用作降低血胆固醇药物的 取代氮杂环丁酮化合物 发明背景
本发明涉及在治疗和预防动脉粥样硬化中用作降低血胆固醇药物的取代氮杂环丁酮，本发明的取代氮杂环丁酮和用于治疗和预防动脉粥样硬化的胆固醇生物合成抑制剂的结合物，包含所述氮杂环丁酮和结合物的药物组合物，用于合成所述氮杂环丁酮的中间体的制备方法以及所述方法制得的新中间体。
在西方国家，动脉粥样硬化冠心病是造成死亡和心血管疾病的主要病因。动脉粥样硬化冠心病的危险因素包括高血压，糖尿病，家族史，男性，吸烟和血清胆固醇。总胆固醇水平超过225-250mg/dl，危险性显著升高。
胆固醇酯是动脉粥样硬化损害的主要成分并且是胆固醇在动脉壁细胞中的主要贮存形式。胆固醇酯的形成也是饮食胆固醇在肠内吸收的关键步骤。
据报道，已有少数几种氮杂环丁酮化合物可用于降低哺乳动物动脉壁中胆固醇和/或抑制含胆固醇损害的形成。US4,983,597公开了用作抗血胆固醇过多药物的N-磺酰基-2-氮杂环丁酮，Ram等人在Indian J.Chem.Sect.B，29B，12(1990)，P.1134-7中公开了作为降低血脂药物的4-(2-氧代氮杂环丁烷-4-基)苯氧基链烷羧酸乙酯。欧洲专利公开264,231中公开了作为血小板聚集抑制剂地1-取代-4-苯基-3-(2-氧代亚烷基)-2-氮杂环丁酮。欧洲专利199,630和欧洲专利申请337,549公开了将可抑制弹性蛋白酶的取代氮杂环丁酮用于治疗导致组织破坏的炎症，所述组织的破坏与各种疾病如动脉粥样硬化有关。WO93/02048公开了用作降低血胆固醇药物的取代β-内酰胺。
除调节饮食胆固醇之外，人和动物全身胆固醇体内平衡的调节还包括调节胆固醇生物合成，胆汁酸生物合成，以及含胆固醇血浆脂蛋白的降解代谢。肝脏是担负胆固醇生物合成和降解代谢的主要器官，为此，它是血浆胆固醇水平的主要决定因素。肝脏是极低密度脂蛋白(VLDL)的合成和分泌场所，其后这种极低密度脂蛋白在循环过程中代谢成低密度脂蛋白(LDL)。LDL是血浆中主要的载有胆固醇的脂蛋白，并且其浓度的增加与动脉粥样硬化的增大有关。
当采用各种方式使胆固醇的肠内吸收降低时，则较少胆固醇将被运送至肝脏。这种作用的结果导致肝脂蛋白(VLDL)的生成降低和肝血浆胆固醇(大部分为LDL)的清除率增加。因此，抑制肠内胆固醇吸收的净结果是血浆胆固醇水平降低。
已证明，3-羟基-3-甲基戊二酰基辅酶A还原酶(EC1.1.1.34)抑制剂对胆固醇生物合成的抑制是降低血浆胆固醇(Witzum，Circulation，80，5(1989)，P.1101-1114)和减轻动脉粥样硬化的有效方式。业已证明，HMG CoA还原酶抑制剂和胆汁酸螯合剂对血脂过多病人的联合治疗比采用这两种药剂的任一种单独治疗时更有效(Illingworth，Drugs，36(Suppl.3)(1988)，P.63-71)。
发明概述
本发明化合物由下述式I化合物或其药用盐代表：其中：
Ar1代表R3-取代的芳基；
Ar2代表R4-取代的芳基；
Ar3代表R5-取代的芳基；
Y和Z独立选自-CH2-，-CH(低级烷基)-和-C(＝低级烷基)-；
A代表-O-，-S-，-S(O)-或-S(O)2-；
R1选自-OR6，-O(CO)R6，-O(CO)OR9和-O(CO)NR6R7；R2选自氢，低级烷基和芳基；或者R1和R2一同代表＝O；
q为1，2或3；
P为0，1，2，3或4；
R5代表1-3个独立选自下述基团的取代基：-OR6，-O(CO)R6，-O(CO)OR9，-O(CH2)1-5OR9，-O(CO)NR6R7，-NR6R7，-NR6(CO)R7，-NR6(CO)OR9，-NR6(CO)NR7R8，-NR6SO2-低级烷基，-NR6SO2-芳基，-CONR6R7，-COR6，-SO2NR6R7，S(O)0-2-烷基，S(O)0-2-芳基，-O(CH2)1-10-COOR6，-O(CH2)1-10CONR6R7，邻-卤代，间-卤代，邻-低级烷基，间-低级烷基-(低级亚烷基)-COOR6，-CH＝CH-COOR6；
R3和R4各自独立代表1-3个独立选自R5，氢，对-低级烷基，芳基，-NO2，-CF3和对-卤代的取代基；
R6，R7和R8各自独立选自氢，低级烷基，芳基和芳基取代的低级烷基；
以及
R9代表低级烷基，芳基或芳基-取代的低级烷基。
优选的式I化合物中，Ar1代表R3-取代的苯基，尤其是(4-R3)-取代的苯基，Ar2优选为R4-取代的苯基，尤其是(4-R4)-取代的苯基，Ar3优选为R5-取代的苯基，尤为(4-R5)-取代的苯基。优选Ar1，Ar2和Ar3各自为单取代的。
