一种用于活血化瘀止痛的泡腾片及其制备方法 【技术领域】
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种用于活血化瘀止痛的泡腾片及其制备方法，本发明的泡腾片又称之为三七伤药泡腾片。
技术背景
以中药三七、蒸草乌、雪上一支蒿、冰片、骨碎补、红花、接骨木、赤芍组成的三七伤药片和三七伤药胶囊，在舒筋活血、散瘀止痛方面有着很好的疗效。方中三七为主药，《日华子本草》称“三七祛瘀、生新、消肿、定痛，可止血而不留瘀，行血而不伤新。”三七用于跌打瘀肿疼痛，外伤出血。草乌、雪上一枝蒿、接骨木为次药，三药祛风除湿，止痛效果特强，还能搜风剔络止关节痛，共同加强主药散瘀消肿、活血止痛的功效。佐以赤芍凉血散瘀、消肿骨；红花活血祛瘀，加强主药活血化瘀的功效；骨碎补归肝、肾，二者可补肾、活血，既能治疗伤筋引起的血瘀疼痛，又可针对其内因肝肾不足起一定的补虚作用，有标本兼治之效。辅药用冰片走串通络，引药至病所，使瘀血去新血生，经络通畅。诸药合用共奏舒筋活血、散瘀止痛之功效。
三七伤药片[《中国药典》2000年版一部，351]、三七伤药胶囊[国家药品监督管理局。国家中成药标准汇编(骨伤科分册)，191]及申请号为02133242的专利文献中，均采用以下的制备方法：三七、蒸草乌、雪上一支蒿三味药材粉碎成细粉；骨碎补、红花、接骨木、赤芍四味药材加水煎煮两次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05(80℃)的清膏。加入上述细粉，混匀，干燥，加入冰片细粉，混匀，即得。
三七主药以粉末入药，不仅增加了服用量，而且降低了生物利用度，直接影响了药物的治疗效果。骨碎补中以柚皮苷为主要有效成分的总黄酮能明显提高大鼠的骨密度[谢雁鸣，等。骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠骨密度和细胞因子IL-6、IL-4、TNFα水平的影响。中国中医基础医学杂志，2004，10(1)：34；]；红花的主要有效成分为黄酮类化合物[杨志福，等。红花有效成分及药理作用。西北药学杂志，2001，(16)：131]；接骨木的乙酸乙酯可溶性部分有很强的预防骨质疏松的作用[国外医学·中医中药分册，1997，19(5)：63]；赤芍中有效成分为丰富的苷类化合物[阮金兰，等。赤芍化学成分和药理作用的研究进展。中国药理学通报，2003，19(9)：965]；可见，利用水煎煮的方法提取上述四味药材中的有效成分是不科学、不合理地。蒸草乌和雪上一支蒿药材中的有效成分是生物总碱，适于用乙醇提取。
泡腾片是近年开发的以泡腾物料为崩解剂制成的一种新剂型，能在较短的时间内溶解，具有起效迅速、生物利用度高、携带方便的特点，特别适用于儿童、老人和不能吞咽固体制剂的患者，所以泡腾片具有剂型新颖，市场前景广阔的特点。
【发明内容】
本发明的目的在于提供一种三七伤药泡腾片及其制备方法。根据处方所含药材的特点，本发明采用40％-90％乙醇提取处方中三七、蒸草乌、雪上一支蒿、骨碎补、红花、接骨木、赤芍药材的有效成分；冰片用β-CD或HP-β-CD包合；再与药用辅料组合，制备成泡腾片。本发明的产品活性成分的含量显著增加，药效也得到很大提高，而这并非是由于泡腾片本身的剂型所带来的效果。
本发明通过以下技术方案实现：
一、工艺制法
(1)三七伤药泡腾片的原料药材组成重量份为：
三七40-60 蒸草乌40-60
雪上一支蒿15-30 冰片1.00-1.10
骨碎补470-510 红花140-180
接骨木750-800 赤芍70-100
(2)三七伤药泡腾片的原料药材组成重量份为：
三七52.5 蒸草乌52.5
雪上一支蒿23 冰片1.05
骨碎补492.2 红花157.5
接骨木787.5 赤芍87.5
(3)取三七、蒸草乌、雪上一支蒿、骨碎补、红花、接骨木、赤芍药材，粉碎，以40％-90％乙醇作溶剂提取两次，每次加入相当于药材重量6-12倍的溶剂；第一次提取1-3小时，第二次提取1-2小时；合并乙醇提取液，过滤，50℃时浓缩滤液至相对密度为1.15-1.30，喷雾干燥、粉碎，得到提取物；将冰片缓慢加入β-CD或HP-β-CD水溶液中，50℃搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，过滤，得到冰片包合物。
