《制备具有低含量的4′O甲基吡哆醇和/或双黄酮的银杏提取物的改进方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《制备具有低含量的4′O甲基吡哆醇和/或双黄酮的银杏提取物的改进方法.pdf（10页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、10申请公布号CN104189025A43申请公布日20141210CN104189025A21申请号201410231982522申请日20060428102005020685920050503DE102005061948720051223DE200680013412220060428A61K36/16200601A61P25/28200601A61P7/00200601A23L1/3020060171申请人威玛舒培博士两合公司地址德国卡尔斯鲁厄市72发明人克莱门斯埃德尔迈尔荷尔曼休格伊哥酷克福瑞德须朗74专利代理机构北京康思博达知识产权代理事务所普通合伙11426代理人路永斌54发明名称制。
2、备具有低含量的4O甲基吡哆醇和/或双黄酮的银杏提取物的改进方法57摘要本发明涉及一种制备具有降低含量的4O甲基吡哆醇和/或双黄酮的银杏GINKGOBILOBA提取物的改进多步骤方法，其中排除是通过经吸附剂树脂和/或离子交换剂过滤进行且待去除的物质仍保留在树脂上。本发明进一步涉及可由本发明的方法获得的具有降低含量的4O甲基吡哆醇和/或双黄酮的银杏提取物，以及其用途。30优先权数据62分案原申请数据51INTCL权利要求书2页说明书7页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书7页10申请公布号CN104189025ACN104189025A1/2页21一种制造具有低于1。
3、0PPM的降低含量的4O甲基吡哆醇和/或双黄酮的银杏GINKGOBILOBA提取物的方法，其特征在于所述方法的以下步骤A使用含水丙酮、具有1至3个碳原子的含水烷醇或无水甲醇提取银杏叶，B通过浓缩所述溶剂直到含量为至多10重量分离所述有机溶剂，其中在最后的蒸馏步骤期间可添加水，C用水稀释所述剩余水溶液直到固体含量为5重量至25重量，冷却至低于25的温度且使其静置直到形成沉淀，D用硫酸铵处理所述剩余水溶液且接着使用甲乙酮或甲乙酮与丙酮的混合物提取至少一次，E浓缩所获得的提取物且用乙醇水混合物稀释以获得固体含量为10重量的含有50重量水和50重量乙醇的溶液，F用铅化合物或不溶性聚酰胺处理所述溶液，G。
4、使用沸点为60至100的脂族或环脂族溶剂提取所述过滤溶液，H浓缩所述剩余醇水溶液，接着用硫酸铵处理且用甲乙酮和乙醇提取，I浓缩所获得的有机相直到固体含量为50重量至70重量，K将所述浓缩物溶解于具有1至3个碳原子的烷醇水溶液中且视情况过滤，L通过酸性离子交换剂过滤来降低4O甲基吡哆醇的含量，其中将所述待去除的物质保留在所述树脂上，和M在减压下干燥所述浓缩物以获得水含量小于5的干燥提取物。2根据权利要求1所述的方法，其中步骤L还包括通过吸附剂树脂过滤来降低双黄酮的含量至低于20PPM，其中所述双黄酮选自包含穗花杉双黄酮AMENTOFLAVONE、白果素BILOBETIN、银杏素GINKGETIN。