Y和Z优选为-CH2-。R2优选为氢。R1优选为-OR6，其中R6为氢，或易代谢成羟基的基团(如定义如上的-O(CO)R6，-O(CO)OR9和-O(CO)NR6R7)。同样优选其中R1和R2一同代表＝O的化合物。
q和p之和优选为1或2，较优选为1。优选其中p为零且q为1的化合物，更优选其中p为零，q为1，Y为-CH2-且R1为-OR6，尤其当R6为氢的化合物。
另一组优选化合物中，Ar1代表R3-取代的苯基，Ar2代表R4-取代的苯基且Ar3代表R5-取代的苯基。同样还优选下述化合物，其中Ar1代表R3-取代的苯基，Ar2代表R4-取代的苯基，Ar3代表R5-取代的苯基，且p和q之和为1或2，尤其是1。更优选的化合物中，Ar1代表R3-取代的苯基，Ar2代表R4-取代的苯基，Ar3代表R5-取代的苯基，p为零且q为1。
A优选为-O-。
R3优选为-COOR6，-CONR6R7，-COR6，-SO2NR6R7，S(O)0-2-烷基，S(O)0-2-芳基，NO2或卤代。R3更优选为卤代，尤其是氟代或氯代。
R4优选为氢，低级烷基，-OR6，-O(CO)R6，-O(CO)OR9，-O(CO)NR6R7，-NR6R7，COR6或卤代，其中R6和R7各自独立优选为氢或低级烷基，以及R9优选为低级烷基。R4更优选为氢或卤代，尤其是氟代或氯代。
R5优选为-OR6，-O(CO)R6，-O(CO)OR9，-O(CO)NR6R7，-NR6R7，-(低级亚烷基)-COOR6或-CH＝CH-COOR6，其中R6和R7各自独立优选为氢或低级烷基，以及R9优选为低级烷基。R5较优选为-OR6，-(低级亚烷基)-COOR6或-CH＝CH-COOR6，其中R6优选为氢或低级烷基。
本发明还涉及制备式II手性β-氨基酯中间体的新方法：
其中Ar20代表Ar2，适当保护的羟基取代的芳基或适当保护的氨基取代的芳基，Ar30代表Ar3，适当保护的羟基取代的芳基或适当保护的氨基取代的芳基，以及-C(O)OR10代表手性醇的酰基残基，
上述中间体用于制备式III手性3-未取代氮杂环丁酮：
其中Ar20和Ar30的定义同上。
式II化合物的制备方法包括：
使式R10OC(O)CH2Br手性醇的溴代乙酸酯，(其中R10OH为光学纯手性醇)，式Ar20-N＝CH-Ar30亚胺(其中Ar20和Ar30的定义如上)与锌反应制得式IIβ-氨基酯。
用格利雅(Grignard)试剂环化式IIβ-氨基酯可以使式II中间体转化成式III手性3-未取代氮杂环丁酮。
本发明还涉及式II新中间体，即下述式II化合物：
其中Ar20代表R4-取代的芳基，适当保护的羟基取代的芳基或适当保护的氨基取代的芳基；
Ar30代表R5-取代的芳基，适当保护的羟基取代的芳基或适当保护的氨基取代的芳基；
-C(O)OR10代表选自1-基，异松蒎基，(1S)-内冰片基，异基，反式-2-苯基环己基或苯基的光学纯手性醇的酰基残基；
R5代表1-3个独立选自下述的取代基：-OR6，-O(CO)R6，-O(CO)OR9，-O(CH2)1-5OR9，-O(CO)NR6R7，-NR6R7，-NR6(CO)R7，-NR6(CO)OR9，-NR6(CO)NR7R8，-NR6SO2-低级烷基，-NR6SO2-芳基，-CONR6R7，-COR6，-SO2NR6R7，S(O)0-2-烷基，S(O)0-2-芳基，-O(CH2)1-10-COOR6，-O(CH2)1-10CONR6R7，邻-卤代，间-卤代，邻-低级烷基，间-低级烷基，-(低级亚烷基)-COOR6，-CH＝CH-COOR6；
R4代表1-3个独立选自下述的取代基：R5，H，对-低级烷基，芳基，-NO2，-CF3和对-卤代；
R6，R7和R8独立选自H，低级烷基，芳基和芳基取代的低级烷基；以及
R9代表低级烷基，芳基或芳基取代的低级烷基。
本发明还涉及式I化合物在所需治疗的哺乳动物中作为降低血浆胆固醇水平和治疗或预防动脉粥样硬化的降低血胆固醇药物中的应用。
另一方面，本发明涉及一种药物组合物，它包含式I取代氮杂环丁酮和药用载体。本发明还涉及所述药物组合物作为降低血浆胆固醇水平和治疗或预防动脉粥样硬化的降低血胆固醇药物的应用，以及通过混合式I化合物和可药用载体制备所述组合物的方法。
