一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法.pdf

本发明公开了一种用于治疗妇科炎症的中药组合物，该组合物是由苦参、莪术、苍术和冰片等原料药，经水提醇沉、树脂柱精制、提取挥发油等工艺步骤制成适宜的剂型，优选为凝胶剂，属中药领域。本发明中药组合物对妇女细菌性、霉菌性阴道炎，宫颈炎，宫颈糜烂等有着显著的治疗效果。本发明同时还公开了该中药组合物的制备方法和质量控制方法。

1.  一种用于治疗妇科生殖系统炎症的药物组合物，其特征在于它是由如下重量份原料药制成的：苦参1000～2000份、莪术200～800份、苍术100～500份、冰片5～20份。

2.  根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于各原料药的优选重量配比为：苦参1400～1600份、莪术400～600份、苍术200～400份、冰片5～15份。

3.  根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于各原料的最佳重量配比为：苦参1500份、莪术500份、苍术300份、冰片10份。

4.  根据权利要求1至3中任一所述的药物组合物，其特征在于该组合物可制成临床上或药学上可接受的各种剂型，包括颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、栓剂、凝胶剂、洗液等。

5.  权利要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包含如下工艺过程：取苦参药材，粉碎，加水煎煮，煎液减压浓缩至60℃时相对密度为1.00～1.10的清膏，加乙醇使含醇量达60～80％，静置冷藏后滤过，滤液减压回收乙醇，并浓缩至60℃时相对密度为1.10～1.20的清膏，调pH2～3，静置，滤过，滤液通过强酸性阳离子交换树脂柱，加完药液后，以去离子水继续洗脱至水洗脱液pH6～8，弃去；加浓氨水浸泡1～3小时，再以5～15％的氨水液洗脱至完全，收集洗脱液，减压回收溶剂，药液浓缩至干，粉碎，备用；另取莪术、苍术两味药材，加水蒸馏提取，收集馏液，加5～30％的氯化钠，冷藏，分取上层油液，与上面的苦参提取精制物及冰片合并，加入适宜辅料，制成相应剂型。

6.  根据权利要求5所述药物组合物的制备方法，其特征在于该具体过程如下：取苦参药材，粉碎分别加10倍量水煎煮三次，合并煎液，于65～70℃，-0.08Mpa条件下减压浓缩至60℃时相对密度为1.08～1.10的清膏，放冷加乙醇使含醇量达70～80％，静置冷藏24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃时相对密度为1.18～1.20的清膏，加盐酸调pH2～3，放置12小时，滤过，滤液通过H型强酸性阳离子交换树脂柱，加完药液后，以去离子水继续洗脱至水洗脱液pH6～7，弃去；加浓氨水浸泡2小时，再以10～15％的氨水液洗脱，以10％硅钨酸试剂检查至沉淀反应阴性为止，收集洗脱液，减压回收溶剂，药液浓缩至干，粉碎，备用；另取莪术、苍术两味药材，加8～10倍量水蒸馏提取5～8小时，收集馏液，加12～20％的氯化钠，冷藏12小时，分取上层油液，与上面的苦参提取精制物及冰片合并，加入适宜辅料，制成所需剂型。

7.  根据权利要求6所述药物组合物的制备方法，其特征在于其中的阳离子交换树脂柱是用湿法装柱，湿树脂重0.75～1.0kg，柱径与柱高之比为1∶5～1∶10，水流出液pH3～4。

8.  根据权利要求7所述药物组合物的制备方法，其特征在于凝胶剂的工艺过程为：取莪术500份、苍术300份提取挥发油，加挥发油中加入80型吐温5份，研磨均匀，取冰片10份，加乙醇使溶解，加入到上述混合物中，研磨均匀，再加甘油200份，羟丙甲纤维素20份，充分研匀，得药液A；再取苦参1500份提取精制成药粉，加水500份，再加适量乳酸调节pH至3～4，加热使溶解，放冷，滤过，所得滤液加入到药液A中，边加边搅，再加水补足至1000份，搅拌使成均匀凝胶，即得。