5、、异银杏素ISOGINKGETIN和金松双黄酮SCIADOPITYSIN的群组。3根据权利要求1或2所述的方法，其中步骤K中的所述烷醇水溶液为乙醇水溶液。4根据权利要求3所述的方法，其中所述乙醇水溶液为含量为40重量至60重量的乙醇。5根据权利要求2至4中任一权利要求所述的方法，其中步骤L中的所述吸附剂树脂为基于视情况经取代苯乙烯/二乙烯基苯的树脂。6根据权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其中步骤L中的所述酸性离子交换剂为强酸性离子交换剂。7一种银杏叶提取物，其由根据权利要求1至6中任一权利要求所述的方法获得。8根据权利要求7所述的提取物，其特征在于4O甲基吡哆醇的含量小于2PPM。9根。
6、据权利要求7或8所述的提取物，其特征在于具有小于10PPM的4O甲基吡哆醇含量。10根据权利要求7或8所述的提取物，其特征在于具有小于5PPM的双黄酮含量。11根据权利要求7至10中任一权利要求所述的提取物，其特征在于具有以下含量以重量计20到30的类黄酮，其是选自包含槲皮素QUERCETIN、山奈酚KAEMPFEROL和异鼠李素糖苷ISORHAMNETINGLYCOSIDE的群组，45重量至85重量的萜类内酯，和权利要求书CN104189025A2/2页3小于10PPM的银杏酸GINKGOLICACID。12根据权利要求7至10中任一权利要求所述的提取物，其特征在于具有以下含量以重量计220。
7、到270的类黄酮，其是选自包含槲皮素、山奈酚和异鼠李素糖苷的群组，50重量至70重量的萜类内酯，和至多5PPM的银杏酸。13根据权利要求7至10中任一权利要求所述的提取物，其特征在于具有以下含量以重量计220到270的类黄酮，其是选自包含槲皮素、山奈酚和异鼠李素糖苷的群组，总计28重量至34重量的银杏内酯GINKGOLIDEA、B和C，26重量至32重量的白果内酯BILOBALID，和至多5PPM的银杏酸。14一种根据权利要求7至13中任一权利要求所述的提取物的用途，其用于制造供治疗痴呆和其症状和/或脑或周围血液循环病症用的药物、食品或其他制剂。15一种药物、食品或其他制剂，其特征在于含有根据。
8、权利要求7至13中任一权利要求所述的银杏提取物。权利要求书CN104189025A1/7页4制备具有低含量的4O甲基吡哆醇和/或双黄酮的银杏提取物的改进方法技术领域0001本发明涉及一种制备具有降低含量的4O甲基吡哆醇和/或双黄酮的银杏GINKGOBILOBA提取物的改进多步骤方法，其中排除是通过经吸附剂树脂和/或离子交换剂过滤实现且待去除的物质仍保留在树脂上。本发明进一步涉及可由本发明的方法获得的具有降低含量的4O甲基吡哆醇和/或双黄酮的银杏提取物，以及其用途。背景技术0002儿十年来，使用银杏叶提取物作为药物。当前，其用于治疗各种痴呆和其症状以及腩和周围血液循环病症。与功效相关的成分为萜类。
9、内酯银杏内酯GINKGOLIDEA、B和C以及白果内酯BILOBALIDE以及黄酮的糖苷槲皮素QUERCETIN、山萘酚KAEMPFEROL和异鼠李素ISORHAMNETIN。银杏叶同时也含有不促成所要功效但可能导致危险和副作用的组分。除诸如银杏酸GINKGOLICACID的非极性植物成分外，这些组分为4O甲基吡哆醇和双黄酮。因此，在有效且同时尽可能安全且具有尽可能低的副作用的银杏提取物中，应尽最大可能不存在这些化合物。00034O甲基吡哆醇可引起诸如抽搐发作和无意识的中毒症状。因此，这一化合物也称为银杏毒素GINKGOTOXIN。银杏中所含有的双黄酮展现免疫毒性潜能且可能引发接触性过敏。银杏。
