一种从樟子松树皮中提取醇溶性物质的方法.pdf

一种从樟子松树皮中提取醇溶性物质的方法，包括如下步骤：(1)将樟子松树皮粉碎成20～80目大小的颗粒，投入到正己烷/氯仿中，进行超声处理，得到混合物A；(2)对所述混合物A进行过滤，得到滤液a和滤渣；将滤液a进行蒸馏，蒸出正已烷/氯仿，得到脂类物质；(3)将所述滤渣投入到乙醇溶液中，对其进行超声处理；(4)对所述混合物B进行过滤，得到滤液b，对滤液b进行蒸馏，蒸出乙醇溶液，得到醇溶性物质的浓缩液，将所述浓缩液干燥得醇溶性物质。运用此方法提取的醇溶性物质中黄酮含量高，还含有芥子酸、开环异落叶松脂醇、9’-对羟基(反式)桂皮酸-7-羟基-开环异落叶松脂醇酯等有效成分，具有抗氧化、抗菌等功效。

权利要求书
1.  一种从樟子松树皮中提取醇溶性物质的方法，包括如下步骤：
(1)将樟子松树皮粉碎成20～80目大小的颗粒，投入到正己烷 /氯仿中，进行超声处理，所述超声处理的条件为：温度30～60℃，时 间15～60min，频率15～40KHz，得到混合物A；
(2)对所述混合物A进行过滤，得到滤液a和滤渣；将所述滤液a 进行蒸馏，蒸出正已烷/氯仿，得到脂类物质；
(3)将所述滤渣投入到乙醇溶液中，对其进行超声处理，所述 超声处理的条件为：温度30～55℃，时间15～60min，频率10～35KHz 得到混合物B；
(4)对所述混合物B进行过滤，得到滤液b，对滤液b进行蒸馏， 蒸出乙醇溶液，得到醇溶性物质的浓缩液，再将所述浓缩液置于35℃ 烘箱干燥12-24h，即得醇溶性物质。

2.  根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述正已烷/氯 仿中正已烷和氯仿的体积比为1:5～5:1。

3.  根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述颗粒与正已 烷/氯仿的质量体积比为1:10～1:30。

4.  根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述乙醇溶液的 浓度为40％～80％。

5.  根据权利要求1中所述的的方法，其特征在于，所述颗粒与乙 醇溶液的质量体积比为1:10～1:50。

6.  根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述步骤(1) 中的温度比步骤(3)中的温度高5～15℃，频率比步骤(3)中的频率 高5-10KHz。

7.  根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，包括如下 步骤：1)将樟子松树皮粉碎成20～80目大小的颗粒，投入到正己烷 /氯仿中，所述正已烷/氯仿，正已烷氯仿的体积比为1:1～1:2，所述颗 粒与正已烷/氯仿的质量体积比为1:15-1:20；进行超声处理，所述超声 处理的条件为：温度35～50℃，时间15～60min，频率25～35KHz；，得 到混合物A；
(2)对所述混合物A进行过滤，得到滤液a和滤渣；将滤液a进行 蒸馏，蒸出正已烷/氯仿，得到脂类物质；
(3)将所述滤渣投入到乙醇溶液中，所述乙醇溶液的浓度为 50％-80％，所述颗粒与乙醇溶液的质量体积比为1:20-1:25，对其进行 超声处理，所述超声处理的条件为：温度30～35℃，超声时间15～60min， 频率15～25KHz，得到混合物B；
(4)对所述混合物B进行过滤，得到滤液b，对滤液b进行蒸馏， 蒸出乙醇溶液，得到醇溶性物质的浓缩液，再将所述浓缩液置于35℃ 烘箱干燥12-24h，即得醇溶性物质。

