大环生长素释放肽受体激动剂的盐、溶剂合物和药物组合物及其使用方法.pdf

大环生长素释放肽受体激动剂的盐、 溶剂合物和药物组合 物及其使用方法
    方法
     相关申请的交叉引用
     本申请要求 2009 年 9 月 30 日提交的第 61/247,362 号美国临时申请的优先权， 该 临时申请的公开内容以引用的方式整体并入本文。
     发明领域
     本发明涉及与生长素释放肽 ( 生长激素促分泌素 ) 受体结合和 / 或为其功能性激 动剂的大环化合物的新颖盐和溶剂合物。本发明还涉及这些盐和溶剂合物的多晶型物、 含 有这些盐或溶剂合物的药物组合物以及使用所述药物组合物的方法。 这些药物组合物可用 作用于多种疾病适应症， 尤其用于治疗和预防胃肠道病症的治疗剂， 所述胃肠道病症包括 但不限于术后肠梗阻 ； 胃轻瘫， 包括糖尿病性胃轻瘫和术后胃轻瘫 ； 阿片样物质所诱发的 肠功能障碍 ； 慢性肠假性梗阻 ； 短肠综合征 ； 功能性胃肠道病症 ； 和胃肠运动障碍， 诸如在 危重症护理情况下或者因用药剂治疗而连同其它病状一起出现的胃肠运动障碍。另外， 所 述药物组合物可以应用于治疗和预防代谢和 / 或内分泌病症、 心血管病症、 中枢神经系统 病症、 骨病、 炎性病症、 过度增生病症、 特征在于细胞凋亡和遗传障碍的病症。
     发明背景
     生长素释放肽是新近表征的具有 28 个氨基酸的肽激素， 其最初自大鼠的胃中 分离出， 随后在人类中识别出直接同源物， 其特征在于 Ser3 上异常的正辛酰基修饰。 (Kojima， M. ； Hosoda， H. 等， Nature 1999， 402， 656-660 ； Kojima， M.Regul.Pept.2008， 145， 2-6。) 此激素存在于许多其它物种中， 表明其在正常生理功能中起保守并重要的作 用。已表明生长素释放肽是先前孤儿 G 蛋白偶联受体 (GPCR)( 即 1 型生长激素促分泌素 受体 (GHS-R1a)) 的内源性配体 (Howard， A.D. ； Feighner， S.D. 等， Science 1996， 273， 974-977 ； 第 6， 242， 199 号美国专利 ； 第 WO97/21730 号和第 WO 97/22004 号国际专利申 请 )。GHS-R1a 新近因识别出其内源性配体而被重新分类为生长素释放肽受体 (GRLN) (Davenport， A.P. 等， Pharmacol.Rev.2005， 57， 541-546)。GRLN 主要存在于脑 ( 尤其是 下丘脑中的弓状核和腹内侧核、 海马和黑质 ) 和垂体中， 并且表达于许多其它组织和器 官 中 (Gnanapavan， S. ； Kola， B. ； Bustin， S.A. 等， J.Clin.Endocrinol.Metab.2002， 87， 2988-2991 ； Cruz， C.R. ； Smith， R.G.Vitam.Horm.2008， 77， 47-88)。
     已发现生长素释放肽具有多种内分泌和非内分泌功能 (Broglio， F. ； Gottero， C； Arvat， E. ； Ghigo， E.Horm.Res.2003， 59， 109-117 ； Hosoda， H. ； Kojima， M. ； Kangawa， K.J.Pharmacol.Sci.2006， 100， 398-410) 且 此 作 用 范 围 促 使 去 寻 求 用 于 许 多 治 疗 目 的 的 生 长 素 释 放 肽 受 体 调 节 剂。(Kojima， M. ； Kangawa， K.Nat.Clin.Pract.Endocrinol. Metab.2006 ， 2， 80-88 ； Akamizu ，T. ； Kangawa ，K.Endocr.J. 2006 ， 53 ， 585-591 ； Leite-Moreira， A.F. ； Soares， J.-B.Drug Disc.7oday 2007， 12， 276-288 ； Katergari， S.A. ； Milousis， A. ； Pagonopoulou， O. ； Asimakopoulos， B. ； Nikolettos， N.K.Endocr.J. 2008， 55， 439-453 ； Constantino， L. ； Barlocca， D.Fut.Med. Chem.2009， 1， 157-177。) 例如， 生长素释放肽和生长素释放肽激动剂已被表明在消耗综合征 ( 诸如恶病质 ) 中 具 有 积 极 的 作 用。(Kamiji， M.M. ； Inui， A.Curr.Opin.Clin.Nutr.Metab.Care 2008， 11， 443-451 ； DeBoer， M.D.Nutrition2008， 24， 806-814 ； Ashitani， J. ； Matsumoto， N. ； Nakazato， M.Peptides 2009， 30， 1951-1956 ； Cheung， W.W. ； Mak， R.H.Kidney Intl.2009， 76， 135-137。 ) 已开始对这些激动剂中的某些进行临床试验， 从而利用这些作用。 (Garcia， J.M. ； Polvino ， W.J.The Oncologist 2007 ， 12 ， 594-600 ； Strasser ， F. ； Lutz ， T.A. ； Maeder， M.T.Br.J. Cancer 2008， 98， 300-308 ； Garcia， JM. ； Polvino， W.J.GrowthHorm. IGF Res.2009， 19， 267-273。) 还将这些药剂作为老化干预剂进行了研究。(Smith， R.G. ； Sun， Y. ； Jiang， H. ； Albarran-Zeckler， R. ；Timchenko， N.Ann.N.Y.Acad.Sci.2007， 1119， 147-164。)
     作 为 另 一 实 例， 生 长 素 释 放 肽 在 胃 肠 (GI) 系 统 中 具 有 促 动 力 作 用， 使得生 长 素 释 放 肽激 动剂 可用于在特 征为 GI 运动 障碍的 病 症中 达到治 疗 目的。(Peeters， T.L.Curr.Opin.Pharmacol.2006， 6， 553-558 ； Sanger， G.J.Drug Disc.Today 2008， 13， 234-239 ； Venkova， K. ； Greenwood-Van Meerveld， B.Curr.Opin.Invest.Drugs 2008， 9， 1103-1107 ； DeSmet ， B. ； Mitselos ， A. ； Depoortere ， I.Pharmacol.Ther.2009 ， 123 ， 207-223 ； Camilleri， M. ； Papathanasopoulos， A. ； Odunsi， S.T.Nat.Rev.Gastroenterol. Hepatol.2009， 6， 343-352 ； El-Salhy， M.Int.J.Mol.Med. 2009， 24， 727-732。) 所 述 病 症包括但不限于术后肠梗阻 ； 胃轻瘫， 包括糖尿病性胃轻瘫和术后胃轻瘫 ； 阿片样物质 所诱发的肠功能障碍 ； 慢性肠假性梗阻 ； 短肠综合征 ； 功能性胃肠道病症 ； 和胃肠运动 障碍， 诸如在危重症护理情况下或者因用药剂治疗而连同其它病状一起出现的胃肠运动 障碍。生长素释放肽激动剂还已用作治疗心血管疾病 ( 诸如慢性心力衰竭 ) 的治疗剂 (Nagaya， N. ； Kangawa， K.Drugs 2006， 66， 439-448 ； Garcia， E.A. ； Karbonits， M.Curr. Opin.Pharmacol.2006， 6， 142-147 ； Isgaard， J. ； Barlind， A. ； Johansson， I.Cardiovasc. Hematol.Disord.Drug Targets2008， 8， 133-137)， ， 这是因为生长素释放肽已显示为有 效的血管扩张剂 ； 用 作 治 疗 骨 病 ( 诸 如 骨 质 疏 松 症 ) 的 治 疗 剂 (Svensson， J. ； Lall， S. ； Dickson， S.L. 等， Endocrine2001， 14， 63-66 ； van der Velde， M. ； Delhanty， P. 等， Vitamins and Hormones 2007， 77， 239-258) ； 用作过度增生病症 ( 诸如癌症 ) 的抗血管生 成剂 (Baiguera， S. ； Conconi， M.T. ； Guidolin， D. 等， Int.J. Mol. Med.2004， 14， 849-854 ； Conconi， M.T. ； Nico， B. ； Guidolin， D. 等， Peptides2004， 25， 2179-2185) ； 和用于预防或者 改善累及 CNS 的病状， 包括焦虑、 压力、 认知增强和睡眠调节。(Seoane， L.M. ； Al-Massadi， O. ； Lage， M. ； Dieguez， C. ； Casanueva， F.F.Pediatr.Endocrinol.Rev.2004， 1， 432-437 ； McNay， E.C.Curr.Opin.Pharmacol.2007， 7， 628-632 ； Ferrini， F. ； Salio， C. ； Lossi， L. ； Merighi， A.Curr.Neuropharmacol.2009， 7， 37-49。) 生长素释放肽还显示出抗细胞凋亡 特性， 表现在其能够改善脊髓损伤后的恢复 (Lee， J.Y. ； Chung， H. ； Yoo， Y.S. ； Oh， Y.J. ； Oh， T.H. ； Park， S， Yune， T.Y.Endocrinology.2010， 151， 3815-3826) 或辐射暴露后的恢复 ( 诸 如在辐射复合伤中 )(Jacob， A. ； Shah， K.G. ； Wu， R. ； Wang， P.Mol.Med.2010， 16， 137-143)， 展现出生长素释放肽受体激动剂的其它治疗潜能。最后， 生长素释放肽显示出抗炎作用， 因此， 生长素释放肽激动剂可用于治疗和预防炎性病症。(Vixit， V.D. ； Taub， D.D.Exp.Gerontol.2005， 40， 900-910 ； Taub， D.D.Vitamins and Hormones 2007， 77， 325-346。)
     一系列大环肽模拟物最近已被描述为生长素释放肽受体的调节剂， 并且其可用 于治疗和预防多种医学病状， 包括所概述的代谢和 / 或内分泌病症、 胃肠道病症、 心血管 病症、 肥胖和肥胖相关病症、 中枢神经系统病症、 遗传障碍、 过度增生病症和炎性病症 ( 第 7,452,862 号、 第 7,476,653 号 和 第 7,491,695 号 美 国 专 利 ； 第 WO 2006/009645 号、 第 WO 2006/009674 号、 第 WO 2006/046977 号、 第 WO 2006/137974 号 和 第 WO 2008/130464 号国际专利申请公布 ； 第 2006/025566 号、 第 2007/021331 号、 第 2008/051383 号 和 第 2008/194672 号美国专利申请公布 )。已报道这些大环之一 ( 即化合物 298) 在大鼠 POI 模 型中的活性。(Venkova， K. ； Fraser， G. ； Hoveyda， H.R. ； Greenwood-Van Meerveld， B.Dig. Dis.Sci.2007， 52， 2241-2248 ； Fraser， G.L. ； Venkova， K. ； Hoveyda， H.R. ； Thomas， H. ； Greenwood-Van Meerveld， B.Eur.J.Pharmacol.2009， 604， 132-137。 ) 和其它类型的生长素 释放肽激动剂相比， 化合物 298 在这些动物模型中不会刺激同时发生的 GH 分泌。(Fraser， G.L. ； Hoveyda， H.R. ； Tannenbaum， G.S.Endocrinology 2008， 149， 6280-6288。 ) 然而， 仍需 要可用作活性药物成分并且适合于制备药物组合物的其它形式的化合物 298。
