一种具有预防和延缓衰老作用的药物片剂及其制备方法 [技术领域] 本发明涉及一种具有增强人体免疫功能，并具有预防和延缓衰老作用的药物组合物片剂及其制备方法，尤其是一种含有大豆异黄酮、人参茎叶皂苷及原花青素等天然植物提取物的药物组合物片剂，该片剂亦可作为保健食品使用，对于增强人体免疫功能，预防和延缓衰老具有明显功效。
[背景技术] 近年来，随着人民生活水平的日益提高，人们对于健康的要求已经不能仅仅满足于对疾病的预防和治疗上，如何防止和延缓衰老的问题，已经越来越受到人们的重视。研究人员发现，大豆异黄酮、人参茎叶皂苷及原花青素等药物，对于延缓人体衰老都具有明显的功效。
异黄酮(Isoflavone)类化合物是一种天然存在的植物雌激素，在植物中它们的主要作用是抗氧化剂，在人和动物体内这类物质除有雌激素样作用外，还有其它生物活性。研究发现该类化合物大量存在于豆类作物中，是大豆中的一类非营养成分，但对人类有明显的保健作用，且无明显毒性，因此受到广泛重视。近年来对大豆异黄酮生理及保健作用的研究倍受重视，对大豆异黄酮的抗癌、抗衰老、防治心血管疾病、对骨质疏松的治疗作用等报道很多，是一种很有潜力的化学防治剂[1]。
人参茎叶皂甙(ginsenosideofstemandleaf，GSL)是人参茎、叶中的主要活性成分，其作用是多方面地[1]，有抗疲劳、抗衰老和改善学习记忆等作用，现在认为人参茎叶和人参根部一样也是一种高级营养品。既往研究发现：GSL改善学习记忆的机制与增强大脑肾上腺素(NE)能神经、5-羟色胺(5-HT)能神经功能有关[2]。
有资料表明，人参有效成分——人参茎叶皂甙可提高机体的免疫功能。经观察发现，人参茎叶皂甙对创伤小鼠脾脏、胸腺、肠系膜淋巴结病理形态学改变及淋巴细胞的变性与坏死具有一定的改善作用，且能明显提高创伤小鼠淋巴细胞膜的流动性，这说明人参茎叶皂甙在一定程度上可从器官——细胞——分子乃至基因转录水平纠正创伤后的细胞免疫功能低下[3]。
原花青素在欧美等国家享有“皮肤维生素”、“口服化妆品”的美誉。皮肤属于结缔组织，其中所含的胶原蛋白和弹性蛋白对皮肤的整个结构起着重要作用，胶原蛋白的适度交联，可以维持皮肤的完整性，而体内自由基氧化可使其过度交联，在皮肤上表现为皱纹和囊泡，原花青素可促使胶原蛋白的适度交联，有效清除自由基，从而保持皮肤柔顺、光滑。另外，弹性蛋白可使皮肤具有弹性，缺乏弹性蛋白的皮肤松弛无力，使人显得老态龙钟，弹性蛋白可被自由基或弹性蛋白酶所降解，原花青素具有清除自由基，阻断弹性蛋白酶的产生并抑制其活性，从而改善皮肤健康状况。原花青素防病保健功效的基础就是其清除自由基的能力。此外，它还具有较好的生物利用度，易于与胶原蛋白结合，稳定细胞膜及抗酶活性，这些能力与抗氧化能力协同使其有望成为一种颇具开发前景的保健品[4]。
将大豆异黄酮、人参茎叶皂苷以及原花青素等三种药物组方，结合并用，可以达到协同互补之功效，能够更好的发挥其增强人体免疫功能，预防和延缓衰老的作用。据查临床上至今尚未有使用以上三种药物组方制剂的报道，也没有类似的保健食品公诸于世。
[发明内容] 本发明的目的在于弥补现有技术的不足，向广大追求美好生活的人们，提供一种能有效增强人体免疫功能，并具有预防和延缓衰老作用的药物组合物片剂及其制备方法。
将大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素按照一定的比例组方，再配以相应的辅料，并经过常规的片剂制备工艺，即可得到本发明所述及的药物组合物片剂。该制剂可制成普通片剂或异形片剂，商品名为“京雷牌岁月无痕片”。以下是本发明所述“京雷牌岁月无痕片”的制备方法：
一.药物原料
1.大豆异黄酮——汉语拼音Dadou Yihuangtong，英文名soybean isoflavones；
大豆中异黄酮主要有以下3种构成：染料木苷(genistin)、大豆苷(daidzin)和6-甲氧基大豆苷(glicitin)，其总量约占大豆重的0.25％[5]；
2.人参茎叶皂苷——据国家药品标准记载如下：
人参茎叶总皂苷——汉语拼音Renshen Jingye Zongzaogan
英文名General Ginsenoside in extract of Ginseng stems and leaves