8.  权利要求1-7任一项方法提取的醇类物质。

说明书一种从樟子松树皮中提取醇溶性物质的方法
技术领域
本发明属于植物有效成分提取工艺，具体地说，涉及一种超声波辅 助溶剂分段提取樟子松树皮中天然产物的方法。
背景技术
樟子松是我国三北地区主要优良造林树种之一，分布广泛，资源丰 富，樟子松树皮作为重要的林业副产物，其资源利用率较低。
研究表明，樟子松树皮用乙醇提取的醇溶性物质中含有多糖、酚性 物质、有机酸、鞣质、黄酮等有效成分。其中以黄酮为公认的具有多种 保健功效的天然提取物。樟子松中的油脂含量较低，约为树皮干重的 1％-3％。
由于樟子松树皮中油脂含量较低，因此没有引起人们的重视，当前 提取樟子松树皮中醇溶性物质的方法主要为直接用乙醇提取，运用该方 法，所得的醇溶性天然产物中黄酮的含量较低。
发明内容
针对当前的方法中，直接用醇类物质提取样樟子松树皮中的活性成 分的方法存在的提取率低的缺陷。本发明提供一种分段提取樟子松树皮 中天然产物的方法。
本发明所述从樟子松树皮中提取醇溶性物质的方法，包括如下步 骤：
(1)将樟子松树皮粉碎成20～80目大小的颗粒，投入到正己烷/ 氯仿中，进行超声处理，所述超声处理的条件为：温度30～60℃，时间 15～60min，频率15～40KHz；，得到混合物A；
(2)对所述混合物A进行过滤，得到滤液a和滤渣；将所述滤液a 进行蒸馏，蒸出正己烷/氯仿，得到脂类物质；
(3)将所述滤渣投入到乙醇溶液中，对其进行超声处理，所述超 声处理的条件为：温度30～55℃，超声时间15～60min，频率10～35KHz得 到混合物B；
(4)对所述混合物B进行过滤，得到滤液b，对滤液b进行蒸馏，蒸 出乙醇溶液，得到醇溶性物质的浓缩液，再将所述浓缩液置于35℃烘箱 干燥12-24h，即得醇溶性物质；
所述步骤(1)中的温度比步骤(3)中的温度高5～15℃，所述步 骤(1)中的频率比步骤(3)中的超声频率高5-10KHz。
本发明促所述正己烷/氯仿中正己烷和氯仿的体积比为1∶5～5∶1，由 于樟子松树皮中油脂含量低，用传统的有机溶剂如石油醚、乙醚等提取 效果不好，采用复合提取剂正己烷/氯仿提取效果明显改善。
本发明中所述颗粒与正己烷/氯仿的质量体积比为1∶10～1∶30。
本发明中所述乙醇溶液的浓度为40％～80％。
本发明中所述颗粒与乙醇溶液的重量体积比为1∶10～1∶50
本发明所述的提取方法包括如下的优选方案：
1)将樟子松树皮粉碎成20～80目大小的颗粒，投入到正己烷/氯仿 中，所述正己烷/氯仿，正己烷氯仿的体积比为1∶1～1∶2，所述颗粒与正 己烷/氯仿的质量体积比为1∶15-1∶20；进行超声处理，所述超声处理的条 件为：温度35～50℃，时间15～60min，频率25～35KHz；，得到混合物A；
(2)对所述混合物A进行过滤，得到滤液a和滤渣；将滤液a进行蒸 馏，蒸出正己烷/氯仿，得到脂类物质；
(3)将所述滤渣投入到乙醇溶液中，所述乙醇溶液的浓度为 50％-80％，所述颗粒与乙醇溶液的质量体积比为1∶20-1∶25，对其进行超 声处理，所述超声处理的条件为：温度30～35℃，超声时间15～60min， 频率15～25KHz，得到混合物B；
(4)对所述混合物B进行过滤，得到滤液b，对滤液b进行蒸馏，蒸 出乙醇溶液，得到醇溶性物质的浓缩液，再将所述浓缩液置于35℃烘箱 干燥12-24h，即得醇溶性物质；
所述步骤(1)中的温度比步骤(3)中的温度高5～15℃，所述步骤 (1)中的频率比步骤(3)中的超声频率高5-10KHz。
本发明提供的一种超声波辅助溶剂分段提取樟子松树皮中天然产 物的方法，具有如下优点：
(一)本发明采用的分段提取的方法，先提取脂类再提取醇溶性物 质，有效减少了醇提物中油脂的干扰，提高醇提物中黄酮等活性物质的 提取率，降低了后续纯化工艺的难度。
(二)采用本发明方法成功提取分离出脂类与醇溶性物质两类产 品，提取效率高，分离效果好，成功实现了将现代提取分离技术应用于 樟子松树皮的精细化利用，对樟子松树皮的多元化、高值化、精细化利 用具有重要的意义。
附图说明
图1：分段提取法所得醇溶性物质的LC/MS/MS谱图；
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特 别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手 段，所用原料均为市售商品。
以下实施例中使用的樟子松树皮采集自黑龙江省大兴安岭。
实施例1一种从樟子松树皮中提取醇溶性物质的方法
包括如下步骤：
(1)将20g樟子松树皮粉碎成20～80目大小的颗粒，并投入到 300mL的正己烷/氯仿中，正己烷与氯仿的体积比为1∶5，在35℃条件下 超声波作用30min，超声频率为25KHz。