     已知有机化合物的固态特性会显著地影响其研发成医药产品的适宜性 (Berge， S.M. ； Bighley， L. D. ； Monkhouse， D.C.J.Pharm.Sci.1977， 66， 1-19 ； Gould， P.L.Int. J.Pharm.1986， 33， 201-217 ； Byrn， S.R. ； Pfeiffer， R.R. ； Stephenson， G. ； Grant， D.J.W. ； Gleason， W.B.Chem.Mater.1994， 6， 1146-1158 ； Bighley， L. D. ； Berge， S.M. ； Monkhouse， D.C.Salt Forms of Drugs and Absorption.Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology ； Swarbrick， J.， Boylan， J.C. 编 ； Marcel Dekker， Inc. ： New York， 1996 ； 第 13 卷， 第 453-499 页 ； Stahl， P.H.， Wermuth， C.G. 编， Handbook of Pharmaceutical Salts ： Properties， Selection and Use ； VHCA 和 Wiley-VCH ： Zurich， Switzerland 和 Weinheim， Germany， 2002 ； Clas， S.-D.Curr.Opin.Drug Disc.Develop.2003， 6， 555-560 ； Huanga， L.-F. ； Tong， W.-Q.Adv.Drug Deliv.Rev.2004， 56， 321-334 ； Serajuddin， A.T.M.Adv. Drug Deliv.Rev.2007， 59， 603-616 ； Paulekuhn， G.S. ； Dressman， J.B. ； Saal， C.J. Med. Chem.2007， 5O， 6665-6672。)
     呈固态的化合物可能与一个或多个溶剂分子形成结晶结构的一部分， 继而被称为 溶剂合物。 这些溶剂合物同样具有特定物理化学特性和其它特性， 所述特性可能显著不同， 取决于溶剂的性质和与晶体缔合的溶剂分子的数目。这又可能继而极大地影响物质的溶 解度和生物利用度以及其它医药相关参数。(Vippagunta， S.R. ； Brittain， H.G. ； Grant，
     D.J.Adv.Drug Deliv.Rev.2001， 48， 3-26。)
     除鉴别出最适当的盐或溶剂合物形式之外， 对于固态物质还需考虑多晶型现象。 多晶型物是相同化学物质的不同晶形。 (Burger， A. ；Ramberger， R.Mikrochim.Acta 1979， 2， 259-271， 273-316 ； Vippagunta， S.R. ； Brittain， H.G. ； Grant， D.J.W.Adv.Drug Deliv. Rev.2001， 48， 3-26 ； Singhal， D. ； Curatolo， W.Adv.Drug Deliv.Rev.2004， 56， 335-347 ； Llinàs， A. ； Goodman， J.M.Drug Disc.Today 2008， 13， 198-210 ； Brittain， H.G. 编， Polymorphism in Pharmaceutical Solids， 第 2 版， Informa Healthcare， London and New York， 2009。) 不同的多晶型物可以具有不同的物理特性， 包括但不限于熔点、 溶解度、 流动 特性、 可压缩性和密度、 溶解率以及稳定性。
     就如化合物 298 的大环分子而言， 对其固态性质知之甚少， 这是因为此一般类别 的分子很少被研发成医药产品。已报道化合物 298 的盐酸盐仅用作化合物 298 的纯化过程 中的中间体 ( 第 7,476,653 号 ； 第 7,491,695 号美国专利 ； 和美国专利申请 12/351,395)， 但是没有描述特定溶剂合物或结晶多晶型物。化合物 298 的未指定制剂已对人类显示 出适当的安全和药代动力学特性 (Lasseter， K.C. ； Shaughnessy， L. ； Cummings， D. 等， J. Clin.Pharmacol.2008， 48， 193-202)，以 及 治 疗 POI(Popescu， I. ； Fleshner， P.R. ； Pezzullo， J.C. ； Charlton， P.A. ； Kosutic， G. ； Senagore， A.J.Dis Colon Rectum 2010， 53， 126-134) 和糖尿病性胃轻瘫 (Ejskjaer， N. ； Vestergaard， E.T. ； Hellstrom， P.M. 等， Aliment Pharmacol Ther2009， 29， 1179-1187 ； Ejskjaer， N. ； Dimcevski， G. ； Wo， J. 等， Neurogastroenterol Motil 2010， 1069-1078) 的功效。
     由本发明提供的特定盐、 溶剂合物和多晶型物具有优异的高度有利的特性， 所述 特性适于医药研发且未在现有技术中公开。此外， 这些固态形式使得制备效能特征得到改 良的药物组合物的制剂成为可能。
     发明概述
     本发明提供构象确定的大环化合物的溶剂合物和其多晶型物。 这些溶剂合物和多 晶型物可以充当生长素释放肽 ( 生长激素促分泌素 ) 受体 (GRLN、 GHS-R1a) 及其亚型、 同种 型 (isoform) 和变体的激动剂。此 外， 其能够容易地配制成可用作药剂的组合物。更具体 而言， 能够可重现地制备这些具有高稳定性、 显著溶解度、 缺少吸湿性、 具有所需溶解率和 / 或良好生物利用度以及易于处理且易于制备药物组合物的溶剂合物和多晶型物。
     根据本发明的各方面， 本发明涉及具有以下结构的溶剂合物 ：
     其中 HX 选自盐酸、 氢溴酸、 氢碘酸、 碳酸、 硫酸、 硝酸、 磷酸、 甲酸、 乙酸、 丙酸、 马来 酸、 琥珀酸、 扁桃酸、 富马酸、 丙二酸、 柠檬酸、 丙酮酸、 草酸、 硬脂酸、 抗坏血酸、 乙醇酸、 水杨 酸、 吡喃糖苷酸 (pyranosidyl acid)、 α- 羟酸 ( 诸如乳酸、 苹果酸或酒石酸 )、 氨基酸、 芳
     族酸和磺酸 ( 诸如甲磺酸或乙磺酸 )。
     本发明的特定方面提供这些溶剂合物的非晶形或晶形。 其它具体方面提供溶剂合 物， 其是水合物或乙醇合物。
     本发明的另一特定方面提供单盐酸盐一水合物溶剂合物、 单盐酸盐二水合物溶剂 合物和单盐酸盐单乙醇合物溶剂合物。
     本发明的另一特定方面提供具有上文所示结构的溶剂合物的多晶型物 ：
     其中 HX 选自盐酸、 氢溴酸、 氢碘酸、 碳酸、 硫酸、 硝酸、 磷酸、 甲酸、 乙酸、 丙酸、 马来 酸、 琥珀酸、 扁桃酸、 富马酸、 丙二酸、 柠 檬酸、 丙酮酸、 草酸、 硬脂酸、 抗坏血酸、 乙醇酸、 水 杨酸、 吡喃糖苷酸、 α- 羟酸 ( 诸如乳酸、 苹果酸或酒石酸 )、 氨基酸、 芳族酸和磺酸 ( 诸如甲 磺酸或乙磺酸 )。
     在另一方面， 提供了制备这些多晶型物的方法。 对于本发明的一实施方案来说， 所 述方法包括 ：
     (a) 将具有以下结构的大环化合物
     溶于醇的溶液中， 形成溶液 A ；
     (b) 将酸 HX 加入溶液 A， 形成酸化的溶液 A， 其中 HX 选自盐酸、 氢溴酸、 氢碘酸、 碳 酸、 硫酸、 硝酸、 磷酸、 甲酸、 乙酸、 丙酸、 马来酸、 琥珀酸、 扁桃酸、 富马酸、 丙二酸、 柠檬酸、 丙 酮酸、 草酸、 硬脂酸、 抗坏血酸、 乙醇酸、 水杨酸、 吡喃糖苷酸、 α- 羟酸 ( 诸如乳酸、 苹果酸或 酒石酸 )、 氨基酸、 芳族酸和磺酸 ( 诸如甲磺酸或乙磺酸 ) ；
     (c) 任选地将酸化的溶液 A 冷却 ；
     (d) 从酸化的溶液 A 中分离沉淀的盐 ；
     (e) 将来自 (d) 的所沉淀的盐溶于醇与水的热混合物中， 形成溶液 B ；
     (f) 将溶液 B 冷却 ；
     (g) 从溶液 B 中分离沉淀的盐 ；
     (h) 将来自 (g) 的所沉淀的盐溶于酮溶剂与水的热混合物中， 形成溶液 C ；
     (i) 将溶液 C 冷却到环境温度或环境温度以下 ； 以及
     (j) 从溶液 C 中分离沉淀的盐。
     在某些其它实施方案中， 所述方法中的醇是乙醇， 酸 HX 是盐酸 或酮溶剂是甲基 乙基酮 (2- 丁酮 )。
     本发明其它方面提供药物组合物， 其包含这些溶剂合物或多晶型物和药学上可接 受的载体、 赋形剂或稀释剂。在一些实施方案中， 药物组合物包含 (a) 本文所述的多晶型物 或溶剂合物、 缓冲剂和张度剂。在一些实施方案中， 乙酸盐缓冲液的 pH 值是约 4.0 到 6.0， 乙酸盐缓冲液是乙酸盐缓冲液和 / 或张度剂是右旋糖。在一些实施方案中， 乙酸盐缓冲液 的浓度是约 5mM 到 50mM， 且右旋糖以约 4％到 6％的浓度存在于水中。在特定实施方案中， 药物组合物包含本文所述的多晶型物或溶剂合物、 10mM 乙酸盐和溶于水中的 5 ％右旋糖 (D5W)。
     在某些实施方案中， 药物组合物中存在的溶剂合物或多晶型物的量是在组合物的 约 75 重量％到约 99.9 重量％范围内。在一些实施方案中， 在制备药物组合物和 / 或最终 药物组合物期间仅存在活性物质的一种溶剂合物或多晶型物。
     在其它实施方案中， 药物组合物是固体剂型。 在更其它实施方案中， 药物组合物是 含水剂型， 即提供于溶剂中。 在一特定方面， 提供了单盐酸盐一水合物的缓冲含水药物组合物。
     另一特定方面提供了制备这些药物组合物的方法。在本发明的一实施方案中， 其 中药学上可接受的载体、 赋形剂或稀释剂是缓冲剂和张度剂， 所述方法包括 ：
     (a) 将张度剂溶于溶剂中， 形成溶液 D ；
     (b) 将酸加入溶液 D 中， 形成酸性的溶液 D ；
     (c) 将具有以下结构的大环化合物
     其中 HX 选自盐酸、 氢溴酸、 氢碘酸、 碳酸、 硫酸、 硝酸、 磷酸、 甲酸、 乙酸、 丙酸、 马来 酸、 琥珀酸、 扁桃酸、 富马酸、 丙二酸、 柠檬酸、 丙酮酸、 草酸、 硬脂酸、 抗坏血酸、 乙醇酸、 水杨 酸、 吡喃糖苷酸、 α- 羟酸 ( 诸如乳酸、 苹果酸或酒石酸 )、 氨基酸、 芳族酸和磺酸 ( 诸如甲磺 酸或乙磺酸 ) ； 溶于酸化的溶液 D 中， 形成溶液 E ；
     (d) 通过添加碱调节溶液 E 的 pH 值， 形成溶液 F ； 以及
     (e) 用溶剂将溶液 F 稀释到有效浓度。
     在一实施方案中， 前述方法中的步骤依序进行， 而在另一实施方案中， 各步骤以步 骤 (b)， 步骤 (d)， 步骤 (a)， 步骤 (c)， 步骤 (e) 的顺序进行。
     在其它实施方案中， 此方法中溶剂是注射用水， 张度剂是右旋糖， 酸是乙酸， 碱是 氢氧化钠， pH 值被调节到 4.0-5.0 之间， 或有效浓度是 0.05mg/mL 到 5.0mg/mL。在此方法 的具体实施方案中， pH 值处于 4.3-4.7 之间或有效浓度是 1.0±0.1mg/mL 或 2.0±0.2mg/
     mL( 以游离碱当量给出 )。在另一实施方案中， 所述方法进一步包括通过一个或多个灭菌过 滤器 ( 诸如 0.22μm 过滤器 ) 过滤。
     在本发明的另一方面， 提供具有以下结构的大环化合物的盐 ：
     其中 HX 选自碳酸、 硫酸、 硝酸、 磷酸、 甲酸、 乙酸、 丙酸、 马来酸、 琥珀酸、 扁桃酸、 富 马酸、 丙二酸、 柠檬酸、 丙酮酸、 草酸、 硬脂酸、 抗坏血酸、 乙醇酸、 水杨酸、 吡喃糖苷酸、 α- 羟 酸 ( 诸如乳酸、 苹果酸或酒石酸 )、 氨基酸、 芳族酸和磺酸 ( 诸如甲磺酸或乙磺酸 )。
     本发明其它方面涉及制备盐、 溶剂合物和多晶型物及其药物组合物的方法。
     本发明的其它方面提供了用有效量的含有溶剂合物或多晶型物的药物组合物治 疗以下疾病的方法 ： 胃肠道病症、 由食欲降低或食物摄入减少表征的病症、 代谢或内分泌病 症、 心血管病症、 炎性病症、 骨病、 由细胞凋亡表征的病症或过度增生病症。
     本发明的另外方面进一步提供刺激胃肠运动和 / 或治疗胃肠道病症的方法， 所述 方法包括对受试者施用有效量的这些盐、 溶剂合物或多晶型物来刺激哺乳动物 GRLN 受体。
     本发明的各方面还涉及预防和 / 或治疗本文所述的病症， 尤其以下病症的方法 ： 胃肠道病症， 包括术后肠梗阻、 胃轻瘫 ( 诸如糖尿病性胃轻瘫和术后胃轻瘫 )、 阿片样物质 所诱发的肠功能障碍、 慢性肠假性梗阻、 短肠综合征、 功能性胃肠道病症 ； 胃肠运动障碍， 诸 如在危重症护理情况下或者因用药剂治疗而连同其它病状 ( 包括感染、 神经疾病、 神经肌 肉病状、 结缔组织疾病和内分泌或代谢失调 ) 一起出现的胃肠运动障碍 ； 诸如由癌症化疗 所引起的呕吐、 诸如与肠易激综合征 (IBS) 的运动不足阶段有关的便秘、 与消耗性病状有 关的胃排空延迟、 胃食管反流病 (GERD)、 胃溃疡、 克罗恩氏病 (Crohn′ s disease) 和其它 胃肠道疾病及病症。
     在特定实施方案中， 胃肠道病症是术后肠梗阻、 胃轻瘫、 糖尿病性胃轻瘫、 术后胃 轻瘫、 阿片样物质所诱发的肠功能障碍、 慢性肠假性梗阻、 急性结肠假性梗阻 ( 奥格尔维氏 综合征 (Ogilvie′ s syndrome))、 短肠综合征、 呕吐、 便秘为主的肠易激综合征 (IBS)、 慢 性便秘、 功能性消化不良、 癌症相关性消化不良综合征、 移植物抗宿主反应、 胃食管反流病 (GERD)、 胃溃疡、 克罗恩氏病、 胃肠炎、 饮食障碍 ( 包括神经性厌食症和贪食症 ) 患者的胃 肠功能失调或胃排空延迟、 帕金森氏病 (Parkinson′ s disease) 患者的胃肠功能失调或 胃排空延迟、 强直性肌营养不良患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 自主神经退化患者的 胃肠功能失调或胃排空延迟、 中风患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 多发性硬化患者的 胃肠功能失调或胃排空延迟、 神经疾病和病症 ( 包括淀粉 样蛋白神经病、 原发性自主运动 不能、 交感神经损伤和幽门狭窄 ) 患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 精神病 ( 包括抑郁 症 ) 患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 硬皮病患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 囊性 纤维化患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 结缔组织疾病 ( 包括全身性硬化、 皮肌炎、 多发