本发明还涉及降低血浆胆固醇水平的方法，治疗或预防动脉粥样硬化的方法，这些方法包括给予所需治疗哺乳动物有效量本发明取代氮杂环丁酮胆固醇吸收抑制剂和胆固醇生物合成抑制剂的结合物。也就是说，本发明涉及取代氮杂环丁酮胆固醇吸收抑制剂在与胆固醇生物合成抑制联合用于治疗或预防动脉粥样硬化或降低血浆胆固醇水平方面的应用。同样地，本发明涉及胆固醇生物合成抑制剂在与取代的氮杂环丁酮胆固醇吸收抑制剂联合用于治疗或预防动脉粥样硬化或降低血浆胆固醇水平方面的应用。
另一方面，本发明涉及包括有效量取代氮杂环丁酮胆固醇吸收抑制剂、胆固醇生物合成抑制剂和可药用载体的药物组合物。还涉及所述组合物在治疗或预防动脉粥样硬化或降低血浆胆固醇水平方面的应用，以及通过混合取代氮杂环丁酮胆固醇吸收抑制剂，胆固醇生物合成抑制剂，和可药用载体制备所述组合物的制备。最后，本发明还涉及一种药盒，它包括在一个容器中含有有效量的取代氮杂环丁酮胆固醇吸收抑制剂和可药用载体，及在另一容器中含有有效量的胆固醇生物合成抑制剂和可药用载体。
详细描述
本文中所用术语“低级烷基”是指1至6个碳原子的直链或支链烷基。类似地，“低级亚烷基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链二价烷基链。
“芳基”是指苯基，萘基，茚基，四氢化萘基或2，3-二氢化茚基。
“卤代”是指氟，氯，溴或碘基。
在上面叙述中，其中R6，R7和R8被定义为独立选自一组取代基，这是指R6，R7和R8是独立选择的，而且当可变的R6，R7或R8在分子的存在超过一处时，这些存在是独立选择的(例如，当R1为-OR6，其中R6为氢时，R4可以是其中R6为低级烷基的-OR6)。同样R3，R4和R5独立地选自一组取代基，并且当超过一个R3，R4和/或R5存在时，取代基是独立选择的，本领域技术人员可以认识到取代基的大小和性质将会影响可能存在的取代基的数量。
本发明化合物至少具有一个不对称碳原子，因此，所有异构体，包括非对映体和内旋异构体在内也视为本发明的一部分。本发明包括纯态和混合形式的d和l异构体，包括外消旋混合物。采用常规方法，通过使用旋光纯或富旋光原料反应或通过分离式I化合物异构体可制备异构体。
本领域技术人员不难知道，对于某些式I化合物，一种异构体将比另一种异构体显示出更高的药理活性。
具有氨基的本发明化合物可与有机酸和无机酸形成可药用盐。成盐用合适的酸的例子有盐酸，硫酸，磷酸，乙酸，柠檬酸，草酸，丙二酸，水杨酸，苹果酸，富马酸，琥珀酸，抗坏血酸，马来酸，甲磺酸以及其它本领域技术人员公知的无机酸和有机羧酸。这类盐的制备是通过使游离碱与足够量所需酸接触，由此产生盐。游离碱可通过用合适的稀碱水溶液如稀碳酸氢钠水溶液处理而再生成。在某些物理性质方面，如在极性溶剂中的溶解度方面，游离碱与其相应的盐多少有点不同，但对于本发明的目的而言，所述盐在其他方面与其相应的游离碱是等效的。
本发明某些化合物是酸性的(如，具有羧基的那些化合物)。这些化合物与无机和有机碱形成可药用盐。这类盐的例子有钠盐，钾盐，钙盐，铝盐，金盐及银盐。同样还包括与药学上可接受的胺如氨，烷基胺，羟烷基胺，N-甲基葡糖胺等所形成的盐。
在本发明结合物中使用的胆固醇生物合成抑制剂包括HMG CoA还原酶抑制剂)，如洛伐他汀，普伐他汀，氟伐他停，昔伐司丁和C1-981；HMG CoA合成酶抑制剂，例如L-659，699((E，E-11-[3′R-(羟甲基)-4′-氧代-2′R-环氧丙烷基]-3，5，7R-三甲基-2，4-十一碳二烯酸)；角鲨烯合成抑制剂，例如Squalestatin 1；以及角鲨烯环氧酶抑制剂，例如NB-598((E)-N-乙基-N-(6，6-二甲基-2-庚烯-4-炔基)-3-[(3，3′-联噻吩-5-基)甲氧基]苯-甲胺盐酸盐)。洛伐他汀，普伐他汀和昔伐司丁为优选的HMG CoA还原酶抑制剂。
式I化合物可通过已知方法制备。例如，其中Ar1，Ar2，Ar3，R2和Zp的定义同上，Y为-CH2-，q为1，R1为OH，且A为-O-或-S-的式(I)化合物(即式Ia化合物)的制备如方法1所述：
方法1
室温下，在惰性气氛如N2中，用式Ar′-A′-M化合物(其中A′代表-O-或-S-，且M代表金属如钠，钾，锂或镁)在惰性溶剂如四氢呋喃(THF)中处理式1环氧化物取代的氮杂环丁酮，得到式Ia化合物。式1化合物在上述反应之前通过下述方法可迅速制备：用碱金属氢化物悬浮物在惰性溶剂如THF中，或者，当M为镁时，用烷基格利雅(Grignard)试剂如异丙基溴化镁溶液在相同溶剂中，处理Ar1-OH或Ar1-SH溶液。
另一方面，在试剂如ZnCl2存在下用Ar1-OH或Ar1-SH处理式1化合物也可制得式Ia化合物。