(4)本发明制剂组成为：提取物10-35份，冰片包合物2-8份，酸剂16-26份，碱剂30-60份，甜味剂1-10份，矫味剂1-5份。
(5)将提取物、冰片包合物与药用辅料(其中碱剂用聚乙二醇包裹)混合，用常规制药工艺技术制粒、干燥、整粒、压片、检验、包装，得到三七伤药泡腾片。
二、含量测定分析
1.高效液相色谱法测定三七伤药制剂中人参皂苷Rg1的含量
1.1仪器与试药 高效液相色谱仪包括LC-10ATvp型溶剂输送泵，SPD-10ATvp型紫外可见检测器(日本岛津公司)；N2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)；KQ3200型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，TGL-16G高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。色谱纯乙腈(德国默克公司)；水为三蒸水(自制)；其它试剂均为分析纯。三七伤药片(哈中药六厂)；三七伤药胶囊(杭州华东润康药厂)；三七伤药泡腾片(北京乾露春科技有限公司实验室提供)；人参皂苷Rg1对照品(中国药品生物制品检定所)。
1.2色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：迪马公司C18柱(5μm，150mm×4.6mm，I.D)；流动相：乙腈-水(30∶70)；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm。理论板数按人参皂苷Rg1记算应不低于3000。
1.3对照品溶液制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品6.25mg，置入20ml量瓶中，加入甲醇，超声使溶解，再加甲醇至刻度，即得。
1.4标准曲线制备 分别精密吸取上述对照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，在上述测定条件下进样测定，结果人参皂苷Rg1在1.5625μg～7.8125μg范围内呈良好线性关系，回归方程为Y＝256143X-6989，r＝0.9996。
1.5供试品溶液的制备 取本品10片，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液离心(12000rpm)10min，上清液作为供试品溶液。
1.6测定法 精密吸取供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，用标准曲线计算含量。结果见表1。
表1 三七伤药制剂中人参皂苷Rg1含量比较
组别 人参皂苷Rg1(mg/粒)
三七伤药片 0.525
三七伤药胶囊 0.533
三七伤药泡腾片 0.587
2.高效液相色谱法测定三七伤药制剂中人参皂苷Rb1的含量
2.1仪器与试药 高效液相色谱仪包括LC-10ATvp型溶剂输送泵，SPD-10ATvp型紫外可见检测器(日本岛津公司)；N2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)；KQ3200型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，TGL-16G高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。色谱纯乙腈(德国默克公司)；水为三蒸水(自制)；其它试剂均为分析纯。三七伤药片(哈中药六厂)；三七伤药胶囊(杭州华东润康药厂)；三七伤药泡腾片(北京乾露春科技有限公司实验室提供)；人参皂苷Rb1对照品(中国药品生物制品检定所)。
2.2色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：迪马公司C18柱(5μm，150mm×4.6mm，I.D)；流动相：乙腈-水(30∶70)；流速：1.0ml/min；检测波长：208nm。理论板数按人参皂苷Rb1记算应不低于3000。