     性肌炎、 全身性红斑狼疮和淀粉样变性 ) 患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 肝硬化患者 的胃肠功能失调或胃排空延迟、 肝衰竭患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 肾衰竭患者的 胃肠功能失调或胃排空延迟、 胆囊病症患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 偏头痛患者的 胃肠功能失调或胃排空延迟、 败血症患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 脑干病变患者的 胃肠功能失调或胃排空延迟、 脊髓损伤患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 癌症 ( 包括胃 癌、 胆癌、 食道癌、 胃癌和胰腺癌 ) 患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 瘤形成患者的胃肠 功能失调或胃排空延迟、 进行辐射治疗患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 弛缓不能患者 的胃肠功能失调或胃排空延迟、 传染病 ( 包括 HIV、 带状疱疹 (Herpes zoster) 感染和恰加 斯氏病 (Chagas disease)) 患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 因手术而引起的胃肠功能 失调或胃排空延迟、 危重病患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 需要危重症护理的患者的 胃肠功能失调或胃排空延迟、 移植 ( 包括心脏或肺移值 ) 后患者的胃肠功能失调或胃排空 延迟、 特纳氏综合征 (Turner′ s syndrome) 患者的胃肠功能失调或胃排空延迟 ； 因用药剂 治疗而引起的胃肠功能失调或胃排空延迟， 所述药剂包括阿片样物质、 抗胆碱能药、 β 阻断 剂、 钙通道拮抗剂、 胰高血糖素样肽 -1(GLP-1) 受体激动剂、 胰淀素受体激动剂、 肽 YY(PYY) 受体激动剂、 蛋白酶体抑制剂、 三环抗抑郁药、 单胺摄取阻断剂抗抑郁药、 癌症化学治疗剂、 肾上腺素能激动剂、 多巴胺能剂、 抗疟药、 解痉药、 大麻素激动剂、 奥曲肽、 左旋多巴、 酒精和 尼古丁 ； 因内分泌失调 ( 包括甲状腺功能减退、 甲状腺功能亢进、 艾迪生氏病 (Addison′ s disease) 和卟啉症 ) 所致的胃肠功能失调或胃排空延迟、 因代谢失调 ( 包括高血糖症、 低钾 血症和低镁血症 ) 所致的胃 肠功能失调或胃排空延迟、 因麻醉所致的胃肠功能失调或胃 排空延迟、 因机械通气所致的胃肠功能失调或胃排空延迟、 因电解质紊乱所致的胃肠功能 失调或胃排空延迟、 因严重创伤所致的胃肠功能失调或胃排空延迟， 或因疼痛所致的胃肠 功能失调或胃排空延迟。
     本发明还涉及用于制备用于预防和 / 或治疗本文所述病症的药物的溶剂合物或 多晶型物。
     本发明的其它方面提供了试剂盒， 其包含一个或多个容器， 所述容器容纳包含有 效量的一种或多种本发明化合物的药物剂量单位， 所述药物剂量单位连同其任选的使用说 明书一起封装。
     本发明的上述及其它方面更详细地阐明于下文所述的说明书中。
     附图简述
     图 1 显示本发明代表性溶剂合物化合物 298·HCl·H2O 的合成途径。
     图 2 显示本发明代表性溶剂合物化合物 298·HCl·H2O 的单晶 X 射线结构。
     图 3 显示本发明的另一代表性溶剂合物化合物 298·HCl·2H2O 的单晶 X 射线结 构。
     图 4 显示本发明的另一代表性溶剂合物化合物 298·HCl·EtOH 的单晶 X 射线结 构。
     图 5 显示本发明代表性溶剂合物化合物 298·HCl·H2O 的 1H NMR 谱。
     图 6 显示本发明代表性溶剂合物化合物 298·HCl·H2O 的 13C NMR 谱。
     图 7 显示本发明代表性溶剂合物化合物 298·HCl·H2O 的 19F NMR 谱。
     图 8 显示本发明代表性溶剂合物化合物 298·HCl·H2O 的 FT-IR 谱。图 9 显示本发明代表性多晶型物的 X 射线粉末衍射图 (XRPD)。
     图 10 显示本发明代表性溶剂合物化合物 298·HCl·H2O 的差示扫描量热法 (DSC) 热谱图。
     图 11 显示本发明代表性溶剂合物化合物 298·HCl·H2O 的动态蒸汽吸附 / 解吸 附 (DVS) 实验结果。
     发明详述
     现将结合本文所述的实施方案更详细地描述本发明的上述及其它方面。应了解， 本发明可以不同形式体现且不应将其视作局限于本文所述的实施方案。相反， 提供这些实 施方案以使本发明公开内容详尽且完整， 并且将本发明的范围完整地传达给本领域的技术 人员。
     本发明的说明书中所用的术语仅旨在描述特定实施方案， 而不意图限制本发明。 除非上下文另外明确指示， 否则如本发明的说明书和所附的权利要求中所用的单数形式 “一个 ( 种 )” 和 “所述” 还意图包括复数形式。另外， 如本文所用的术语 “和 / 或” 包括所列 相关项目中的一个或多个的任何及所有组合并且可缩写为 “/” 。
     除非另外定义， 否则本文所用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域的 一般技术人员通常所了解的含义相同。
     本文引用的所有出版物、 美国专利申请、 美国专利和其它参考文献以引用的方式 整体并入本文。
     “稳定化合物” 或 “稳定结构” 指的是足够稳固从而能够以适用的纯度分离和配制 成有效治疗剂的化合物。
     术语 “氨基酸” 指的是为本领域技术人员所知的常见天然 ( 基因编码的 ) 或合成氨 基酸和其常见衍生物。 “标准” 或 “蛋白原 (proteinogenic)” 在应用于氨基酸时指基因编码 的 20 种呈天然构型的氨基酸。同样， “非天然” 或 “不常见” 在应用于氨基酸时指非天然的、 稀少的或合成的氨基酸的广泛选择物， 诸如以下文献中所述的氨基酸 ： Hunt， S.Chemistry and Biochemistry of the Amino Acids， Barrett， G.C. 编著， Chapman and Hall ： New York， 1985 ； Kamphuis， J. ； Meijer， E.M. ； Boesten， W.H. 等， Ann.N.Y. Acad.Sci.1992， 672， 510-527 ； Kotha， S.Acc.Chem.Res.2003， 36， 342-351 ； Cardillo， G. ； Gentilucci， L. ； Tolomelli， A.Mini-Rev.Med.Chem.2006， 6， 293-304 ； Fotheringham， I. ； Archer， I. ； Carr， R. ； Speight， R. ；Turner， N.J.Biochem.Soc.Trans.2006， 34， 287-290。
     用 于 氨 基 酸 的 缩 写 和 肽 命 名 法 遵 循 J. Biol.Chem.1972， 247， 977-983 中 的 IUPAC-IUB 生物化学命名委员会 (IUPAC-IUBCommission of Biochemical Nomenclature) 的规则。 此文献已更新 ： Biochem.J. 1984， 219， 345-373 ； Eur.J. Biochem.1984， 138， 9-37 ； 1985， 152， 1； Internat.J. Pept.Prot.Res.1984， 24， 第 84 页 后 ； J. Biol.Chem.1985， 260， 14-42 ； Pure Appl.Chem.1984， 56， 595-624 ； Amino Acids and Peptides 1985， 16， 387-410 ；和 Biochemical Nomenclature and Related Documents，第 2 版， Portland Press， 1992， 第 39-67 页。所述规则的扩充内容公布于 JCBN/NC-IUB Newsletter 1985， 1986， 1989 中 ； 参见 Biochemical Nomenclature and Related Documents， 第 2 版， Portland Press， 1992， 第 68-69 页。
     术语 “激动剂” 指使得蛋白质、 受体、 酶或类似物的内源性配体的至少一些效应加倍的化合物。
     术语 “有效量” 或 “有效” 意图表示引起如通过临床试验和评估、 患者观测和 / 或 类似方法所指明的疾病或病症的症状缓解的剂量和 / 或使得生物活性或化学活性出现可 检测变化的剂量。可检测的变化可以由本领域的技术人员检测和 / 或进一步定量以用于相 关的机制或过程。 如本领域通常所了解， 剂量将根据施用途径、 症状和患者的体重以及所施 用的化合物而变化。
     “组合” 施用两种或更多种化合物意指两种化合物的施用时间足够接近以使得一 种化合物的存在会改变另一化合物的生物效应。两种化合物可以同时 ( 并行 ) 或依序施 用。 可以通过先混合化合物， 之后施用， 或通过在同一时间点但在不同解剖部位或使用不同 施用途径施用化合物来进行同时施用。如本文所用的短语 “并行施用” 、 “组合施用” 、 “同时 施用 (simultaneous administration)” 或 “同时施用 (administered simultaneously)” 意指化合物在同一时间点施用或彼此紧密相继施用。在后一种情况下， 两种化合物的施用 时间足够接近以使得所观测到的 结果与在同一时间点施用化合物时所达到的结果没有区 别。
     术语 “药学上可接受的盐” 意图表示化合物的盐形式， 所述盐形式允许所述化合 物用作或配制成药物且保留指定化合物的生物有效性并且在生物学上或其它方面合乎需 要。所述的一些盐描述于 Stahl， P.H.， Wermuth， C.G. 编著， Handbook of Pharmaceutical Salts ： Properties， Selection and Use ； VHCA 及 Wiley-VCH ： Zurich， Switzerland 及 Weinheim， Germany， 2002 中。 术语 “药学活性代谢物” 意图表示通过指定化合物在体内代谢而产生的药理学活 性产物。
     术语 “盐” 意图表示由酸与碱接触而产生的离子化合物。盐在呈固体形式时可以 是非晶形的、 结的晶或部分结晶的。
     术语 “溶剂合物” 意图表示含有溶剂分子作为一部分晶体结构的指定化合物的药 学上可接受的固体形式。溶剂合物通常保留所述化合物的至少一些生物有效性。溶剂合物 可具有不同的溶解度、 吸湿性、 稳定性和其它特性。 溶剂合物的实例包括但不限于化合物与 水、 异丙醇、 乙醇、 甲醇、 DMSO、 乙酸乙酯、 乙酸或乙醇胺的组合。溶剂合物有时称作 “假多晶 型物 (pseudopolymorph)” 。
     术语 “水合物” 意图表示含有水的溶剂合物。
     术语 “乙醇合物” 意图表示含有乙醇的溶剂合物。
     术语 “多晶型物 (polymorph” 或 “多晶型物 (polymorphic form)” 意图表示物质 的单晶形。结晶物质可具有一种或多种多晶型物。多晶型物的化学组成相同， 但是晶格结 构中分子的排列或构象不同。不同多晶型物可以具有不同的物理和化学特性， 包括不同的 密度、 熔点、 溶解度和其它特性。
     1. 化合物
     本文公开的化合物可具有不对称中心。本发明的化合物可以单个立体异构体、 外 消旋体和 / 或对映体和 / 或非对映体的混合物形式存在。所有所述的单个立体异构体、 外 消旋体和其混合物意图处于本发明范 围内。然而， 在特定实施方案中， 使用呈光学纯形式 的本发明化合物。如本文所用的术语 “S” 构型和 “R” 构型如 IUPAC 1974Recommendations
     for Section E， Fundamentals of Stereochemistry(Pure Appl.Chem.1976， 45， 13-30) 所 定义。除非另外描绘成某一特定取向， 否则本发明涉及所有立体异构形式。
