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1、10申请公布号CN104208145A43申请公布日20141217CN104208145A21申请号201410483987722申请日20140919A61K36/535200601A61P25/24200601A61K127/0020060171申请人华润三九医药股份有限公司地址518110广东省深圳市龙华新区观澜高新园区观清路1号72发明人陈周全谭沛韩正洲谈英马鹏岗74专利代理机构北京三聚阳光知识产权代理有限公司11250代理人赵敏54发明名称从紫苏叶中提取高纯度总三萜酸类化合物的方法及应用57摘要本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种从紫苏叶中提取高纯度的以熊果酸为主并包含。
2、齐墩果酸的总三萜酸类化合物的方法及其应用。该方法采用乙醇对紫苏叶进行提取，提取液回收乙醇后，稠膏再用热水洗涤以除去水溶性物质，水洗后的残渣用含碱性乙醇溶液进行提取，提取液先用活性炭进行脱色处理，然后回收乙醇至近干后，残渣再用适量乙醇溶解，用盐酸调PH，使沉淀，滤取沉淀，沉淀先用适量乙醇洗涤，除去残留的母液，然后再用适量热水洗涤除去残留的盐，干燥，得到产物。该方法获得的总三萜纯度较高，操作简单，适用于大工业生产。51INTCL权利要求书2页说明书11页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书11页附图1页10申请公布号CN104208145ACN1042081。
3、45A1/2页21一种从紫苏叶中提取高纯度总三萜酸类化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤1取紫苏叶药材，加入乙醇进行提取，滤过并合并提取液，减压回收乙醇，浓缩至稠浸膏，并将所述稠浸膏加沸水洗涤；2取水洗后的稠浸膏加入碱性乙醇溶液混匀，并过滤；3取滤液加入活性炭进行吸附处理，滤过后取滤液减压回收乙醇至干；4取回收物加入乙醇溶解，并以盐酸调节溶液PH值至强酸性，滤过取沉淀物；5取沉淀物以强酸性乙醇洗涤，除去残留在沉淀物表面的母液，然后加沸水洗涤，烘干，即得。2如权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤1取紫苏叶药材052重量份，加入415体积份浓度为75100的乙醇，提取13次，每次401。
4、20MIN，滤过并合并提取液，减压回收乙醇，浓缩为稠浸膏，并将所述稠浸膏加入530重量倍量的沸水，洗涤25次；2取水洗后的稠浸膏加入610重量倍量浓度为0315的碱性乙醇溶液混匀，并过滤；3取滤液加入活性炭进行吸附处理，滤过后取滤液减压回收乙醇至干；4取回收物加入浓度为8095的乙醇溶解，并以盐酸调节溶液PH值为082，滤过取沉淀物；5取沉淀以PH值为0815、浓度为6090的酸性乙醇洗涤，除去残留在沉淀表面的母液，然后加48重量倍量的沸水洗涤，烘干，即得；所述重量份与所述体积份的关系为G/ML的关系。3如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，包括如下步骤1取紫苏叶药材1重量份，加入15体积份。
5、浓度为95的乙醇提取2次，每次提取2H，滤过并合并提取液，减压回收乙醇，浓缩为稠浸膏，并将所述稠浸膏加入15重量倍量的沸水，洗涤25次；2取水洗后的稠浸膏加入6重量倍量浓度为10的碱性乙醇溶液混匀，并过滤；3取滤液加入活性炭进行吸附处理，滤过后取滤液减压回收乙醇至干；4取回收物加入滤液等量的浓度为85的乙醇溶解，并以盐酸调节溶液PH值为10，滤过取沉淀物；5取沉淀以PH值为10、浓度为85的酸性乙醇洗涤，除去残留在沉淀表面的母液，然后加48重量倍量的沸水洗涤，烘干，即得；或1取紫苏叶药材1重量份，加入15体积份浓度为85的乙醇提取2次，每次提取2H，滤过并合并提取液，减压回收乙醇，浓缩为稠浸膏。
