新的光学活性三唑衍生物，其制备 方法，抗真菌剂和其应用方法 本发明涉及新的光学活性的三唑衍生物或其盐，其制备方法，含有该衍生物或其药学上可接受的盐为活性成分的抗真菌剂，和其应用方法。
近些年来，由免疫缺陷或使用抗癌药品导致的缺乏免疫力的宿主身上的真菌感染已成为诱发由于真菌感染造成的真菌病的严重问题。于是，为解决这个难题研究出了各种抗真菌剂。
EP-A-333059公开了与下述的本发明的式(I)表示的衍生物结构相似的三唑化合物具有农用抗真菌活性；但是，没有公开其医学用途和对人或动物的真菌感染的抑制作用。
本发明地目的是提供具有用于治疗人和动物的真菌病的抗真菌活性的光学活性三唑衍生物。
本发明的这一目的和其它目的通过下面式(I)表示的光学活性三唑衍生物或其药学上可接受的盐来实现：其中R1和R2相同或不同，各自代表氢原子，卤素原子或C1-C6卤代烷基；R3代表苯基，有一个或多个相同或不同的选自卤原子、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和氰基取代基的苯基，或者有一个或多个相同或不同的选自C1-C6烷基、苯基和卤代苯基取代基的甲硅烷基；和n是整数1或2，条件是R1和R2不能同时为氢原子。
而且，本发明的这一目的和其它目的通过制备式(I)表示的光学活性三唑衍生物的方法来实现，该方法包括用下式(II)表示的化合物：(其中R1和R2与如上定义的相同)与下式(III)表示的格利雅试剂反应：
R3-(CH2)nMgX (III)(其中R3和n如上定义；且X代表卤原子)。
此外，本发明的这一目的和其它目的通过药物组合物来实现，该药物组合物包括作为活性成分的药学有效量的式(I)光学活性三唑衍生物或其药学上可接受的盐，还有药学上可接受的载体或稀释剂。
进一步来说，本发明的这种和其它目的通过预防或治疗真菌病的方法来实现，该方法包括对需要这种预防或治疗的人或动物施用药学有效量的式(I)表示的光学活性三唑衍生物或其药学上可接受的盐，并选择性地结合有药学上可接受的载体或稀释剂。
更进一步来说，本发明的这种和其它目的通过式(I)表示的光学活性三唑衍生物或其药学上可接受的盐在制备抗真菌组合物中的应用来实现。
式(I)表示的外消旋化合物已有报道(EP-A-0679647)。该化合物含有两个不对称碳原子，有四种立体异构体。在EP-A-0679647中，把四种立体异构体的混合物分离成两对非对映体；一种是赤式和另一种是苏式。但是未进行每种非对映体的旋光拆分和不对称合成。因此，真菌病活性所必须的绝对结构是未知的。本发明从这4种异构体和其盐中发现了最有效的抗真菌活性的光学活性三唑衍生物的立体结构。此外，还同时发现了选择性制备光学活性三唑衍生物的方法。
在式(I)中，卤素原子的实例包括氯、氟、溴和碘原子。C1-C6烷基包括有1至6个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基。C1-C6卤代烷基的实例包括有1至6个碳原子且被一个或多个相同或不同的卤素原子取代的卤代烷基，例如氯甲基、氟甲基、溴甲基、碘甲基、二氯甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯乙基、氟乙基、溴乙基、碘乙基、二氯乙基、二氟乙基、三氟乙基、氯丙基、氟丙基和氟丁基、C1-C6卤代烷氧基的实例包括有1至6个碳原子且被一个或多个相同或不同的卤素原子取代的直链或支链的卤代烷氧基，例如氯甲氧基、氟甲氧基、三氟甲氧基和三氟乙氧基。
优选的是R1和R2相同或不同且各自代表氯原子或氟原子，和R3代表被氯原子、氟原子或氰基取代的苯基。
本发明式(I)表示的光学活性三唑衍生物或其酸加成盐可被用作抗真菌剂。该酸的实例包括无机酸(例如盐酸、硫酸)和有机酸(例如草酸、甲磺酸、硝酸)。
式(I)表示的光学活性三唑衍生物可通过例如以下方法制备，其中R1、R2、R3和n如上定义；X代表卤素原子。在式(III)中，用X表示的卤素原子的实例包括氯、氟、溴和碘原子。