     如本领域技术人员通常所了解， “光学纯的” 化合物是仅含有单个对映体的化合 物。如本文所用的术语 “具有光学活性” 意图表示化合物所包含的一种对映体相比另一对 映体来说至少足够过量以便混合物使平面偏振光旋转。 光学活性化合物能够使平面偏振光 旋转。一种对映体相比另一对映体来说过量通常表示为对映体过量 (e.e.)。在描述光学 活性化合物中， 字首 D 和 L 或 R 和 S 用于表示所述分子关于其手性中心的绝对构型。字首 “d” 和 “1” 或 (+) 和 (-) 用于表示化合物的旋光性 ( 即， 平面偏振光由光学活性化合物旋 转的方向 )。 “l” 或 (-) 字首指示化合物具有左旋性 ( 即， 平面偏振光向左或逆时针方向旋 转 )， 而 “d” 或 (+) 字首意指化合物具有右旋性 ( 即， 平面偏振光向右或顺时针方向旋转 )。 旋光性的符号 ( 即 (-) 和 (+)) 与分子的绝对构型 (R 和 S) 无关。
     具有所需药理学特性的本发明化合物是旋光的， 并且可以包含至少 90 ％ (80 ％ e.e.)、 至少 95％ (90％ e.e.)、 至少 97.5％ (95％ e.e.) 或至少 99％ (98％ e.e.) 的单个异 构体。
     本发明的盐、 溶剂合物和 / 或多晶型物相较于先前已知的化合物显示出增强的稳 定性。 在各种环境条件下的稳定性尤其能够确保不形成具有可能不合需要的副作用的分解 产物并且药物组合物中活性物质的量不会随时间推移或在储存期间减少到有效量以下。 同 样， 物质在制备含有这物质的药物组合物中所涉及的必要加工期间必须保持稳定。 本发明的盐、 溶剂合物和 / 或多晶型物显示出提高的活性物质溶解度。这在以下 情况中是合乎需要的 ： 例如在将药物组合物制备成诸如用于注射或输注的溶液期间， 活性 物质必须充分溶解于生理上可接受 的溶剂中并且随时间推移以及在储存期间保持可溶。 同样， 对于口服制剂来说， 活性物质同样必须充分溶解于生理性流体中， 以便在施用后溶解 率允许在血浆中达到活性物质的治疗水平。本发明的盐、 溶剂合物和 / 或多晶型物可拥有 这些能力。
     为了制备用于口服施用的药物组合物， 活性物质的固态特性因另外的原因而同 样有益。流动性会影响在制备和加工药物组合物 ( 通常为片剂或胶囊 ) 期间处理物质的 简易性， 虽然这同样和制备如糖浆剂或酏剂的液体组合物有关。流动性不良通常需要添 加赋形剂以改良流动特性， 从而会增加复杂度并提高药物组合物的成本。(Aleeva， G.N. ； Zhuravleva， M.V. ； Khafizyanova， R.K.Pharm.Chem.J. 2009， 43， 230-234。) 固态形式影响 活性物质的可压缩性， 此可压缩性同样是固体剂型的一个重要的参数。 本发明的盐、 溶剂合 物和 / 或多晶型物可拥有这些能力。
     活性物质的吸湿性也是一个目标参数。药物质吸收水分， 从而重量增加且因此使 得活性组分的相对含量减少。所述物质通常被特殊地储存以防止其吸收水分。吸湿性也可 能在制备活性物质或含有其的药物组合物期间造成困难， 这是因为在制造期间吸收水分会 引起加工和分离工序方面的技术问题。本发明的盐、 溶剂合物和 / 或多晶型物显示出低吸 湿性。
     2. 合成方法
     用于本发明盐、 溶剂合物和多晶型物的一般类型大环结构的合成方法描述于国际 专利申请 WO 01/25257、 WO 2004/111077、 WO2005/012331 和 WO 2005/012332 中。如图 1 中
     所概述来制备化合物 298 和其盐酸盐 ( 第 7,476,653 号和第 7,491,164 号美国专利 ； 美国 专利申请公布 2009/0198050 ； 和美国专利申请 12/351,395)。 本发明的盐、 溶剂合物和多晶 型物可以使用下文所述的一般方法以及实施例中所提供的一般方法来制备。
     方法 2A. 制备本发明代表性盐或溶剂合物的一般方法
     使用以下一般工序来制备本发明的代表性盐或溶剂合物 ：
     (a) 将 1 当量 (1.0 当量 ) 呈其游离碱形式的大环化合物加入适当的容器中 ；
     (b) 向游离碱中添加 1.1 当量酸水溶液 ；
     (c) 将所得混合物搅动多达 72 小时 ；
     (d) 将混合物加热， 并添加有机溶剂 ( 使用诸如逐滴或与水溶液体积成固定比率 的技术 ) ；
     (e) 将热混合物缓慢冷却到室温， 任选地进一步冷却到 4℃ ；
     (f) 通过过滤收集所沉淀的盐并洗涤。
     方法 2B. 制备本发明的代表性多晶型物的一般方法
     可以使用以下工序制备本发明的代表性多晶型物 ：
     (a) 将大环化合物溶于醇溶液中， 形成溶液 A ；
     (b) 将酸加入溶液 A 中， 形成酸化的溶液 A， 然后可以任选地将其冷却 ；
     (c) 从酸化的溶液 A 中分离沉淀的盐 ；
     (d) 将来自 (c) 的所沉淀的盐溶于醇与水的热混合物中， 形成溶液 B ；
     (e) 将溶液 B 冷却 ；
     (f) 从溶液 B 中分离沉淀的盐 ；
     (g) 将来自 (f) 的所沉淀的盐溶于酮溶剂与水的热混合物中， 形成溶液 C ；
     (h) 将溶液 C 冷却到环境温度或环境温度以下 ； 以及
     (i) 从溶液 C 中分离沉淀的多晶型物。
     本发明的盐也可能通过为本领域技术人员所知的任何合适的方法来制备， 包括 用以下酸处理游离碱 ： 无机酸， 诸如盐酸、 氢溴酸、 氢碘酸、 碳酸、 硫酸、 硝酸、 磷酸及类似 酸； 或有机酸， 包括甲酸、 乙酸、 丙酸、 马来酸、 琥珀酸、 扁桃酸、 富马酸、 丙二酸、 柠檬酸、 丙 酮酸、 草酸、 硬脂酸、 抗坏血酸、 乙醇酸、 水杨酸 ； 吡喃糖苷酸， 诸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸 ； α- 羟酸， 诸如乳酸、 苹果酸或酒石酸 ； 氨基酸， 诸如天冬氨酸或谷氨酸 ； 芳族酸， 诸如苯甲 酸或肉桂酸 ； 磺酸， 诸如对甲苯磺酸、 甲磺酸、 乙磺酸、 2- 羟基乙磺酸、 苯磺酸、 环己基 - 氨基 磺酸或类似酸。本发明代表性盐的制备法提供于实施例中。
     本发明的盐可以与其所接触的某些溶剂形成溶剂合物。 这些溶剂通常是参与化合 物反应或纯化的溶剂。 本发明的代表性盐、 溶剂合物和多晶型物按照实施例中所述来制备。
     3. 药物组合物
     本发明的盐、 溶剂合物和多晶型物可配制成各种剂型的药物组合物。在所述各种 剂型中可包括量为约 75％、 80％、 85％、 90％、 95％、 99％或 99.9％的本发明盐、 溶剂合物和 多晶型物。因此， 药物组合物的一种特定剂型可能包括受控、 稳定和 / 或所需量的呈盐形 式、 溶剂合物形式或多晶型物的本文所述化合物。 在一些实施方案中， 在剂型中包括活性物 质的最具热力学稳定性的多晶型物。
     为了制备本发明的药物组合物， 根据为药物配制领域的技术人员所知的技术， 将一种或多种盐、 溶剂合物或多晶型物作为活性成分与适当的载体、 赋形剂和添加剂紧密地 混合。
     用于这些药物组合物的载体和添加剂可以采用多种形式， 取决于预期的施用方 式。因此， 用于口服施用的组合物可能是例如固体制剂， 诸如片剂、 糖衣片剂、 硬胶囊、 软胶 囊、 颗粒剂、 粉末剂及类似制剂， 其中合适的载体和添加剂是淀粉、 糖、 粘合剂、 稀释剂、 成粒 剂、 润滑剂、 崩解剂及类似物。由于片剂和胶囊易于使用并且患者依从性较高， 所以片剂和 胶囊代表用于许多医学病状的最有利的口服剂型。
     类似地， 液体制剂组合物包括溶液、 乳液、 分散液、 混悬液、 糖浆剂、 酏剂及类似 制剂， 其中合适的载体和添加剂是水、 醇、 油、 二醇、 防腐剂、 调味剂、 着色剂、 悬浮剂及类 似物。用于胃肠外施用的典型制剂包含活性成分以及载体， 诸如无菌水或胃肠外可接受 的油， 包括聚乙二醇、 聚乙烯吡咯烷酮、 卵磷脂、 花生油或芝麻油， 其中也 可能包括用于 协助溶解或防腐的其它添加剂。在溶液的情况下， 可将其冻干成粉末， 然后在临用前复水 (reconstituted)。 对于分散液和混悬液来说， 适当的载体和添加剂包括含水树胶、 纤维素、 硅酸盐或油。
     根据本发明的实施方案的药物组合物包括适合于口服、 直肠、 局部、 吸入 ( 例如经 由气溶胶 )、 经颊 ( 例如舌下 )、 阴道、 局部 ( 即， 皮肤和粘膜表面， 包括气管表面 )、 透皮施用 和胃肠外或输注 ( 例如皮下、 肌肉内、 皮内、 关节内、 胸膜内、 腹膜内、 鞘内、 脑内、 颅内、 动脉 内或静脉内 ) 的组合物， 尽管在任何给定情况下最合适的途径将取决于正治疗的病状的性 质和严重度以及正使用的特定活性剂的性质。
     用于注射的组合物将包括活性成分连同合适的载体， 包括丙二醇 - 醇 - 水、 等渗 水、 无菌注射用水 (WFI， USP)、 emulPhorTM- 醇 - 水、 cremophor-ELTM 或其它为本领域技术 人员所知的合适的载体。这些载体可单独使用或与其它常规的增溶剂 ( 诸如乙醇、 丙二醇 或其它为本领域技术人员所知的试剂 ) 组合使用。
     在本发明的大环化合物的溶剂合物、 多晶型物和盐将以溶液或注射剂形式施用 时， 所述化合物可以通过溶解或悬浮于任何常规的稀释剂中来加以使用。稀释剂可能包括 例如生理盐水、 林格氏溶液 (Ringer′ ssolution)、 葡萄糖水溶液、 右旋糖水溶液、 醇、 脂肪 酸酯、 甘油、 二醇、 植物或动物源性油、 石蜡及类似物。 这些制剂可以根据为本领域技术人员 所知的任何常规方法来制备。
     此外， 在制备这些包含一种或多种活性成分与为配制组合物所需的组分的混合物 的药物组合物中， 可以并入其它药理上可接受的常规添加剂， 例如赋形剂、 稳定剂、 抗菌剂、 湿润剂、 乳化剂、 润滑剂、 甜味剂、 着色剂、 调味剂、 等渗剂、 缓冲剂、 抗氧化剂及类似添加剂。 作为添加剂， 有可能提到例如淀粉、 蔗糖、 果糖、 右旋糖、 乳糖、 葡萄糖、 甘露醇、 山梨糖醇、 沉 淀碳酸钙、 结晶纤维素、 羧甲基纤维素、 糊精、 明胶、 阿拉伯胶、 EDTA、 硬脂酸镁、 滑石、 羟丙基 甲基纤维素、 焦亚硫酸钠及类似添加剂。
     在一些实施方案中， 提供了呈诸如片剂或胶囊的单位剂型的组合物。
     在其它实施方案中， 本发明提供了试剂盒， 所述试剂盒包括一个或多个包含药物 剂量单位的容器， 这些药物剂量单位包含有效量的本发明中的一种或多种盐、 溶剂合物或 多晶型物。
     在具体实施方案中， 所述试剂盒含有包含药物剂量单位的小瓶或注射器， 这些药物剂量单位包含有效量的本发明中的一种或多种盐、 溶剂合物或多晶型物。
     本发明进一步说明本发明的溶剂合物、 盐和多晶型物可以与用于预防和 / 或治疗 以下疾病的治疗剂组合施用 ： 代谢和 / 或内分泌病症、 胃肠道病症、 心血管病症、 肥胖和肥 胖相关病症、 中枢神经系统病症、 骨病、 遗传障碍、 过度增生病症、 由细胞凋亡表征的病症和 炎性病症。示例性药剂包括镇痛剂 ( 包括阿片样物质镇痛剂 )、 麻醉剂、 抗真菌剂、 抗生素、 消炎药 ( 包括非类固醇消炎剂 )、 驱虫剂、 止吐剂、 抗组胺剂、 抗高血压剂、 抗精神病药、 抗关 节炎药、 止咳药、 抗病毒剂、 心脏活性药物、 泻药、 化学治疗剂 ( 诸如 DNA 相互作用剂、 抗代谢 物、 微管蛋白相互作用剂、 激素剂和诸如天冬酰胺酶或羟基脲的药剂 )、 类皮质激素 ( 类固 醇 )、 抗抑郁药、 镇静剂、 利尿剂、 安眠药、 矿物质、 营养补充剂、 拟副交感神经药、 激素 ( 诸如 促皮质素释放激素、 促肾上腺皮质激素、 生长激素释放激素、 生长激素、 促甲状腺激素释放 激素和促甲状腺激素 )、 安神剂、 磺酰胺、 刺激剂、 拟交感神经药、 镇定剂、 血管收缩剂、 血管 扩张剂、 维生素和黄嘌呤衍生物。
     适于根据本发明加以治疗的受试者包括但不限于鸟类和哺乳动物受试者， 并且优 选是哺乳动物。本发明的哺乳动物包括但不限于犬、 猫、 牛、 山羊、 马、 绵羊、 猪、 啮齿动物 ( 例如大鼠和小鼠 )、 兔类动物、 灵长类动物、 人类及类似哺乳动物， 以及处于子宫内的哺乳 动物。需要根据本发明治疗的任何哺乳动物受试者是合适的。优选人类受试者。两种性别 和处于任何发育阶段 ( 即， 新生儿、 婴儿、 少年、 青年、成年 ) 的人类受试者能够根据本发明 来治疗。
     根据本发明的说明性鸟类包括鸡、 鸭、 火鸡、 鹅、 鹌鹑、 雉鸡、 平胸类鸟 ( 例如鸵鸟 ) 和驯养鸟类 ( 例如鹦鹉和金丝雀 ) 以及处于卵内的鸟。
     虽然本发明主要关于人类受试者的治疗， 但是本发明还可以出于兽医学目的对动 物受试者进行， 尤其是哺乳动物受试者， 诸如小鼠、 大鼠、 犬、 猫、 家畜和马。
     在生长素释放肽受体激动剂有效的的哺乳动物 ( 即人类或动物 ) 的病状治疗的治 疗应用中， 可施用有效量的本发明的溶剂合物、 盐或多晶型物或其适当的药物组合物。 由于 物质的活性和治疗作用程度不同， 所以所施用的实际剂量将依据诸如以下的公认因素来确 定： 受试者的年龄、 病状、 递送途径和受试者的体重。剂量可为约 0.1mg/kg 到约 100mg/kg， 每天 1 到 4 次口服施用。另外， 适当的药物组合物中的溶剂合物、 盐或多晶型物可以通过每 次给药注射约 0.01mg/kg 到 20mg/kg 来施用， 每天施用 1 到 4 次。治疗可以持续几周、 几个 月或更久。因此， 治疗可以是急性或长期的。针对特定情况确定最佳剂量在本领域技术人 员的能力范围内。