原料式1化合物的制备如下述方法所述(示例化合物中p为0，即Z不存在)，其中方法A制备在β-内酰胺3-和4-位为相对“反式”取向的式1a化合物，而方法B制备在β-内酰胺3-和4-位为“顺式”取向的式1b化合物：
方法A：
首先，将巴豆酰氯(2)与式3亚胺(其中Ar2和Ar3的定义同上)于惰性溶剂如CH2Cl2或THF中，在碱如三正丁基胺，三乙胺或二异丙基乙胺存在下回流，制得式4反式-取代的3-乙烯基-2-氮杂环丁酮。式4化合物然后在惰性溶剂如CH2Cl2中用氧化剂如MCPBA处理，此反应用试剂如Na2SO3水溶液骤冷并使用常规提取和分离技术，得到3-环氧乙烷基-2-氮杂环丁酮差向异构体混合物，它们可通过HPLC分离。
方法B：
低温下，如在-78℃，在合适溶剂如THF中用强碱如二异丙基氨化锂(LDA)处理式4的3-乙烯基-2-氮杂环丁酮，然后用位阻酸如2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)，冰乙酸或异戊酸处理，得到相应的顺式-3-乙烯基-2-氮杂环丁酮(4a)。按类似于方法A中所述的方法，氧化式4a化合物，制得式Ib化合物。
下述方法2说明了其中Ar1，Ar2，Ar3，R1，R2，Yq和ZP的定义同上，且A代表-O-或-S-的式I化合物(即式Ic化合物)的制备：
方法2：
在室温或升高的温度下，将式5活化羧酸衍生物，例如酰氯，其中Q为氯，以及L为离去基团如卤离子，与式3亚胺在惰性溶剂如CH2Cl2或甲苯中于碱如三烷基胺(例如，三乙胺或三正丁基胺)存在下反应。然后按方法1所述使式6中间体与式Ar1-A1-M化合物反应，制得式Ic化合物。
方法3说明了其中Ar1，Ar2，Ar3和Yq的定义同上，R1代表OH，R2代表H，P为零且A1代表-O-或-S-的式Id化合物的制备：
方法3：
低温下(如-70至-78℃)，将式7的3-未取代氮杂环丁酮在惰性溶剂如THF中用强碱如LDA或二环己基氨化锂处理，然后与式8醛反应。当3-未取代氮杂环丁酮为手性时，与醛8的反应产物是非外消旋。
式2，3，5，7和8起始原料是已知的，或者按本领域公知的方法制备。
式III手性起始原料(其中式7化合物为其例子)可通过环化式II手性β-氨基酯中间体制得，该中间体按上述新方法制备。式III化合物的制备步骤用下述反应流程说明：其中Ar20，Ar30和R10的定义同时。Ar20和Ar30中的羟基或氨基取代的芳基的合适保护基如下表所示。典型的R10OH旋光纯手性醇选自1-基，异松蒎基，(1S)-内冰片基，异基，反式-2-苯基环己基和苯基基。为制备优选的式III化合物，优选的旋光纯醇是1-基，(-)异松蒎基，(1S)-内冰片基，(+)-异基，(-)-反式-2-苯基环己基和(-)-苯基基。
在第一步骤中，将等摩尔量的式9溴代乙酸酯和式3亚胺与锌粉在惰性溶剂中，最好在锌活化剂如碘存在下，于10至30，优选23至25℃的温度下反应约24至48小时，其中的惰性溶剂如无水二噁烷，THF或乙醚。此反应还优选利用超声波作用来进行。生成物β-氨基酯采用常规方法纯化，例如，滤出锌粉，结晶出过量胺，然后将β-氨基酯结晶出；另外的β-氨基酯可通过闪式色谱回收。
在第二步骤中，β-氨基酯在-40至40℃，优选0℃至室温下，于醚类溶剂如THF中通过用格利雅试剂如异丙基溴化镁或乙基溴化镁处理而被环化。
环化之后，根据需要，保护基可通过本领域技术公知的方法除去。
式9起始原料按下述制备：在-40℃至室温下，优选-20℃至室温，使相应的手性醇的醇钠与溴代乙酰氯在惰性溶剂如THF或乙醚中反应。
对于各种不同的手性醇原料，在相应的3-未取代氮杂环丁酮中观测到下述对映体比例：
手性醇 比例
醇 60∶40
2-莰醇 60∶40
异醇 75∶25
异松蒎醇 75∶25
苯基环己醇 99∶1
苯基醇 99∶1
其中A代表-S(O)-或-S(O)2的式I化合物可通过用氧化剂如间-氯过苯甲酸(MCPBA)处理其中A代表-S-的相应化合物而制得。
在上述方法中未涉及的活性反应基可在反应期间用常规保护基保护，这些保护基在反应之后能用标准方法除去。下表1中示出了一些典型保护基：
表1
本申请发明人发现，本发明化合物可降低血清类脂水平，特别是血清胆固醇水平。业已发现，本发明化合物在动物模型中能抑制胆固醇的肠内吸收和显著降低肝脏胆固醇酯的形成。所以，本发明化合物凭借其抑制胆固醇的脂化和/或肠内吸收的能力，可以作为降低血胆固醇药物；因此本发明化合物可用于治疗或预防哺乳动物，特别是人的动脉粥样硬化。
