表示。萃取后所得峰高值相对于等量未萃取的药物峰高值的百分比是萃取过程的回收率。
药物动力学分析按如下方法进行：血浆药物峰浓度(Cmax)及血浆药物浓度相对于时间作曲线，曲线下(AUC0-∞)的总面积在分析前转换成对数。采用线性trapozoidal规则计算AUC0-∞值并且外推至无限。Cmax和AUC0-∞值采用Wagner(1975)所述的方差分析法(ANOVA)进行统计地计算。Tmax值根据Wilcoxon signed-rank实验方法与对照样品进行比较。
在表9中给出了在当天和相邻两天间准确度和精密度的检测方法，同时二氢青蒿素和青蒿素的回收率分别如表10和11所示。另外，测试方法的检测限是信噪比在5∶1条件下为12.5ng ml-1。
三斜晶型(A)和正交晶型(B)两种晶体形态的平均血浆浓度水平曲线如图8所示，同时血浆中的各个数据点在表12中列出。三斜晶型(A)的平均血浆浓度曲线显著高于正交晶型(B)的。另外，前者的峰浓度平均为580.89ng ml-1，是后者的3.35倍，后者只近似为173.65ngml-1。
按照Peh和Yuen(1996)的方法，根据所测磺胺吡啶的血浆水平的数据，估算混悬液盲囊口传导时间(达到结肠的时间)。获得的平均值为2.7+0.6小时，它指示出制剂到达结肠的开始。图9表示三斜晶型(A)和正交晶型(B)两种制剂的百分吸收值相对时间的曲线。有虚线表示悬浮液到达盲囊。它表明此时间点后曲线吸收值不再有增加。由此可将青蒿素在结肠中的吸收忽略不计。正交晶型晶体(B)观察到的吸收度低，主要是由于到达结肠前其药物溶解吸收较少。
药物动力学参数的各个数值Cmax，Tmax，AUC0-∞都如表13所示。Tmax和AUC0-∞分别表示吸收速率和吸收数值，而Cmax与两者都相关。两种晶体形态的Tmax值没有统计学上的显著性差异，但Cmax和AUC0-∞的对数值具有统计学上的显著性，表明两种晶体形态吸收速率相似但吸收度不同。90％的三斜晶型形态的AUC0-∞对数转换值相对于正交晶型形态的置信区间为3.1-3.7。所以，青蒿素三斜晶型晶体吸收量是正交晶型的3.4倍或提高了340％。
在表14中给出了两种晶体构型的药物动力学参数数值Ke，t1/2，Vd。两种晶体的所有三种参数数值都很相似并且没有统计学上的显著性差异。这些数值与现有文献(Titulaer等，1990)中所述的相类似。
表1自环已烷(Artecyclohex)和50％含水乙醇(Artaquenol)中重结晶的青蒿素晶体的密度值(g cm-3) No of measurements(n) Artecyclohex Artaquenol 1 2 3 4 5 - 平均值 方差 1.290 1.289 1.295 1.295 1.296 1.293* 0.003 1.299 1.301 1.300 1.301 1.299 1.300* 0.001*统计学上的显著性差异 (P＝0.0018，P＜0.01)
表2Artecyclohex和Artaquenol晶体熔融的主要吸热温度峰(Tm)和总焓(ΔH) 青蒿素晶体 Tm*(℃) ΔH*(Jg-1) Artecyclohex Artaquenol 155.00±0.03 154.88±0.20 80.76±2.37 82.43±4.57*平均值±SD(n＝3)
表3Artecyclohex和Artaquenol的非氢原子间的分子内间距〔A±(SD)〕 原子 原子 Artecyclohex Artaquenol O1 O1 O2 O3 O3 O4 O5 O5 C1 C2 C2 C3 C3 C4 C4 C6 C6 C7 C8 C9 C10 C10 C11 C1 C5 C1 O4 C6 C4 C5 C6 C2 C3 C13 C4 C12 C5 C9 C7 C14 C8 C9 C10 C11 C15 C12 1.34(3) 1.42(3) 1.21(3) 1.48(2) 1.41(3) 1.44(3) 1.41(3) 1.49(3) 1.55(3) 1.48(3) 1.57(3) 1.47(3) 1.52(4) 1.52(3) 1.57(3) 1.60(4) 1.47(3) 1.47(4) 1.59(4) 1.52(3) 1.51(4) 1.55(3) 1.55(4) 1.33(5) 1.47(4) 1.17(5) 1.47(3) 1.42(5) 1.45(4) 1.38(4) 1.43(4) 1.57(5) 1.56(4) 1.51(4) 1.47(4) 1.50(5) 1.63(4) 1.55(4) 1.57(5) 1.45(4) 1.56(4) 1.52(4) 1.58(4) 1.54(5) 1 51(5) 1.51(5)