     方法 3A. 制备本发明的代表性药物组合物的一般方法
     以下工序可用于制备含有本发明的盐、 溶剂合物或多晶型物的代表性制剂。
     (a) 将张度剂 ( 例如盐水溶液或溶于水中的 5％右旋糖 ) 溶于溶剂 ( 诸如注射用 水 ) 中， 形成新溶液 D ；
     (b) 添加酸 ( 诸如乙酸 )， 形成酸化的溶液 D ；
     (c) 将盐、 溶剂合物或多晶型物溶于酸化的溶液 D 中， 形成溶液 E ；
     (d) 通过添加碱 ( 例如氢氧化钠 ) 来调节溶液 E 的 pH 值， 形成溶液 F ； 以及
     (e) 用溶剂将溶液 F 稀释到有效浓度。
     本发明的某些代表性药物组合物在实施例中提供。4. 分析方法
     本发明的溶剂合物、 盐和多晶型物可利用一系列公认的分析和物理化学技术来 进行鉴别和表征。在一些情况下， 这些技术的特定方法已被研发用于本发明的溶剂合 物、 盐和多晶型物。某些标准分析方法提供于美国药典 - 国家处方集 (United States Pharmacopeia-National Formulary， USP-NF) 中， 所述美国药典 / 国家处方集为公共药典 标准书籍且含有针对医药、 剂型、 药物质、 赋形剂、 医疗器械和膳食补充剂的标准。 所述方法 由 USP<#> 指示， 其中 # 表示 USP-NF 中对应的章节数。
     除了使用单晶 X 射线衍射法来提供关于结晶固体形式的结构信息之外， 还已经 研发出许多不同的分析技术来定量和区分非晶形与晶形以及晶形与多晶型物 (Bugay， D.E.Adv.Drug Deliv.Rev.2001， 48， 43-65 ； Shah， B. ； Kakumanu， K. ； Bansal， A.K.J. Pharm. Sci.2006， 95， 1641-1665。) 这些包括 X 射线粉末衍射法 (XRPD)、 热重分析、 差示扫描量热 法 (DSC)、 溶液微量热法、 等温微量热法 (IMC)、 拉曼光谱法 (Raman spectroscopy)、 近红外 光谱法 (NIR)、 漫反射红外 (IR) 光谱法、 衰减反射光谱法、 固态核磁共振 (NMR)、 动态蒸汽吸 附 (DVS)、 太赫兹脉冲光谱法 (terahertz pulsed spectroscopy， TPS)、 热刺激电流光谱法 (TSC)、 动态力学分析 (DMA) 和反相气相色谱法 (IGC)。
     不同多晶型物可以由其热行为来区分， 且可以使用诸如熔点、 热重分析 (TGA) 和 DSC 的方法来单独地表征。 特定多晶型物具有独特的光谱特性， 这些光谱特性可以使用诸如 13 XRPD、 固态 C NMR 光谱法和 IR 光谱法的技术来检测。
     为了测定活性药物成分 (API) 或药物组合物的稳定性， 可以遵循如人用药物注 册技术要求国际协调会议 (ICH)Q1A 准则 ： 新药物质和产品稳定性测试 (International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use(ICH)Q 1A Guideline ： Stability Testing of New Drug Substances and Products)(2003 年 2 月 ) 中出于规范的目的所概述的方法。概 括来说， 这要求对在三种代表性受控条件下所储存的样品重复某些分析测试以确定是 否出现任何降解或效能降低。所用的典型条件是 ： (1)25 ℃ ±2 ℃， 60 ％ ±5 ％相对湿度 (RH) ； (2)30 ℃ ±2 ℃， 65 ％ ±5 ％ RH ； (3)40 ℃ ±2 ℃， 75 ％ ±5 ％ RH( 这常称作加速稳定 性 )。通常还研究如人用药物注册技术要求国际协调会议 (ICH)Q1B 准则 ： 稳定性测试 ： 新药 物 质 和 产 品的 光稳定性测 试 (International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use(ICH) Q1B Guideline ： Stability Testing ： Photostability Testing of New Drug Substances and Products)(1996 年 11 月 ) 中所概述的光稳定性。
     可采用以下一般方法对本发明的盐、 溶剂合物或多晶型物进行表征。
     方法 4A. 外观
     目测检查样品并报告物理状态和颜色。
     方法 4B.HPLC 测定 - 纯度、 杂质和效能
     这一工序的目的在于通过反相 HPLC 测定本发明的代表性盐、 溶剂合物和多晶型 物的纯度。 可以利用与 HPLC 相容的任何适当的检测方法， 诸如单波长或双波长紫外线 (UV) 检测、 蒸发光散射检测 (ELSD) 或化学发光氮检测 (CLND)。 对于大多数情况来说， 优选 UV 检 测。纯度可以由峰面积％来确定。使用相同测定条件来测定杂质水平和效能。此 HPLC 测定的参数描述于下文中。
     流动相 A ： 10mM 氢氧化铵的水溶液
     将 1.8mL 氢氧化铵 (21％ ) 加入 2L 水中并充分混合。如果为 HPLC 系统所需， 那么 可以通过适当的方法 ( 诸如在线脱气器或 He 鼓泡 ) 来使溶剂脱气。
     流动相 B ： 10mM 氢氧化铵的乙腈溶液将 1.8mL 氢氧化铵 (21％ ) 加入 2L 乙腈中并 充分混合。 如果为 HPLC 系统所需， 那么可以通过适当的方法 ( 诸如在线脱气器或 He 鼓泡 ) 来使溶剂脱气。
     稀释剂 ： 水 / 乙腈 (1/1， v/v)
     将 500mL 乙腈和 500mL 水加入适当的容器中并充分混合。此稀释剂通常还用于制 备空白样品。
     典型色谱条件
     柱： XTerra RP18， 3.5μm， 4.6×100mm( 或等效物 )
     检测 ： 230nm
     柱温 ： 30℃
     注入体积 ： 10μL
     流速 ： 1 毫升 / 分钟
     运行时间 ： 46.0 分钟
     数据采集时间 ： 37.5 分钟
     流动相 A ： 10mM 氢氧化铵的水溶液
     流动相 B ： 10mM 氢氧化铵的乙腈溶液
     梯度
     时间 ( 分钟 ) 0.00 25.00 35.00 37.50 38.00 46.00
     ％A 80.0 50.0 0.0 0.0 80.0 80.0 ％B 20.0 50.0 100.0 100.0 20.0 20.0 流速 (mL/min) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0制备空白对照 ：
     使用水 / 乙腈 (1/1) 作为空白对照。
     制备样品 ：
     称取约 25mg 样品并用水 / 乙腈 (1/1)( 或适当的溶液以提供 0.5mg/mL 的浓度 ) 溶解 / 稀释到 50.0mL。
     制备标准品 ：
     为了确定已知化合物的种类或测定其效能， 称取适量的标准样品放入 50mL 容量 瓶中。溶于水 / 乙腈 (1/1)( 或其它适当溶剂 ) 中， 稀释到一定体积并充分混合。可以通过 准确地稀释特定体积量的标准样品来制备不同浓度的样品。 所述样品还可以用于确定系统 适用性。
     样品分析工序
     ●使色谱系统平衡。●注入空白对照并确定对目标峰的预期保留时间不存在显著干扰。 ●注入标准品 ( 或根据分析的需要注入一系列标准品 )。 ●注入每一样品制备物一次。 ●在分析多个样品期间插入适当的标准样品。 ●测量在样品注入中等于或高于定量限 (0.05％ ) 的所有峰的面积％响应值。 替代色谱条件 柱： XTerra RP18， 3.5μm， 4.6×100mm( 或等效物 ) 检测 ： 225nm 柱温 ： 30℃ 注入体积 ： 20μL 流速 ： 1.2 毫升 / 分钟 运行时间 ： 46.0 分钟 重平衡时间 ： 8.5 分钟 数据收集时间 ： 37.5 分钟 洗针液 ： 50/50 乙腈 / 水 (v/v) 流动相 A ： 流动相 B ： 梯度 10mM 氢氧化铵的水溶液 10mM 氢氧化铵的乙腈溶液时间 ( 分钟 ) 0.0 0.5 27.0 35.0 37.5 38.0 46.0％A 80 80 60 0 0 80 80％B 20 20 40 100 100 20 20
     方法 4C. 通过 UV- 可见光谱法分析
     可以使用 Ultrospec 2100Pro UV/ 可见光分光光度计 ( 或类似仪器 ) 获得本发明 的盐、 溶剂合物或多晶型物的适当溶液的紫外光谱。 13
     方法 4D. 通过 1H NMR、 C NMR 及 19F NMR 分析种类
     根据 USP<761>， 使用 Varian Mercury VX-300MHz 光谱仪、 Bruker Avance 300MHz 1 13 光谱仪或 Bruker Avance 500MHz 光谱仪 ( 或类似仪器 ) 记录 H NMR、 C NMR 和 19F NMR 光 谱。通常针对样品与标准品的结构一致性来分析光谱。
     方法 4E. 通过傅里叶变换红外 (Fourier-Transform Infrared， FT-IR) 法进行分 析
     可以使用 Perkin Elmer 1600FT-IR 光谱仪 ( 或类似仪器 )， 在适当的溶液中或以 溴化钾 (KBr) 压片形式获得本发明的盐、 溶剂合物和多晶型物的傅里叶变换红外 (FT-IR) 吸收光谱。
     方法 4F. 测定氯离子将样品溶于乙腈∶水 (1 ∶ 1) 中， 然后用水和 6N 硝酸稀释。然后使用硝酸银溶液 通过电位滴定来测定氯离子的定量。
     可以使用如下替代方法， 此替代方法利用氧气燃烧， 之后进行电位滴定。
     方法 4G. 测定水分水平
     根据 USP<9211a>， 使用直接滴定法， 通过卡尔费歇尔滴定分析法 (Karl Fischer titrimetry) 来测定水分水平。
     方法 4H. 灼烧残渣
     根据 USP<281>， 通过硫酸化灰分测试来测定灼烧残渣。
     方法 4I. 测定内毒素水平
     根据 USP<85>， 使用胶凝法测量内毒素水平。
     方法 4J. 测定生物负荷 (bioburden)
     根据 USP<61>， 通过总细菌计数以及总酵母和霉菌计数来评估生物负荷。
     方法 4K.X 射线粉末衍射 (XRPD) 分析
     为 了 评 估 本 发 明 的 盐 和 溶 剂 合 物 的 结 晶 度 和 多 晶 型 物， 可以在环境条件 (22℃ ±3℃ ) 下操作广角粉末 X 射线衍射仪 (Siemens D5005， Shimadzu 型号 XRD-6000 或 类似仪器 ) 来进行 XRPD。此通常从 5°到 40° 2θ， 以步进扫描方式并以 0.05° 2θ 的增 量来进行， 并且在每一步累加计数 1 秒。可以将磨碎的粉末样品或其它适当制备的样品顶 部填充到铝制样品架中， 且曝露于 Cu Kα 辐射。
     方法 4L. 差示扫描量热法 (DSC) 表征
     可以通过使用 TA Instruments 型号 Q1000 或 Mettler Toledo 型号 822e 装置 ( 或 类似装置 ) 来进行 DSC 分析。通常使用铟金属作为参照物针对熔点温度和熔化焓来修正 DSC 装置。在氮气下， 使用密封的铝样品盘获得 DSC 谱。样品通常以 “原样” 形式使用而不 施加任何研磨。
     方法 4M. 吸湿性分析
     可以通过静态和动态吸湿性研究来评估本发明的盐、 溶剂合物和多晶型物的吸湿 性。对于后者来说， 可以在 SGA-100 重量吸附分析器 ( 或类似仪器 ) 上进行动态蒸汽吸附 / 解吸附 (DVS) 实验。实验方案通常包括在 0％ RH 下全重平衡。
     方法 4N ： X 射线结晶学
     在典型实验中， 使用玻璃纤维将一个单晶安装于测角仪上。除非另作说明， 否则 在 Enraf-Nonius CAD-4 自 动 衍 射 仪 ( 或 类 似 仪 器 ) 上， 在 293K±2K 下 使 用 ω/2θ 扫 描来收集数据。使用 DIFRAC 程序 (Flack， H.D. ； Blanc， E. ； Schwarzenbach， D.J. Appl. Cryst， 1992， 25， 455-459) 来进行定中心、 指数测定和数据收集。每 100 次反射测量两次标 准反射， 在数据收集期间观测任何可观测到的强度衰減并针对个别结构进行 记录。 通过根 据 扫描的经验方法来针对吸收率修正数据且用 NRCVAX 程序换算 (Gabe， E.J. ； Le Page， Y. ； Charland， J.-P. ； Lee， F.L. ； White， P.S.J. Appl.Cryst.1989， 22， 384-387)。 使 用 2 SHELXL-9 将其解析且用 SHELXL-97 通过基于 F 的全矩阵最小二乘法来进行精修。( 版本 97-2 ； Sheldrick， G.M.Acta Cryst.2008， A64， 112-122。) 各向异性地精修非氢原子。将氢 原子放在理想化的计算几何位置上并使用骑式模型各向同性地精修。除非另作说明， 否则 通过反常色散效应来指定最终的绝对结构。 (Flack， H.D.Acta Cryst.A1983， 39， 876-881。 )表 1 提供了如何能够使用这些方法来对本发明的代表性溶剂合物进行表征的实 表1： 针对化合物 298·HClH2O 的代表性分析测试例。