9.  权利要求8所述药物组合物的质量控制方法，含有含量测定和定性鉴别两部分，其特征在于含量测定方法如下：
色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，比例为30∶70的乙腈-0.02％三乙胺为流动相，流速1ml/min，检测波长为230nm，理论塔板数按苦参碱峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备  精密称取已干燥至恒重的苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含苦参碱200μg的溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备  取本品1.0g，精密称定，置锥形瓶中，加饱和食盐水20ml，搅拌使溶，再加浓氨水调节pH9～10，以氯仿振摇提取5次，每次20ml，合并氯仿液，水浴挥干溶剂，残渣加甲醇定量转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，微孔滤膜滤过，即得；
测定法  分别精密吸取对照品与供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得。

10.  根据权利要求9所述药物组合物的质量控制方法，其特征在于其中的鉴别方法包含如下的一种或几种：
1)取本品4g，加硅藻土10g，研磨均匀，加水50ml转移至100ml圆底烧瓶中，上接挥发油提取器，提取器刻度管内先加满水，再加入醋酸乙酯2ml，蒸馏提取1小时，收集醋酸乙酯液，作为供试品溶液；另取莪术对照药材1g，加石油醚20ml超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为19∶1苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫色主斑点；
2)取“鉴别1)”项下的供试品溶液作为供试品溶液；另取苍术对照药材1g，加石油醚20ml超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3～8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的墨绿色斑点；
3)取“鉴别1)”项下的供试品溶液作为供试品溶液；另取冰片对照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为19∶1环己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
4)取“鉴别1)”项下经蒸馏提取后的水液，以脱脂棉滤过，再加浓氨水调节pH9～10，以氯仿振摇提取3次，每次30ml，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取苦参碱对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为2∶3∶4∶0.2的苯-丙酮-醋酸乙酯-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点。

