治疗尿频的药物及其制备方法 技术领域
本发明涉及一种治疗尿频的药物，具体说是以植物中草药为原料制成的治疗尿频的中成药，本发明还涉及该药物的制备方法。
技术背景
尿频即小便频数，是以尿次数多为临床症状的临床常见病，虽不致于危及生命，但给患者带来很大痛苦。西医认为多尿常与神经、肾、或代谢紊乱有关；中医认为，该病的病因病机多与肾气不固，膀胱湿热、肾阴亏虚，以及肺脾气虚有关。此外，尚有部分患者临证以寒热交错、虚实夹杂表现为主。小孩和老人易见夜间尿频症，其身心的健康受到严重地影响。老年人肾气渐衰，关阖不固，如伴中气不足，气虚下陷，就及易出现小便频数的症状。目前，西药中没有什么治疗此病的特效药。中药方面，卫媛萍报道用醒脾升陷汤加味治疗单纯性老年液尿频症(《新中医》1995年第5期第219页；《河南新医药学刊》1999年第6期第9页)；单明义用补中益气汤加味及一些自拟的处方治疗此病，均取得较好的治疗效果。谭健报道(《新中医》1992年第12期第48页)应用蛤蚧大补丸(由蛤蚧、杜仲、狗脊等15味药组成)治疗86例中老年夜尿频多症患者，其中显效35例，占40.7％，有效47例，占54.6％，无效4例，占4.7％，总有效率为95.3％。福田佳弘报道(《日本东洋医学杂志》1995年第5期第71页)以乌头、白术、肉桂、龙骨制成丸剂天雄散治疗17例尿频患者，其中显效4例，有效10例，无效3例。也有另外一些中成药可以治疗尿频，但这些都远远满足不了社会的需求，因为，用现代科学的技术和手段暂时还无法解释说明尿频症的发病机理，不同的患者也许发病的原因不尽相同，可能适应于不同的中成药。此外，现有地报道中大部分为传统的复方煎剂用于临床治疗，这种药汤对病人来说，服用量大，不便保存，不便于携带，给患者带来很多麻烦，因此，尽管中医有较多疗效满意的药物组合，但都是由于前述众多不便而不能大量推广。
【发明内容】
本发明的目的是提供一种以中草药为原料的药物，以有效治疗尿频。
本发明的另一目的是提供该药物胶囊剂的制备方法。
本发明所述的药物是由下述重量(份)配比的原料制成的药剂：
黄芪8～15 桑螵蛸4～10 升麻1～5
本发明药物的最佳重量(份)配比为：
黄芪12 桑螵蛸7 升麻1.5
上述用于治疗尿频的药物可制成药剂学上所说的任何一种剂型。
本发明所述药物的胶囊剂的制备方法是：
分别将黄芪、升麻干燥粉碎成碎块，桑螵蛸在-20℃冷冻后粉碎成碎块，按所述配比混合后，用乙醇溶液提取，提取液减压回收乙醇，并浓缩成浸膏使相对密度为1.10～1.20，加水将溶液悬浮起来，放置于4～10℃环境下，静置12～24小时，离心除去沉淀，上清液减压浓缩，成浸膏使相对密度为1.20～1.30，按以下重量比加入辅料，浸膏∶微粉硅胶∶硬脂酸镁∶乳糖为1∶1∶0.1∶0.1，制成颗粒，用筛整粒后装入胶囊制成胶囊剂。
本发明以黄芪补中健脾益气为君。《本草正义》曰：黄芪补益中土，温养脾胃，凡中气不振，脾土虚弱，清气下陷者最宜。桑螵蛸，咸甘平，入肝肾经，补肾固精，有利于三焦肺、脾、肾气化恢复；固涩小便，有利于膀胱约束之权，治疗遗尿，为本方陈药。桑螵蛸与黄芪配伍，可增强黄芪通补气健脾益肺力量。升麻，辛甘微寒，归肺、脾、胃经，善于引清阳之气上升，与黄芪配伍升阳之力增强，对于脾气下陷，小便不利有特殊治疗作用。三药合用，体现健脾益气，补气升提，化气行水，固涩小便治疗法则。
本发明所述药物疗效明显，经实验证明为低毒高效的尿频治疗药物。
为了更好地理解本发明的实质，以下用本发明药物的药理学实验和毒理学实验来说明其在治疗尿频中的功效作用。
1.动物急性毒性试验：
取昆明种小鼠50只(一级动物，合格证号为：医动字第310101001)，体重18～22g，雌雄各半，分5组，每组10只，禁食不禁水12小时，按剂量(151.11、136.0、122.4、110.16、99.144g生药/kg)分别给动物一次性灌服药物，记录动物毒性反应及死亡情况，连续观察7天，并计算LD50。