10、中所含有的这些双黄酮主要为化合物穗花杉双黄酮AMENTOAVONE、白果黄素BILOBETIN、银杏黄素GINKGETIN、异银杏双黄酮ISOGINKGETIN和金松双黄酮SCIADOPITYSIN。00044O甲基吡哆醇00050006双黄酮0007说明书CN104189025A2/7页50008穗花杉双黄酮R1R2R3H0009白果黄素R1R3H，R2OCH30010银杏黄素R3H，R1R2OCH30011异银杏双黄酮R1H，R2R3OCH30012金松双黄酮R1R2R3OCH30013同时排除4O甲基吡哆醇和双黄酮的方法以及所获得的提取物已描述于EP1037646B1中。其中，4O甲基吡。
11、哆醇是使用酸性阳离子交换剂滞留且双黄酮吸附在活性碳上。优选地，这些排除步骤在EP1037646B1的方法的步骤F第3页之后，即“用铅化合物或不溶性聚酰胺处理溶液”之后进行。EP1037646B1的方法是基于最初描述于DE3940091C2中的方法。0014在EP1037646B1中，双黄酮和4O甲基吡哆醇的排除在方法的某一阶段步骤F进行，其中存在相对高含量的铅盐和铵盐，致使必须使用增加量的离子交换剂。0015此外，双黄酮和4O甲基吡哆醇的排除仅以组合形式描述和主张。然而，根据将来可能建立的限制和鉴于尽可能少地改质提取组合物的要求，可能希望仅移除双黄酮或4O甲基吡哆醇。0016此外，EP1037。
12、646B1中所追求的小于50PPM的4O甲基吡哆醇和小于100PPM的双黄酮的含量仍相对较高。因为EP1037646B1并未描述比较实例，所以从这一参考文献也不能看出实例2和3中所达成的排除的实际程度。发明内容0017因此，本发明的目的在于提供不具有上述缺点的制备具有低含量的4O甲基吡哆醇和/或低含量的双黄酮的银杏提取物的方法，且具体来说0018其中使用可充分再循环和/或非常廉价的吸附剂，0019其产生小于20PPM、优选小于10PPM且尤其优选小于2PPM的4O甲基吡哆醇含量和/或小于20PPM、优选小于10PPM且尤其优选小于5PPM的双黄酮含量，和0020其产生优选含量为20重量至30重。
13、量尤其优选220至270的类黄酮，45重量至85重量尤其优选50至70，优选28至34的银杏内酯A、B和C和26至32的白果内酯的萜类内酯和银杏酸至多5PPM的提取物，其中220至270的类黄酮，50至7O的萜类内酯其中28至34的银杏内酯A、B和C与其中26至32的白果内酯和银杏酸至多5PPM的所述含量满足德国药典说明书CN104189025A3/7页62003GERMANPHARMACOPOEIA2003“DEUTSCHESARZNEIBUCH”；DAB的要求。0021根据DAB，确定类黄酮在酸性水解后呈槲皮素、山奈酚和异鼠李素形式且以黄酮的糖苷形式计算。0022这一目的可通过使用吸附剂树。
14、脂分离双黄酮和/或经由酸性离子交换剂分离4O甲基吡哆醇来解决。0023为制造本发明的提取物，优选进行如下方法，其中步骤A至I以及M已基本描述于DE3940091C2中，其所有揭露内容，尤其关于方法的细节将以引用的方式并入本申请案中0024A在20100。C、优选4060。C的温度下使用含量为2090重量的含水丙酮、具有1至3个碳原子且含量为2090重量的含水烷醇甲醇、乙醇、正丙醇和异丙醇或无水甲醇提取银杏叶药物，其中药物溶剂的比率等于14至120，优选15至11O，0025B通过蒸发溶剂直到含量为至多10重量优选至多5重量分离有机溶剂，其中在最后蒸馏步骤期间可添加水，0026C用水稀释剩余水溶。