6、，并将所述稠浸膏加入10重量倍量的沸水，洗涤4次；2取水洗后的稠浸膏加入6重量倍量浓度为10的碱性乙醇溶液混匀，并过滤；3取滤液加入活性炭进行吸附处理，滤过后取滤液减压回收乙醇至干；4取回收物加入滤液等量的浓度为85的乙醇溶解，并以盐酸调节溶液PH值为15，滤过取沉淀物；权利要求书CN104208145A2/2页35取沉淀以PH值为15、浓度为85的酸性乙醇洗涤，除去残留在沉淀表面的母液，然后加6重量倍量的沸水洗涤，烘干，即得；或1取紫苏叶药材1重量份，加入5体积份浓度为75的乙醇提取3次，每次提取2H，滤过并合并提取液，减压回收乙醇，浓缩为稠浸膏，并将所述稠浸膏加入15重量倍量的沸水，洗涤3。
7、次；2取水洗后的稠浸膏加入10重量倍量浓度为10的碱性乙醇溶液混匀，并过滤；3取滤液加入活性炭进行吸附处理，滤过后取滤液减压回收乙醇至干；4取回收物加入滤液等量的浓度为80的乙醇溶解，并以盐酸调节溶液PH值为08，滤过取沉淀物；5取沉淀以PH值为08、浓度为80的酸性乙醇洗涤，除去残留在沉淀表面的母液，然后加6重量倍量的沸水洗涤，烘干，即得。4如权利要求13任一所述的方法，其特征在于，所述步骤2中，所述碱性乙醇溶液为KOH乙醇溶液或NAOH乙醇溶液。5如权利要求14任一所述的方法，其特征在于，所述步骤3中，所述活性炭的加入重量为所述滤液体积的153。6如权利要求15任一所述的方法，其特征在于，。
8、所述步骤3中，还包括加入活性炭后进行加热回流处理并冷却至室温的步骤。7由权利要求16任一所述的方法提取得到的总三萜酸类提取物。8由权利要求7所述提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床可接受的制剂。9根据权利要求8所述的制剂，其特征在于，所述制剂包括丸剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。权利要求书CN104208145A1/11页4从紫苏叶中提取高纯度总三萜酸类化合物的方法及应用技术领域0001本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种从紫苏叶中提取高纯度的以熊果酸和齐墩果酸为主的总三萜酸类化合物的方法及其应用。背景技术0002萜酸类化合物是具有。
9、广泛的药理作用和重要的生物活性的一类物质，其广泛存在于植物中。大量的动物试验和临床预试研究已显示，萜酸类化合物在抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗HIV和护肝等方面均显现出令人关注的药理特性，并且在治疗肿瘤、肝炎和生产化妆品等方面已开发了许多药用产品。其中，研究应用较多的是熊果酸和齐墩果酸，市面上常见的产品有齐墩果酸片胶囊、泰脂安胶囊等产品。现有技术研究发现，紫苏叶中含有的总三萜酸类化合物以熊果酸和齐墩果酸为主，其具有显著地抗抑郁活性，各种研究结果证明其具有明显的成药价值。0003毫无疑问，如何从植物中提取、制备高纯度的总三萜酸类物质，是开发相关产品的关键技术之一。但现有技术中公开的几种常用的从植物中提取。
10、、制备较高纯度熊果酸或同类三萜酸类化合物的方法，主要有溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、或通过水解将三萜酸苷类除去糖后再制备的方式。但是，溶剂萃取法一般需要使用石油醚对提取物进行脱脂处理，对车间的防爆提出极高的要求，使得工业应用受到限制，同时萃取操作不仅受环境影响大，且易乳化，使得提取结果的重复性较差；而大孔吸附树脂法则主要有树脂残留和操作重复性较差等问题。发明内容0004为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种采用“碱溶酸沉法”从紫苏叶中提取高纯度的以熊果酸和齐墩果酸为主的总三萜类化合物的方法及其应用。0005本发明为解决上述问题，提供了一种从紫苏叶中提取高纯度总三萜酸类化合物的方法，其特征在于。