给药后5分钟，动物有倦卧、自发活动减少、呼吸加深加快等现象，后呼吸逐渐困难(张嘴并伴有腹部抽搐等)，并出现皮肤紫绀、腹泻，动物死亡时间从1小时15分到4天不等，死亡时呼吸较心跳先停，个别动物出现角弓反张现象。尸解发现，小肠有部分积液，其余脏器未见异常。
PEMS统计软件统计，统计结果见表1。
表1 小鼠一次性灌服的LD50统计结果
剂量 动物数 死亡率 估计概率单位
(X) (n) (P) Y0 Y1 Y2
151 10 1.000 6.811 6.300 6.400
136 10 0.700 6.037 5.700 5.800
122 10 0.400 5.263 5.100 5.100
110 10 0.500 4.489 4.500 4.500
99 10 0.100 3.722 3.900 3.900
加权直线回归方程：
Probit(Y)＝-22.9762+13.4672×1n(X)
药物给小鼠一次性灌服的LD50为119.50g生药/kg，该剂量相当于成人临床每日推荐用药量(0.333g生药/kg/日，以60kg计)的365倍，其95％的可信区间为116.97～122.07g生药/kg。
2.对大鼠正常尿液的作用
2.1初筛：取wistar大鼠(♂，一级动物，合格证号：医动字第310101002号)，适应代谢笼1天，同时禁食。第二天分两次给予生理盐水，第一次给3ml/100g，收集30分钟的尿液，第二次给予2ml/100g加30分钟的尿量作为水负荷，收集2小时的尿量，淘汰排泄率(2小时的尿量/给纯水量)低于20％和高于50％的动物。
2.2初筛后的大鼠随机分为4组，即大剂量、中剂量、小剂量、正常对照组。ig给药，1ml/100g，连续3天。末次给药后30分钟(立即收集30分钟的尿液)，各组给予生理盐水4ml/100g+30分钟的尿量(用生理盐水代替)收集2、4、6、9、12h的尿量，计算排泄率。
2.3将12h内的尿液混合，离心(1000转/分钟，10分钟)，取上清液测定k+、Na+、Cl-浓度。结果见表2、表3。
表2 药物对正常尿液的影响(排泄率)
组别 剂量 动物数 给水后各时间段排泄率(％)
(g/kg) (只) 2h 4h 6h 9h 12h
1 5 8 26.63±7.91 34.40±6.48 43.41±7.81 54.32±11.49 64.55±12.10
2 10 9 21.89±10.64* 30.57±11.53* 44.17±12.58 53.79±14.18 64.61±15.61
3 20 9 8.58±7.21** 15.56±7.46** 25.99±4.81** 33.30±5.09* 44.30±7.49**
对照组 / 9 31.78±8.91 40.22±9.33 48.86±9.43 56.55±9.88 66.07±11.02
注：*为与NS对照组相比P＜0.05，**为与NS对照组相比P＜0.01。
表3药物对正常尿液的影响(离子浓度)
组别 剂量 离子浓度(mmol/l)
(g/kg) k+ Na+ Cl-
1 5 68.09±12.16 76.65±15.83** 138.75±19.99**
2 10 89.58±15.09** 65.88±9.96** 144.04±13.30**
3 20 166.87±4.95** 24.48±11.45** 152.78±25.20**
对照 / 57.14±8.47 149.51±25.57 194.60±26.54
注：*为与NS对照组相比P＜0.05，**为与NS对照组相比P＜0.01。
结果表明：10g/kg、20 g/kg剂量组在前4小时能明显抑制正常大鼠尿液的排泄，但从6h、12h的总量来看，则只有20g/kg组有明显的抑制尿液的排泄。电解质排泄方面，本药物可明显抑制Na+和Cl-的排出，促进k+的排出，呈现明显的保钠排钾作用。
3.对大鼠的抗利尿作用
实验动物：Wistar大鼠，61只，全♂，一级动物，合格证号：医动字第310101002号。对照药物：垂体后叶素，南京新天生物化学制药有限公司提供，批号：0100502。