除了上述化合物方面之外，本发明由此还涉及降低血清胆固醇水平的方法，该方法包括给予所需治疗的哺乳动物降低血胆固醇有效量的本发明式I化合物。该化合物最好在适宜口服给药的可药用载体中给药。
本发明还涉及包含本发明式I化合物和可药用载体的药物组合物。式I化合物可以以任何常规口服剂型给药，例如胶囊，片剂，粉剂，扁囊剂，悬浮液或溶液。该制剂和药物组合物可采用常规的药用赋形剂和添加剂及常规方技制备。这类可药用赋形剂和添加剂包括无毒相容性填料，粘合剂，崩解剂，缓冲剂，防腐剂，抗氧化剂，润滑剂，矫味剂，增稠剂，着色剂，乳化剂等等。
式I化合物的每日降低血胆固醇剂量为约每天每千克体重约0.1至约30mg，优选每千克体重约0.10至约15mg。因此，对于平均体重70Kg的病人，剂量水平为每天约5至约2000mg药物，优选约5至约1000mg，单剂量或分2-4分剂量服用。但是，确切的剂量由主治医生决定，并取决于所用化合物的效力，病人的年龄，体重，症状及对药物的反应。
对于本发明的结合物，其中取代氮杂环丁酮与胆固醇生物合成抑制剂联合施用，胆固醇生物合成抑制剂的典型日剂量为每天0.1至80mg/千克哺乳动物体重，可以以单剂量或多剂量给药，通常为每天一或两次：例如，对于HMG CoA还原酶抑制剂，每次服用约10至约40mg，每日1至2次，这样每天的总剂量为约10至80mg，而对于其它胆固醇生物合成抑制剂，用量为每次约1至1000mg，每日1至2次，每天的总剂量为约1mg至约2g。所用的结合物中任一组分的确切剂量由主治医师决定，并取决于所用化合物的效力，病人的年龄，体重，症状以及对药物的反应。
当结合物各组分单独用药时，每天所用的各组分剂量的次数不必相同，例如，当某一组分可能具有较长的活性持续时间时，该组分因此将需要较少的给药次数。
由于本发明涉及通过用活性成分结合物(其中所述活性成分可单独施用)治疗而降低血浆胆固醇水平，因此本发明还涉及以药盒形式合并独立的药物组合物。也就是说，涉及一种药盒，其中合并有两个独立单元：胆固醇生物合成抑制剂药物组合物和取代氮杂环丁酮胆固醇吸收抑制剂药物组合物。药盒最好包括独立组分的给药说明。当独立组分必须以不同剂型(如口服和非肠胃给药制剂)给药时，或者当以不同的用药间隔给药时，药盒形式是特别优越的。
以下为制备3-未取代氮杂环丁酮原料和式I化合物的实施例。所示立体化学为相当立体化学，除非另有说明。术语顺式和反式是指β-内酰胺的3-和4-位上的相对取向。
制备1
步骤1：制备(+)-反式-溴代乙酸2-苯基环己酯
在无水THF中溶解(+)-反式-2-苯基环己醇(0.0113mole)，冷却至-15℃，分批加入NaH(1.2eq)并搅拌30分钟。滴加溴代乙酰氯(1.5eq)并于室温搅拌过夜。冷却反应混合物至0℃并滴加叔丁醇(5ml)和水(10ml)骤冷。温热混合物至室温，用乙酸乙酯(EtOAc)稀释并依次用水(2×50ml)，盐水(2×50ml)洗涤。用MgSO4干燥有机层，过滤并浓缩。采用闪式硅胶色谱纯化所得残留物，用己烷→5％EtOAc)/己烷洗脱。
步骤2：制备下式化合物
回流Zn粉(2.88g，44mmol)和碘(0.3g，1.2mmol)的无水二噁烷(50ml)溶液1小时，然后冷却至室温。将烧瓶浸入超声波浴中，加入步骤1产物(7.4mmol)和4-苄氧基苯亚甲基(4-氟)苯胺(1.87g，6mmol)的混合物并于室温超声处理48小时。用硅藻土滤出锌粉并浓缩滤液。所得残留物再溶于最少量EtOAc中；1小时后，滤出结晶的未反应亚胺。真空浓缩滤液并将所得残留物再溶于最少量CH3OH中，以结晶出所需要的β-氨基酯(1.2g，2.2mmol)。浓缩母液并用闪式硅胶色谱层析，用10％己烷/EtOAc洗脱，得到另外的β-氨基酯(0.3g)。M.P.129-131℃；
元素分析C34H34FNO3：
计算值：C，78.01；H，6.50；N，2.67；
实测值：C，77.62；H，6.65；N，2.74。
步骤3：0℃下，用乙基溴代镁(1.2eq)处理步骤2产物(0.18mmole)在THF(5ml)的溶液，搅拌4小时并将反应温热至室温。反应用NH4Cl水溶液(10ml)骤冷并用乙醚(50ml)提取。用MgSO4干燥有机层并浓缩。采用硅胶板制备色谱分离产物，用20％EtOAc/己烷洗脱。采用手性分析HPLC AS柱分析产物，用异丙醇∶己烷(20/80)洗脱：两种对映体的保留时间在0.5ml/min流速下分别为15.3和16.4分钟。
实施例1步骤1：