将通过已知方法制备(例如在Chem.Pharm.Bull.，39：2241(1991)；Chem.Pharm.Bull.，41：1035(1993)中所述方法)的式(II)表示的化合物与由式(III)表示的格利雅试剂制备的反应剂和铜盐反应可制备式(I)表示的光学活性三唑衍生物。在EP-A-0421210和EP-A-0473387中报道了式(II)表示的化合物，该化合物用作起始物来合成与本发明结构不同的抗真菌化合物。在一些文章中也报道了在铜盐存在下格利雅试剂和环氧化物的反应(Org.Synth.，69：1(1990).，Tetrahedron，37：3879(1981).，J.Org.Chem.，48：4131(1983))。
尽管通常使用催化量的铜盐，但也可由等当量至过量的范围内选用合适量。铜盐的实例包括碘化铜、溴化铜、氰化铜、和溴化铜/二甲亚砜复合物。如果需要还可加入路易士酸，例如三氟化硼、氯化铝。
反应中使用的惰性溶剂可以是任意的，只要该惰性溶剂不抑制反应的进程就行。其实例包括的惰性溶剂例如乙醚、四氢呋喃、正己烷、甲苯和它们的结合使用。
另一方面，可以用常规方法例如光学活性高效液相色谱(HPLC)和选择性结晶将式(I)表示的光学活性三唑衍生物的外消旋混合物进行光学拆分制备出本发明的光学活性三唑衍生物。
式(I)表示的本发明光学活性三唑衍生物是用于预防或治疗人和动物的真菌病的抗真菌剂，该真菌病例如对于真菌(如发癣菌属、含珠菌属、曲霉属)的局部真菌感染，粘膜真菌感染和系统真菌感染。
本发明衍生物作为抗真菌剂使用时，本发明的衍生物可加工成适于口服或肠胃外给药的剂型(例如液体、片剂、栓剂、乳剂、软膏、乳膏、洗液、硬膏)，可单独使用也可与药学上可接受的惰性载体或稀释剂形成组合物。
根据情况如年龄、体重和投药方式投药量可以任何适宜的量，但本发明的抗真菌剂可以0.05至100mg/kg的剂量给药，优选从0.5至50mg/kg，对成人进行系统治疗每天1至几个剂量。
就局部治疗而言，活性成分的浓度优选为从0.001至5％，且更优选从0.1至2％。
本发明的抗真菌剂可以与其它抗真菌剂或抗细菌剂(例如两性霉素B、曲古霉素、拟青霉素、克霉唑)一起使用。
现在，通过下述实施例更加详细地说明本发明，但是，可以理解的是本发明并不局限于此。
实施例1制备(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-4-(4-氟苯基)-3-甲基-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-醇(化合物1)：
向200mg碘化铜在8ml无水乙醚的悬浮液中加入在-30℃的10ml无水乙醚中由145mg镁和870mg 4-氟苄基氯制备的格利雅试剂溶液。在-20℃搅拌30分钟后，在同样温度加入500mg(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-3-甲基-2-[(1H-1，2，4-三唑-1-基)甲基]环氧乙烷的12ml无水乙醚溶液。在-20℃搅拌2小时后，加入饱和氯化铵水溶液并且用乙酸乙酯萃取目的产物。有机层用盐水洗涤并用无水硫酸镁干燥。减压馏出溶剂，剩余物用硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶1)。这样得到466mg无色油状化合物1的产物。
实施例2制备(2R，3S)-2，4-双(2，4-二氟苯基)-3-甲基-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-醇(化合物2)：
向200mg碘化铜在8ml无水乙醚的悬浮液之中，加入在-30℃的10ml无水乙醚中由145mg镁和1.24g 2，4-二氟苄基溴制备的格利雅试剂溶液。在-20℃搅拌30分钟后，在同样温度加入500mg(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-3-甲基-2-[(1H-1，2，4-三唑-1-基)甲基]环氧乙烷的12ml无水乙醚溶液。在-20℃搅拌2小时后，加入饱和氯化铵水溶液并用乙酸乙酯萃取目的产物。将有机层用盐水清洗并用无水硫酸镁干燥。减压馏出溶剂，剩余物用硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶1)。这样得到603mg无色油状产物的化合物2。