3.1初筛：取大鼠适应代谢笼1天，同时禁食。第二天分两次给予纯水，第一次给5ml/100g，收集30分钟的尿液，第二次给予3ml/100g加30分钟的尿量作为水负荷，收集2小时的尿量，淘汰排泄率(2小时的尿量/给纯水量)低于40％的动物。
3.2初筛后的大鼠随机分为6组，即大剂量、中剂量、小剂量、模型、垂体后叶素组、正常对照组。ig给药，1ml/100g，连续3天(垂体后叶素组sc给药，只给一次)。末次给药后30分钟(立即收集30分钟的尿液)，除指出对照组给生理盐水外，其余各组给予纯水5ml/100g，加30分钟的尿量(用生理盐水代替)收集1、2、3、4、5h的尿量，计算每小时的排泄率。结果见表4。
表4 药物对大鼠多尿的影响
动物 给水后各时间段排泄率(％)
剂量
组别
数
(g/kg)
1h 2h 3h 4h 5h
(只)
正常对照 / 8 13.96±11.31 29.32±22.89 15.02±10.97 16.33±8.20 16.3±14.44
模型组 / 8 42.05±12.55△△ 48.88±12.27 7.43±10.95 9.90±8.25 3.64±6.24
垂体后叶素10u/kg 8 15.87±9.12** 15.96±7.74** 19.66±10.71** 33.0±21.51 24.5±3.05**
1 5 8 54.83±25.68 33.12±11.61 7.13±9.47 8.08±8.85 8.06±7.78
2 10 8 38.21±18.57 25.40±10.25* 9.63±8.71 17.13±8.63 12.82±6.98
3 20 8 20.47±9.45** 13.95±5.29** 13.29±10.49 12.72±9.35 16.2±12.35
注：*为与模型组相比P＜0.05，**为与模型组相比P＜0.01，△为与正常对照组相比P＜0.05，△△为与正常对照组相比P＜0.01。
由表可见：10g/kg、20g/kg剂量对纯水致大鼠多尿模型有明显的抗利尿作用，作用时间集中在第1、2h。垂体后叶素在此时间段也有明显作用。
4.对猫的抗利尿作用
试验动物：猫，30只，♂♀各半；对照药物：垂体后叶素 南京新天生物化学制药有限公司提供，批号：0100502。
把猫麻醉(戊巴比妥钠35mg/kg)后，开腹，找出十二指肠，穿线备用。分离尿道，用塑料管插管从尿道进入膀胱，固定。分离股静脉，静滴任氏液(1.5ml/min)。待其尿量稳定后，记录60分钟尿量。给药后30分钟，给予纯水50ml/kg，记录给纯水后0.5、1、1.5、2、3、4h尿量。计算其变化值。结果见表5(“-”表示尿量减少)。
表5药物对猫多尿模型的影响
组别 剂量 动物数 给水后各时间段尿量变化值(ml)
(g/kg) (只) 0.5h 1h 1.5h 2h 3h 4h
模型 / 6 0.43±0.51 -0.53±0.89 -0.24±0.99 0.26±1.28 3.14±2.61 5.36±4.11
1 2.125 6 -0.22±0.34 0.00±0.60 0.00±0.54 0.48±0.78 1.97±3.11 2.65±3.33
2 4.25 6 0.07±1.03 -0.22±0.88 -0.20±0.82 -0.52±0.61 -0.0±0.59* 1.43±1.45*
3 8.5 6 0.43±0.73 0.34±1.31 -0.06±1.07 -0.19±1.03 0.78±1.03 1.69±2.30*
垂体后叶素 1u/kg 6 0.48±0.93 -0.12±0.23 -0.28±0.06 -0.28±0.06 0.42±0.23 0.45±0.30*
注：*为与模型组相比P＜0.05。
结果表明：10g/kg、20g/kg剂量对纯水致猫多尿模型有明显的抗利尿作用，作用时间主要集中在第3、4h。
5.对肾阳虚模型的影响
