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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410700484.0(22)申请日 2014.11.28C12P 19/14(2006.01)C12P 19/04(2006.01)(71)申请人 哈尔滨墨医生物技术有限公司地址 150046 黑龙江省哈尔滨市香坊区军民街24号立汇格林小镇B5栋2单元8层1号(72)发明人 戴路(54) 发明名称一种高效提取猴头菇多糖的方法(57) 摘要一种高效提取猴头菇多糖的方法，该提取方法具体步骤为 ：（1）材料预处理 ；（2）微波提取 ；（3）超声提取 ；（4）酶解提取 ；（5）超滤分离 ；（6）真空干燥。本发明的一种高效提取猴头菇多糖的方。
2、法，复合微波、超声提取，使细胞内容物更大量的释放，同时加入酶解提取，去除了蛋白等杂质，最后进行超滤分离，使其收率高、纯度好。(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书3页(10)申请公布号 CN 104480162 A(43)申请公布日 2015.04.01CN 104480162 A1/1 页21.一种高效提取猴头菇多糖的方法，其特征在于 ：该提取方法具体步骤为 ：（1）材料预处理 ：取干燥猴头菇，粉碎，过 50 120 目筛，得干燥猴头菇粉末，按干燥猴头菇粉末与蒸馏水 1 ：5 35 的重量配比，加入蒸馏水，于 0 65得温度条件下。
3、，浸泡1-5 小时，得到待提取物 ；（2）微波提取 ：取步骤（1）的待提取物，放入微波中，调节微波的功率为 500-1000W，处理时间为 5-15min ；（3）超声提取 ：把步骤（2）微波处理后的物质置于超声波中，在 0 60的温度条件下，用 5 20KHz 超声波萃取 0.5h 2.0h，过滤，得到滤液 1 ；（4）酶解提取 ：调节滤液 1 的 pH 为 3 6，加入足量纤维素酶，在 30 60的温度条件下，水解 0.5h 3.0h，离心分离取滤液 2，调滤液 2 的 pH 为 3 6，加入足量果胶酶，在30 60的温度条件下，水解 0.5h 1.5h，离心分离取滤液 3，调滤液 3 的。
4、 pH 为 3 6，加入足量木瓜蛋白酶，在 30 60的温度条件下，水解 l.0h 2.0h，离心分离取滤液 4，备用；（5）超滤分离 ：调节滤液 4 的 PH 值为 8-9，加入体积为滤液 4 体积 0.5-1.0 倍的 30% 双氧水，于 40-45的温度下搅拌 0.5h-1h，以 5k 的聚砜膜超滤，收集分子量 1000 道尔顿以上的组分 ；（6）真空干燥：取步骤（5）中得到的分子量1000道尔顿以上的组分，在真空度 -0.095MPa，干燥温度 20-50的条件下，干燥 20min，得到猴头菇多糖。2.根据权利要求 1 所述的一种高效提取猴头菇多糖的方法，其特征在于 ：所述纤维素酶，为。
5、酶治性为 10000 20000 u/g 的纤维素酶，质量为滤液 1 质量的 0.5-1.0 倍。3.根据权利要求 1 所述的一种高效提取猴头菇多糖的方法，其特征在于 ：所述果胶酶，为酶活性为 15000 25000 u/g 的果胶酶，质量为滤液 2 质量的 1.0-1.5 倍。4.根据权利要求 1 所述的一种高效提取猴头菇多糖的方法，其特征在于 ：所述木瓜蛋白酶，为酶活性为 800000-1000000 u/g 的木瓜蛋白酶，质量为滤液 3 质量的 0.5-1.5 倍。权 利 要 求 书CN 104480162 A1/3 页3一种高效提取猴头菇多糖的方法技术领域0001 本发明涉及一种多糖提。