本品为人参茎叶的提取物，按干燥品计算，含人参皂苷Rg1(C42H72O14)不得少于7.0％，含人参皂苷Re(C48H82O18)不得少于23.0％。
[性状]本品为淡黄色或棕黄色无定形粉末，微臭；味苦；具吸湿性。
本品在甲醇或乙醇中易溶，在水中溶解，在乙醚或石油醚中几乎不溶。
[鉴别]见国家药品标准2002年第七分册P7-4，WS-10001-(HD-0591)-2002
3.原花青素——汉语拼音Yuanhuaqingsu，英文名leucocyanidins，或者procysnidins。
原花青素属双黄酮衍生物的天然多酚化合物，由不同数目的黄烷醇聚合而成，本发明所涉及的原花青素是以葡萄籽提取物5，7，3’，4’-四羟基黄烷-3醇(5，7，3’，4’-tetrahydroxyflavan-3-ol)，即(+)-儿茶素(+)-catechin、(-)-表儿茶素(-)-epicatechin为单位聚合而成的这类化合物[4]。
二.处方
药物原料：
大豆异黄酮(10～40)％，人参茎叶皂苷(1～60)％，原花青素(10～70)％
辅料：
微晶纤维素(5～40)％，淀粉(5～30)％，硬脂酸镁(0～10)％
三.制备工艺
第一步 按照处方给出的比例，以重量计，正确称取各原、辅料；
第二步 将大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素等三种药物原料混合均匀，经超微粉碎得到≤5μm的微粉药物原料混合物I备用；
第三步 将所得微粉药物原料混合物I与微晶纤维素、淀粉充分混合均匀后，加入适量10％乙醇溶液，制粒，在(40～60)℃温度条件下干燥后，得含有药物的混合物II备用；
第四步 将混合物II用整粒机整粒，压片，包衣，分装，灭菌，即得。
(将混合物II整粒后，还可酌情加入适量硬脂酸镁作为润滑剂，并充分混合均匀，压片，包衣，分装，灭菌，即得。)
[有益效果] 利用现有技术得到的抗衰老药物或保健食品种类繁多，不胜枚举。本发明所述及的具有增强人体免疫功能，并具有预防和延缓衰老作用的药物组合物片剂，商品名称为“京雷牌岁月无痕片”，具有以下有益效果：
一.理论分析
1.采用大豆异黄酮、人参茎叶皂苷和原花青素等高纯度的天然植物提取物为原料，服用剂量小，功效强，服用方便；
2.三种药物配合使用，其功效协同互补，其增强人体免疫功能和预防、延缓衰老的效果也更为明显；
3.采用大豆、人参茎叶、葡萄籽的高纯度天然植物提取物为药物原料，简化了制备工艺，有利于保证药品在制备过程中的卫生条件，使得广大使用者服用更加安全。
4.本发明所述及的“京雷牌岁月无痕片”为常规薄膜衣片，制备工艺简单，服用量小，服用方便，既可以作为药物使用，也可以用作保健食品，长期服用成本较低，具有更加广阔的市场前景。
二.实验结果
为了证明以上效果，针对本发明所述及的“京雷牌岁月无痕片”设计了果蝇寿命的实验，其结果如下：
1.实验材料
上海铁道大学医学院提供的美国野生型黑腹果蝇(Oigen)。
2.剂量选择
设一个空白对照组和四个剂量组，各剂量组饲料含受试物浓度分别为0％、0.013％、0.040％、0.120％、0.360％。
3.果蝇基础饲料
玉米粉8.5％、红糖6.5％、琼脂0.75％、丙酸0.5％、干酵母粉0.75％、水83％，pH＝7。
4.检测方法
卵、幼虫、蛹及成虫均培养在25±1℃，相对湿度(40～70)％的生化培养箱中。将常用基础饲料煮成粥后，分装于无菌培养试管中，每支培养管用无菌海绵塞封口，成虫基础饲料每四天更换一次。将培养管平放在培养箱内饲养，收集六小时内孵出的成虫进行分组，在次时间内孵出的果蝇均未交配。用乙醚麻醉后称重分组，选择个体大小相近的果蝇，每管20只，雌雄分养，每组雌雄果蝇各200只。在成虫期给受试物，受试物掺入到预先溶化的50℃基础饲料中，并保持各组pH值一致，每天定时统计果蝇存活数和死亡数，直至全部死亡，每组最后死亡的20只果蝇存活天数的平均数为该组的最高寿命，实验结束，计算平均寿命和最高寿命以及半数死亡时间。
实验数据用微软公司Excel软件进行方差分析统计。
5.实验结果
(实验结果中的受试物即本发明所述及的“京雷牌岁月无痕片”)