试验动物：wistar大鼠，50只，全♂，一级动物，合格证号：医动字第310101002号。对照药物：肾气丸：河南宛西制药股份有限公司提供，批号：20020203。
取大鼠，随机分为6组，除正常对照组外，其余各组均每日sc0.5％氢化可的松(0.3ml/100g)一次，连续10天，对照组给予同等体积的ns液。末次给药后，立即收集30分钟的尿液，再次各组给予生理盐水4ml/100g+30分钟的尿量(用生理盐水代替)收集6h的尿量，计算排泄率。将动物处死，取脾、肾、胸腺、精囊腺、肾上腺、前列腺和睾丸，计算脏器系数。结果见表6、7、8。
表6 药物对肾阳虚模型的脏器及系数影响
组别 模型 对照组 1 2 3 肾气丸
剂量(g/kg) / / 5 10 20 1.5
脾(g) 0.64±0.06 0.97±0.23 0.87±0.39 0.92±0.41 0.69±0.06 0.63±0.07
肾(g) 1.78±0.17 1.90±0.24 1.92±0.20 1.89±0.19 1.92±0.23 1.86±0.27
胸腺(mg) 62.81±14.77△△ 273.29±21.67 60.71±18.19 64.00±31.87 68.00±22.01 52.50±15.02
精囊腺(g) 430.00±90.18△△ 767.1±207.26 448.5±106.99 433.75±68.44 426.25±78.36 540.0±129.42
肾上腺(mg) 33.88±5.00△△ 49.29±4.27 39.50±6.91 39.38±5.94 34.50±8.16 34.67±4.22前列腺(g) 196.56±55.01 207.00±29.23 210.57±30.21 200.25±28.59 198.75±42.39 206.11±40.89
睾丸(g) 2.79±0.18 2.79±0.17 2.64±0.16 2.59±0.20* 2.73±0.15 2.73±0.13
脾系数
0.268±0.025 0.366±0.090 0.369±0.171 0.404±0.155 0.296±0.023 0.269±0.032
(g/g×100％)
肾系数
0.744±0.059 0.714±0.058 0.812±0.054 0.838±0.059* 0.831±0.059* 0.786±0.106
(g/g×100％)
胸腺系数
26.45±6.65△△ 103.24±8.61 25.71±7.72 28.78±14.91 29.28±9.14 22.09±5.96
(mg/g×100％)
精囊腺系数
182.96±45.81△△ 289.20±80.49 189.42±40.36 193.60±33.82 186.71±42.70 227.12±48.80
(g/g×100％)
肾上腺系数
14.15±1.54△△ 18.70±2.57 16.80±3.09* 17.45±1.94** 14.89±2.86 14.62±1.06
(mg/g×100％)
前列腺系数
82.89±24.53 77.85±7.61 89.67±14.94 89.27±13.87 86.98±21.82 86.73±13.42
(g/g×100％)
睾丸系数
1.17±0.06△△ 1.05±0.08 1.12±0.07 1.15±0.07 1.18±0.09 1.16±0.06
(g/g×100％)
*为与模型组相比P＜0.05，**为与模型组相比P＜0.01。△为与对照组相比P＜0.05，△△为与对照组相比
P＜0.01
表7 药物对肾阳虚模型尿量的影响
剂量 给水后各时间段排泄率(％)
组别
(g/kg) 1h 2h 3h 4h 5h 6h
模型 / 26.25±6.11△△ 46.13±14.74△ 51.99±22.47 65.19±31.62 75.12±38.98 83.51±47.78△