表4Artecyclohex和Artaquenol的含氢原子间的分子内间距 原子 原子 Artecyclohex Artaquenol C2 C3 C5 C7 C7 C8 C8 C9 C10 C11 C11 C12 C12 C13 C13 C13 C14 C14 C14 C15 C15 C15 H1 H2 H3 H4 H5 H6 H7 H8 H9 H10 H11 H12 H13 H14 H15 H16 H17 H18 H19 H20 H21 H22 1.041 1.024 0.974 1.023 0.912 0.973 0.963 0.968 0.958 0.941 0.998 0.955 0.981 0.992 1.009 0.977 0.961 0.933 0.967 0.903 1.053 0.957 0.921 0.977 1.016 1.005 0.921 1.033 1.004 0.978 0.987 0.922 1.067 0.955 1.068 0.999 1.031 0.923 1.029 0.963 1.003 0.940 1.016 0.980
表5 Artecyclohex和Artaquenol的非氢原子间的分子内键角〔°±(SD)〕 原子 原子 原子Artecyclohex Artaquenol O3 O3 O3 O5 O5 C7 C6 C7 C8 C8 C10 C9 C9 C11 C10 C11 C12 C12 C4 O4 O4 04 C9 C9 C3 O5 O5 O1 C3 C3 C1 O1 O1 O2 C6 C6 C6 C6 C6 C6 C7 C8 C9 C9 C9 C10 C10 C10 C11 C12 C3 C3 C3 C4 C4 C4 C4 C4 C4 C5 C5 C5 C2 C2 C2 C1 C1 C1 O5 C7 C14 C7 C14 C14 C8 C9 C10 C4 C4 C11 C15 C15 C12 C3 C4 C2 C2 C9 C3 C5 C3 C5 C5 O1 C4 C4 C1 C13 C13 O2 C2 C2 106(2) 110(2) 107(2) 106(2) 107(2) 120(3) 119(3) 114(2) 109(2) 112(2) 112(2) 110 (2) 111(2) 112(3) 114(3) 113(3) 112(2) 111(3) 112(3) 105(2) 104(2) 113(2) 112(2) 109(2) 113(2) 104(2) 116(2) 113(2) 112(2) 116(3) 113(3) 122(3) 118(3) 119(3) 107(3) 115(3)* 105(4) 108(4) 112(3)* 110(4)* 112(3)* 116(3) 110(4) 115(4) 110(4) 117(3)* 109(4) 109(4) 111(3) 114(4) 116(4) 117(4)* 111(4) 106(3) 110(4)* 111(3) 115(4) 108(4) 107(3)* 111(4)* 109(3)* 110(4) 109(3) 117(4) 108(4)* 117(6) 118(4) 125(5)**Artaquenol型和Artecyclohex型不同的值
表6Artecyclohex和Artaquenol含氢原子间的分子内键角(°) 原子 原子 原子 Artecyclohex Artaquenol C6 C6 C8 C8 C6 C7 C7 C9 C9 H6 C8 C10 C4 C9 C11 C15 C10 C10 C12 C12 H10 C11 C11 C3 H12 C12 C4 C2 O5 O1 C4 C3 C1 C13 C2 C2 H14 H14 H15 C10 C10 C10 H20 H20 H21 C6 C6 C6 H17 H17 H18 C7 C7 C7 C7 C7 C8 C8 C8 C8 C8 C9 C9 C9 C10 C10 C10 C11 C11 C11 C11 C11 c12 C12 C12 C12 C12 C3 C3 C3 C5 C5 C5 C2 C2 C2 C13 C13 C13 C13 C13 C13 C15 C15 C15 C15 C15 C15 C14 C14 C14 C14 C14 C14 H4 H5 H4 H5 H5 H6 H7 H6 H7 H7 H8 H8 H8 H9 H9 H9 H10 H11 H10 H11 H11 H12 H13 H12 H13 H13 H2 H2 H2 H3 H3 H3 H1 H1 H1 H14 H15 H16 H15 H16 H16 H20 H21 H22 H21 H22 H22 H17 