15、液直到固体含量为5重量至25重量优选15重量至20重量，将溶液冷却至低于25。C优选约10至12。C的温度且使剩余水溶液静置直到形成沉淀，0027D用硫酸铵处理剩余水溶液优选直到含量为至多40重量、尤其优选25重量至35重量且接着使用甲乙酮或甲乙酮与丙酮的混合物比率优选为91至46、尤其64将溶液提取至少一次，0028E浓缩所获得的提取物优选直到固体含量为50重量至70重量且用乙醇与水的混合物稀释提取物以获得含有50重量水和50重量乙醇且固体含量为10重量的溶液，0029F用铅化合物优选乙酸铅、乙酸氢氧化铅、硝酸铅或氢氧化铅水性悬浮液处理溶液直到出现颜色由棕色变为红棕色，或用不溶性聚酰胺优选聚。
16、酰胺6、聚酰胺6，6或交联聚乙烯吡咯烷酮聚维酮POLYVIDONE处理，0030G使用沸点为60至100的脂族或环脂族溶剂提取经过滤的溶液，0031H浓缩剩余醇水溶液，接着用硫酸铵处理溶液且用甲乙酮和乙醇提取溶液，优选将溶液在减压下浓缩直到乙醇含量为至多约5，添加硫酸铵直到含量为20重量且用82至55、优选64比率的溶剂提取，0032I浓缩所获得的有机相直到固体含量为50重量至70重量，0033K将浓缩物溶解于具有1至3个碳原子的烷醇水溶液中且视情况过滤产物，0034L经吸附剂树脂和/或离子交换剂过滤，其中待去除的物质仍保留在树脂上，和0035M在减压下干燥浓缩物优选在60。C至80的最高温度。
17、下以获得水含量小于5的干燥提取物。0036本发明方法的优点在于排除步骤在方法的末期进行。因此，必须使用较小量的离子交换剂且尤其获得低含量的4O甲基吡哆醇和/或双黄酮。0037在步骤1中的优选吸附剂树脂为基于视情况经取代苯乙烯/二乙烯基苯的树脂，诸如DIAIONHP20、HP21或SEPABEADSSP207或SP850。优选离子交换剂为强酸性离子说明书CN104189025A4/7页7交换剂，诸如MCRCKI或AMBERLITEIR120。过滤视情况包括使用另一溶剂普通冲洗。步骤K中的烷醇水溶液为含量分别为2090重量的甲醇水溶液、乙醇水溶液、正丙醇水溶液或异丙醇水溶液，优选乙醇水溶液，尤其优。
18、选为浓度为40重量至60重量。0038本发明的一标的为提取物，具体来说为干燥提取物，其可由本发明的方法获得且展现以下含量0039小于20PPM、优选小于10PPM且尤其小于2PPM的4O甲基吡哆醇，和/或0040小于20PPM、优选小于10PPM且尤其小于5PPM的双黄酮。0041此外，本发明的标的为提取物，具体来说为干燥提取物，其可由本发明的方法获得且展现以下其他含量004220重量至30重量、优选220重量至270重量的类黄酮，004345重量至85重量、优选50重量至70重量的萜类内酯，和0044小于10PPM，优选不超过5PPM的银杏酸。0045本发明的另一标的为提取物，具体来说为干燥。
19、提取物，其可由本发明的方法获得且展现以下含量004620重量至30重量、优选220重量至270重量的类黄酮，0047总计25重量至45重量的银杏内酯A、B和C，优选总计28重量至34重量的银杏内酯A、B和C，004820重量至40重量、优选26重量至32重量的白果内酯，0049小于10PPM、优选不超过5PPM的银杏酸，和0050小于20PPM、优选小于10PPM、尤其优选小于2PPM的4O甲基吡哆醇，和/或0051小于20PPM、优选小于10PPM且尤其优选小于5PPM的双黄酮。0052根据欧洲药典，干燥提取物通常具有至少95重量的干燥残余物。0053本发明的提取物可以散剂、颗粒剂、锭剂、糖。