11、，包括如下步骤00061取紫苏叶药材，加入乙醇进行提取，滤过并合并提取液，减压回收乙醇，浓缩至稠浸膏，并将所述稠浸膏加沸水洗涤；00072取水洗后的稠浸膏加入碱性乙醇溶液混匀，并过滤；00083取滤液加入活性炭进行吸附处理，滤过后取滤液减压回收乙醇至干；00094取回收物加入乙醇溶解，并以盐酸调节溶液PH值至强酸性，滤过取沉淀物；00105取沉淀物以强酸性乙醇洗涤，除去残留在沉淀物表面的母液，然后加沸水洗涤，烘干，即得。0011进一步的，所述的方法包括如下步骤00121取紫苏叶药材052重量份，加入415体积份浓度为75100的乙醇，提取13次，每次40120MIN，滤过并合并提取液，减压回收。
12、乙醇，浓缩为稠浸膏，并将所述稠浸膏加入530重量倍量的沸水，洗涤25次；说明书CN104208145A2/11页500132取水洗后的稠浸膏加入610重量倍量浓度为0315的碱性乙醇溶液混匀，并过滤；00143取滤液加入活性炭进行吸附处理，滤过后取滤液减压回收乙醇至干；00154取回收物加入浓度为8095的乙醇溶解，并以盐酸调节溶液PH值为082，滤过取沉淀物；00165取沉淀以PH值为0815、浓度为6090的酸性乙醇洗涤，除去残留在沉淀表面的母液，然后加48重量倍量的沸水洗涤，烘干，即得；0017所述重量份与所述体积份的关系为G/ML的关系。0018更进一步的，所述的方法包括如下步骤001。
13、91取紫苏叶药材1重量份，加入15体积份浓度为95的乙醇提取2次，每次提取2H，滤过并合并提取液，减压回收乙醇，浓缩为稠浸膏，并将所述稠浸膏加入15重量倍量的沸水，洗涤25次；00202取水洗后的稠浸膏加入6重量倍量浓度为10的碱性乙醇溶液混匀，并过滤；00213取滤液加入活性炭进行吸附处理，滤过后取滤液减压回收乙醇至干；00224取回收物加入滤液等量的浓度为85的乙醇溶解，并以盐酸调节溶液PH值为10，滤过取沉淀物；00235取沉淀以PH值为10、浓度为85的酸性乙醇洗涤，除去残留在沉淀表面的母液，然后加48重量倍量的沸水洗涤，烘干，即得；0024或00251取紫苏叶药材1重量份，加入15体。
14、积份浓度为85的乙醇提取2次，每次提取2H，滤过并合并提取液，减压回收乙醇，浓缩为稠浸膏，并将所述稠浸膏加入10重量倍量的沸水，洗涤4次；00262取水洗后的稠浸膏加入6重量倍量浓度为10的碱性乙醇溶液混匀，并过滤；00273取滤液加入活性炭进行吸附处理，滤过后取滤液减压回收乙醇至干；00284取回收物加入滤液等量的浓度为85的乙醇溶解，并以盐酸调节溶液PH值为15，滤过取沉淀物；00295取沉淀以PH值为15、浓度为85的酸性乙醇洗涤，除去残留在沉淀表面的母液，然后加6重量倍量的沸水洗涤，烘干，即得；0030或00311取紫苏叶药材1重量份，加入5体积份浓度为75的乙醇提取3次，每次提取2H。
15、，滤过并合并提取液，减压回收乙醇，浓缩为稠浸膏，并将所述稠浸膏加入15重量倍量的沸水，洗涤3次；00322取水洗后的稠浸膏加入10重量倍量浓度为10的碱性乙醇溶液混匀，并过滤；00333取滤液加入活性炭进行吸附处理，滤过后取滤液减压回收乙醇至干；00344取回收物加入滤液等量的浓度为80的乙醇溶解，并以盐酸调节溶液PH值为08，滤过取沉淀物；说明书CN104208145A3/11页600355取沉淀以PH值为08、浓度为80的酸性乙醇洗涤，除去残留在沉淀表面的母液，然后加6重量倍量的沸水洗涤，烘干，即得。0036所述重量份与所述体积份的关系为G/ML的关系。0037更进一步的，任一所述的方法，。
16、所述步骤2中，所述碱性乙醇溶液为KOH乙醇溶液或NAOH乙醇溶液。0038任一所述的方法，所述步骤3中，所述活性炭的加入重量为所述滤液体积的153。0039任一所述的方法，所述步骤3中，还包括加入活性炭后进行加热回流处理并冷却至室温的步骤。0040进一步的，任一所述的方法提取得到的总三萜酸类提取物。0041更进一步的，所述提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成的临床可接受的制剂。0042所述的制剂包括丸剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。0043本发明的上述技术方案所提取的制备工艺安全环保，操作过程没有使用有毒害的化学试剂，有利于操作人员的身体健康，而且该。
