一种速效救心口腔崩解片及其制备方法 【技术领域】
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种速效救心口腔崩解片及其制备方法。
技术背景
由川芎和冰片为原料制成的治疗冠心病、心绞痛的速效救心丸，上市20多年来，已经把千万条生命从死神手中拯救出来，显示出很好的治疗作用。川芎中含以川芎嗪为主要成分的生物碱类物质，以蒿本内酯为主要成分的挥发性物质和以阿魏酸为主要成分的有机酸类物质；申请号为85105829的专利文献中的速效救心丸，采用醇提，浓缩后的水液调成酸性用氯仿萃取除杂的方法获得以川芎嗪为主要有效成分的生物碱类化合物；随着时代的发展，人们发现川芎中所含的阿魏酸[欧仕益，等。阿魏酸及其衍生物的药理作用研究进展。中药材，2001，24(3)：220]和挥发性物质[赖福生，等。川芎注射液对血小板钙内流的影响。上海医学，1995，18(3)：157]也具有很强的生理活性；川芎中的主要有效成分川芎嗪不稳定，22℃开始升华，与酸成盐后，稳定性增强[张立坤，等。高效液相色谱法测定复方制剂中阿魏酸和川芎嗪。中草药，1996，27(4)：213]。阿魏酸在酸性溶液中稳定性增加[杨广德，等。川芎中阿魏酸的提取方法研究。中成药，2002，24(6)：418]。
申请号01100108的专利文献采用微波萃取、减压浓缩、超音速射流技术喷雾干燥提取川芎中地有效成分；此方法周期长，投资大，对含不稳定物质和大量挥发性成分的提取很不理想；申请号为02135441的专利文献采用醇提、水提醇沉的方法和申请号为02123498的专利文献采用水蒸气蒸馏、精馏，醇提、水提的方法提取川芎中的有效成分，没有考虑到川芎嗪的不稳定性和挥发性成分长时间受热而遭到破坏和损失。
文献资料[原永芳，等。超临界流体CO2萃取川芎挥发油化学成分的研究。中国药学杂志，2000，35(2)：84]中，采用超临界萃取法提取川芎中的有效成分。通过试验我们发现，即使在超临界萃取中加入携带剂，药渣中仍能检测出大量的川芎嗪和阿魏酸，由此可见超临界萃取对极性较大的生物碱和有机酸类成分提取很不完全。
口腔崩解片是近年来新兴的新剂型，该剂型无需用水也无需咀嚼，药物置于舌上，遇唾液迅速崩解后，借吞咽动作入胃起效，也可以置于舌下，迅速崩解后药物通过粘膜吸收起效。
【发明内容】
本发明的目的是为了克服上述现有技术存在的不足，提供一种服用方便、对适应症起效快、达峰早、疗效明显的速效救心口腔崩解片制剂及其制备方法。
根据原料药材所含的有效成分及其理化性质，本发明采用超临界萃取装置提取川芎药材中的挥发性有效成分，与冰片一起包合；药渣用酸性乙醇提取，大孔吸附树脂除杂的工艺提取有效成分；再与药用辅料组合，制备成口腔崩解片。本发明的产品活性成分的含量显著增加，药效也得到很大提高，而这并非是由于口腔崩解片本身的剂型所带来的效果。
本发明通过以下技术方案实现：
一、工艺制法
(1)口腔崩解片的原料药材组成重量份为：川芎20-60、冰片1-2
(2)取川芎药材，粉碎，过20-60目筛，经超临界萃取，萃取压力为10-50Mpa，在20-70℃循环萃取1-4小时，得到超临界萃取物；
(3)将上述药渣，以60％-95％的pH值为1-6的酸性乙醇提取两次；每次加入相当于药材重量6-10倍的溶剂；第一次提取1-3小时，第二次提取1-2小时；合并乙醇提取液，过滤，滤液浓缩至无醇味；上大孔吸附树脂，先用3-6倍量的水洗，再用30％-80％乙醇洗脱；收集乙醇洗脱液，50℃时浓缩至相对密度为1.15-1.30的浸膏，得到酸性乙醇提取物；
(4)将超临界萃取物、酸性乙醇提取物和冰片用少量乙醇溶解，缓慢加入β-CD或HP-β-CD水溶液中，50℃搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，过滤，得到包合物；
