中药附子中多糖的提取和纯化方法 本发明涉及一种从中药附子中提取分离纯化多糖的方法，属于药物化学领域。
近年来对具有生理活性的多糖物质，经药理研究与临床应用，确认具有降血糖，抗肿瘤与增强免疫功能的作用，受到越来越多的专家的重视。目前国内外对于人参多糖、刺五加多糖、猪苓多糖、枸杞多糖、香菇多糖等从中药中提取的多糖物质，已应用于临床，取得令人满意的效果。附子属于毛莨科乌头属(Aconitum Carmichaeli Debx)植物的侧根，是一种常用的中药，具有回阳救逆、温补肾阳之功能。国内外对于附子中有效成分的研究，主要集中在附子生物碱方面，而对附子中多糖的研究则很少。多糖物质的提取分离纯化方法有多种，经查阅文献，本发明提供的中国产附子(黑顺片)多糖的提取分离纯化方法未见有报道。发明人在研究筛选其有效部位时，反复进行免疫调节作用及降血糖作用的实验，已确证其药效作用。
本发明的目的是提供三种从中药附子根茎炮制品——黑顺片中提取附子粗多糖的方法。
本发明的另一目地是提供上述粗多糖的纯化方法。
本发明从中药附子中提取附子粗多糖的方法包括如下步骤：
1.将中药附子黑顺片分选除杂，粉碎，过20-50目筛。
2.提取。用下述三种方法之一。
(2.1)置于超声提取器中，加入pH值为8～10的NaOH水溶液，温度80～100℃，提取三次，第一次提取(固液比为1∶10～20)0.5～2小时；滤渣再提取二次(固液比为1∶5～10)，每次0.5～1.5小时。药渣可用于制备附子生物碱。
(2.2)加入pH值为8～10的NaOH水溶液，先煮沸1～2小时，再转于超声提取器中提取，80～100℃，0.5～1.5小时，用纱布过滤；滤渣再超声提取1～2次(固液比为1∶5～10)，0.5～1.5小时/次。药渣可用于制备附子生物碱。
(2.3)提总生物碱将中药附子黑顺片分选除杂，用粉碎机粉碎，取50g加入95％乙醇800ml，转移至索氏提取器中，80～90℃超声回流提取2小时，过滤，乙醇提取液浓缩，用于制备附子生物碱，回收乙醇。先超声提取附子总生物碱，药渣再加入pH值为8～10的NaOH水溶液超声提取2～3次，第一次提取(固液比为1∶10～20)0.5～2小时；滤渣再提取1～2次(固液比为1∶5～10)，0.5～1.5小时/次。
3.纱布过滤，合并提取液，趁热置于离心机中离心(2000～4000r/min)15～25分钟，过滤。
4.将滤液浓缩至1/3～1/5体积。
5.加入无水乙醇，使乙醇浓度达到70～85％，充分搅拌，静置，得粗多糖沉淀。
6.离心、过滤、干燥得粗多糖。
附子粗多糖纯化方法：
1.粗多糖用1-2倍(w/w)蒸馏水复溶。
2.按3∶1～5∶1(v/v)体积加入苯酚/氯仿(1∶1 v/v)试剂，充分搅拌混匀，静置分层。
3.离心(2000～3000r/min)25分钟，过滤得滤液。
4.滤液重复除杂2～4次后，减压浓缩，醇沉，离心，得多糖沉淀。
依次用3～5倍体积的无水乙醇、丙酮、乙醚充分洗涤2～3次，真空干燥后，粉碎得精制附子多糖。
本发明的优点在于：应用超声提取技术，改进除杂工艺，大大缩短了提取时间，收率高、纯度高、成本低。通过药效学实验，证明具有免疫调节功能及降血糖作用。
下面给出实施例：
[例1]：
(1)超声提取将中药附子黑顺片分选除杂，用粉碎机粉碎，取50g；加入pH＝9的NaOH水溶液750ml，温度为90℃的条件下，超声提取二次。第一次提取(固液比为1∶15)1小时；滤渣再提取二次(固液比为1∶5)，每次0.5小时，用四层纱布过滤，将三次提取液合并，趁热置于离心机中离心(3000r/min)20分钟，过滤得滤液。药渣用于制备附子生物碱。
(2)浓缩、醇沉滤液减压浓缩至1/5体积，加入无水乙醇，使乙醇终浓度达到75％，静置4小时，使多糖沉淀完全，置于离心机中离心(3000r/min)10分钟，过滤得多糖沉淀。