1小时内，向回流的三正丁胺(7.23ml，0.03moles)和对甲氧基亚苄基苯胺(3.19g，0.015moles)的CH2Cl2(100ml)溶液内滴加入巴豆酰氯(1.81ml，0.02moles)的CH2Cl2(50ml)溶液。加完之后回流16小时，然后冷却至室温。用水(2×100ml)和盐水(1×100ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得到油与过量己烷一同搅拌，过滤得到黄色固体(2.5g)。残留物通过硅胶色谱纯化，EtOAc/己烷(1∶5)洗脱，得白色固体(2.0g，49％产率)，m.p.119-120℃，EIMS：M+＝279。
步骤2：室温下，向搅拌的步骤1产物(化合物A)(1.0g，0.0036moles)的CH2Cl2(40ml)溶液内分批加入MCPBA(1.9g，0.01moles)。36小时后，反应通过滴加10％Na2SO3水溶液骤冷。分出水层，有机层依次用5％NaHCO3(2×50ml)，水(1×50ml)和盐水(1×50ml)洗涤，Na2SO4干燥并浓缩。所得残留物通过硅胶色谱纯化，用EtOAc/己烷(2∶1)洗脱，得到环氧化物差向异构体混合物，为灰白色固体(1.00g，96％产率)。进一步用HPLC纯化，用5％EtOAc/CH2Cl2洗脱，得到：
较低极性环氧化物：0.27g，m.p.85-88℃，EIMS：M+295。
较高极性环氧化物：0.54g，m.p.138-141℃，EIMS：M+295。
步骤3：室温下，向NaH(0.53g60％油分散物，0.013moles)的THF(35ml)悬浮液中加入4-氟苯酚(2.26g，0.02moles)并搅拌30分钟，直至得到澄清溶液。加入步骤2的主要产物(化合物B-1)(2.0g，0.067moles)并于室温搅拌3天。反应混合物用EtOAc稀释，先用水(1×30ml)，然后用盐水(2×3ml)洗涤，Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得棕色油(3.1g)。此油用硅胶色谱纯化，EtOAc/己烷(1∶2)洗脱，得到外消旋混合物形式的标题化合物(1.23g，45％产率)(Rel(1′S，3S，4S)-1-苯基-3-[1-羟基-2-(4-氟苯氧基)乙基]-4-(4-甲氧基苯基)-2-氮杂环丁酮)。
采用制备ChiracelAS HPLC柱拆分步骤3的外消旋物，用己烷-异丙醇(80∶20)洗脱，得到：
实施例2
向化合物C(5.0g，13.4mmols)的CH2Cl2(70ml)溶液内加入MCPBA(7g，40mmols)和NaHCO3(3g)。在氮气氛搅拌36小时(反应约95％完成)，然后加入少量(CH3)2S(约1ml)并搅拌30分钟。将酸性副产物提取到NaHCO3水溶液内并弃之。盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥并真空除去溶剂。粗残留物用硅胶色谱纯化，20％乙酸乙酯(EtOAc)/己烷→30％EtOAc/己烷洗脱，得到：
异构体1(化合物D-1)，1.7g，EIMS：M+＝389；
异构体2(化合物D-2)，2.3g，EIMS：M+＝389。
步骤2：
向4-氟苯酚(0.715g，6.38mmols)的THF(20ml)溶液内加入80％NaH(100mg，3.5mmols，己烷预洗涤)的THF悬浮液。待鼓泡停止之后，向此溶液中加入步骤1产物(化合物D-1)(0.45g，0.00115moles)的THF溶液，并在氮气氛下将反应于室温下保持2天。反应混合物用Na2CO3水溶液(20ml)处理，产物用EtOAc提取，MgSO4干燥并真空除去溶剂。所得残留物用硅胶色谱纯化，5％EtOAc/CH2Cl2→40％EtOAc/CH2Cl2洗脱。
步骤3：步骤2产物(化合物E)(0.185g，0.00037moles)的乙醇溶液用10％Pd/C(120mg)处理。在抽气真空下搅拌，然后导入N2，重新此步骤数次以除去氧气。通入氢气并维持在1大气压下反应18小时。真空除去氢气并再导入N2。反应混合物通过Celite过滤并浓缩成玻璃状。用制备TLC纯化，15％EtOAc/CH2Cl2洗脱，得0.102g标题化合物(rel-(1′S，3S，4S)-1-(4-氟苯基)-3-[1-羟基-2-[4-氟苯氧基]乙基)-4-(4-羟基苯基)-2-氮杂环丁酮)。HRMS FAB：C23H20NO4F2(M+1)计算值412.1360；实例值412.1368。元素分析，计算值：C＝67.15，H＝4.64，N＝3.41；F＝9.25；实测值：C＝67.00，H＝4.87，N＝3.26，F＝9.09。