17、工艺操作简单、成本低，副产物少、原料的回收率很高、不仅受环境影响、操作的重复性很高。所提取产物中熊果酸的含量和纯度均很高，并且含有一定的齐墩果酸，产品不易乳化，具有很高的经济应用前景。0044实验例00451、实验材料004611试剂0047香草醛分析纯、高氯酸分析纯、冰醋酸分析纯、醋酸乙酯分析纯、三乙胺分析纯、甲醇分析纯、甲醇色谱纯、乙腈色谱纯。004812主要仪器0049岛津UV2401PC型紫外可见分光光度计、岛津LC10AT高效液相色谱仪、DIONEXP680高效液相色谱仪戴安公司、SPD10AVP紫外检测器、浙大智能N2000工作站、电热恒温鼓风干燥箱型号1013；上海跃进医疗器械厂。
18、、D800LS智能药物溶出仪天津大学无线电厂、R系列旋转蒸发器上海申生科技有限公司、BECKMANDU640型紫外可见分光光度计岛津公司、SARTORIUSBP211D型电子天平德国赛多利斯、METTLERTOLEDOXP56型电子天平瑞士梅特勒托利多、VD53型真空干燥箱德国BINDER。005013药材0051紫苏叶广东、江苏、安徽产。005214对照品0053熊果酸中国药品生物制品检定所提供，批号0742200010纯度为9837。00542、对产物中总三萜的含量和熊果酸的含量测定方法005521总三萜的含量具体的测定方法0056对照品溶液的制备精密称取熊果酸对照品适量，加甲醇制成每1M。
19、L含熊果酸60G的溶液，即得；0057供试品溶液的制备取本品0015G，精密称定，置250ML量瓶中，加甲醇使溶解，并说明书CN104208145A4/11页7稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜045M滤过，取续滤液，即得；0058测定法精密量取供试品溶液和对照品溶液各1ML，置具塞刻度试管中，水浴挥干甲醇，冷却至室温，分别依次加入新配制的5香草醛冰醋酸溶液02ML、高氯酸08ML，摇匀，密塞，70水浴加热15分钟，流水冷却，加乙酸乙酯4ML，摇匀，密塞，放置30分钟，以空白试剂为空白，于556NM波长处分别测定吸收度，计算，即得。005922紫苏叶中熊果酸的含量测定0060色谱条件与系统适用性试验。
20、用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈甲醇水冰乙酸三乙胺60301001503为流动相；检测波长为215NM，理论板数按熊果酸峰计算应不低于10000；0061对照品溶液的制备精密称取熊果酸对照品适量，加甲醇制成每1ML含熊果酸100G的溶液，即得；0062供试品溶液的制备取供试品，研细，取0015G，精密称定，置50ML量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜045M滤过，取续滤液，即得。0063测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20L，注入液相色谱仪，测定，即得。0064采用HPLC法，测定五批原料药材熊果酸含量，实验结果见表1，高效液相色谱见图2。图2中峰可见，采用上述方。
21、法还可以有效检测紫苏叶中含有的齐墩果酸的含量。0065表1紫苏叶中熊果酸含量测定结果00660067根据上述测定结果，暂定紫苏叶含熊果酸C30H48O3不得少于025。00683、紫苏叶提取物抗抑郁活性组分总三萜的制备工艺研究0069在药效学研究的基础上，考虑以乙醇作为提取溶媒，具体的浓度、用量及提取时间等工艺参数通过正交试验结果来确定。007031药材吸收溶剂量的测定0071取紫苏叶药材100G粗粉，加1000ML乙醇，浸泡，每隔2小时用100目筛过滤，药渣称重，计算药材吸收乙醇的量约为25倍。007232正交试验优化紫苏叶总三萜成分醇提工艺0073322因素水平表及实验方案00741设计时。