5-1 受试物对老龄小鼠心肌脂褐素的影响
表1受试物对老龄小鼠心肌脂褐素的影响(X±SD) 分组 受试物剂量(g/Kg.bw) 动物数(只)心肌脂褐素含量(μg/g组织重) P值空白对照组 0 12 5.4±1.8 -低剂量组 0.1 12 4.5±1.4 0.1447中剂量组 0.2 12 4.5±0.8 0.0890高剂量组 0.6 12 4.1±0.9* 0.0233
*与空白对照组相比有显著差异(p＜0.05)
表1表明，经口给予老龄小鼠不同剂量受试物45天后，与空白对照组相比，高剂量组心肌脂褐素含量降低24％(p＜0.05)。
5-2 受试物老龄小鼠血清丙二醛含量的影响
表2受试物老龄小鼠血清丙二醛含量的影响(X±SD) 分组 受试物剂量(g/Kg.bw) 动物数(只) 血清丙二醛(nmol/mL) P值空白对照组 0 12 4.6±0.7 -低剂量组 0.1 12 4.2±0.7 0.1408中剂量组 0.2 12 3.8±0.4** 0.0023高剂量组 0.6 12 3.6±0.3*** 0.0001
**与空白对照组相比有非常显著差异(p＜0.01)
***与空白对照组相比有极显著差异(p＜0.001)
表2表明，经口给予老龄小鼠不同剂量受试物45天后，与空白对照组相比，中、高剂量组血清丙二醛含量分别降低17％(p＜0.01)、22％(p＜0.001)。
5-3 受试物老龄小鼠血清SOD活力的影响
表3受试物老龄小鼠血清SOD活力的影响(X±SD) 分组 受试物剂量(g/Kg.bw) 动物数(只) 血清SOD活力(L/mL) P值空白对照组 0 12 263±26 -低剂量组 0.1 12 261±21 0.8551中剂量组 0.2 12 283±15* 0.0292高剂量组 0.6 12 284±18* 0.0311
*与空白对照组相比有显著差异(p＜0.05)
表3表明，经口给予老龄小鼠不同剂量受试物45天后，与空白对照组相比，中、高剂量组血清SOD活力分别提高8％(p＜0.05)、8％(p＜0.05)。
5-4 受试物老龄小鼠全血谷光甘肽过氧化物酶活力的影响
表4受试物老龄小鼠全血谷光甘肽过氧化物酶活力的影响(X±SD) 分组 受试物剂量(g/Kg.bw) 动物数(只) GSH-PX(L/mL全血) P值空白对照组 0 12 14.8±2.9 -低剂量组 0.1 12 14.3±2.8 0.6936中剂量组 0.2 12 14.4±2.7 0.7172高剂量组 0.6 12 14.0±2.0 0.4323
表4表明，经口给予老龄小鼠不同剂量受试物45天后，与空白对照组相比，各剂量组全血谷光甘肽过氧化物酶活力均无显著差异(p＞0.05)。
5-5 受试物对老龄小鼠体重的影响
表5受试物对老龄小鼠体重的影响(X±SD) 分组 受试物剂量 (g/Kg.bw) 动物数 (只) 实验前体重 (克) P值 实验后体重 (克) P值空白对照组 0 12 49.1±4.4 - 49.3±4.0 -低剂量组 0.1 12 48.9±5.5 0.9452 49.2±5.5 0.9463中剂量组 0.2 12 48.8±5.9 0.9075 49.4±5.4 0.9932高剂量组 0.6 12 48.8±5.7 0.9149 49.1±5.6 0.9178
表5表明，经口给予老龄小鼠不同剂量受试物45天后，与空白对照组相比，低、中、高剂量组体重均无显著差异(p＞0.05)。
5-6 每管果蝇平均体重
表6每管果蝇平均体重(X±SD) 受试物浓度％ 性别 样本数 每管果蝇平均体重(mg) P值 0 ♀ 200 19.9±0.7 - ♂ 200 15.3±0.5 - 0.013 ♀ 200 19.7±0.9 0.5040 ♂ 200 15.3±0.5 0.9317 0.040 ♀ 200 19.7±1.1 0.6763 ♂ 200 15.4±0.5 0.7332 0.120 ♀ 200 19.6±1.0 0.4248 ♂ 200 15.2±0.8 0.8710 0.360 ♀ 200 20.0±1.0 0.7932 ♂ 200 15.2±0.5 0.7312
表6表明，与空白对照组相比，各剂量组每管果蝇平均体重均无显著差异(p＞0.05)。