6、取方法，特别是一种高效提取猴头菇多糖的方法。背景技术0002 猴头菇又叫猴头菌，原是一种深藏于密林中的珍贵食用菌。子实体圆而厚，常悬于树干上，布满针状菌刺，形状极似猴子的头，故而得名猴头菇。猴头菇，性平味甘，人胃经，有助于消化，利五脏，扶正固本，具有健脑提神的功效，有“素中荤”之称，长期以来人们把它同“熊掌，海参，鱼翅”共同列为四大名菜，或把它与燕窝相提并论，民间谚语有“多食猴头，返老还童”之说闭。临海水土异物志中记载“民皆好淡猴头羹，虽五肉膝不能及之”其俗称为“宁负千石粟不愿负猴头羹”都说明了人们对猴头菇的喜爱。0003 目前，猴头菇的药用价值引起了国内外学者的广泛关注。猴头菇富含多糖体、多。
7、肤等物质，能抑制癌细胞中遗传物质的合成，从而预防和治疗消化道癌症和其他恶性肿瘤 ;此外，猴头菇中含有多种氨基酸等物质，能够提高肌体免疫力，延缓衰老。0004 猴头菇的有效药理成分尚未完全研究清楚，到目前为止已从猴头菌中分离得到许多化合物。但已知有确切疗效的是猴头菇多，猴头菇多糖是最主要的活性物质，多糖具有广泛的生物学活性，如免疫调节剂、抵抗肿瘤增殖、抵抗病原感染、降低糖尿病患者的血糖浓度、降低患者血脂浓度等的作用。0005 猴头菇多糖目前已制成各种药物及保健品，深受人们喜爱。猴头多糖应用前景广泛，已吸引了越来越多研究者的注意。进一步开展猴头菇多糖的分离纯化等实验研究，对药物和食品开发以及猴头菇。
8、资源的利用都具有重要的意义。0006 目前常用的猴头菇多糖的提取方法有碱提法、酸提法、盐提法还有热水浸提法。稀酸、稀碱法，试剂用量少，仪器均为常规仪器，因此操作简单易行。但稀酸、稀碱条件下，易使多糖发生糖苷键的断裂，部分多糖发生水解而使多糖的提取率减少，而且杂质含量，也比较多，有一定的适用范围，所以本发明在水提的基础上，复合微波、超声提取，使细胞内容物更大量的释放，同时加入酶解提取，去除了蛋白等杂质，大大提高了多糖的提取含量。发明内容0007 本发明的目的是提供一种高效提取猴头菇多糖的方法，复合微波、超声提取，使细胞内容物更大量的释放，同时加入酶解提取，去除了蛋白等杂质，最后进行超滤分离，使其。
9、收率高、纯度好。0008 本发明的目的通过以下技术方案来实现 ：一种高效提取猴头菇多糖的方法，该提取方法具体步骤为 ：（1）材料预处理 ：取干燥猴头菇，粉碎，过 50 120 目筛，得干燥猴头菇粉末，按干燥猴头菇粉末与蒸馏水 1 ：5 35 的重量配比，加入蒸馏水，于 0 65得温度条件下，浸泡1-5 小时，得到待提取物 ；（2）微波提取 ：取步骤（1）的待提取物，放入微波中，调节微波的功率为 500-1000W，处说 明 书CN 104480162 A2/3 页4理时间为 5-15min ；（3）超声提取 ：把步骤（2）微波处理后的物质置于超声波中，在 0 60的温度条件下，用 5 20KH。
10、z 超声波萃取 0.5h 2.0h，过滤，得到滤液 1 ；（4）酶解提取 ：调节滤液 1 的 pH 为 3 6，加入足量纤维素酶，在 30 60的温度条件下，水解 0.5h 3.0h，离心分离取滤液 2，调滤液 2 的 pH 为 3 6，加入足量果胶酶，在30 60的温度条件下，水解 0.5h 1.5h，离心分离取滤液 3，调滤液 3 的 pH 为 3 6，加入足量木瓜蛋白酶，在 30 60的温度条件下，水解 l.0h 2.0h，离心分离取滤液 4，备用；（5）超滤分离 ：调节滤液 4 的 PH 值为 8-9，加入体积为滤液 4 体积 0.5-1.0 倍的 30% 双氧水，于 40-45的温度。
11、下搅拌 0.5h-1h，以 5k 的聚砜膜超滤，收集分子量 1000 道尔顿以上的组分 ；（6）真空干燥：取步骤（5）中得到的分子量1000道尔顿以上的组分，在真空度 -0.095MPa，干燥温度 20-50的条件下，干燥 20min，得到猴头菇多糖。0009 所述纤维素酶，为酶治性为 10000 20000 u/g 的纤维素酶，质量为滤液 1 质量的0.5-1.0 倍。0010 所述果胶酶，为酶活性为1500025000 u/g的果胶酶，质量为滤液2质量的1.0-1.5 倍。0011 所述木瓜蛋白酶，为酶活性为 800000-1000000 u/g 的木瓜蛋白酶，质量为滤液 3质量的 0.5。