2.3对照品溶液制备 精密称取人参皂苷Rb1对照品6.00mg，置入20ml量瓶中，加入甲醇，超声使溶解，再加甲醇至刻度，即得。
2.4标准曲线制备 分别精密吸取上述对照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，在上述测定条件下进样测定，结果人参皂苷Rb1在1.50μg～7.50μg范围内呈良好线性关系，回归方程为Y＝3284716X-8264，r＝0.9999。
2.5供试品溶液的制备 取本品10片，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液离心(12000rpm)10min，上清液作为供试品溶液。
2.6测定法 精密吸取供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，用标准曲线计算含量。结果见表2。
表2 三七伤药制剂中人参皂苷Rb1含量比较
组别 人参皂苷Rb1(mg/粒)
三七伤药片 0.504
三七伤药胶囊 0.527
三七伤药泡腾片 0.583
3.高效液相色谱法测定三七伤药制剂中芍药苷的含量
3.1仪器与试药 高效液相色谱仪包括LC-10ATvp型溶剂输送泵，SPD-10ATvp型紫外可见检测器(日本岛津公司)；N2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)；KQ3200型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，TGL-16G高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。色谱纯甲醇(北京化学试剂有限公司)；水为三蒸水(自制)；其它试剂均为分析纯。三七伤药片(哈中药六厂)；三七伤药胶囊(杭州华东润康药厂)；三七伤药泡腾片(北京乾露春科技有限公司实验室提供)；芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所)。
3.2色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：迪马公司C18柱(5μm，250mm×4.6mm，I.D)；流动相：甲醇-水-磷酸(30∶70∶0.2)；流速：1.0ml/min；检测波长：230nm。理论板数按芍药苷峰记算应不低于3000。
3.3对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的芍药苷对照品10.6mg，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3.4标准曲线制备 精密吸取芍药苷对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；在上述条件下进样测定，结果表明，芍药苷在1.06～5.3μg的浓度范围内线性关系良好，回归方程为A＝1774.8C+14.66，相关系数r＝0 9996。
3.5供试品溶液的制备 取本品10片，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液离心(12000rpm)10min，上清液作为供试品溶液。
3.6测定法 精密吸取供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，用标准曲线计算含量。结果见表3。
表3 三七伤药制剂中芍药苷含量比较
组别 芍药苷(mg/粒)
三七伤药片 0.437
三七伤药胶囊 0.443
三七伤药泡腾片 0.513
结论：以上含量测定实验说明，本发明三七伤药泡腾片中的有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、芍药苷的含量比三七伤药片和三七伤药胶囊均有所提高，且本发明三七伤药泡腾片生物利用度更高，充分说明本发明的制备工艺具有实际意义。
三、崩解时限
按《中国药典》(2000年版一部)的崩解时限检查法(附录VII A)中泡腾片的检查方法，对本发明三七伤药泡腾片进行了崩解时限检查，结果3分钟内形成透明溶液。
四、稳定性