采用制备ChiracelAS HPLC柱拆分外消旋1-(4-氟苯基)-3-[1-羟基-2-[4-氟苯氧基]-乙基)-4-(4-羟基苯基)-2-氮杂环丁酮，己烷-异丙醇(70∶30)洗脱，得到：
实施例3
采用实施例1步骤2的较低极性异构体(化合物B-2)，按照实施例1步骤3的过程，得到标题化合物(Rel(1′R，3S，4S)-1-苯基-3-[1-羟基-2-(4-氟苯氧基)乙基]-4-(4-甲氧基苯基)-2-氮杂环丁酮)，为外消旋物。m.p.125-129℃，HRMS FAB：M+1计算值＝408.1611，实测值＝408.1600。
实施例4
采用类似于实施例1步骤3的方法，用4-氟苯硫醇代替4-氟苯酚并用乙醚替代EtOAc进行稀释。在浓缩提取的产物之后，用乙醚-己烷结晶，得白色固体(0.3g，70％)，m.p.129-130℃，MS：HRMS FAB：计算值：424.1383，实测值：424.1394。
实施例5
0℃下，向实施例4产物(0.27g，0.637mmols)的CH2Cl2(20ml)溶液中分批加入MCBPA(0.12g，0.695mmols)并搅拌2小时。反应用(CH3)2S(0.5ml)骤冷，用CH2Cl2稀释，5％NaHCO3(2×20ml)，水(1×20ml)和盐水(1×20ml)洗涤，Na2SO4干燥，过滤并浓缩。所得残留物用硅胶色谱纯化，EtOAc/己烷(1∶1)和(2∶1)洗脱，得到两种组分：
5A，较高极性组分：0.22g；
5B，较低极性组分：0.0259g，HRMS FAB：计算值：456.1281，实测值：456.1280。
进一步用HPLC纯化5A，25％己烷/EtOAc洗脱，得异构体A和B：
异构体A(较低极性，5A-1)：m.p.141-143℃；HRMS FAB：计算值：440.1332，实测值：440.1348；
异构体B(较高极性，5A-2)：m.p.176-179℃；HRMS FAB：计算值：440.1332，实测值：440.1352。
实施例6步骤1：
通过用1eq正丁基锂(5.7mmols，3.6ml 1.6M己烷溶液)处理二环己基胺的THF冷(0℃)溶液制备二环己基氨化锂(5.7mmols)的THF(40ml)溶液。冷却此溶液至-70℃并通过套管加入化合物F(1.74g，5mmols)的THF预冷(-70℃)溶液。15分钟后，在搅拌下缓慢加入4-氟苯氧基乙醛(1g，6.5mmols)的THF溶液。30分钟后，在-78℃用冰乙酸(0.6ml)终止反应。将产物提取到乙醚中。乙醚层用NaHCO3水溶液洗涤，MgSO4干燥并真空蒸发溶剂。所得残留物用硅胶色谱纯化，3∶1己烷/EtOAc→1∶1EtOAc/己烷洗脱。浓缩所需部分，得到三种组分，G1，G2和G3。
步骤2：采用类似于实施例2步骤3中所述的方法除去化合物G1，G2和G3中的苄基基团，得到化合物6a，6b和6c。
采用ChiracelAS制备HPLC柱色谱分离外消旋化合物6a成其对映体。己烷/异丙醇(70∶30)洗脱。(化合物6a与实施例2的产物相同)。
6b：m.p.130-131℃。
6c：HRMS FAB：计算值：412.1360，实测值：412.1364。
实施例7
将氮杂环丁酮-化合物H(1.7g，7mmol)溶于无水THF(50ml)并冷却至-78℃。以THF溶液(10ml)形式加入新制的LDA(1.2eq)并于-78℃下搅拌45分钟。滴加氟代苯氧基乙醛(1.3g，1.2eq)的THF(5ml)溶液，并搅拌4小时。温热反应混合物至0℃并用NH4Cl(50ml)骤冷反应。用乙醚(200ml)提取，用MgSO4干燥有机相，过滤并浓缩。用硅胶闪式色谱纯化所得残留物，己烷→15％EtOAc/己烷洗脱。NMR和色谱分析表明7A与实施例1的产物相同，且7B与实施例3的产物相同。
实施例8
室温下，用NaH悬浮物(0.017g60％油分散物，0.42mmols)处理实施例1，步骤3产物(0.15g，0.37mmols)的THF溶液。15分钟后。在搅拌下加入CH3I(0.07ml，1.12mmols)并在室温保持16小时。EtOAc稀释混合物，用盐水提取，有机层用Na2SO4干燥并真空蒸发溶剂。所得油用硅胶制备薄层色谱纯化，EtOAc/己烷(1∶3)洗脱，得60mg标题化合物。HRMSFAB(M+1)：计算值：422.1768；实测值：422.1763。
实施例9(M+1)390.