(2)趁热对处理后的混合物进行真空抽滤，得到滤液a和滤渣。将 滤液a置于旋转蒸发仪进行减压蒸馏，蒸出正己烷/氯仿溶剂，得到脂类 物质。
(3)将步骤2)中的滤渣投入400mL、50％乙醇溶液中，在30℃条 件下超声波作用30min，超声频率为19KHz。
(4)趁热对处理后的混合物进行真空抽滤，得到滤液b。将滤液a 置于旋转蒸发仪进行减压蒸馏，蒸出乙醇溶液，得到醇溶性物质的浓缩 液，再将剩余物置于35℃烘箱干燥12h。
按此方法提取的樟子松树皮中的脂类物质为18.60mg/g，醇溶性物质 的总量为88.63mg/g。
用亚硝酸铝-硝酸铝-氢氧化钠显色法(以芦丁计)对所得的醇溶性 物质中的黄酮进行检测，其中黄酮含量为23.09mg/g。
实施例2一种从樟子松树皮中提取醇溶性物质的方法
(1)将20g樟子松树皮粉碎成30～60目大小的颗粒，并投入到 400mL的正己烷/氯仿中，正己烷与氯仿的体积比为1∶1，在50℃条件下 超声波作用60min，超声频率为30KHz。
(2)趁热对处理后的混合物进行真空抽滤，得到滤液a和滤渣。将 滤液a置于旋转蒸发仪进行减压蒸馏，蒸出正己烷/氯仿溶剂，得到脂类 物质。
(3)将步骤2)中的滤渣投入500mL、80％乙醇溶液中，在35℃条 件下超声波作用60min，超声频率为25KHz。
(4)趁热对处理后的混合物进行真空抽滤，得到滤液b。滤液b用 旋转蒸发仪进行减压浓缩，蒸出乙醇溶剂，得到脂溶性物质的浓缩液， 将浓缩液置于35℃烘箱干燥16h，得到醇溶性物质。
按此方法提取的樟子松树皮中的脂类物质为24.72mg/g，醇溶性物质 的总量为95.24mg/g。
用亚硝酸铝-硝酸铝-氢氧化钠显色法(以芦丁计)测量对所得的醇 溶性物质中的黄酮进行检测，其中黄酮含量为26.28mg/g。
实施例3一种从樟子松树皮中提取醇溶性物质的方法
(1)将20g樟子松树皮粉碎成30-70目大小的颗粒，并投入到 350mL的正己烷/氯仿中，正己烷与氯仿的体积比为1∶2，在40℃条件下 超声波作用50min，超声频率为35KHz。
(2)趁热对处理后的混合物进行真空抽滤，得到滤液a和滤渣。将 滤液a置于旋转蒸发仪进行减压蒸馏，蒸出正己烷/氯仿溶剂，得到脂类 物质。
(3)将步骤2)中的滤渣投入500mL、70％乙醇溶液中，在30℃条 件下超声波作用55min，超声波频率为25KHz。
(4)趁热对处理后的混合物进行真空抽滤，得到滤液b。滤液b用 旋转蒸发仪进行减压浓缩，蒸出乙醇溶剂，得到醇溶性物质的浓缩液， 将浓缩液置于35℃烘箱干燥14h，得到醇溶性物质。
按此方法提取的樟子松树皮中的脂类物质为24.35mg/g，醇溶性物质 的总量为93.52mg/g。
用亚硝酸铝-硝酸铝-氢氧化钠显色法(以芦丁计)测量对所得的醇 溶性物质中的黄酮进行检测，其中黄酮含量为25.86mg/g。
对比例1
同实施例2相比，区别仅在于，将步骤(1)中的正己烷/氯仿替换为 乙醚。按此方法提取的樟子松树皮中的脂类物质为10.72mg/g，醇溶性 物质的总量为100.24mg/g。
用亚硝酸铝-硝酸铝-氢氧化钠显色法(以芦丁计)测量对所得的醇 溶性物质中的黄酮进行检测，其中黄酮含量为19.28mg/g。
对比例2
同实施例2相比，其区别仅在于，所述步骤(1)和步骤(2)中的 超声波条件均为：在35℃条件下作用60min，超声频率为25KHz。
按此方法提取的樟子松树皮中的脂类物质为15.72mg/g，醇溶性物质 的总量为99.52mg/g。
用亚硝酸铝-硝酸铝-氢氧化钠显色法(以芦丁计)测量对所得的醇 溶性物质中的黄酮进行检测，其中黄酮含量为21.28mg/g。
对比例3
同实施例2相比，略去第步骤(1)和(2)提取油脂的操作，其他 操作相同。
按此方法提取的樟子松树皮中醇溶性物质的总量为103.68mg/g。
用亚硝酸铝-硝酸铝-氢氧化钠显色法(以芦丁计)测量对所得的醇 溶性物质中的黄酮进行检测，其中黄酮含量为20.15mg/g。
实验例1
实验对象：实施例2提取的醇溶性物质。
实验方法：利用高效液相色谱串联二级质谱分析检测醇溶性物质中 的物质组成。仪器型号：Thermo Scientific-Q Exactive，数据处理软件： Xcalibur。紫外检测器型号：Ultimate 3000，检测波长：280nm。柱型号： Hypersil Gold Dim(mm)1002.1。流动相：A为水，B为甲醇，流速： 200μL/min。洗脱梯度：0min，5％B→10min，10％B→30min，15％B→45 min，20％B→60min，30％B→70min，50％B→100min，50％B。离 子源：ESI-，m/z扫描范围：0-1500，喷雾电压(-)：2500.00。进样 量5μL。
实验结果：
实施例2的LC/MS/MS谱图如图1，对图1进行分析比对得到实施例2 的醇溶性物质中的成份组成如表1
表1