11.  权利要求1至3中任一所述的药物组合物在制备用于治疗女性阴道炎、宫颈炎、宫颈糜烂等妇科炎症的药物中的应用。

一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法
技术领域
本发明涉及一种治疗女性阴道炎、宫颈炎、宫颈糜烂等妇科炎症的中药组合物及其制备方法和质量控制方法，属中药领域。
背景技术
宫颈炎、阴道炎、宫颈糜烂是妇女生殖系统炎症中的常见病、多发病，属中医“带下”、“阴痒”范畴，古有“十女九带”之说，给广大妇女带来很大的身心痛苦。在该类疾病的治疗上，西医多采用化学药物外用治疗，但复发率高，且易引起化学性外阴道炎和表皮的溃破，疗效不甚满意。
中药中有许多药材具有杀菌抗炎的作用，但如何将这些中药材配方组合，使其能发挥协同增效的作用，是中药界一直在研究的课题。另外，由于制剂技术的局限和卫生条件的限制，至今极少有适宜的中药剂型可以供妇科外用。而已有的剂型也仅有洗剂、栓剂、泡腾片剂，这些剂型都存在载药量小、药物停留时间短或释药不均匀等问题。
本发明目的旨在克服现有药物的不足，提供一种有效治疗女性阴道炎、宫颈炎、宫颈糜烂的中药组合物及其制备方法；本发明目的还在于提供一种中药组合物的质量控制方法。
发明内容
本发明目的是通过如下技术方案实现的：
本发明所述的药物是由下列组份的原料药制成的(用量为重量份)：
苦参1000～2000份、莪术200～800份、苍术100～500份、冰片5～20份。
经优选后的原料药比例为：
苦参1400～1600份、莪术400～600份、苍术200～400份、冰片5～15份。
经实验后进一步优选后，确实最优配比为：
苦参1500份、莪术500份、苍术300份、冰片10份。
为了方便临床使用，发明人针对该原料药做了进一步研究，以制定其提取制备工艺，将其制成临床或药学所需的各种剂型，如颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、栓剂、凝胶剂、洗液等。研究过程如下：
首先为前提取工艺的研究：
采用正交试验法，以苦参碱和总生物碱得量为指标考察苦参的提取工艺和精制工艺；以挥发油得量为指标考察了莪术、苍术的提取工艺；冰片为直接入药的部分，将上述三部分药物合并即得本药物组合物。
基本工艺过程为：取苦参药材，粉碎，加水煎煮，煎液减压浓缩至60℃时相对密度为1.00～1.10的清膏，加乙醇使含醇量达60～80％，静置冷藏后滤过，滤液减压回收乙醇，并浓缩至60℃时相对密度为1.10～1.20的清膏，调pH2～3，静置，滤过，滤液通过强酸性阳离子交换树脂柱，加完药液后，以去离子水继续洗脱至水洗脱液pH6～8，弃去；加浓氨水浸泡1～3小时，再以5～15％的氨水液洗脱至完全，收集洗脱液，减压回收溶剂，药液浓缩至干，粉碎，备用；另取莪术、苍术两味药材，加水蒸馏提取，收集馏液，加5～30％的氯化钠，冷藏，分取上层油液，与上面的苦参提取精制物及冰片合并，制成中间体，可以进一步制成各种剂型。
优选后的工艺过程为：取苦参药材，粉碎分别加10倍量水煎煮三次，合并煎液，于65～70℃，-0.08Mpa条件下减压浓缩至60℃时相对密度为1.08～1.10的清膏，放冷加乙醇使含醇量达70～80％，静置冷藏24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃时相对密度为1.18～1.20的清膏，加盐酸调pH2～3，放置12小时，滤过，滤液通过H型强酸性阳离子交换树脂柱，加完药液后，以去离子水继续洗脱至水洗脱液pH6～7，弃去；加浓氨水浸泡2小时，再以10～15％的氨水液洗脱，以10％硅钨酸试剂检查至沉淀反应阴性为止，收集洗脱液，减压回收溶剂，药液浓缩至干，粉碎，备用；另取莪术、苍术两味药材，加8～10倍量水蒸馏提取5～8小时，收集馏液，加12～20％的氯化钠，冷藏12小时，分取上层油液，与上面的苦参提取精制物及冰片合并，得到制剂中间体。
这其中，树脂柱的具体要求是：用湿法装柱，湿树脂重0.75～1.0kg，柱径与柱高之比为1∶5～1∶10，水流出液pH3～4。
应用以上提取及前处理工艺得到的药物组合物中间体，配以相应的辅料，就可以制成临床所需的各种剂型，包括包括颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、栓剂、凝胶剂、洗液等。由于凝胶剂最有创新性，最适合本发明产品的应用，故发明人重点研究了凝胶剂。
凝胶制剂的研究：
按上述的工艺研究资料，取莪术500份、苍术300份提取挥发油，加挥发油中加入80型吐温5份，研磨均匀，取冰片10份，加乙醇使溶解，加入到上述混合物中，研磨均匀，再加甘油200份，羟丙甲纤维素20份，充分研匀，得药液A；再取苦参1500份提取精制成药粉，加水500份，再加适量乳酸调节pH至3～4，加热使溶解，放冷，滤过，所得滤液加入到药液A中，边加边搅，再加水补足至1000份，搅拌使成均匀凝胶，即得。
随着处方量的变化，各种辅料的比例也会有所波动，但其比例是基本不变的，因而都应属本发明申请的保护范围。
凝胶剂是一种新的中药外用剂型，本发明是采用新型水溶性基质-羟丙甲纤维素为赋形剂，配以中药苦参、莪术、苍术、冰片的提取物，加适宜附加剂制成的凝胶剂，具有清热燥湿，抗菌、消炎、杀虫、解毒之功效，用于治疗女性宫颈炎、阴道炎症。凝胶剂是一种适用于中药外用的理想剂型，它是药物与能形成大分子网络体系的辅料混合制成的半流体制剂，与黏膜有良好的偶合作用和水合作用，可较长时间与作用部位紧密黏附，有较好的生物相容性，无油腻感，有利于药物释放。本制剂克服了一般制剂经口服、注射、直肠等给药途径产生的味苦、疼痛、给药不便的缺点；疗效确切，使用方便，毒副作用小，患者易接受。
质量控制方法的研究：
在研究本发明产品及制备方法的过程中，为了有效控制本发明产品的质量，发明人还制定了其质量控制方法，也应属于本发明的整体思路之一，因而也是本申请的保护内容。这套质量控制办法包括含量测定部分和定性鉴别两部分，分述如下。