     在通过调整性工艺使活性成分进展期间， 常常会修改所示的目标结果， 通常会达 到更严格的限定。
     可以使用其它分析方法来对本发明的药物组合物进行表征。
     方法 4O. 药物组合物的外观
     以一张干净的白纸为背景对药物组合物进行目测检查并记录观测结果， 尤其包括 所见到的任何微粒物质。
     方法 4P. 针对种类、 杂质和效能的 HPLC 分析
     可以使用单个 HPLC 方法进行所有三项测定。可以使用同一测定来确定药物组合 物在各种储存条件下随时间推移的稳定性。
     工序
     按一定顺序注入色谱标准品和样品制备物以利用每四次样品制备物注入标准品 交替测试法 (standard bracketing)。在单次注入中注入各样品制备物。可以如下文所示 计算效能 ( 呈％游离碱形式 )。 同样， 可以如下文所示计算所观测到的任何已知和未知的杂 质 / 相关物质的面积％ ( 以及任何未知杂质的相对保留时间 )。
     色谱条件
     柱： 检测 (UV) ： 柱温 ： 注入体积 ： 流速 ： XTerra RP18， 3.5μm， 4.6×100mm 225nh 30℃ 20μL 1.2 毫升 / 分钟 46 分钟 37.5 分钟 10mM 氢氧化铵的水溶液 10mM 氢氧化铵的乙腈溶液梯度％A 80 80 60 0 0 80 80 ％B 20 20 40 100 100 20 20 流速 ( 毫升 / 分钟 ) 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2制备流动相 A
     对于各 3L 流动相来说， 将 2.25mL 25％氢氧化铵吸取到 3000mL 高纯度水中并充 分混合。
     制备流动相 B
     对于各三升流动相来说， 将 2.25mL 25％氢氧化铵吸取到 3000mL 乙腈中并充分混 合。
     制备稀释剂
     对于制备每一升稀释剂来说， 将 500mL 高纯度水与 500mL 乙腈组合并充分混合。
     制备标准品
     准确地称取一定量固体参照标准品并转移到容量瓶中。 用稀释剂稀释到一定体积 并充分混合。标准品制备物在未加保护以免受光影响的情况下在 5℃下或在室温下储存时 通常保持稳定至少 7 天。
     制备样品
     用稀释剂将样品稀释到先前确定的工作浓度， 诸如 0.5mg/mL。因此， 对于 2mg/mL 标示量的样品溶液来说， 吸取 1.0mL 样品和 3.0mL 稀释剂放入小瓶中并充分混合。一式两 份制备样品。每一样品注入一次。
     计算
     以下计算关于以 2mg/mL 配制的药物组合物。
     ● PF 是针对药物组合物所指定的效能因子。根据参照标准品中的游离碱含量以 小数形式报道其值。
     ●平均标准品峰面积是在整个分析期间所有标准品的平均值。
     ● DF 是应用于样品的稀释因子。对于 2mg/mL 制剂来说， 稀释因子是 4， 这是因为 将样品 1 ∶ 4 稀释， 从而达到最终浓度 0.5mg/ml。
     ●化合物％是以 mg/mL 报道的理论浓度 ( 通常是游离碱的浓度 )。
     杂质％ ( 面积％ ) ＝通过色谱系统针对每一峰相对于总峰面积所计算得到的值。
     仅仅累计面积％≥ 0.05％ (LOQ) 的峰。
     ％总相关物质＝未鉴别杂质的总和 + 已鉴别杂质的总和
     应注意， 不考虑将溶剂前沿、 稀释剂相关峰用于计算。
     鉴别测试 ： 样品制备物中化合物的保留时间与参照标准品制备物中化合物的保留 时间相同 ( 容许误差 ±5％ )。
     方法 4Q.pH 值测定
     可以根据 USP<791>pH 值测定 (pH Determination) 来测定样品的 pH 值。
     方法 4R. 重量渗透摩尔浓度测定
     可以根据 USP<785> 重量渗透摩尔浓度和容量渗透摩尔浓度 (Osmolality and Osmolarity) 来测定样品的重量渗透摩尔浓度。
     方法 4S. 微粒物质测定
     可以遵照 USP<788> 注射剂中的微粒物质 (Particulate Matter in Injections) 中所指示， 使用光阻法粒子计数测试对微粒物质进行表征。
     方法 4T. 内毒素测定
     可以遵照 USP<85> 细菌内毒素测试 (Bacterial Endotoxins Test) 中所指示， 使 用胶凝法分析样品。
     方法 4U. 无菌性测定
     对于无菌性来说， 可以遵照 USP<71> 无菌性测试 (Sterility Tests) 中所指示来 测试样品。
     在实施例中提供了使用这些方法来对本发明的代表性药物组合物进行表征。
     5. 生物学方法
     已知针对人类 (GRLN、 GHS-R1a)、 猪和大鼠生长素释放肽受体的特定测定方法 ( 第 6,242,199 号美国专利、 第 WO 97/21730 号和第 97/22004 号国际专利申请 ) 以及针对犬生 长素释放肽受体的特定测定方法 ( 第 6,645,726 号美国专利 )， 和将这些方法用于通常鉴别 这些受体的激动剂和拮抗剂。
     还已知用于测定与人类生长素释放肽受体 (GRLN) 相互作用的本 发明溶剂合 物、 盐和多晶型物的功能和体内活性的适当方法。例如， 可以使用竞争性放射性配体结合 测定、 荧光测定或水母发光蛋白功能性测定 ( 参见第 7,452,862 号 ； 第 7,476,653 号 ； 第 7,491,695 号美国专利 ； 和第 2008/051383 号 ； 第 2008/194672 号美国专利申请公布 )。另 外， 可以使用本领域中确立的方法来测定其它对于确定作为药剂的适合性来说重要的参 数， 诸如药代动力学。
     本 发 明 的 盐、 溶剂合物和多晶型物以及其药物组合物的药代动力学特性可 以通过为本领域技术人员所熟知的方法来确定并且可用于研究静脉内、 皮下和口服 施 用 这 些 物 质 的 药 代 动 力 学 参 数 ( 消 除 半 衰 期、 总 血 浆 清 除 率 等 )。(Wilkinson， G.R.“Pharmacokinetics ： The Dynamics of Drug Absorption， Distribution， and Elimination” ， Goodman & Gilman′ s The Pharmacological Basis of Therapeutics， 第 10 版， Hardman， J.G. ； Limbird， L. E. 编著， McGraw Hill， Columbus， OH， 2001， 第 1 章。) 还参见第 7,476,653 号 ； 第 7,491,695 号美国专利和美国专利申请公布 2008/0194672。在 实施例中提供了本发明的代表性药物组合物的这些参数的测定。6. 使用方法
     本发明的盐、 溶剂合物和多晶型物可用于预防和治疗多种医学病状， 包括但不限 于代谢和 / 或内分泌病症、 胃肠道病症、 心血管病症、 肥胖和肥胖相关病症、 中枢神经系统 病症、 骨病、 遗传障碍、 过度增生病症、 由细胞凋亡表征的病症、 炎性病症和其组合， 其中 所述病症可能是多种潜在疾病的结果。在特定实施方案中， 疾病或病症是肠易激综合征 (IBS)、 非溃疡性消化不良、 克罗恩氏病、 胃食管反流病症、 连同其它病状一起出现的胃肠运 动障碍、 便秘、 溃疡性结肠炎、 胰腺炎、 婴儿肥厚性幽门狭窄、 类癌瘤综合征、 吸收不良综合 征、 萎缩性结肠炎、 胃炎、 胃潴留、 胃肠倾倒综合征、 胃肠造口吻合术后综合征、 乳糜泻、 饮食 障碍或肥胖。 在其它实施方案中， 疾病或病症是充血性心力衰竭、 缺血性心脏病或慢性心脏 病。在其它实施方案中， 疾病或 病症是骨质疏松症和 / 或骨脆性、 骨折修复加速、 代谢综 合征、 蛋白质分解代谢反应弱化、 恶病质、 蛋白质丧失、 伤口愈合障碍或伤口愈合障碍的风 险、 烧伤恢复障碍或烧伤恢复障碍的风险、 手术恢复障碍或手术恢复障碍的风险、 肌力受损 或肌力受损的风险、 活动障碍或活动障碍的风险、 皮肤厚度改变或皮肤厚度改变的风险、 代 谢稳态受损或代谢稳态受损的风险， 或肾稳态受损或肾稳态受损的风险。在其它实施方案 中， 所述疾病或病症涉及以下方面 ： 促成新生儿发育、 刺激人体生长激素释放、 维持人类的 肌力和功能、 逆转或预防人类的骨脆性、 预防糖皮质激素的分解代谢副作用、 治疗骨质疏松 症、 刺激和提高肌肉量和肌力、 刺激免疫系统、 加速伤口愈合、 加速骨折修复、 治疗肾衰竭或 因生长迟缓所致的功能不全、 治疗身材矮小症、 治疗肥胖和生长迟缓、 加速烧伤患者恢复和 减少其住院治疗、 治疗宫内生长迟缓、 治疗骨骼发育不良、 治疗皮质醇过多症、 治疗库兴氏 综合征 (Cushing′ s syndrome)、 诱导脉动式生长激素释放、 替代应激患者的生长激素、 治 疗骨软骨发育不良、 治疗努南综合征 (Noonans syndrome)、 治疗精神分裂症、 治疗抑郁症、 治疗阿茲海默氏病、 治疗呕吐、 治疗记忆丧失、 治疗繁殖障碍、 治疗伤口愈合延迟、 治疗心理 社会剥夺、 治疗肺功能障碍、 治疗呼吸机依赖 ； 弱化蛋白质分解代谢反应、 减轻恶病质和蛋 白质丧失、 治疗高胰岛素血症、 诱导排卵的辅佐治疗、 刺激胸腺发育、 预防胸腺功能下降、 治 疗免疫抑制患者、 改善肌肉活动度、 维持皮肤厚度、 代谢稳态、 肾稳态、 刺激成骨细胞、 刺激 骨重建、 刺激软骨生长、 刺激伴侣动物的免疫系统、 治疗伴侣动物的老化病症、 促进家畜生 长和 / 或刺激绵羊羊毛生长。其它实施方案提供了治疗由细胞凋亡表征的病症 ( 诸如脊髓 损伤和辐射复合伤 ) 的方法。其它实施方案提供了治疗以下疾病的方法 ： 炎性病症， 包括 溃疡性结肠炎、 炎性肠病、 克罗恩氏病、 胰腺炎、 类风湿性关节炎、 骨关节炎、 哮喘、 血管炎、 胰腺和肝脏损 牛皮癣、 过敏性鼻炎、 消化性溃疡疾病、 手术后腹内败血症、 缺血再灌注损伤、 伤、 败血症和败血性休克、 由某些药物所引起 的胃损伤、 应激性胃损伤、 由幽门螺旋杆菌 (H.pylori) 所引起的胃损伤、 炎性疼痛、 慢性肾病和肠炎。
     根据本发明的另一方面， 提供了治疗患有以下疾病的人类或动物患者所患疾病的 方法 ： 术后肠梗阻、 胃轻瘫 ( 诸如由 I 型或 II 型糖尿病引起的胃轻瘫 )、 其它胃肠道病症、 恶病质 ( 消耗综合征 )( 诸如由癌症、 AIDS、 心脏病和肾病引起的恶病质 )、 生长激素缺乏 症、 骨丧失， 和其它年龄相关病症， 所述方法包括对所述患者施用有效量的至少一种选自以 下的成员 ： 本文公开的能够刺激生长素释放肽受体的溶剂合物、 盐和多晶型物。可以由本 文公开的化合物所治疗的其它疾病和病症包括短肠综合征、 胃肠倾倒综合征、 胃肠造口吻 合术后综合征、 乳糜泻和过度增生病症， 诸如肿瘤、 癌症和赘生性病症以及恶变前和非赘生性或非恶性过度增生病症。 特定来说， 能够由本发明治疗的肿瘤、 癌症和赘生性组织包括但 不限于恶性病症， 诸如乳腺癌、 骨肉瘤、 血管肉瘤、 纤维肉瘤和其它肉瘤、 白血病、 淋巴瘤、 窦 瘤、 卵巢癌、 输尿管癌、 膀胱癌、 前列腺癌和其它泌尿生殖器癌症、 结肠癌、 食道癌和胃癌及 其它胃肠癌症、 肺癌、 骨髓瘤、 胰腺癌、 肝癌、 肾癌、 内分泌癌症、 皮肤癌和脑或中枢和周围神 经 (CNS) 系统肿瘤 ( 恶性或良性 )， 包括神经胶质瘤和成神经细胞瘤。
     在特定实施方案中， 本发明的盐、 溶剂合物和多晶型物可以用于治疗术后肠梗阻。 在其它实施方案中， 本发明的盐、 溶剂合物和多晶型物可以用于治疗胃轻瘫。 在其它实施方 案中， 本发明的溶剂合物、 盐和多晶型物可以用于治疗糖尿病性胃轻瘫或术后胃轻瘫。 在另 一实施方案中， 本发明的溶剂合物、 盐和多晶型物可以用于治疗阿片样物质所诱发的肠功 能障碍。