12、-1.5 倍。0012 本发明的有益效果 ：1、本发明采用微波、超声的提取方法，微波可穿透萃取介质，直接作用于物料内部，使内部温度迅速上升，增大目标物质在介质中的溶解度，质量稳定，所制得产品纯度高，生物活性高 ；2、针对猴头菇子实体本身含有纤维素、果胶、蛋白质等杂质的干扰，筛选适用于此的纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶反应体系，使杂质充分脱除，猴头菇粗多糖得率可达 15.3% ；3、采用双氧水脱色，条件温和，不易损坏多糖结构，且副产物为水，绿色环保，符合保健食品的生产要求 ；4、采用聚砜膜，将切向流过滤技术应用到猴头菇多糖的制备中，在过滤的同时也对聚砜膜表面冲刷，使膜表面不会形成杂质大分子凝胶层，。
13、从而确保稳定，快速的超滤速度，大大缩短工艺时间，便于工业化生产。具体实施方式0013 实施例 1（1）材料预处理 ：取干燥猴头菇（可由新鲜猴头菇经自然风干得到），粉碎，过 80 目筛，得猴头菇干燥粉末，按重量配比加入 10 倍质量的蒸馏水，于 50 65下，侵泡 4 小时 ；（2）微波提取 ：取步骤（1）的待提取物，放入微波中，调节微波的功率为 500W，处理时间为 10min ；（3）超声提取 ：接着把步骤（2）的物质放入超声波中，20 60下用 5 20KHz 超声波萃取 0.5h，过滤，取滤液 1 ；滤渣可重复进行以上操作，滤液进行下一步提取 ；说 明 书CN 104480162 A3/。
14、3 页5（4）酶解提取 ：调节滤液 pH 为 4.5，加入足量纤维素酶，30 60水解 0.5h，离心取滤液 2 调 pH 为 4.5，加入足量果胶酶，30 60水解 0.5h，离心取滤液 3 调 pH 为 4.5，加入足量木瓜蛋白酶，30 60水解 l.0h，离心，取滤液 4 ；（5）超滤分离 ：调节滤液 4 的 PH 值为 8-9，加入体积为滤液 4 体积 0.5-1.0 倍的 30%，双氧水，于 40-45保温搅拌 0.5h-1h，以 5k 的聚砜膜超滤，收集分子量 1000 道尔顿以上的组分 ；（6）真空干燥 ：在真空度 -0.095MPa，干燥温度 20-50下，干燥 20min，得。
15、到猴头菇多糖。0014 提取的猴头菇多糖得率为 19.05%。0015 实施例 2（1）材料预处理 ：取干燥猴头菇（可由新鲜猴头菇经自然风干得到），粉碎，过 80 目筛，得猴头菇干燥粉末，按重量配比加入 10 倍质量的蒸馏水，于 50 65下，侵泡 4 小时 ；（2）微波提取 ：取步骤（1）的待提取物，放入微波中，调节微波的功率为 800W，处理时间为 10min ；（3）超声提取 ：接着把步骤（2）的物质放入超声波中，20 60下用 5 20KHz 超声波萃取 1.0h，过滤，取滤液 1 ；滤渣可重复进行以上操作，滤液进行下一步提取 ；（4）酶解提取 ：调节滤液 pH 为 4.5，加入足量纤。
16、维素酶，30 60水解 1.0h，离心取滤液 2 调 pH 为 4.5，加入足量果胶酶，30 60水解 1.0h，离心取滤液 3 调 pH 为 4.5，加入足量木瓜蛋白酶，30 60水解 l.0h5，离心，取滤液 4 ；（5）超滤分离 ：调节滤液 4 的 PH 值为 8-9，加入体积为滤液 4 体积 0.5-1.0 倍的 30%，双氧水，于 40-45保温搅拌 0.5h-1h，以 5k 的聚砜膜超滤，收集分子量 1000 道尔顿以上的组分 ；（6）真空干燥 ：在真空度 -0.095MPa，干燥温度 20-50下，干燥 20min，得到猴头菇多糖。0016 提取的猴头菇多糖得率为 21.32%。说 明 书CN 104480162 A。