H18 H19 H18 H19 H19 111.69 107.68 109.62 101.13 106.46 109.62 104 72 111.78 110.07 106.52 108.61 104.83 109.99 109.66 107.66 107.11 107 98 112.83 105.77 109.21 106.24 111.06 109.40 110.57 106.39 -106.49 104.82 109.15 106.86 105.46 109.30 108.81 100.42 114.15 99.48 121.98 110.77 113.41 102.73 103.94 101.69 116.51 107.70 112.22 104.71 113.06 100.96 111.48 106.79 111.81 107.13 109.97 109.49 111.20 108.40 108.89 109.22* 108.40 110.86 112.17* 107.08* 110.28 99.21* 110.33 97.54* 112.07 113.75 101.16 106.31 119.32* 105.17* 114.18* 102.07* 102.26* 105.41* 106.46* 118.32* 110.30* 100.01* 89.98* 110.89 116.65* 102.89 116.65* 107.26 99.11 117.91 106.10* 113.50* 108.02 120.70* 99.64 107.61 104.97 114.35 114.90* 111.95 104.87 107.74* 102.00 111.36 118.07* 118.73* 104.92 99.92* 102.44**Artaquenol和Artecyclohex有区别的值
表7Artecyclohex和Artaquenol的扭曲角或构型角 atom1 atom2 atom3 atom4 Artecyclohex Artaquenol O4 O4 O4 O4 O4 O4 O4 O4 O4 O3 O3 O3 O3 O3 O5 O5 O5 O5 O1 O1 O1 O1 O1 O2 O2 O2 C6 C6 C6 C7 C7 C7 C8 C8 C8 C8 C8 C9 C9 C9 C10 C10 C10 C11 C11 C11 C12 C12 C12 C12 C4 C4 C4 C4 C5 C5 C5 O3 O3 O3 C4 C4 C4 C4 C4 C4 O4 O4 O4 C6 C6 C6 C5 C5 C5 C5 C5 C5 C1 C1 C1 C1 C1 O3 O5 C7 C6 C8 C8 C7 C9 C9 C9 C9 C10 C4 C4 C9 C9 C11 C10 C12 C12 C11 C3 C3 C3 C9 C3 C3 C5 O5 O1 C4 C6 C6 C6 C9 C9 C3 C3 C5 C5 C4 C4 C4 O5 C7 C7 O1 C4 C4 O5 C4 C4 C2 C2 O1 C2 C2 O4 C5 C8 C8 C9 C9 C6 C10 C10 C4 C4 C11 C3 C3 C4 C4 C12 C9 C3 C3 C10 C4 C2 C2 C10 C2 C2 O1 C6 C1 C3 O5 O5 C14 C8 C10 C12 C2 O5 O1 C9 C3 C5 C5 C8 C8 C1 C9 C3 C6 C9 C3 C3 C13 C5 C3 C13 C4 C4 C9 C9 C10 C4 C14 C11 C15 C3 C5 C12 C12 C2 C3 C5 C3 C4 C4 C2 C15 C5 C1 C13 C15 C1 C13 C1 C14 C2 C2 -74(2) 41(3) 172(2) 69(2) -168(2) 166(2) -68(2) -47(3) 73(3) -110(2) 132(2) 10(3) 34(3) -94(3) 20(3) 158(2) 70(3) -164(2) -101(2) -170(2) -44(3) 34(3) 168(2) 165(2) -158(3) -24(4) 50(3) 23(3) 60(3) -83(3) -161(2) -36(3) 141(3) 179(2) -58(3) -179(2) -53(3) -52(3) 53(3) 179(2) -56(3) 70(3) 50(4) 54(3) -50(3) -177(3) -175(3) -71(3) 79(3) -54(3) 178(2) -48(3) 180(2) 32(3) 148(2) -27(3) 55(3) -74(3) 