     在特定实施方案中， 本发明的盐、 溶剂合物和多晶型物可以用于治疗术后肠梗阻、 胃轻瘫、 糖尿病性胃轻瘫、 术后胃轻瘫、 阿片样物质所诱发的肠功能障碍、 慢性肠假性梗阻、 急性结肠假性梗阻 ( 奥格尔维氏综合征 )、 短肠综合征、 呕吐、 便秘为主的肠易激综合征 (IBS)、 慢性便秘、 功能性消化不良、 癌症相关性消化不良综合征、 移植物抗宿主反应、 胃食 管反流病 (GERD)、 胃溃疡、 克罗恩氏病、 胃肠炎、 饮食障碍 ( 包括神经性厌食症和贪食症 ) 患 者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 帕金森氏病患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 强直性 肌营养不良患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 自主神经退化患者的胃肠功能失调或胃排 空延迟、 中风患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 多发性硬化患者的胃肠功能失调或胃排 空延迟、 神经疾病和病症 ( 包括淀粉样蛋白神经病、 原发性自主运动不能、 交感神经损伤和 幽门狭窄 ) 患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 精神病 ( 包括抑郁症 ) 患者的胃肠功能失 调或胃排空延迟、 硬皮病患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 囊性纤维化患者的胃肠功能 失调或胃排空延迟、 结缔组织疾病 ( 包括全身性硬化、 皮肌炎、 多发性肌炎、 全身性红斑狼 疮和淀粉样变性 ) 患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 肝硬化患者的胃肠功能失调或胃排 空延迟、 肝衰竭患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 肾衰竭患者的胃肠功能失调或胃排空 延迟、 胆囊病症患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 偏头痛患者的胃肠功能失调或胃排空 延迟、 败血症患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 脑干病变患者的胃肠功能失调或胃排空 延迟、 脊髓损伤患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 癌症 ( 包括胃癌、 胆癌、 食道癌、 胃癌和 胰腺癌 ) 患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 瘤形成患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 进行辐射治疗患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 弛缓不能患者的胃肠功能失调或胃排空 延迟、 传染病 ( 包括 HIV、 带状疱疹感染和恰加斯氏病 ) 患者的胃肠功能失调或胃排空延 迟、 因手术而引起的胃肠功能失调或胃排空延迟、 危重病患者的胃肠功能失调或胃排空延 迟、 需要危重症护理的患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 移植 ( 包括心脏或肺移值 ) 后 患者的胃肠功能失调或胃排空延迟、 特纳氏综合征患者的胃肠功能失调或胃排空延迟 ； 因 用药剂治疗而引起的胃肠功能失调或胃排空延迟， 所述药剂包括阿片样物质、 抗胆碱能药、 β 阻断剂、 钙通道拮抗剂、 胰高血糖素样肽 -1(GLP-1) 受体激动 剂、 胰淀素受体激动剂、 肽 YY(PYY) 受体激动剂、 蛋白酶体抑制剂、 三环抗抑郁药、 单胺摄取阻断剂抗抑郁药、 癌症化 学治疗剂、 肾上腺素能激动剂、 多巴胺能剂、 抗疟药、 解痉药、 大麻素激动剂、 奥曲肽、 左旋多 巴、 酒精和尼古丁 ； 因内分泌失调 ( 包括甲状腺功能减退、 甲状腺功能亢进、 艾迪生氏病和 卟啉症 ) 所致的胃肠功能失调或胃排空延迟、 因代谢失调 ( 包括高血糖症、 低钾血症和低镁血症 ) 所致的胃肠功能失调或胃排空延迟、 因麻醉所致的胃肠功能失调或胃排空延迟、 因 机械通气所致的胃肠功能失调或胃排空延迟、 因电解质紊乱所致的胃肠功能失调或胃排空 延迟、 因严重创伤所致的胃肠功能失调或胃排空延迟， 或因疼痛所致的胃肠功能失调或胃 排空延迟。
     本发明进一步提供了治疗马或犬的胃肠道病症的方法， 其包括施用治疗有效量的 本发明的盐、 溶剂合物或多晶型物。在一些实施方案中， 胃肠道病症是肠梗阻或绞痛。
     如本文所用的 “治疗” 未必意图表示治愈或完全消除与其相关的病症或症状。
     本发明的盐、 溶剂合物或盐可以进一步用于制备用于治疗多种医学病状的药物组 合物或药物， 所述医学病状包括但不限于胃肠道病症、 代谢和 / 或内分泌病症、 心血管病 症、 中枢神经系统病症、 肥胖和肥胖相关病症、 遗传障碍、 骨病、 过度增生病症、 由细胞凋亡 表征的病症和炎性病症。
     现在将参考以下实施例来描述本发明的其它实施方案。应了解， 这些实施例旨在 说明本发明的实施方案， 而非限制本发明的范围。 实施例 实施例 1
     通过结晶制备化合物 298·HCl·H20
     制备例 A
     将非晶形化合物 298·HCl(1.0g) 悬浮在逐滴添加的热 H2O 和甲基乙基酮 (MEK) (4 ∶ 1) 中直到完全溶解。然后使用油浴 (90℃ - ＞ 25℃ ) 将溶 液缓慢地冷却到室温， 之 后在 4℃下放置过夜 (O/N)。通过过滤收集所得化合物 298·HCl·H2O 的晶体并在空气中 干燥过夜。产率 ： 82％。
     制备例 B
     将 非 晶 形 化 合 物 298·HCl(3.0g) 溶 于 40mL 热 H2O/MEK(3 ∶ 1) 中。 使 用 油 浴 (90℃ - ＞ 25℃ ) 将溶液缓慢地冷却到室温， 然后在 4℃下放置过夜。将所得晶体过滤， 然 后在空气中干燥 24 小时。获得与制备例 A 中所形成的化合物 298·HCl·H2O 晶体的 X 射 线结构相同的晶胞。
     通过从 40mL 热 H2O/iPrOH(3 ∶ 1) 中进行结晶获得相似结果。
     制备例 C
     将化合物 298·HCl·EtOH(10g， 16.1mmol) 在 H2O/MEK(8 ∶ 2， 100mL) 中的混悬液 在回流下搅拌并缓慢地添加 MEK 直到完全溶解。将混合物缓慢地冷却到室温， 然后在室温 下留置 10 小时。通过过滤收集晶体并用冷水 (1×10mL) 洗涤。将固体在空气中干燥过夜 (16 小时到 18 小时 )， 得到呈大白色晶体状的化合物 298·HCl·H2O( 约 80％产率 )。
     制备例 D
     在 8mL 玻 璃 小 瓶 中， 向 化 合 物 298 游 离 碱 (100mg， 0.18mmol， 1.0 当 量 ) 在 MEK(0.5mL) 中的溶液中缓慢地添加浓 HCl(23μL， 0.27mmol， 1.5 当量 )。将溶液在室温下 搅拌 10 分钟， 期间出现沉淀， 然后添加 0.5mL 水， 使得沉淀物完全溶解。将溶液在氮气氛下 浓缩到 0.5mL 并添加 0.5mL 水。出现沉淀。将混悬液加热到回流并逐滴地添加 MEK 直到完 全溶解。将溶液在油浴 (90℃ - ＞室温 ) 中缓慢地冷却到室温。在冷却时出现结晶。将小
     瓶在约 5℃下放置过夜。通过过滤收集晶体并用冷水 (1×0.5mL) 洗涤。将晶体在 50℃下 高真空干燥， 得到呈白色晶体状的化合物 298·HCl·H2O(70mg， 70％ )。
     制备例 E
     向化合物 298(38.0g， 70.6mmol) 在 115mL 无水 EtOH 中的溶液中添加 1.25M HCl 的 EtOH 溶液 (113mL， 141mmol， Fluka)。将混合物在室温下搅拌 15 分钟， 然后在 0℃下搅拌 30 分钟。将沉淀的固体 在仍冷的同时通过过滤来收集， 然后用冷 EtOH(2×100mL) 洗涤。 将固体真空干燥过夜， 得到 26.1g(64％ ) 呈白色固体状的化合物 298·HCl·EtOH。将此溶 于 210mL EtOH/H2O(85 ∶ 15) 中并加热到 75℃。将溶液冷却到室温， 然后在 -20℃下放置 过夜。收集所形成的晶体， 用无水 EtOH(1×100mL) 洗涤， 然后真空干燥， 得到 25.7g(99％ ) 白色结晶固体。将此与以类似方式制备的 3.3g 相同物质 ( 通过 HPLC 和 MS 鉴别 ) 合并， 并 将合并的固体溶于 EtOH/H2O(3 ∶ 1， 125mL) 中， 加热到 75℃， 在仍热的同时进行过滤， 并将 滤液冷却到室温， 然后在 -20℃下放置过夜。收集结晶的物质， 用 EtOH(1×) 洗涤并真空干 燥， 留下 24.4g。向其中添加 iPrOH/H2O(7 ∶ 3， 180mL) 并将混合物加热到 85℃直到溶解。 将溶液冷却到室温， 然后放置在 -20℃下。将胶状固体分离， 从其倾析溶剂并将残余物用丙 酮处理。收集所形成的固体， 用丙酮清洗并真空干燥， 得到 19.0g。随后将此物质溶于 MEK/ H2O(15 ∶ 85， 147mL) 中并加热到 95 ℃。在溶解后， 停止加热， 将溶液冷却到室温， 然后在 2℃下放置过夜。收集固体， 用冷 H2O(2×) 洗涤并真空干燥， 得到 14.5g 结晶物质。将大部 分 (13.0g) 此固体悬浮在 73mL H2O 中并加热到 95℃ ( 油浴 )， 然后逐滴地添加 MEK 直到完 全溶解 (16mL)。将溶液缓慢地 (5℃ / 小时 ) 冷却到室温， 并留置过夜。收集沉淀的固体并 用 H2O(2×) 洗涤， 留下 11.6g 白色晶体。将此固体在 95℃ ( 油浴 ) 下溶于 MEK/H2O(1 ∶ 4， 65mL) 中。将溶液缓慢地 (5℃ / 小时 ) 冷却到室温。收集所形成的晶体， 用 MEK/H2O(1 ∶ 4， 2×25mL)、 H2O(1×25mL) 洗涤， 然后在空气中干燥过夜， 得到呈白色结晶固体状的化合物 298·HCl·H2O(7.6g)。
     纯度
     使用方法 4B 通过 HPLC 和在 230nm 下进行 UV 检测来测定溶剂合物的纯度。
     X 射线结晶学
     使用方法 4N 得到的化合物 298·HCl·H2O 的代表性 X 射线晶体结 构呈现在图 2 中。 此确定了单盐酸盐一水合物结构， 并与由其它方法形成的溶剂合物的 X 射线结构一致。
     化合物 298·HCl·H2O 的晶体数据和结构精修
     溶解度
     在含水介质 (pH 4.0-7.0) 和非含水介质中测定化合物 298HCl· H2O 的溶解度。来 自这些研究的数据总结在表 2 中。
     表2： 化合物 298·HCl·H2O 的溶解度数据
     33CN 102781441 A
     1说明书28/54 页溶解度描述遵循 USP 第 28 卷 (2005 年 ) 第 9 页 ( 凡例 (General Notices) 章 节 ) 中的指导。
     UV 分析
     使用方法 4C 获得 0.1mg/mL 化合物 298·HCl·H2O 溶于 MeOH 中的溶液的紫外光 谱。在这些条件下， 溶剂合物在 217nm、 266nm、 272nm 和 278nm 处显示出最大吸收值。
     NMR 分析
     使用方法 4D， 用 Varian Mercury-VX 300MHz 获得化合物 298·HCl·H2O 的 1H NMR 13 谱、 C NMR 谱和 19F NMR 谱。具体来说， 用以 300.080MHz 操作并维持在 25℃下的光谱仪获 1 得 H NMR(1D 和 2D) 谱。通过将 36.1mg 化合物 298·HCl·H2O 溶于 3.61mLCD3CN(99.96％ D， Aldrich) 中来制备样品。所有 1H NMR 谱中的化学位移参考值由 CHD2CN 五重峰 (δ ＝ 1.94ppm) 提供。代表性 1H NMR 谱呈现在图 5 中。这些光谱数据与化合物 298· HCl· H2O 的 结构完全相符。 1
     H NMR(CD3CN) ： δ0.48-0.70(m， 3H)， 0.77-0.89(m， 1H)， 1.23(d， m， 重 叠， J ＝ 7.5Hz， 4H)， 1.47(d， J ＝ 6.1Hz， 3H)， 1.70-1.90(m， 2H)， 2.58-2.78(m， 1H)， 2.96-3.12(s， m， 重 叠， 4H)， 3.12-3.26(m， 2H)， 3.26-3.40(m， 2H)， 3.40-3.55(m， 1H)， 3.72-3.88(m， 1H)， 4.33(d， J ＝ 8.3Hz， 1H)， 4.46-4.60(m， 2H)， 4.85-4.97(m， 1H)， 6.93-7.08(m， 4H)， 7.16-7.30(m， 2H)， 7.32-7.43(m， 2H)， 7.51-7.67(br s， br t， 重叠， 2H)， 8.38(d， J ＝ 9.3Hz， 1H)， 9.80-10.05(br s， 1H)。
     在以 75.46MHz 操作并维持在 25℃下的光谱仪上获得 13C NMR 谱。将已经制备用 于 1H NMR 实验的同一样品用于 13C NMR 光谱法。化学位移参考值由 CD3CN 七重峰 (δ ＝ 1.32ppm) 提供。图 6 显示了化合物 298·HCl·H2O 的代表性 13C NMR 谱。 13
     C NMR(CD3CN) ： δ1.9， 5.6， 10.1， 15.1， 18.1， 28.9， 30.0， 32.8， 36.4， 41.1， 49.5， 56.7， 57.0， 61.5， 70.3， 115.3， 115.6(JC-F ＝ 21Hz)， 123.0， 127.9， 130.8， 132.0(JC-F ＝ 8Hz)， 133.1， 136.0(JC-F ＝ 3Hz)， 154.9， 162.4(JC-F ＝ 242 Hz)， 171.4， 171.8， 172.4。 19
     最后， 在以 282.33MHz 操作并维持在 25℃下的光谱仪上获得 FNMR 谱。正如对于 1 H NMR 光谱法所进行来制备样品， 例外为添加一滴 CCl3F 用作参照标准品 (δ ＝ 0ppm)。如 图 7 中的代表性光谱所示， 如对于结构所预期， 获得 -117.4ppm 处的单个 19F 信号。
     FT-IR 分析