(3)复溶、除杂将所得粗多糖重新溶于2倍体积蒸馏水中，按5∶1(v/v)体积加入苯酚/氯仿(1∶1 v/v)试剂，充分搅拌混匀，静置分层后，离心(3000r/min)25分钟，过滤得滤液。滤液重复(2)、(3)步骤二次除杂。
(4)浓缩、醇沉除杂后的滤液，经减压浓缩至1/2体积，加入无水乙醇，使终浓度达到75％，静置4小时，使多糖沉淀完全，将多糖沉淀置于离心机中离心(3000r/min)20分钟，过滤得多糖沉淀。
(5)精制将二次醇沉后的多糖沉淀，先后用5倍体积的无水乙醇、丙酮、乙醚充分洗涤各两次，得附子多糖。
(6)干燥将精制多糖移至真空干燥箱。
(7)将干燥后的多糖粉碎，得白色粉末状附子多糖精品6.2g，装入密闭容器防潮保存，备用。
[例2]：
(1)先水提后超声将中药附子黑顺片分选除杂，用粉碎机粉碎，取50g；加入pH＝9的NaOH水溶液750ml(固液比为1∶15)，100℃煮沸0.5小时，转用超声提取，90℃提取1小时，纱布过滤；滤渣再用超声90℃提取1小时(固液比为1∶5)，用四层纱布过滤，将二次提取液合并，趁热置于离心机中离心(3000r/min)20分钟，过滤得滤液。药渣用于制备附子生物碱。
(2)浓缩、醇沉滤液减压浓缩至1/5体积，加入无水乙醇，使乙醇终浓度达到75％，静置4小时，使多糖沉淀完全，置于离心机中离心(3000r/min)10分钟，过滤得多糖沉淀。
(3)复溶、除杂将所得粗多糖重新溶于2倍体积蒸馏水中，按5∶1(v/v)体积加入苯酚/氯仿(1∶1v/v)试剂，充分搅拌混匀，静置分层后，离心(3000r/min)25分钟，过滤得滤液。滤液重复(2)、(3)步骤二次除杂。
(4)浓缩、醇沉除杂后的滤液，经减压浓缩至1/2体积，加入无水乙醇，使终浓度达到75％，静置4小时，使多糖沉淀完全，将多糖沉淀置于离心机中离心(3000r/min)20分钟，过滤得多糖沉淀。
(5)精制将二次醇沉后的多糖沉淀，先后用5倍体积的无水乙醇、丙酮、乙醚充分洗涤各两次，得附子多糖。
(6)干燥将精制多糖移至真空干燥箱。
(7)将干燥后的多糖粉碎，得白色粉末状附子多糖精品6.7g，装入密闭容器防潮保存，备用。
[例3]：
(1)提总生物碱将中药附子黑顺片分选除杂，用粉碎机粉碎，取50g加入95％乙醇800ml，转移至索氏提取器中，80～90℃超声回流提取2小时，过滤，乙醇提取液浓缩，用于制备附子生物碱，回收乙醇。
(2)超声提取药渣加入pH值为8～10的NaOH水溶液超声提取2次，第一次加入750ml，提取1小时，四层纱布过滤；滤渣再加入500mlNaOH水溶液提取1小时，四层纱布过滤，将两次提取液合并，趁热置于离心机中离心(3000r/min)20分钟，过滤得滤液。
(3)浓缩、醇沉滤液减压浓缩至1/5体积，加入无水乙醇，使乙醇终浓度达到75％，静置4小时，使多糖沉淀完全，置于离心机中离心(3000r/min)10分钟，过滤得多糖沉淀。
(4)复溶、除杂将所得粗多糖重新溶于2倍体积蒸馏水中，按5∶1(v/v)体积加入苯酚/氯仿(1∶1 v/v)试剂，充分搅拌混匀，静置分层后，离心(3000r/min)25分钟，过滤得滤液。滤液重复(2)、(3)步骤二次除杂。
(5)浓缩、醇沉除杂后的滤液，经减压浓缩至1/2体积，加入无水乙醇，使终浓度达到75％，静置4小时，使多糖沉淀完全，将多糖沉淀置于离心机中离心(3000r/min)20分钟，过滤得多糖沉淀。
(6)精制将二次醇沉后的多糖沉淀，先后用5倍体积的无水乙醇、丙酮、乙醚充分洗涤各两次，得附子多糖。
(7)干燥将精制多糖移至真空干燥箱。
(8)将干燥后的多糖粉碎，得白色粉末状附子多糖精品6.0g，装入密闭容器防潮保存，备用。