含量测定方法：照高效液相色谱法测定苦参碱
色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，比例为30∶70的乙腈-0.02％三乙胺为流动相，流速1ml/min，检测波长为230nm，理论塔板数按苦参碱峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备  精密称取已干燥至恒重的苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含苦参碱200μg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备  取本品1.0g，精密称定，置锥形瓶中，加饱和食盐水20ml，搅拌使溶，再加浓氨水调节pH9～10，以氯仿振摇提取5次，每次20ml，合并氯仿液，水浴挥干溶剂，残渣加甲醇定量转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，微孔滤膜滤过，即得。
测定法  分别精密吸取对照品与供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得。
定性鉴别方法：
(1)取本品4g，加硅藻土10g，研磨均匀，加水50ml转移至100ml圆底烧瓶中，上接挥发油提取器，提取器刻度管内先加满水，再加入醋酸乙酯2ml，蒸馏提取1小时，收集醋酸乙酯液，作为供试品溶液；另取莪术对照药材1g，加石油醚20ml超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为19∶1苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫色主斑点。
(2)取(1)项下的供试品溶液作为供试品溶液；另取苍术对照药材1g，加石油醚20ml超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3～8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的墨绿色斑点。
(3)取(1)项下的供试品溶液作为供试品溶液；另取冰片对照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为19∶1环己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取(1)项下经蒸馏提取后的水液，以脱脂棉滤过，再加浓氨水调节pH9～10，以氯仿振摇提取3次，每次30ml，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取苦参碱对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为2∶3∶4∶0.2的苯-丙酮-醋酸乙酯-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点。
经发明人证明，以上质量控制方法可以应用于本发明技术方案能够制成的各种剂型。
有益效果：
本发明药物组合物具有行气破瘀，燥湿杀虫，生肌止痛之功效，可用于治疗女性细菌性、霉菌性阴道炎，宫颈炎，宫颈糜烂等症。为证明其效果，发明人进行了如下动物药效学实验。
试验药品：妇康凝胶(按本发明最优技术方案制备而得)
批号：20031020
含量：2.31g生药/g凝胶
受试药物的配置：用基质稀释，小、中、大剂量含生药分别为0.58g生药/g凝胶、1.16g生药/g凝胶、2.31g生药/g凝胶。
试验动物：Wistar大鼠，由山东中医药大学动物中心提供，动物合格证号：2003002；白色豚鼠：动物合格证号：2003004；家兔，体重2.1～2.5kg，♀♂兼用，由山东省农科院畜牧所种兔场提供，动物合格证号：鲁动质字D20021135。
试验器材：Oliympus ch30显微镜(日本)，YJ-1450医用净化工作台(苏州金燕挣化厂)。
菌种：金黄色葡萄球菌(ATCC，25923)，大肠杆菌(ATCC，25922)，乙型溶血性链球菌(32204)、淋球菌、白色念珠菌，均由山东中医药大学附属医院检验科细菌室临床分离。
洁尔阴洗液：成都恩威制药有限公司，批号：021140。
营养肉汤(生物制剂)：山东省卫生防疫站，批号：20000401。
磷酸组胺：上海丽珠东风生物技术有限公司，批号：990406。
达克宁栓：西安杨森制药有限公司，批号：010115711。
注射用青霉素：山东鲁抗医药股份有限公司，批号：B030616。
试验方法与结果
1.妇康凝胶体外抑菌试验
1.1妇康凝胶抑制细菌试验：(1)菌种：致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、淋球菌、白色念珠菌，以上细菌均选标准菌株(皆从临床标本分离，每个菌种分离10个菌株)。(2)培养基：营养肉汤(3)方法：取灭菌小试管若干支，用相应的培养基稀释被试药，浓度从含生药0.2g/ml开始，并二倍稀释法分为6管，(另设药物对照组试管及菌株对照试管)每管加培养基1ml，每管加入0.1ml稀释的新鲜菌液(含菌量：金黄色葡萄球菌约3.5×108、乙型溶血性链球菌1×107、大肠杆菌约5×109)，置37℃培养箱中培养18小时后观察有无细菌生长，如果药液颜色深或不透明，无法判定有无细菌生长，把可疑试管再移到平面皿培养基上，培养18小时，观察细菌生长情况，细菌不生长的最高药物稀释浓度为该药的最低抑菌浓度(MIC)，每个菌种采用10株，求其平均值为其最低抑菌浓度，试验结果见表1。
表1           凝胶液体试管法体外抑菌(MIC)试验结果(X±SD)(g/ml)