46(4) 167(3)* 69(4) -166(3) 170(3) -53(4)* -50(6) 72(5) -106(3) 129(3) 11(5) 32(5) -94(4) 26(4)* 145(5)* 66(4) -170(5) -94(4)* -172(3) -48(4) 29(7) 157(5)* 166(4) -153(6) -24(7) 49(4) 27(5) 57(4) -92(4)* -165(2) -39(5) 148(4)* 171(3)* -65(4)* -169(4)* -50(5) -46(4) 50(4) 173(3)* -44(4)* 75(4) 48(4) 43(4)* -53(4) -174(3) -170(3) -70(4) 79(5) -44(5)* 167(3)* -57(5)* 180(3) 24(6) 147(4) -15(8)* 67(4)*
*Artaquenol和Artecyclohex有区别的值
#自相对原子2至3是顺时针运动并与原子4重叠的原子1观察，标记为正数。
表8三斜晶型青蒿素片剂的溶解曲线 时间(min) 浓度(mg ml-1) (n＝6) SD 3 6 10 15 20 25 30 60 120 180 240 720 16.38 18.84 23.04 29.01 35.49 39.71 45.54 55.26 70.11 72.04 76.82 83.14 2.09 1.53 2 22 1.81 2.86 2.04 1.37 3.68 2.86 3.15 2.44 2.81
表9青蒿素检测的准确度和精密度 当天 相邻两天 浓度(ng mL-1) 平均 回收率 (ng mL-1) SD CV (％) ％ 误差 平均回收率(ng mL-1) SD CV (％) ％ 误差 25 50 200 800 23.43 48.06 199.53 781.78 1.25 1.86 1.97 11.25 5.33 3.87 0.99 1.44 7.34 6.07 0.77 2.28 24.58 48.91 199.60 792.59 2.48 5.00 6.13 11.83 10.08 2.05 3.07 1.49 7.84 6.77 2.45 1.36表10二氢青蒿素的回收率 浓度 (ng mL-1) 平均回收率 (％) SD CV (％) 200 94.93 4.82 5.08表11青蒿素回收率 浓度 (ng mL-1) 平均回收率 (％) SD CV (％) 25 88.86 2.95 3.32 50 87.60 8.15 9.31 200 87.53 3.67 4.20 800 97.68 1.54 1.57
表12各血浆青蒿素浓度在不同时间的值 三斜晶型(ng mL-1) time (hr.) 1 2 3 4 5 6 7 8mean SD 0.00 0.25 0.50 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 0.00 38.36 177.20 299.54 692.36 566.42 478.95 332.66 234.52 176.95 122.11 89.73 19.00 0.00 34.51 191.10 325.47 548.31 466.29 323.61 253.26 145.06 91.09 58.09 31.16 ND 0.00 47.29 94.44 124.09 254.99 475.60 212.93 174.22 94.32 77.19 67.99 26.11 ND 0.00 29.43 74.47 197.80 543.71 710.10 404.26 302.64 154.37 95.93 72.36 30.00 ND 0.00 18.76 58.71 90.47 286.14 507.61 187.12 126.45 70.74 52.26 45.68 34.51 ND 0.00 32.53 77.82 171.24 526.84 364.05 231.67 188.98 134.39 70.62 67.27 20.00 ND 0.00 12.92 66.28 118.39 318.52 643.86 322.24 113.42 67.77 59.70 48.29 39.72 ND 0.00 11.19 51.76 129.80 542.47 419.39 297.05 114.67 69.01 38.86 14.04 ND ND 0.00 28.12 98.97 182.10 464.17 519.17 307.23 200.79 121.27 82.83 61.98 33.90 3.63 