22、所考虑的因素00751所用药材用粉碎机打成粗粉，以避免取样不均匀带来的误差。说明书CN104208145A5/11页800762根据对紫苏叶中三萜类成分理化性质的分析，选择95，85，75三个浓度的乙醇来提取。00773药材吸收溶剂的量为药材重量的25倍左右，因此在正交实验中第一次提取时先加3倍量的溶媒，再加正交试验表中的溶媒倍数。设定溶媒用量的3个水平为药材量4，7，10倍，实验设计见表2。0078表2紫苏叶药材提取工艺正交因素水平表0079008000812实验方法0082具体实验方案见表3，以表3中第一组试验为例称取紫苏叶药材粗粉150G熊果酸含量为028，加入95乙醇450ML，再加4。
23、倍量95乙醇，加热回流提取1次，回流时间为40MIN，趁热用滤纸抽滤，滤液减压回收至干，用95乙醇溶解并定容500ML。吸取1ML蒸干，测定紫苏药材处理方法进行处理，用甲醇溶解并定容10ML，供含量测定，测定结果见表3。其它组的实验依此类推。0083表3紫苏叶提取的实验方案及结果0084说明书CN104208145A6/11页900853实验结果分析0086按极差分析的最佳条件为A1B3C3D2。由于提取二次与提取三次，差异不显著，从节省能源及生产实际出发，取A1B3C2D2为最佳提取工艺，即分别用13，10倍量95乙醇回流提取二次，每次70分钟。00874正交结果的验证0088取150G紫苏。
24、叶药材，按正交试验所优化的提取工艺进行试验，以熊果酸为检测指标，结果其提取转移率为9852，RSD358N5。说明以熊果酸为测定指标，按正交试验所确定的提取工艺条件合理。008933浓缩0090在通常条件下，熊果酸等三萜酸类化合物对热比较稳定，因此，对紫苏叶乙醇提取液按常规条件进行减压回收乙醇，至无醇味，得浸膏。009134纯化0092341水洗处理纯化研究0093由于熊果酸、齐墩果酸等三萜类化合物均不溶于水，所以，首先考虑采用水洗处理以除去水溶性成分。0094取50G浸膏，加沸水充分搅拌洗涤5次，每次750ML，每次搅拌后静置30MIN，冷却，倾出上清液，每次所得溶液回收至干，称重，结果见表。
25、4。0095表4浸膏水洗结果0096说明书CN104208145A7/11页100097从以上结果可以看出，浸膏经过水洗可以去掉很大一部分物质，起主要作用的是第一、二次，第三次已经很少了，因此确定水洗条件为用沸水洗涤三次，每次加沸水量为浸膏量的15倍。0098取浸膏900G，加135L沸水，充分搅拌，静置，冷却后，倾去上清液，继续加沸水重复操作二次，得水洗后浸膏，结果见表5。0099表5浸膏水洗前后熊果酸损失情况的结果010001010102可见，水洗2次对熊果酸只损失了540，而浸膏的重量明显减少，表明膏中的杂质被水洗去除而使有效成分熊果酸含量明显提高，达到了初步纯化目的同时为后续处理也打下。
26、了良好的基础。0103后续考察了不同水洗量对水洗效果的影响，结果用530倍量，洗涤25次，效果均好，结合除杂效果，考虑生产效率，洗涤2次，每次15倍量较好。010435酸碱处理纯化研究0105351碱性醇处理对熊果酸含量的影响0106紫苏叶中具有抗抑郁作用的三萜类成分经分析主要为三萜酸，利用其母核含有羧基，用碱性醇溶液来进行处理，使三萜酸类成分与其它成分分离，而得以纯化。但是采用该方法纯化是否会造成三萜酸的损失，需先对其进行考察。0107取浸膏熊果酸含量2082G，加1KOH乙醇溶液50ML，加热回流1小时，冷却后，用HCL调PH5，转移至100ML量瓶并用乙醇稀释至刻度，取2ML样品蒸干，以。
27、下同药材提取后样品的处理，定容10ML。测定熊果酸的量为207，与原含量没有差别。表明用碱处理对熊果酸的含量没有影响。0108352采用正交试验优化碱性醇处理的条件。01091因素水平的设置01101碱性醇溶液为1KOH乙醇溶液量，加入量定为浸膏量的4，6，8倍；01112用活性炭吸附去除一部分杂质，活性炭用量为溶液量的15,20,25；01123母液中的醇浓度会影响产品的质量。经预试，母液中的醇浓度设计为95、90、85；01134有研究得出熊果酸、齐墩果酸在PH值为65的85的甲醇溶液中其PKA值分说明书CN104208145A108/11页11别为48145、49137，因此，设计醇溶液。