(5)本发明的制剂处方为：包合物5-40重量份，崩解剂10-30重量份，填充剂50-90重量份，矫味剂1-10重量份，润滑剂0.5-3重量份；
(6)将包合物与药用辅料混合，制粒、干燥、整粒、压片、检验、包装，得到口腔崩解片。
所制得的崩解片是由川芎、冰片包合物5-40重量份和药用辅料61.5-133重量份组成的，其中包合物中川芎超临界萃取物为0.5-3.0重量份、酸性乙醇提取物为0.2-0.6重量份。
上述制备方法在用超临界流体萃取川芎中的挥发性成分后，药渣用酸性乙醇提取，使得易升华的主要有效成分川芎嗪以稳定的盐的形式存在，阿魏酸也处在了使其更稳定的酸性环境中，从而避免了川芎嗪和阿魏酸在长时间的提取过程中因受热而损失，增加了提取量，又通过环糊精包合，进一步巩固药物的稳定性，再加以辅料制成的崩解片在使用过程中，缩短药物释放时间，增大溶出度，能更加快速达到药效。
二、含量测定分析
1.高效液相色谱法测定救心制剂中川芎嗪的含量
1.1仪器与试药 高效液相色谱仪包括LC-10ATvp型溶剂输送泵，SPD-10ATvp型紫外可见检测器(日本岛津公司)；N2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)；KQ3200型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，TGL-16G高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。色谱纯甲醇(北京化学试剂有限公司)；水为三蒸水(自制)；其它试剂均为分析纯。速效救心丸(天津市第六中药厂)；速效救心口腔崩解片(北京乾露春科技有限公司实验室提供)；川芎嗪对照品(中国药品生物制品检定所)。
1.2色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：迪马公司C18柱(5μm，150mm×4.6mm，I.D)；流动相：甲醇-0.1mol/L醋酸、醋酸钠缓冲液(33∶47)[pH4.0]；流速：1.0ml/min检测波长：278nm。理论板数按川芎嗪峰记算应不低于3000。
1.3对照品溶液制备 精密称取川芎嗪对照品4.00mg，置入200ml量瓶中，加入甲醇，超声使溶解，再加甲醇至刻度，即得。
1.4标准曲线制备 分别精密吸取上述对照品溶液1μl、5μl、10μl、15μl、20μl，在上述测定条件下进样测定，结果川芎嗪在0.02μg～0.40μg范围内呈良好线性关系，回归方程为Y＝1.0798×10-3X+0.019836，r＝0.9998。
1.5供试品溶液的制备 取供试品10片，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液离心(12000rpm)10min，上清液作为供试品溶液。
1.6测定法 精密吸取供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，用标准曲线计算含量。结果见表1。
表1 制剂中川芎嗪含量比较
组别 川芎嗪*
(mg)
速效救心丸 11.88
速效救心口腔崩 14.43
解片
*表示一次服用量
注：本发明速效救心口腔崩解片每次服用量为3片。
2.高效液相色谱法测定救心制剂中阿魏酸的含量
2.1仪器与试药 高效液相色谱仪包括LC-10ATvp型溶剂输送泵，SPD-10ATvp型紫外可见检测器(日本岛津公司)；N2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)；KQ3200型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，TGL-16G高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。色谱纯甲醇(北京化学试剂公司)；水为三蒸水(自制)；其它试剂均为分析纯。速效救心丸(天津市第六中药厂)；速效救心口腔崩解片(北京乾露春科技有限公司实验室提供)；阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所)。