对照组 / 14.45±10.57 27.45±13.12 37.00±14.22 45.21±13.20 51.99±15.33 52.72±15.35
1 5 19.13±7.12 40.98±6.94 55.84±10.29 68.16±13.59 76.45±13.06 82.76±11.70
2 10 16.17±11.23* 34.62±18.52 50.16±26.52 64.35±28.67 72.95±31.48 75.03±29.99
3 20 9.49±4.37** 26.99±13.46* 41.60±18.16 54.65±23.88 60.00±27.40 65.02±25.31
肾气丸 1.5 19.22±9.15 40.32±17.67 51.87±19.09 57.18±18.82 62.47±21.95 64.15±20.85
注：*为与对照组相比P＜0.05，**为与对照组相比P＜0.01。△为与对照组相比P＜0.05，△△为与对照组相比P＜0.01
表8 药物对肾阳虚模型尿离子浓度的影响
组别 剂量 离子浓度(mmol/l)
(g/kg) Na+ Cl- K+
模型 / 175.81±58.34△△ 155.48±20.29 47.78±24.09
对照组 / 119.76±20.46 148.70±34.27 44.74±3.62
1 5 116.13±25.18** 109.19±13.37** 28.42±18.23
2 10 158.74±26.25 94.19±17.11** 18.34±8.75
3 20 138.18±37.10* 102.18±45.33 53.74±43.14
肾气丸 1.5 91.44±20.16** 96.73±12.37** 48.99±12.78
注：*为与模型组相比P＜0.05，为与模型组相比P＜0.05。△△为与对照组相比P＜0.01
结果表明：氢化可的松能明显抑制正常大鼠的胸腺、精囊腺和肾上腺的生长，使大鼠尿量明显高于对照组；本药物能增加肾阳虚大鼠肾上腺和肾的重量，中、大剂量组在1、2h可明显减少氢化可的松所致肾虚大鼠的尿量，能明显减少肾阳虚大鼠尿中Na+、Cl-的浓度，提示药物对大鼠肾阳虚症状有一定的对抗作用。
6.对安体舒通模型的影响
试验动物：Wistar大鼠，50只，全♂，一级动物，合格证号：医动字第310101002号。对照药物：垂体后叶素：南京新天生物化学制药有限公司提供，批号：0100502。取大鼠，随机分为6组，除正常对照组外，其余各组均给予安体舒通0.1ml/100g一次造成尿频模型。给药后，立即收集30分钟的尿液，再次各组给予生理盐水5ml/100g+30分钟的尿量(用生理盐水代替)收集6h的尿量，计算每小时的排泄率。结果见表9。
表9药物对安体舒通模型的影响
组别 剂量 动物 给水后各时间段排泄率(％)
(g/kg) 数 1h 2h 3h 4h 5h 6h
(只)
模型 / 3 42.05±12.55△ 48.88±12.27△△ 11.14±5.03 4.75±3.74 5.81±6.00 4.11±3.98
正常对照 / 8 21.80±8.83 23.10±9.49 6.78±5.51 8.36±5.84 3.07±4.33 5.80±4.92
1 5 8 26.70±5.79 22.82±7.64** 11.46±6.00 6.82±3.96 3.13±3.90 4.08±4.17
2 10 8 19.10±4.69* 11.43±4.23** 6.92±6.23 6.24±5.33 6.86±9.55 6.96±4.85
3 20 9 7.13±3.18** 3.82±3.96** 3.59±4.64* 3.27±4.96 2.10±3.46 2.44±5.55
垂体后叶素 10u/kg 7 25.89±13.02 19.79±5.62** 14.87±8.88 9.07±5.98 5.61±4.02 2.37±2.38
*为与模型组相比P＜0.05，**为与模型组相比P＜0.01。△为与对照组相比P＜0.05，△△为与对照组相比P＜0.01。