28、的PH值调节为1、2、3，结果见表6。0114表6紫苏叶提取物纯化工艺正交因素水平表011501162实验方法0117具体实验方案见表7。以表7中第一组试验为例称取紫苏叶浸膏水洗后的残渣32G相当于未水洗浸膏60G，加入原浸膏4倍量的1KOH乙醇溶液，充分搅拌1小时，滤过，取滤液加入溶液量15的活性炭，搅拌吸附30MIN，滤过，滤液减压回收乙醇至干，然后加入1倍浸膏量的95乙醇60ML，加HCL调至PH1，静置，滤过，用4倍量沸水洗去无机盐，烘干，称重，测定熊果酸及总三萜的含量，测定结果见表7、8。0118表7紫苏叶提取物的纯化实验方案及结果熊果酸为考察指标011901200121表8紫苏叶提。
29、取物的纯化实验方案及结果总三萜为考察指标0122说明书CN104208145A119/11页120123熊果酸及总三萜的测定结果显示，经过上述试验所得到的部位总三萜酸含量已高于50，达到有效部位的要求，见表6及表7。因此，在进行最优化考察时以熊果酸的转移率及总三萜的量因浸膏中总三萜测定时干扰太大而无法测定为指标，结果较优的纯化工艺条件为A2B1C1D3，即取浸膏水洗后的渣，加入浸膏6倍量的1KOH乙醇溶液，充分搅拌1小时，滤过，取滤液加入溶液量15的活性炭，搅拌吸附30MIN，滤过，滤液减压回收乙醇至干，然后加入1倍浸膏量的85乙醇，加HCL调至PH1，静置，滤过，用4倍量沸水洗去无机盐，烘干。
30、，称重，即得。0124考察了不同浓度的KOH乙醇溶液，以及KOH用NAOH替代的效果，值得的总三萜提取物均较好。01253正交结果的验证0126取紫苏叶浸膏水洗后的残渣96G相当于浸膏180G，加入浸膏6倍量的1KOH乙醇溶液1080ML，充分搅拌1小时，过滤，取滤液加入溶液量15的活性炭162G，搅拌吸附30MIN，过滤，滤液减压回收乙醇至干，然后加入1倍浸膏量的85乙醇180ML，加HCL调至PH1，静置，过滤，用4倍量沸水720ML洗去无机盐，烘干，称重，即得。平行5份，结果熊果酸转移率为8253，RSD579；总三萜酸含量为7347，RSD458。012736紫苏叶总三萜的制备工艺01。
31、28根据提取、纯化条件的优选结果，紫苏叶总三萜的制备工艺为取紫苏叶，粉碎成粗粉，加药材量13，10倍量95乙醇，回流提取二次，每次70分钟，滤过，合并二次滤液，减压回收乙醇至无醇味，得稠浸膏。取浸膏加沸水洗三次，每次15倍量，浸膏水洗后的残渣，加入浸膏6倍量的1KOH乙醇溶液，充分搅拌1小时，滤过，取滤液加入溶液量15的活性炭，搅拌吸附30MIN，滤过，滤液减压回收乙醇至干，然后加入1倍浸膏量的85乙醇，加HCL调至PH1，静置，滤过，用4倍量沸水洗去无机盐，烘干，称重，即得。其工艺流程图如图1所示012937紫苏叶抗抑郁活性组分制备的中试结果说明书CN104208145A1210/11页13。
32、0130按以上研究确认的工艺，进行中试放大研究，结果见表9。0131表9三批总三萜提取物中试放大试验结果01320133结论中试放大研究结果证明紫苏叶总三萜抗抑郁活性组分的制备工艺合理、可行。附图说明0134为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实验例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中0135图1为本发明的发明内容所述工艺的具体流程图；0136图2为本发明所述实验例中检测熊果酸和齐墩果酸的HPLC图谱。具体实施方式0137实施例10138取紫苏叶粉碎或不粉碎1KG，加入95乙醇15L，加热提取2次，每次2小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，加沸水洗涤。