2.2色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：迪马公司C18柱(5μm，150mm×4.6mm，I.D)；流动相：甲醇-1％醋酸(35∶65)；流速：1.0ml/min；检测波长313nm；理论板数按阿魏酸峰记算应不低于3000。
2.3对照品混合溶液配制 精密称取阿魏酸对照品约3mg，置100mL量瓶中，加入甲醇，超声使溶解，再加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.4标准曲线制备 分别配制不同浓度的阿魏酸对照品溶液，在上述测定条件下进样测定。结果表明，阿魏酸在0.0775μg～0.620μg范围内进样量与峰面积呈良好线性关系，线性方程为Y＝909.8X-16498，r＝0.9995。
2.5供试品溶液的制备 取供试品10片，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液过滤，取续滤液，即得。
2.6测定法 精密吸取供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，用标准曲线计算含量。结果见表2。
表2 制剂中阿魏酸含量比较
组别 阿魏酸*
(mg)
速效救心丸 12.29
速效救心口腔 26.64
崩解片
*表示一次服用量
结论：以上含量测定实验说明，本发明速效救心口腔崩解片中的有效成分川芎嗪、阿魏酸的含量均有所提高，且本发明速效救心口腔崩解片生物利用度更高，充分说明本发明的制备工艺具有实际意义。
三、崩解时限
取本发明速效救心口腔崩解片，置于盛有5ml 37℃水的10ml的烧杯中，以30转/分的速度搅拌。结果本发明的口腔崩解片在40秒内全部崩解并通过2号筛。
四、溶出度实验
4.1仪器与试药 SR-6型全自动溶出仪(美国Hanson公司)；蒸馏水(自制)；速效救心丸(天津市第六中药厂)；速效救心口腔崩解片(北京乾露春科技有限公司实验室提供)。
4.2实验方法 按溶出度测定法(《中国药典》2000年版二部附录XC)中第二法测定。每个容器盛有100ml的经脱气处理的蒸馏水，加温使水温保持在37℃±0.5℃，搅拌桨转速为50转/分。放入本发明速效救心口腔崩解片1片，每隔一定时间取出2ml溶液，离心10分钟(12000rpm)，上清液作为供试品溶液，用上述含量测定方法测定川芎嗪含量。结果见表3。
表3 两种药物的溶出度比较
药物 取样时间(min)
0.5 1 2 4 8 12 16 20
速效救心丸 4.96 5.28 6.42 7.63 8.84 9.13 10.49 11.88
速效救心口腔崩解片 8.73 9.42 10.77 11.96 12.18 13.33 14.43 14.43
结论：速效救心口腔崩解片0.5min，溶出率即可达到50％以上，16分钟完全溶出；而速效救心丸0.5min的溶出率只有42％，20分钟才溶出完全。因此，本发明速效救心口腔崩解片具有显效迅速的特点。
五、药理实施例
5.1对小鼠缺氧耐力的影响实验
取健康昆明种小鼠30只，体重20～24g。随机分成对照组，速效救心丸组、速效救心口腔崩解片组。每组10只，雌雄各半，分笼饲养。以人常规治疗剂量折算为小鼠的剂量。折算公式为：待测动物试用剂量＝已知动物给药量×待测动物的体表面积比值/已知动物的体表面积比值。对照组给生理盐水，1次/d，连续13d。于末次给药后1h，将小鼠分别置于体积为150ml磨口瓶中，内放15g钠石灰，密闭观察其存活时间。结果见表4。
表4 对小鼠常压缺氧的影响(X±SD)