对本发明三七伤药泡腾片进行了室温留样的稳定性考察，结果在1.5年内稳定。
五、药理实施例
1.三七伤药制剂对切除卵巢骨质疏松模型大鼠椎体整体骨量的影响
实验动物：昆明种大鼠，体重210±10g。
实验药物：三七伤药片(哈中药六厂)；三七伤药胶囊(杭州华东润康药厂)；三七伤药泡腾片(北京乾露春科技有限公司实验室提供)；
实验方法：将40只大鼠，随机分为4组，每组10只。1组为正常对照组；2组为三七伤药片组；3组为三七伤药胶囊组；4组为三七伤药泡腾片组。在26℃恒温下实验。小鼠在戊巴比妥钠麻醉下，在腹正中左旁切口，轻取肠管，选择脂肪较少部位，轻展于一椭圆形有机玻璃片上，以超级恒温水浴灌流小盆夹层保持37℃恒温，用冷光源照明。所试药液0.5ml分别滴注于大鼠肠系膜局部，观察并记录直径为15μm～20μm的微动脉在给药前后的变化，以微动脉管径(直径)、血流状态改变时间为指标进行观察。结果见表4。
表4 三七伤药制剂对大鼠正常肠系膜微循环的影响X±S 组别 n 滴药前后管径最大 差值(mm) 管径扩张最大差值 所需时间(min) 正常组 三七伤药片组 三七伤药胶囊组 三七伤药泡腾片组 10 10 10 10 2.7±0.97 4.6±1.23* 4.7±1.68* 5.6±1.74**★ 6.93±2.24 5.37±1.63* 5.25±1.56* 4.12±1.24**★
和正常组相比：*P＜0.05、**P＜0.01；
和三七伤药片组、三七伤药胶囊组相比：★P＜0.05
三七伤药片、三七伤药胶囊、三七伤药泡腾片能够使大鼠肠系膜微动脉扩张，具有一定的扩血管作用；且三七伤药泡腾片在滴药前后管径最大差值、管径扩张最大差值所需时间两个指标方面与三七伤药片、三七伤药胶囊都有差异(P＜0.05)，说明三七伤药泡腾片的扩血管作用强于三七伤药片和三七伤药胶囊。
2.三七伤药制剂对醋酸所致小鼠扭体反应的影响
实验动物：昆明种小鼠，体重20±2g。
实验药物：三七伤药片(哈中药六厂)；三七伤药胶囊(杭州华东润康药厂)；三七伤药泡腾片(北京乾露春科技有限公司实验室提供)；
实验方法：将40只大鼠，随机分为4组，每组10只。1组为空白对照组，灌服同体积的0.5％CMC-Na；2组为三七伤药片组；3组为三七伤药胶囊组；4组为三七伤药泡腾片组。连续给药5天，末次给药1小时后，每鼠腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/10g，观察并记录小鼠15min内扭体次数。实验结果见表5。
表5 三七伤药制剂对醋酸所致小鼠扭体反应的影响X±S
组别 n 扭体次数(次)
空白对照组 10 39.24±9.76
三七伤药片组 10 28.93±8.66*
三七伤药胶囊组 10 24.57±7.89*
三七伤药泡腾片组 10 19.64±6.58**★
和正常组相比：*P＜0.05、**P＜0.01；
和三七伤药片组、三七伤药胶囊组相比：★P＜0.05
三七伤药片、三七伤药胶囊、三七伤药泡腾片均具有一定的镇痛作用；且三七伤药泡腾片的作用强于三七伤药片和三七伤药胶囊。
以上药理实验证明，用新工艺制备的三七伤药泡腾片比三七伤药片和三七伤药胶囊具有更好的治疗效果。
六、制备实施例
实施例1
(1)三七伤药泡腾片1000片的原料药材组成为：
三七45g 蒸草乌48g
雪上一支蒿20g 冰片1.02g
骨碎补500g 红花160g
接骨木775g 赤芍85g
(2)取三七、蒸草乌、雪上一支蒿、骨碎补、红花、接骨木、赤芍药材，粉碎，以90％乙醇作溶剂用多功能提取器提取两次，每次加入相当于药材重量6倍的溶剂；第一次提取2小时，第二次提取1小时；合并乙醇提取液，过滤，50℃时浓缩滤液至相对密度为1.18，喷雾干燥、粉碎，得到乙醇提取物104g；将冰片缓慢加入β-CD水溶液中，50℃搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，过滤，得到冰片β-CD包合物25g；
(3)组分配比：
提取物 104g
冰片包合物 25g
柠檬酸 244g
碳酸钠 282g
碳酸氢钠 282g
PEG6000 33g
甜蜜素 21g
柠檬香精 9g
制成 1000片
(4)将提取物、冰片包合物与药用辅料(用聚乙二醇包裹碱剂)混合，制粒、干燥、整粒、压片、检验、包装，得到三七伤药泡腾片1000片。