33、3次，每次15重量倍量，水洗后的浸膏加入6重量倍量浓度为10的KOH乙醇溶液，搅拌30分钟，滤过，滤液加入15W/V的活性炭，搅拌30分钟，滤过，滤液减压回收乙醇至干，加入1倍量85的乙醇使溶解，加盐酸调节溶液PH值至10，静置并滤过，取沉淀先用PH值为10、浓度为85的乙醇洗涤，除去残留在沉淀表面的母液，然后用4重量倍量沸水洗涤，烘干，即得总三萜类提取物。按照实验例部分方法进行检测，总三萜含量为7514，熊果酸含量为3508。0139实施例20140取紫苏叶粉碎或不粉碎1KG，加入85乙醇25L，加热提取2次，每次2小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，加沸水洗涤4次，每次10重。
34、量倍量，水洗后的浸膏加入6重量倍量浓度为10的KOH乙醇溶液，搅拌30分钟，滤过，滤液加入15W/V的活性炭，搅拌30分钟，滤过，滤液减压回收乙醇至干，加入1倍量85的乙醇，使溶解，说明书CN104208145A1311/11页14加盐酸调节溶液PH值至15，静置并滤过，取沉淀先用PH值为15、浓度为85的乙醇洗涤，除去残留在沉淀表面的母液，然后用6重量倍量沸水洗涤，烘干，即得总三萜类提取物。按照实验例部分方法进行检测，总三萜含量为7604，熊果酸含量为3176。0141实施例30142取紫苏叶粉碎或不粉碎1KG，加入75乙醇5L，加热提取3次，每次2小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩。
35、至稠膏，加沸水洗涤3次，每次15重量倍量，水洗后浸膏加入10重量倍量浓度为10的KOH乙醇溶液，搅拌30分钟，滤过，滤液加入3W/V的活性炭，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液减压回收乙醇至干，加入1倍量80的乙醇，使溶解，加盐酸调节溶液PH值至08，静置并滤过，取沉淀先用PH值为、浓度为80的乙醇洗涤，除去残留在沉淀表面的母液，然后用6重量倍量沸水洗涤，烘干，即得总三萜类提取物。按照实验例部分方法进行检测，总三萜含量为7222，熊果酸含量为3535。0143实施例40144取紫苏叶粉碎或不粉碎1KG，加入75乙醇15L，加热提取1次，每次120分钟，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏。
36、，加沸水洗涤2次，每次30重量倍量，水洗后浸膏加入10重量倍量浓度为03的KOH乙醇溶液，搅拌30分钟，滤过，滤液加入3W/V的活性炭，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液减压回收乙醇至干，加入1倍量95的乙醇，使溶解，加盐酸调节溶液PH值至08，静置并滤过，取沉淀先用PH值为08、浓度为90的乙醇洗涤，除去残留在沉淀表面的母液，然后用6重量倍量沸水洗涤，烘干，即得总三萜类提取物。按照实验例部分方法进行检测，总三萜含量为7076，熊果酸含量为3296。0145实施例50146取紫苏叶粉碎或不粉碎1KG，加入100乙醇4L，加热提取3次，每次40分钟，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，加。
37、沸水洗涤5次，每次5重量倍量，水洗后浸膏加入10重量倍量浓度为15的KOH乙醇溶液，搅拌30分钟，滤过，滤液加入3W/V的活性炭，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液减压回收乙醇至干，加入1倍量80的乙醇，使溶解，加盐酸调节PH值至2，静置并滤过，沉淀先用PH值为2、浓度为60的乙醇洗涤，除去残留在沉淀表面的母液，然后用6重量倍量沸水洗涤，烘干，即得总三萜类提取物。按照实验例部分方法进行检测，总三萜含量为7713，熊果酸含量为3357。0147显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。说明书CN104208145A141/1页15图1图2说明书附图CN104208145A15。