20、衣药丸包衣锭剂或胶囊形式投与，优选经口投与。为制备锭剂，将提取物与合适的医药学上可接受的诸如乳糖、纤维素、二氧化硅、交联羧甲纤维素和硬脂酸镁的佐剂混合，且压制成视情况具有由例如羟甲基纤维素、聚乙二醇、颜料诸如二氧化钛、氧化铁和滑石制成的合适包衣的锭剂。本发明的提取物也可填充到胶囊中，视情况在添加诸如稳定剂、填充剂等的佐剂的情况下。剂量为使得每天投与10MG至2000MG，优选50MG至1000MG且尤其优选100MG至500MG的提取物的剂量。0054本发明的另一标的为含有视情况与诸如活性成分和/或医药学上可接受的佐剂的其他物质组合的这些提取物的药物、食品或其他制剂。如本文所使用的术语“食品”。
21、尤其指营养食品、饮食增补品以及医药食物和营养增补剂。附图说明0055无具体实施方式0056实例0057制备实例1和2以及比较实例1和2中所使用的提取物溶液0058在约50的温度下提取干银杏叶药物，使用其重量W/W的7倍即，药物溶说明书CN104189025A5/7页8剂比率为17的丙酮/水60/60W/W提取步骤A。0059将有机溶剂与提取物在很大程度上分离步骤B且用水稀释剩余浓水溶液直到固体含量为约10重量。将溶液在搅拌下冷却至约12的温度，且移除所得沉淀步骤C。0060将约30重量的硫酸铵添加到剩余水溶液中且使用比率为64的甲乙酮与丙酮的混合物提取所形成的溶液步骤D。0061将所获得的提取。
22、物在很大程度上浓缩且将所获得的浓缩物用水和乙醇稀释，以使得获得固体含量为约10重量的含有50重量水和50重量乙醇的溶液步骤E。过滤溶液且向滤液中添加乙酸氢氧化铅水溶液步骤F。0062进一步过滤后，用庚烷提取剩余醇水溶液步骤G。0063接着，将剩余醇水溶液在减压下浓缩直到乙醇含量为约5，且添加硫酸铵，以使得获得以水含量计约20重量的含量。0064使用比率为64的甲乙酮与乙醇的混合物提取所获得的溶液步骤H。0065将所得有机相在很大程度上浓缩固体含量为约55重量步骤I。然后，用乙醇和水稀释产物，以使得获得乙醇含量为约75且固体含量为约15的溶液步骤K。0066实例1具有降低含量的4O甲基吡哆醇的银。
23、杏提取物0067将1249G根据上述制备方法获得的提取物溶液用水调节直到乙醇含量为约40W/W且施加于50ML对应于每克干燥提取物028MLAMBERLITEIR120强酸性离子交换剂管柱约2165CM；流速约8ML/MIN步骤I，接着用200ML50乙醇W/W冲洗。将所得溶液在旋转蒸发器上浓缩且在真空中在50下干燥步骤M1794G。0068由下表可见，在基本上未改变与功效相关的成分的含量的情况下，达成04PPM的4O甲基吡哆醇含量。0069比较实例1未经本发明的步骤1排除的银杏提取物0070将984G实例1中所使用的提取物溶液通过蒸发浓缩且在真空中在50下干燥147G。0071实例2A具有降。
24、低含量的双黄酮的银杏提取物0072将500G根据上述制备方法获得的提取物溶液用水调节直到乙醇含量为约40W/W且施加于400ML对应于每克干燥提取物57MLSEPABEADSSP850吸附剂树脂管柱约432CM；流速约8ML/MIN步骤1，接着用总计约21的40乙醇W/W冲洗。将所得溶液的1O2593G在旋转蒸发器上浓缩且冷冻干燥步骤M692G。溶液的剩余90用于实例2B。0073由下表可见，在基本上未改变与功效相关的成分的含量的情况下，分别达成小于1PPM的双黄酮含量。0074实例2B具有降低含量的4O甲基吡哆醇和双黄酮的银杏提取物0075将实例2A中所获得的溶液的9023341G施加于25。
25、ML对应于每克干燥提取物040MLAMBERLITEIR120强酸性离子交换剂管柱约1511CM；流速约10ML/MIN步骤L，接着用100ML40乙醇W/W冲洗。将所得溶液在旋转蒸发器上浓缩且冷冻干燥步骤M6167G。0076由下表可见，在基本上未改变与功效相关的成分的含量的情况下，分别达成说明书CN104189025A6/7页904PPM的4O甲基吡哆醇含量和小于1PPM的双黄酮含量。0077比较实例2未经本发明的步骤L排除的银杏提取物0078将50G实例2A中所使用的提取物溶液通过蒸发浓缩且冷冻干燥705G。0079比较实例3根据EP1037646BI用铅化合物处理步骤F后，经双黄酮排除。