实施例3制备(2R，3R)-2-(2，4-二氟苯基)-3-甲基-4-三甲基甲硅烷基-1-(1H，1，2，4-三唑-1-基)丁-2-醇(化合物5)：
向200mg碘化铜的8ml无水乙醚悬浮液加入一份4.2ml在-30℃的12ml无水乙醚中由290mg镁和1.46g氯甲基三甲基甲硅烷制备的格利雅试剂的溶液，在10℃搅拌一小时后，在-20℃向其中加入300mg(2R，3S)-2-(2，4-二氟苯基)-3-甲基-2-[(C1H-1，2，4-三唑-1-基)甲基]环氧乙烷的10ml无水乙醚溶液。在同样温度搅拌二小时后，加入饱和氯化铵水溶液并用乙酸乙酯萃取目的产物。将有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤并用无水硫酸镁干燥。减压蒸出溶剂和把剩余物用硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶1)。这样得到245mg无水油状产物的化合物5。
实施例4制备(2R，3S)-4-(4-氰基苯基)-2-(2，4-二氟苯基)-3-甲基-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-醇(化合物7)：
(1)在150ml四氢呋喃中溶解19g 2，4-二氟苯基·乙基酮，接着，在干冰/丙酮浴冷却下，用20分钟滴加112ml 1N六甲基二硅叠氮化锂(Lithiumhexamethyl disilazide)的四氢呋喃溶液。
加完之后，在同样温度下将混合物搅拌1小时。用20分钟滴加14g 4-氰基苄基溴的50ml四氢呋喃溶液并将生成混合物在室温搅拌过夜。在向其中加入饱和氯化铵水溶液后，将混合物倾入水中并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤并用无水硫酸镁干燥。减压馏出溶剂和把剩余物用硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶9)。于是得到13g 2′，4′-二氟-2-甲基-3-(4-氰苯基)-2-苯基·乙基酮，产率为41％。
(2)将1.0g 60％的氢化钠悬浮于50ml二甲亚砜，在60℃搅拌1小时，接着将反应混和物冷却至15℃以下并向其中加入5.6g三甲基氧化锍碘化物，室温下搅拌一小时后，再次将混合物冷却至15℃以下并向其中加入2.4g 2，4-二氟-2-甲基-3-(4-氰基苯)-苯基·乙基酮的10ml二甲亚砜溶液，在60℃搅拌1小时后，把混和物冷却至室温，接着将其倾入冰水中并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤和用无水硫酸镁干燥。减压馏出溶剂后，得到2.3g 2-(2，4-二氟苯基)-3-甲基-(4-氰基苯基)-1，2-环氧丁烷，产率：95％。
(3)将2.3g 2-(2，4-二氟苯基)-3-甲基-(4-氰基苯基)-1，2-环氧丁烷溶于50ml N，N-二甲基甲酰胺，向其中加入2.1g 1，2，4-三唑和2.0g叔丁醇钾。在100℃搅拌二小时后，将混合物冷却至室温，再把其倾入冰水中并用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤和用无水硫酸镁干燥，减压馏出溶剂后，将剩余物用硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶1)，得到1.5g 4-(4-氰基苯基)-2-(2，4-二氟苯基)-5-甲基-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-醇，产率：52％。