结果表明：药物大剂量在1、2、3h时间段与模型比较均有显著性差异，中剂量在1、2h时间段与模型比较均有显著性差异，小剂量和阳性在2h时间段与模型比较均有显著性差异。说明本药物对安体舒通造成的多尿模型有治疗作用。
7.对利血平所致小鼠脾虚的影响
实验动物：昆明种小鼠，70只，雌雄各半，一级动物，合格证号：医动字第310101001号。对照药物：十全大补丸：太极集团桐君阁药厂提供，批号：010216001。
将50只小鼠给予腹腔注射利血平(0.25mg/kg/只/天)，连续14天。另取10只作为对照组不予处理。第8天～第14天给药0.1ml/10g，记录体重及腹泻情况。末次给药后24h将小鼠称体重后处死，并称取肝、脾、胸腺等脏器重量计算脏器系数。结果见表10。
表10药物对脾虚小鼠脏器系数的影响
组别 剂量 动物数 体重 肝脏 脾脏 胸腺
(g/kg) (只) (g) (mg/g×100％) (mg/g×100％) (mg/g×100％)
模型组 / 9 21.74±5.12△ 0.064±0.022 0.005±0.003△△ 1.96±1.83△
正常对照 / 10 29.30±4.42 0.070±0.006 0.007±0.002 3.33±1.26
1 5 8 23.40±2.89 0.071±0.014 0.005±0.001 2.66±1.49
2 10 9 25.49±1.99 0.068±0.009 0.006±0.001 2.31±1.29
3 20 10 24.54±2.34 0.072±0.011 0.006±0.002 2.10±0.99
十全大补丸 3 10 23.71±3.07 0.066±0.008 0.005±0.001 1.91±1.22
注：△为与正常对照组相比P＜0.05，△△为与正常对照组相比P＜0.01。
结果表明：药物各剂量组的脏器系数与模型比较差异无显著性意义，体重有一定的增长趋势。提示药物对利血平致脾虚无作用，对利血平致脾虚小鼠体重下降有一定的对抗作用。
以上药理结果显示：本发明药物能明显降低大鼠、猫的尿量，对尿中的钠离子，钾离子，氯离子的含量有明显的改变作用，能增加肾阳虚大鼠的肾及肾上腺的重量。上述结果表明，该药对动物的多尿有综合治疗作用。
以下通过实施例对本发明内容做进一步阐述：
实施例一：按本领域技术人员公知的技术方法制备本发明药物袋泡剂
分别将黄芪、升麻干燥粉碎成0.5cm大小的小块。使用机械方法进一步加工粉碎成过120目筛网的细粉；桑螵蛸在-20℃冷冻后，粉碎成120目筛网的细粉，按下列重量配比称取药材：
黄芪8公斤 桑螵蛸4.5公斤 升麻4.5公斤
将其混合均匀，70～75℃灭菌3～6小时，装入小袋，每装10克，即成袋泡剂。
实施例二：按本领域技术人员公知的技术方法制备本发明药物丸剂
黄芪、升麻干燥粉碎成0.5cm大小的小块，按下述配方比例称取药材：
黄芪10公斤 桑螵蛸8公斤 升麻1.5公斤
黄芪、升麻合并，加药材质量6～8倍量的75～85％乙醇回流2～3次，或者用同等量的75～85％乙醇渗滤，提取物减压浓缩后得浸膏约800毫升。桑螵蛸在-20℃冷冻后，粉碎成过120目网筛的细颗粒，加入浸膏中，以水为粘合剂，泛制成水丸，干燥上衣，即得。
实施例三：制备本发明药物胶囊剂
黄芪、升麻干燥粉碎成0.5cm大小的小块，桑螵蛸在-20℃冷冻后，粉碎成相同大小的小块，按下述配方比例称取药材：
黄芪12公斤 桑螵蛸7公斤 升麻1.5公斤
加药材重量6～8倍量的85％乙醇，加热到90℃，回流提取3次，每次2小时。提取液减压回收乙醇，并浓缩成浸膏使相对密度为1.10～1.20，加4倍浸膏重量的水，将溶液悬浮起来，放置于4℃环境下，静置12小时，离心除去沉淀，上清液减压浓缩，成浸膏使相对密度为1.20～1.30，按以下重量比加入辅料，浸膏∶微粉硅胶∶硬脂酸镁∶乳糖为1∶1∶0.1∶0.1，制成颗粒，用5号筛整粒后装入0号胶囊，制成胶囊剂。