用氯铬酸吡啶鎓(0.55g，2.5mmols)和碱性氧化铝(0.4g)处理实施例1，
步骤3产物(0.3g，0.7mmols)的CH2Cl2溶液。室温搅拌3天，通过硅藻土板过滤并用CH2Cl2洗涤。产物用硅胶色谱纯化，EtOAc/己烷(1∶3)洗脱，得0.23g标题化合物。HRMS FAB(M+1)：计算值：406.1455；实测值：406.1422。
实施例10
按类似于实施例1步骤3中所述的方式处理实施例1，步骤2的环氧化物(化合物B-1)，用苯酚替代4-氟苯酚，得标题化合物，m.p.132-135℃，MS FAB：(M+1)390。
实施例11
按实施例7中所述步骤处理制备1的氮杂环丁酮，随后按实施例2，步骤3中所述除去苄基保护基，得标题化合物，异构体A：m.p.147-150℃；HRMS FAB(M+1)：计算值：426.1517；观测值：426.1520。
异构体B；m.p.146-148℃；HRMS FAB(M+1)：计算值：426.1517，实测值：426.1508。
实施例12
按实施例9中所述步骤处理实施例2，步骤2的产物，随后按实施例2，步骤3中所述除去苄基保护基，得到标题化合物：m.p.129-130℃HRMS FAB(M+1)：计算值：410.1216，实测值：410.1204。
实施例13
向实施例2所得的对映体B(0.025g，0.06mmole)和吡啶(0.024ml，0.296mmole)的CH2Cl2(5ml)溶液内加入过量乙酰氯(0.01ml，0.14mmole)，并于室温搅拌2小时。混合物用CH2Cl2稀释，水及盐水洗涤，Na2SO4干燥并蒸发溶剂。所得油用制备HPLC纯化，EtOAc∶己烷(1∶3)洗脱，得标题化合物：HRMS计算值：496.1558；实测值：496.1572。
以下制剂实例说明了本发明的某些剂型。在各制剂中，术语“活性化合物”表示式I化合物。
实施例A片剂
编号 成分 mg/片 mg/片
1 活性化合物 100 500
2 乳糖USP 122 113
3 玉米淀粉，食品级，
10％净化水糊 30 40
4 玉米淀粉，食品级 45 40
5 硬脂酸镁 3 7
总计 300 700
制备方法
在合适混合机中混合1号和2号成分10-15分钟。用3号成分将混合物成粒。如果需要，通过粗筛(如1/4″，0.63cm)研磨湿颗粒。干燥湿颗粒。如有必要，将干燥颗粒过筛，并与4号成分混合，混合10-15分钟。加入5号成分并混合1-3分钟。用适当的压片机将混合物压制成合适大小和重量的片剂。
实施例B
胶囊
编号 成分 mg/片 mg/片
1 活性化合物 100 500
2 乳糖USP 106 123
3 玉米淀粉，食品级 40 70
4 硬脂酸镁NF 4 7
总计 250 700
制备方法
在合适的拌和机中混合1，2和3号成分10-15分钟。加入4号成分并混合1-3分钟。用合适的包囊机将混合物填充到适当的两截式硬明胶胶囊内。
包含胆固醇生物合成抑制剂的代表性制剂是本领域公知的。可以预料，当两种活性成分以单一组合物形式给药时，利用本领域技术人员的知识，很容易变换取代氮杂环丁酮的上述剂型。
用下述方法测定式I化合物的体内活性
低脂血剂在高脂血仓鼠中的体内试验
仓鼠分成数组，每组6只，并对它们喂用控制胆固醇的食物(含0.5％胆固醇的Purina Chow#5001)七天。监测食物消耗情况以确定食物中胆固醇在试验化合物存在下的暴露情况。每日第一次喂食时即给动物服用试验化合物一次。给药采用管饲法，或单独给予0.2ml玉米油(对照组)，或者给予试验化合物的玉米油溶液(或悬浮液)。对所有濒死或身体条件较差的动物实施安死术。七天后，肌内注入克他命麻醉动物并断头处死。将血液收集到含有EDTA的Vactutainer管内进行血浆类脂分析并切除肝脏供组织类脂分析。数值以相对于对照组类脂的百分降低率表示。
采用大体如上所述的仓鼠体内试验方法，对于优选的式I化合物，得到下式数据。下表中化合物用相应的实施例号表示；数值以相对于对照组的百分变化率表示，因此，负值表示阳性脂质降低作用。 实施例号 百分降低率 剂量mg/Kg 血清胆固醇 胆固醇酯 5A1 12 6b -12 -9 0 -71 -27 -39 10 1 10
对于式I外消旋化合物或式I化合物的活性非对映体或对映体，当以1-10mg/Kg剂量给药时，化合物显示出-96至-15％胆固醇酯降低率，以及-51至0％血清胆固醇降低率。胆固醇酯降低率是更重要的活性量度，并且活性化合物优选显示出-30至-96％，较优选，-50至-96％的胆固醇酯降低率。