组别 鼠数(只) 平均存活时间(min)
对照组 10 19.14±2.36
速效救心丸组 10 24.74±2.23*
速效救心口腔崩解片组 10 28.62±2.77*#
注：与对照组比较：*P＜0.01；
与速效救心丸组比较：#P＜0.05
速效救心丸、速效救心口腔崩解片均能提高小鼠常压缺氧耐力，平均存活时间比对照组显著延长(P＜0.01)；速效救心口腔崩解片和速效救心丸相比，平均存活时间也有差异(P＜0.05)。说明：速效救心口腔崩解片和速效救心丸能显著提高小鼠常压缺氧耐力，而且速效救心口腔崩解片的作用强于速效救心丸。
5.2对小鼠心肌缺氧的保护作用实验
取健康昆明种小鼠30只，体重18～22g，随机分成3组，对照组，速效救心丸组、速效救心口腔崩解片组。每组雌雄各半，分笼饲养。以人常规治疗剂量折算为小鼠的剂量。折算公式为：待测动物试用剂量＝已知动物给药量×待测动物的体表面积比值/已知动物的体表面积比值。对照组给生理盐水。给药方法：1次/d，连续6d。于末次给药后1h用乌拉坦1.2g/kg腹腔注射麻醉，背部固定，分离气管，以动脉夹夹闭气管，用心电仪观察心电，并用秒表记下小鼠夹闭气管后至心电消失的时间。结果见表5。
表5 对小鼠心肌缺氧的影响(X±SD)
组别 鼠数(只) 平均存活时间(min)
对照组 10 6.26±0.68
速效救心丸组 10 7.88±0.49*
速效救心口腔崩解片组 10 9.07±0.57*#
注：与对照组比较：*P＜0.01；
与速效救心丸组比较：#P＜0.05
速效救心丸、速效救心口腔崩解片均能对小鼠心肌缺氧起保护作用，平均存活时间比对照组显著延长(P＜0.01)；速效救心口腔崩解片和速效救心丸相比，平均存活时间也有差异(P＜0.05)。说明：速效救心口腔崩解片和速效救心丸能对小鼠心肌缺氧起保护作用，而且速效救心口腔崩解片的作用强于速效救心丸。
5.3对缺血/再灌注损伤心肌高能磷酸化合物的影响
采用Langendorff离体心脏灌流技术，制备心肌缺血/再灌注损伤模型，利用高效液相色谱法(HPLC)测定离体大鼠心肌组织中的高能磷酸化合物的含量变化。共分4组：正常对照组：大鼠心脏离体后，接在灌流装置上持续灌流75min。单纯缺血再灌组：先预灌15min，然后停止灌流，保持心脏温度恒定在37℃，在无氧、无灌流液的条件下置40min，再恢复灌流20min。速效救心丸保护组：预灌时加速效救心丸，后处理同单纯缺血再灌组。速效救心口腔崩解片保护组：预灌时加速效救心口腔崩解片，后处理同单纯缺血再灌组。结果见表6。
表6 对缺血/再灌注损伤心肌高能磷酸化合物的影响(X±SD)
组别 腺苷酸总量(μg/100mg)
正常对照组 95.42±11.37
单纯缺血再灌组 20.88±4.86
速效救心丸保护组 64.64±7.92*
速效救心口腔崩解片保护组 82.03±5.22*#
注：与单纯缺血再灌组比较：*P＜0.01；
与速效救心丸组比较：#P＜0.05
腺苷酸总量＝一磷酸腺苷(AMP)+二磷酸腺苷(ADP)+三磷酸苷(ATP)
速效救心口腔崩解片、速效救心丸均能提高缺血心肌能量储备能力，而且速效救心口腔崩解片的作用强于速效救心丸。
以上药理实验证明，用新工艺制备的速效救心口腔崩解片比速效救心丸具有更好的治疗效果。
六、制备实施例
实施例1
(1)崩解片的原料药材组成重量份为：川芎22g 冰片1.8g
(2)取川芎药材，粉碎，过20目筛，装入超临界萃取装置的萃取釜中，在12Mpa，60℃循环萃取2小时，得到超临界萃取物0.76；
(3)将上述药渣，以90％的pH5.5的酸性乙醇作溶剂用多功能提取器提取两次；每次加入相当于药材重量6倍的溶剂；第一次提取2小时，第二次提取1小时；合并乙醇提取液，过滤，滤液浓缩至无醇味；上大孔吸附树脂，先用6倍量的水洗，再用80％乙醇洗脱；收集乙醇洗脱液，50℃时浓缩至相对密度为1.20的浸膏，得到酸性乙醇提取物0.23g；