(4)将1.2g 4-(4-氰基苯基)-2-(2，4-二氟苯基)-5-甲基-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基-)丁-2-醇溶于溶剂，通过高效液相色谱的分馏柱[μ-Bondarsphere(Waters Co.，LMT.)；19mm×15cm]分馏，得到0.5赤型化合物(较短保留时间)和0.4g苏型化合物(较长保留时间)。
将该赤型化合物，即(2R*，3S*)-4-(4-氰基苯基)-2-(2，4-二氟苯基)-3-甲基-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-醇用高效液相色谱的分馏柱进行光学拆分，于是得到光学活性化合物[[α]D＝-47.3℃(C＝0.11，甲醇)]。表1 表示按照上述实施例的方法制备的式(I)
表示的光学活性三唑衍生物的典型实施例。
表1HPLC：Chiralsel(商品名)OD(由Daicel Chemical Industries，Ltd.制造，乙醇∶正己烷＝3∶7，0.9ml/min，柱温：30℃)
制剂实施例1发明化合物 0.01份0.5％羧甲基纤维素 99.99份将这些组分混悬得到悬浮液。
制剂实施例2发明化合物 1.00份聚乙二醇400 99.00份将这些组分均匀溶解得到外用的液体制剂。
制剂实施例3发明化合物 2.00份聚乙二醇400 49.00份聚乙二醇4000 49.00份将这些组分加热熔化，混合在一起，接着冷却得到软膏
制剂实施例4发明化合物 3.00份1，2-丙二醇 5.00份硬酯酸甘油酯 5.00份鲸蜡 5.00份肉豆蔻酸异丙酯 10.00份多乙氧基醚 4.00份将这些组分加热再冷却，接着在搅拌下加入68.00份水得到乳膏。
制剂实施例5发明化合物 0.10份十八烷醇 5.00份鲸蜡醇 5.00份中链脂肪酸三甘油酯 10.00份
肉豆蔻酸异丙酯 5.00份
多乙氧基醚60 4.00份
脱水山梨醇-硬酯酸酯 1.00份
对羟基苯甲酸甲酯 0.14份
对羟基苯甲酸丙酯 0.06份
二丁基羟基甲苯 0.02份
纯化水 余量
将这些组分的混合物用惯用方法处理得到乳膏。
试验实施例1
将0.1ml Candida albicans IFO 1270(1.0×106 Cells/ml)接种在Sabouraud′s葡萄糖肉汤(9.8ml)，接着加入0.1ml每种试验化合物以适当浓度溶于二甲亚砜的溶液得到浓度10μg/ml和0.1μg/ml。在37℃振动培育两天后，测出其生长抑制率。结果列于表2。
表2
生长抑制率化合物 10μg/ml 0.1μg/ml 说明
(％) (％) 1 64 48 发明2 66 51 发明3 80 51 发明4 64 50 发明7 70 55 发明A 59 47 对照A：顺-1-乙酰基-4-[4-[[2-(2，4-二氯苯基)-2-(咪唑-1-基甲基)-1-3-氧杂环戊烷(oxolan)-4-基]甲氧基]苯基]哌嗪(名称：ketoconazole)
试验实施例2
将六周龄的ddY小鼠分成有10只小鼠的对照组和每组5只小鼠的试验组。将已接种在Sabouraud 葡萄糖琼脂上的4ml/kg的Candida albicans IFO1270(2.5×107 Cells/ml)于37℃下培育2小时后，将含有0.02％每种试验化合物的0.5％CMC水溶液(含有10％聚乙二醇400和0.1％吐温80)以每天5ml/kg的剂量对小鼠口服给药4天。计算接种10天后的活的细胞数并算出最后一天的存活率。结果列于表3。
表3化合物 存活率 说明
(％) 1 80 发明 2 60 发明 3 100 发明 4 40 发明 7 100 发明 A 40 对照
对照药物与例1中的A一样。
结果表明本发明的光学活性三唑衍生物是可用于治疗真菌病的抗真菌剂。
尽管已经详细尽地并参考具体实施例描述了本发明，但是很显然对于本领域熟练人员而言在不背离本发明的精神和在本发明的保护范围之内可以有多种变化和改进。