5-7 受试物对果蝇半数死亡时间的影响
表7受试物对果蝇半数死亡时间的影响 受试物浓度％ 性别 样本数 半数死亡时间(d) 0 ♀ 200 66 ♂ 200 60 0.013 ♀ 200 66 ♂ 200 60 0.040 ♀ 200 66 ♂ 200 63 0.120 ♀ 200 66 ♂ 200 69 0.360 ♀ 200 69 ♂ 200 59
5-8 受试物对果蝇寿命的影响
表8受试物对果蝇寿命的影响(X±SD) 受试物 浓度％ 性别 样本数 平均寿命(d) P值 最高寿命(d) P值 0 ♀ 200 66.0±11.1 - 79.9±1.4 - ♂ 200 57.8±13.5 - 81.0±2.6 - 0.013 ♀ 200 64.3±12.2 0.1570 82.1±2.3*** 0.0008 ♂ 200 60.1±14.6 0.1078 81.3±0.9 0.5719 0.040 ♀ 200 64.2±11.3 0.1085 81.6±3.6 0.0552 ♂ 200 62.9±13.3*** 0.0002 82.2±2.3 0.1276 0.120 ♀ 200 65.0±12.2 0.4013 80.1±1.3 0.7224 ♂ 200 65.2±14.2*** 1.717×10-7 84.7±2.8*** 0.0001 0.360 ♀ 200 66.8±10.4 0.4627 80.1±1.4 0.6521 ♂ 200 60.3±15.7 0.0882 83.2±2.6* 0.0113
*与空白对照组相比有显著差异(p＜0.05)
***与空白对照组相比有极显著差异(p＜0.001)
表7表8表明，与空白对照组(受试物浓度0％)相比，受试物浓度0.013％的雌性果蝇最高寿命延长3％(p＜0.001)；受试物浓度0.040％的雄性果蝇平均寿命延长9％(p＜0.001)；受试物浓度0.120％的雄性果蝇平均寿命延长13％(p＜0.001)，最高寿命延长5％(p＜0.001)，半数死亡时间延长9天；受试物浓度0.360％的雄性果蝇最高寿命延长3％(p＜0.05)。
三.本发明所述及的药物组合物片剂“京雷牌岁月无痕片”，已通过北京联合大学应用文理学院保健食品功能检测中心鉴定，结论如下：
经口给予老龄小鼠不同剂量的京雷牌岁月无痕片45天，与空白对照组相比：中剂量组(0.2g/Kg.bw)血清丙二醛含量降低17％(p＜0.01)，血清SOD活力提高8％(p＜0.05)。高剂量组(0.6g/Kg.bw)心肌脂褐素含量降低24％(p＜0.05)，血清丙二醛含量降低22％(p＜0.01)，血清SOD活力提高8％(p＜0.05)。实验前后各剂量组体重均无显著差异(p＜0.05)。
与空白对照组(受试物浓度0％)相比，受试物浓度0.013％的雌性果蝇最高寿命延长3％(p＜0.001)；受试物浓度0.040％的雄性果蝇平均寿命延长9％(p＜0.001)；受试物浓度0.120％的雄性果蝇平均寿命延长13％(p＜0.001)，最高寿命延长5％(p＜0.001)，半数死亡时间延长9天；受试物浓度0.360％的雄性果蝇最高寿命延长3％(p＜0.05)。
根据《保健食品的功能学评价程序和检测方法》判定：京雷牌岁月无痕片具有延缓衰老功能[6]。
[具体实施方式] 下面结合三个具体实施例对于本发明所述及的岁月无痕片制备技术方案作进一步说明。
实施例1
第一步 按照处方给出的比例，准确称取大豆异黄酮150g、人参茎叶皂苷40g、原花青素100g、微晶纤维素200g、淀粉200g、硬脂酸镁10g；
第二步 将大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素等三种药物原料混合均匀，经超微粉碎得到≤5μm的微粉药物原料组合物I备用；
第三步 将所得微粉药物原料组合物I与微晶纤维素、淀粉充分混合均匀后，加入适量10％PVP乙醇溶液，制粒，在(40～60)℃温度条件下干燥后，得含有大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素的药物组合物II备用；