0.00 12.76 54.24 87.23 156.84 115.31 98.94 86.14 57.98 42.56 30.60 25.57 7.13 正交晶型(ng mL-1) 0.00 0.25 0.50 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 0.00 ND 10.94 67.64 114.67 191.96 135.00 100.40 85.76 22.11 21.24 ND ND 0.00 ND 39.10 56.97 196.43 125.96 94.07 53.99 49.40 35.88 21.73 ND ND 0.00 ND 30.67 63.55 96.67 151.76 87.24 68.76 49.65 22.60 ND ND ND 0.00 ND 9.33 30.17 -88.86 202.88 185.64 70.37 53.87 23.35 17.14 ND ND 0.00 ND 5.11 29.80 65.90 130.05 56.85 40.72 33.40 15.78 11.93 ND ND 0.00 ND 36.13 76.08 149.28 93.94 89.23 72.60 61.44 35.00 15.00 ND ND 0.00ND 31.41 54.86 73.35 212.06110.82 75.71 67.64 34.76 8.58 ND ND 0.00 ND 10.69 49.90 154.74 98.78 63.05 38.46 25.00 16.52 ND ND ND 0.00 ND 21.67 53.62 117.49 150.92 102.74 65.13 53.27 32.00 11.95 ND ND 0.00 ND 13.89 16.66 45.51 46.52 41.67 20.30 19.09 18.15 8.58 ND NDND：无法检测的
表13Cmax，Tmax及AUC0-∞的各数值 三斜晶型 正交晶型 项目 Cmax(ng mL-1) Tmax (hr.)AUC0-∞ (hr ng mL-1) Cmax(ng mL-1) Tmax (hr.)AUC0-∞ (hr ng mL-1)AUC0-∞三斜晶型相对于正交晶型的比值 1 2 3 4 5 6 7 8 692.36 548.31 475.60 710.10 507.61 526.84 643.86 542.47 2 2 3 3 3 2 3 2 355.47 2494.13 1741.68 2802.50 1615.64 1994.67 1912.01 1702.46 191.96 196.43 151.76 202.88 130.05 149.28 212.06 154.74 3 2 3 3 3 2 3 2 912.21 717.18 583.28 735.68 423.32 667.83 713.03 467.02 3.90 3.48 2.99 3.81 3.82 2.99 2.68 3.65 平均值 580.89 2.50 2227.57 173.65 2.63 652.44 3.42 SD 88.64 0.53 677.22 30.51 0.52 157.74 0.47 CV(％) 15.26 21.20 30.40 17.57 19.77 24.18 13.74Cmax：最大浓度Tmax：达到最大浓度的时间AUC0-∞：曲线下面积
表14Ke，t1/2及Kd的各数值 三斜晶型 正交晶型 Subject Ke (hr-1) t1/2 (hr) Vd(liter kg-1) Ke (hr-1) t1/2 (hr) Vd(liter kg-1) 1 2 3 4 5 6 7 8 0.22 0.25 0.27 0.29 0.43 0.32 0.32 0.27 3.16 2.74 2.56 2.42 1.60 2.15 2.19 2.53 12.82 15.82 21.19 12.44 14.26 15.56 16.53 21.47 0.31 0.30 0.38 0.38 0.42 0.24 0.24 0.33 2.22 2.32 -1.84 1.82 1.64 2.92 2.85 2.21 35.11 46.68 45.51 35.73 55.78 63.15 57.57 50.51 平均值 0.30 2.42 16.26 0.33 2.21 50.51 SD 0.06 0.46 3.44 0.07 0.47 11.53 CV(％) 21.68 19.01 21.16 20.34 21.27 22.83Ke ：消除速率常数t1/2：消除半衰期Vd ：分布体积