所得三七伤药泡腾片表面光洁、细腻。将一片泡腾片投入盛有200ml 20℃饮用水的250ml烧杯中，其很快沉于杯底，并立即放出大量气泡，片剂随之迅速溶解，在2.5分钟内形成透明溶液。
实施例2
(1)三七伤药泡腾片1000片的原料药材组成为：
三七49g 蒸草乌52g
雪上一支蒿23g 冰片1.07g
骨碎补483g 红花158g
接骨木787g 赤芍75g
(2)取三七、蒸草乌、雪上一支蒿、骨碎补、红花、接骨木、赤芍药材，粉碎，以75％乙醇作溶剂用多功能提取器提取两次，每次加入相当于药材重量10倍的溶剂；第一次提取2小时，第二次提取2小时；合并乙醇提取液，过滤，50℃时浓缩滤液至相对密度为1.30，喷雾干燥、粉碎，得到乙醇提取物185g；将冰片缓慢加入HP-β-CD水溶液中，50℃搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，过滤，得到冰片HP-β-CD包合物46g；
(3)组分配比：
提取物 185g
冰片包合物 46g
酒石酸 252g
碳酸氢钠 443g
PEG6000 37g
蛋白糖 24g
桔子香精 13g
制成 1000片
(4)将提取物、冰片包合物与药用辅料(用聚乙二醇包裹碱剂)混合，制粒、干燥、整粒、压片、检验、包装，得到三七伤药泡腾片1000片。
所得三七伤药泡腾片表面光洁、细腻。将一片泡腾片投入盛有200ml 20℃饮用水的250ml烧杯中，其很快沉于杯底，并立即放出大量气泡，片剂随之迅速溶解，在3分钟内形成透明溶液。
实施例3
(1)三七伤药泡腾片1000片的原料药材组成为：
三七54g 蒸草乌43g
雪上一支蒿17g 冰片1.05g
骨碎补492g 红花145g
接骨木760g 赤芍93g
(2)取三七、蒸草乌、雪上一支蒿、骨碎补、红花、接骨木、赤芍药材，粉碎，以55％乙醇作溶剂用多功能提取器提取两次，每次加入相当于药材重量8倍的溶剂；第一次提取3小时，第二次提取1小时；合并乙醇提取液，过滤，50℃时浓缩滤液至相对密度为1.20，喷雾干燥、粉碎，得到乙醇提取物253g；将冰片缓慢加入β-CD水溶液中，50℃搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，过滤，得到冰片β-CD包合物37g；
(3)组分配比：
提取物 253g
冰片包合物 37g
苹果酸 220g
碳酸氢钠 410g
PEG6000 40g
甜菊糖苷 28g
鲜橙香精 12g
制成 1000片
(4)将提取物、冰片包合物与药用辅料(用聚乙二醇包裹碱剂)混合，制粒、干燥、整粒、压片、检验、包装，得到三七伤药泡腾片1000片。
所得三七伤药泡腾片表面光洁、细腻。将一片泡腾片投入盛有200ml 20℃饮用水的250ml烧杯中，其很快沉于杯底，并立即放出大量气泡，片剂随之迅速溶解，在3分钟内形成透明溶液。
实施例4
(1)三七伤药泡腾片1000片的原料药材组成为：
三七58g 蒸草乌57g
雪上一支蒿27g 冰片1.06g
骨碎补475g 红花173g
接骨木793g 赤芍87g
(2)取三七、蒸草乌、雪上一支蒿、骨碎补、红花、接骨木、赤芍药材，粉碎，以40％乙醇作溶剂用多功能提取器提取两次，每次加入相当于药材重量12倍的溶剂；第一次提取3小时，第二次提取2小时；合并乙醇提取液，过滤，50℃时浓缩滤液至相对密度为1.25，喷雾干燥、粉碎，得到乙醇提取物347g；将冰片缓慢加入HP-β-CD水溶液中，50℃搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，过滤，得到冰片HP-β-CD包合物72g；
(3)组分配比：
提取物 347g
冰片包合物 72g
柠檬酸 83g
酒石酸 90g
碳酸钠 330g
PEG6000 38g
阿斯巴甜 16g
甜蜜素 11g
薄荷香精 13g
制成 1000片
(4)将提取物、冰片包合物与药用辅料(用聚乙二醇包裹碱剂)混合，制粒、干燥、整粒、压片、检验、包装，得到三七伤药泡腾片1000片。
所得三七伤药泡腾片表面光洁、细腻。将一片泡腾片投入盛有200ml 20℃饮用水的250ml烧杯中，其很快沉于杯底，并立即放出大量气泡，片剂随之迅速溶解，在3分钟内形成透明溶液。