26、和4O甲基吡哆醇排除的银杏提取物0080在约50的温度下提取干银杏叶药物，使用其重量W/W的7倍即，药物溶剂比率为17的丙酮/水60/60W/W提取。0081将有机溶剂与提取物在很大程度上分离，且将剩余浓水溶液用水稀释直到固体含量为约10重量，在搅拌下冷却至约12的温度且移除所得沉淀。0082将约30重量的硫酸铵添加到剩余水溶液中且使用比率为64的甲乙酮与丙酮的混合物提取所形成的溶液。0083将所获得的提取物在很大程度上浓缩且将所获得的浓缩物用水和乙醇稀释，以使得获得固体含量为约1O重量的含有50重量水和50重量乙醇的溶液。过滤溶液，向滤液中添加乙酸氢氧化铅水溶液，且再次过滤步骤F。0084在。
27、室温下，将150ML所获得的溶液干燥提取物部分71；乙醇含量约50与25G对应于每克最终产物O17G活性碳一起搅拌30分钟。将滤液施加于具有42ML对应于每克最终产物028ML强酸性阳离子交换剂MERCKI的管柱。用45MLETOH50洗涤离子交换剂管柱。0085使用370ML正己烷通过震荡提取组合的洗出液。将乙醇/水相在旋转蒸发器上浓缩且用水稀释到100G。将所获得的提取物溶液用140ML、230ML和120ML比率为32的甲乙酮乙醇混合物提取，其中添加15G硫酸铵实现相分离。0086添加25G硫酸铵后，将有机相在室温下搅拌1H。分离未溶解的硫酸铵以及所形成的水相。将提取物溶液在旋转蒸发器上。
28、在50下浓缩且在真空中在60下干燥148G。0087由下表可见，根据本发明达成52PPM的4O甲基吡哆醇含量和313PPM的双黄酮含量且因此与实例2B相比含量显著较高且排除结果较差。0088表1中所列的类黄酮、萜类内酯和银杏酸的含量的测定根据DAB进行。00894O甲基吡哆醇的定量测定在经SEPPAKPLUSC18滤筒富集，接着经BONDELUTLRCSCX滤筒富集后借助于HPLC和荧光检测进行，其中使用PHENOMENEXPRODIGY5ODS3HPLC管柱和三氟乙酸PH2甲醇91V/V甲醇的梯度。0090表1中所列的双黄酮的含量的测定借助于HPLC和UV检测在340NM下经由WATERSN。
29、OVAPAKC18管柱使用水乙腈为91V/V03体积磷酸85乙腈03体积磷酸的梯度进行。0091在各情况下，校正是使用具有高确定纯度等级的参考物质进行。0092表1以上所给出的实例的提取物的组成0093提取物实例1比较实例1实例2A实例2B比较实例2比较实例3类黄酮248624512717253225892278银杏内酯A、B、C328294297304297340白果内酯317303318314307307萜类内酯645597615618604647说明书CN104189025A7/7页10银杏酸PPM5555554O甲基吡哆醇PPM041045164088952穗花杉双黄酮PPM685787ND1ND1816126白果黄素PPM12331204ND1ND11364104银杏黄素PPM863821ND1ND186127异银杏双黄酮PPM10331044ND1ND1111548金松双黄酮PPM44043OND1ND144008双黄酮的总量PPM42544286ND5ND545963130094ND不可检测说明书CN104189025A10。