第四步 将含有大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素的药物组合物II用整粒机整粒，并加入羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁，充分混合均匀，用常规的压片机压成异形片1000片，硬度控制在80牛顿左右，用浦力膜包衣粉包薄膜衣，分装，灭菌，即得。
以上各原辅料总重量为700g，制成1000片，每片为700mg，含有大豆异黄酮150mg(21.4％)，人参茎叶皂苷40mg(5.7％)，原花青素100mg(14.3％)。
实施例2
第一步 按照处方给出的比例，准确称取大豆异黄酮200g、人参茎叶皂苷40g、原花青素150g、微晶纤维素200g、淀粉100g、硬脂酸镁10g；
第二步 将大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素等三种药物原料混合均匀，经超微粉碎得到≤5μm的微粉药物原料组合物I备用；
第三步 将所得微粉药物原料组合物I与微晶纤维素、淀粉充分混合均匀后，加入适量10％PVP乙醇溶液，制粒，在(40～60)℃温度条件下干燥后，得含有大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素的药物组合物II备用；
第四步 将含有大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素的药物组合物II用整粒机整粒，并加入羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁，充分混合均匀，用常规的压片机压成异形片1000片，硬度控制在80牛顿左右，用浦力膜包衣粉包薄膜衣，分装，灭菌，即得。
以上各原辅料总重量为700g，制成1000片，每片为700mg，含有大豆异黄酮200mg(28.6％)，人参茎叶皂苷40mg(5.7％)，原花青素150mg(21.4％)。
实施例3
第一步 按照处方给出的比例，准确称取大豆异黄酮100g、人参茎叶皂苷20g、原花青素150g、微晶纤维素200g、淀粉220g、硬脂酸镁10g；
第二步 将大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素等三种药物原料混合均匀，经超微粉碎得到≤5μm的微粉药物原料组合物I备用；
第三步 将所得微粉药物原料组合物I与微晶纤维素、淀粉充分混合均匀后，加入适量10％PVP乙醇溶液，制粒，在(40～60)℃温度条件下干燥后，得含有大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素的药物组合物II备用；
第四步 将含有大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素的药物组合物II用整粒机整粒，并加入羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁，充分混合均匀，用常规的压片机压成异形片1000片，硬度控制在80牛顿左右，用浦力膜包衣粉包薄膜衣，分装，灭菌，即得。
以上各原辅料总重量为700g，制成1000片，每片为700mg，含有大豆异黄酮100mg(14.3％)，人参茎叶皂苷20mg(2.9％)，原花青素150mg(21.4％)。
部分参考资料：
1.周玲，苏黎红，侯金玲.大豆异黄酮研究概况.时珍国医国药2001，12-2P.157-158
2.赵晓民，宗瑞义，谢湘林，鲁澄宇，高允生，朱玉云.人参茎叶皂甙和胆碱合用对学习记忆的影响.营养学报2000，22-3P.266-270
3.徐祥，梁华平，王正国，朱佩芳，耿波，罗艳.人参茎叶皂甙提高创伤小鼠细胞免疫功能的实验研究.中医研究1997，12-10(6)P.19-22
4.赵超英，姚小曼.葡萄籽提取物原花青素的营养保健功能(综述).中国食品卫生杂志2000，12-6P.38-41
5.孙家莉.大豆异黄酮的抗癌作用。天津药学2001，4-13(2)P10-12
6.北京联合大学应用文理学院保健食品功能检测中心鉴定报告复印件