(4)将超临界萃取物、酸性乙醇提取物和冰片用少量乙醇溶解，缓慢加入HP-β-CD水溶液中，50℃搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，过滤，得到包合物11g；
(5)制剂处方为：
包合物 11g
纳米微晶纤维素 85g
低取代羟丙甲基纤维素 20g
甘露醇 2.5g
硬脂酸镁 1.5g
(6)将包合物与药用辅料混合，制粒、干燥、整粒、压片、检验、包装，得到口腔崩解片。
实施例2
(1)崩解片的原料药材组成重量份为：川芎30g 冰片1.6g
(2)取川芎药材，粉碎，过40目筛，装入超临界萃取装置的萃取釜中，在25Mpa，50℃循环萃取1.5小时，得到超临界萃取物1.14g；
(3)将上述药渣，以80％的pH4的酸性乙醇作溶剂用多功能提取器提取两次；每次加入相当于药材重量8倍的溶剂；第一次提取3小时，第二次提取2小时；合并乙醇提取液，过滤，滤液浓缩至无醇味；上大孔吸附树脂，先用3倍量的水洗，再用40％乙醇洗脱；收集乙醇洗脱液，50℃时浓缩至相对密度为1.23的浸膏，得到酸性乙醇提取物0.42g；
(4)将超临界萃取物、酸性乙醇提取物和冰片用少量乙醇溶解，缓慢加入β-CD水溶液中，50℃搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，过滤，得到包合物25g；
(5)制剂处方为：
包合物 25g
微晶纤维素 76g
羧甲基淀粉钠 14g
甘露醇 3.6g
滑石粉 1.4g
(6)将包合物与药用辅料混合，制粒、干燥、整粒、压片、检验、包装，得到口腔崩解片。
实施例3
(1)崩解片的原料药材组成重量份为：川芎46g 冰片1.5g
(2)取川芎药材，粉碎，过30目筛，装入超临界萃取装置的萃取釜中，在40Mpa，40℃循环萃取3小时，得到超临界萃取物1.96g；
(3)将上述药渣，以75％的pH4的酸性乙醇作溶剂用多功能提取器提取两次；每次加入相当于药材重量10倍的溶剂；第一次提取2小时，第二次提取1小时；合并乙醇提取液，过滤，滤液浓缩至无醇味；上大孔吸附树脂，先用4倍量的水洗，再用60％乙醇洗脱；收集乙醇洗脱液，50℃时浓缩至相对密度为1.30的浸膏，得到酸性乙醇提取物0.57g；
(4)将超临界萃取物、酸性乙醇提取物和冰片用少量乙醇溶解，缓慢加入β-CD水溶液中，50℃搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，过滤，得到包合物32g；
(5)制剂处方为：
包合物 32g
纳米微晶纤维素 64g
交联羧甲基淀粉钠 19g
甜菊苷 3.4g
十二烷基硫酸镁 1.6g
(6)将包合物与药用辅料混合，制粒、干燥、整粒、压片、检验、包装，得到口腔崩解片。
实施例4
(1)崩解片的原料药材组成重量份为：川芎58g 冰片1.1g
(2)取川芎药材，粉碎，过60目筛，装入超临界萃取装置的萃取釜中，在50Mpa，30℃循环萃取4小时，得到超临界萃取物2.77g；
(3)将上述药渣，以60％的pH3的酸性乙醇作溶剂用多功能提取器提取两次每次加入相当于药材重量8倍的溶剂；第一次提取3小时，第二次提取2小时；合并乙醇提取液，过滤，滤液浓缩至无醇味；上大孔吸附树脂，先用5倍量的水洗，再用70％乙醇洗脱；收集乙醇洗脱液，50℃时浓缩至相对密度为1.27的浸膏，得到酸性乙醇提取物0.35g；
(4)将超临界萃取物、酸性乙醇提取物和冰片用少量乙醇溶解，缓慢加入HP-β-CD水溶液中，50℃搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，过滤，得到包合物38g；
(5)制剂处方为：
包合物 38g
微晶纤维素 51g
交联聚乙烯吡咯烷酮 26g
甜菊苷 3g
硬脂酸镁 2g
(6)将包合物与药用辅料混合，制粒、干燥、整粒、压片、检验、包装，得到口腔崩解片。