由表1可以看出，实施例2提取的醇溶性物质分离得到13个色谱峰， 通过HPLC-MS-MS分析，初步鉴定出其中8种主要成分，为黄杉素、橙 皮素、异鼠李素、落叶松内酯larixinol的黄酮成分，和芥子酸、开环异 落叶松脂醇、9’-对羟基(反式)桂皮酸-7-羟基-开环异落叶松脂醇酯1、 9’-对羟基(反式)桂皮酸-7-羟基-开环异落叶松脂醇酯2。
实验结论：
上述结果表明，采取分段提取法对樟子松树皮中的醇溶性物质进行 提取，可以得到黄酮类的活性成分，还可得到开环异落叶松脂醇、9’- 对羟基(反式)桂皮酸-7-羟基-开环异落叶松脂醇酯等活性成分。芥子 酸为中药芥子的有效成分之一，具有抗真菌、抗肿毒功效。9’-对羟基(反 式)桂皮酸-7-羟基-开环异落叶松脂醇酯和开环异落叶松酯为结构类似 于雌激素的一类化合物，具有抗氧化、抗有丝分裂、抗病毒、抗癌、较 弱的雌激素样作用、降低总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇。因此，该醇 溶性物质具有良好的功能性，可进一步地应用。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽 的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域 技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做 的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。