     使用方法 4E 以溴化钾压片形式获得化合物 298·HCl·H2O 的傅里叶变换红外 (FT-IR) 吸收光谱。通过求得以 4cm-1 的分辨率所测量的 16 次扫描的平均值来获得光谱。 FT-IR 光谱与结构相符， 其中最主要的谱带如表 3 中所指定， 且代表性光谱提供在图 8 中。
     表 3. 化合物 298·HCl·H2O 的主要 FT-IR 吸收谱带
     这表中使用的缩写 ： ν ＝伸缩振动模式。νs ＝对称振动模式。νas ＝反对称振 动模式。δ ＝弯曲或形变振动模式。
     XRPD 分析
     根据方法 4K 对化合物 298·HCl·H2O 进行 X 射线粉末衍射 (XRPD) 分析。代表性 衍射图显示在图 9 中。
     在 以 下 各 处 获 得 峰 (2θ) ： 7.7、 7.9、 8.9、 9.3、 9.5、 11.4、 11.5、 13.3、 14.5、 15.6、 15.9、 16.2、 16.8、 17.2、 17.6、 17.9、 19.7、 21.6、 22.3、 22.6、 23.2、 23.9、 24.8、 25.3、 26.2、 26.6、 26.9、 28.6、 29.1、 33.0、 33.8。
     DSC 谱
     使用方法 4L 获得化合物 298·HCl·H2O 的 DSC 谱， 且代表性实施例提供于图 10 中。
     吸湿性分析
     通过静态和动态蒸汽吸附 / 解吸附 (DVS) 实验来评估化合物 298·HCl·H2O 的吸 湿性， 所述实验在 25℃下根据方法 4M 来进行。 由此经由这些 DVS 研究所评估出的代表性吸 湿性曲线图呈现在图 11 中。
     在 20％到 90％相对湿度范围内仅观测到 1％重量变化 ( 约 0.3H2O)。经由在 0％ RH 下平衡而失去的晶格水 (2.6％重量减轻≡ 0.9H2O) 在初始 10％ RH 增加范围内快速收 复， 因此使一水合物形式复水 (3 重量％ H2O 含量 )。根据这些结果， 化合物 298·HCl·H2O 基本上不吸湿。另外， 根据这一准则在整体结晶物质中不可检测到残余非晶形内含物。
     通过使化合物 298·HCl·H2O 在 25℃下暴露于 80％ RH 湿度 3 个月时间来进行静 态吸湿性研究。在这一研究期间的任何时间点都没有检测到潮解。在第 1 周、 第 1 个月、 第 2 个月和第 3 个月时间点通过以下方法来分析样品 ： DSC、 热重分析和卡尔费歇尔滴定分析 法。这些研究还确定了化合物 298·HCl·H2O 基本上不吸湿。
     实施例 2
     合成化合物 298·HCl·H2O
     35步骤 2-1 ： 制备化合物 298·HCl·EtOH
     在 25L 反 应 器 中， 将 根 据 图 1 中 所 示 制 备 的 化 合 物 298(1.75kg) 溶 于 乙 醇 (10.5kg) 中， 然后添加 1.5 当量氯化氢 (3.5L， 溶于乙醇中的 1.0M)， 形成盐酸盐。 在环境温 度下搅拌混合物以使盐酸盐沉淀， 然后在 0℃下搅拌 30 分钟。将由此获得的固体过滤并用 乙醇洗涤， 然后在 40℃下真空干燥。将物质 (1.3kg， 83％产率， 98.5％ HPLC 纯度 ) 直接用 于下一步。
     步骤 2-2 ： 使化合物 298·HCl·EtOH 重结晶
     在 25L 反应器中， 将化合物 298· HCl EtOH(1.3kg， 2.09mol) 悬浮在乙醇 (8.5L) 与 水 (1.5L) 的混合物中。使混合物回流直到溶解并经由 0.20μm 过滤器趁热过滤。在 -20℃ 下冷却， 得到结晶化合物 298·HCl·EtOH(1.1kg， 84.6％产率， 99.2％ HPLC 纯度 )， 将其原 样用于下一步。
     步骤 2-3 ： 形成化合物 298·HClH2O 并使其结晶
     在 25L 反 应 器 中， 将 化 合 物 298·HCl·EtOH(1.1kg， 1.77mol) 悬 浮 在 2- 丁 酮 (1.1L) 与水 (4.4L) 的混合物中。使混合物回流直到出现完全溶解。然后将其冷却到室温 并在这一温度下维持 16 小时以使得完全结晶。将产物通过过滤分离， 然后用冷水洗涤， 得 到呈白色晶体状的化合物 298·HCl·H2O(868.5g， 82.7％产率， 99.6％ HPLC 纯度 )。
     表4： 对化合物 298·HCl·H2O 的代表性制备物的分析
     1 2根据表 1 中的测试方法和目标值。 未测试 稳定性测试 表 5. 化合物 298·HCl·H2O 的代表性制备物的稳定性 ( 批料 1)相对湿度
     使用方法 4B 以重量计 3
     未测试
     实施例 3
     制备和纯化 298·HCl·H2O
     步骤 3-1 ： 合成化合物 298·HCl·EtOH
     在氮气下向 100L 玻璃夹套反应器中加入 85.8L THF、 4.2L 二异丙基乙胺 (DIPEA) 和 1.6kg DEPBT。将反应器温度设定为 20℃， 并经 6 小时添加溶于 THF 中的化合物 298。在 添加后， 将溶液在这一温度下搅拌至少 36 小时。在完成 ( 起始物料≤ 1％ (HPLC 面积％ )) 后， 将反应器温度调节到 40℃并将 THF 真空浓缩直到残留约 20L 溶液。 将 1M 碳酸钠 (20.7L) 加入反应器中， 继而将 29.7L EtOAc 加入反应器中， 然后剧烈搅动 2 小时。 停止反应器搅动， 并将底部水层从反应器中排出。将有机相依序用 5.3L 1M 碳酸钠在 30 分钟内洗涤， 然后用 8L 饱和氯化钠水溶液洗涤。 将反应器温度调节到 40℃并将含有 EtOAc 的有机溶液真空浓缩 直到残留约 22L 溶液。将 EtOH(44L) 加入反应器中 并在 40℃下蒸发反应器内容物直到残 留约 33L 溶液。添加乙醇以使最终体积达到 44L。将反应器温度调节到 15℃到 20℃， 并添 加 3.4L 约 2.5M 氯化氢的乙醇溶液以使 pH 值达到 1.76( 目标范围 pH 1.5 到 2.0)。冷却到 0℃ ±5℃后， 出现沉淀过夜。通过过滤收集固体并在 25℃下真空干燥， 得到 2.2kg(67.6％ 产率 ) 分离的化合物 298·HCl·EtOH(98.8％纯度 (HPLC 面积％ ))。
     步骤 3-2 ： 使化合物 298·HCl EtOH 重结晶
     向 100L 玻璃夹套反应器中加入 19.5L 乙醇水溶液 (EtOH/H2O85 ∶ 15， 使用注射用 水 ) 和 2.2kg 化合物 298·HCl·EtOH。将反应器加热到 75℃ -85℃， 并将溶液经由配备有 0.2μm 过滤器 (Whatman， 货号 ： 6715-7502) 的转移管线趁热转移。用 EtOH 清洁反应器， 并 使已过滤的溶液回到反应器中。 然后将反应器温度调节到 20℃并在这一温度下将内容物搅 动 6 小时。将反应器进一步冷却到 -15℃ ±5℃， 并将所得浆料搅拌 2 小时。通过过滤收集 固体， 用乙醇 ( 冷却到 -13.9℃ ) 洗涤并在 25℃下真空干燥， 得到 1.843kg(84％产率 ) 结晶
     21化合物 298·HCl·EtOH(99.7％纯度 (HPLC 面积％ ))。
     步骤 3-3 ： 使化合物 298·HCl H2O 结晶
     向 22L 玻璃夹套反应器中加入 9.2L 2- 丁酮水溶液 (MEK/ 注射用水， 1 ∶ 4) 和 1.843kg 化合物 298·HCl·EtOH。将反应器加热到 75℃ -85℃。缓慢冷却并在 20℃ ±5℃ 下搅拌， 之后通过过滤收集固体化合物 298· HCl· H2O， 用注射用水 ( 预先冷却到 4℃ ) 洗涤 并在氮气下于 25℃下干燥。此得到 1.483kg(84％产率 ) 结晶化合物 298· HCl· H2O(99.9％ HPLC 纯度 )。 13
     C NMR(DMSO-d6) ： δ1.18， 4.55， 9.53， 14.58， 17.50， 27.54， 28.73， 31.69， 35.81， 48.75， 54.18， 55.69， 59.83， 69.38， 112.81， 114.65(JC-F 50.1Hz)， 120.98， 126.76， 129.44， 130.94(JC-F 19.8Hz)， 134.46(JC-F 7.2Hz)， 154.51， 160.88(JC-F 577Hz)， 169.66， 170.37， 171.12。
     表6： 化合物 298·HCl·H2O 的代表性物理化学特征
     表7： 对化合物 298·HCl H2O 的代表性制备物的分析38CN 102781441 A
     1 2说明书33/54 页根据表 1 中的测试方法和目标值。 未测试 稳定性测试 表 8. 化合物 298·HCl·H2O 的代表性制备物的稳定性
     相对湿度
     方法 4B 3
     以重量计 4
     未测试 5
     方法 4G
     呈白色粉末状的外观在 6 个月时间内保持不变。
     样品在两种储存条件下 6 个月后的 XRPD 分析仍与标准图一致 ( 参见图 9)。
     实施例 4
     制备化合物 298·HCl·2H2O
     将非晶形化合物 298·HCl 悬浮在使用巴斯德 (Pasteur) 吸管逐滴添加的热 H2O 和甲基乙基酮 (MEK) 中直到观测到完全溶解。使用油浴 (90℃ - ＞ 25℃ ) 将溶液缓慢地冷 却到室温， 之后在 4℃下放置过夜。在将温度维持在 203K±2K 下收集这些晶体并快速获取 X 射线结构。此结构确定了化合物 298·HCl·2H2O 盐的种类并提供为图 3。在室温下静置 后， 此溶剂合物自发地失去了一个水分子而形成化合物 298·HCl·H2O。
     21化合物 298·HCl·2H2O 的晶体数据和结构精修
     实施例 5
     制备化合物 298·HCl·EtOH
     通过以下制备溶剂合物 ： 将 100mg 非晶形化合物 298· HCl 溶于热 H2O/EtOH(1 ∶ 1) 中， 然 后 将 所 得 溶 液 缓 慢 地 冷 却 到 室 温。 将 溶 液 在 4 ℃ 下 放 置 过 夜。 过 滤 化 合 物 298·HCl·EtOH 的晶体并在室温下真空干燥过夜 ( 产率 85％ )。
     晶体的 X 射线结构显示为图 4。 最终的绝对结构由反常色散效应测定， 显示了实际 和反向结构的孪晶。C24′和 C25′组在两个几何位点上是无序的， 此组的最终精修占有率 是 54.5％而 C24 和 C25 的占有率是 45.5％。为清晰起见， 仅显示主要位点。乙醇分子在两 个几何位点上也是无序的， 出于同样的原因， 仅显示了 55.8％占有率的精修主要位点。用 相等的热和键限制 (EADP) 对 C24、 C24′、 C25 和 C25′原子进行精修， 用相似的热和键限制 (SIMU， DELU) 对乙醇分子进行精修。
     当最初将化合物 298 溶于浓 HCl/EtOH(1 ∶ 1) 中时， 形成相似的晶体。
     化合物 298·HCl·EtOH 的晶体数据和结构精修
     实施例 6
     制备化合物 298 的盐并测定其溶解度
     向 20mg(37.2μmol， 1.0 当量 ) 化合物 298 中添加 0.5mL 酸水溶液 (40.9μmol， 1.1 当量 )。将所得混合物在回旋振荡器上搅动 72 小时。然后测量溶液的 pH 值并通过 HPLC-CLND 分析测定已溶解的盐的量。表 9 总结了由此所测定的 14 种化合物 298 盐的溶解 度结果。
     表 9. 代表性化合物 298 盐的溶解度
     酸 马来酸 富马酸 琥珀酸 丙二酸 L- 苹果酸 化合物 298 盐 马来酸盐 富马酸盐 琥珀酸盐 丙二酸盐 苹果酸盐 第 72 小时的 pH 值 2.6 3.6 4.2 3.4 4.2 43 盐溶解度 (mg/mL)1 12.4 19.0 36.4 35.8 36.0CN 102781441 A 柠檬酸 D- 酒石酸 L- 乳酸 甲酸 甲磺酸 乙磺酸 硫酸 盐酸 磷酸说柠檬酸盐 酒石酸盐 乳酸盐 甲酸盐 甲磺酸盐 乙磺酸盐 硫酸盐 盐酸盐 磷酸盐明3.6 3.5 4.6 3.8 2.1 1.8 2.0 4.8 3.3书30.4 4.4 37.0 35.8 14.8 36.4 6.2 17.2 35.038/54 页
     1
     通过 HPLC-CLND 定量来测定
     实施例 7
     合成化合物 298·琥珀酸盐
     向溶于 10mL 丙酮中的 500mg 化合物 298 游离碱中添加 2mL(1.1 当量 ) 琥珀酸水 溶液 ( 通过将 301mg 琥珀酸溶于 5mL 水中来制备 )。将溶液搅动 10 分钟， 然后在真空中蒸 发丙酮 ( 旋转蒸发器 )。用 EtOAc(3×5mL) 萃取所得水溶液。将合并的有机相经 MgSO4 干 燥， 过滤并在真空中蒸发滤液。将由此获得的残余固体干燥过夜 ( 真空泵 )。将盐溶于最 少量的 EtOAc 中， 然后添加庚烷以使白色固体沉淀。将固体用庚烷研磨， 通过过滤收集并干 1 1 燥， 得到 455mg 化合物 298·琥珀酸盐。 HNMR 与对于此盐所预期的 H NMR 一致 ( 包括约 2.5ppm 处的单峰 )。
     以 100mg 化合物 298 游离碱为起始物重复上述工序， 得到 85mg 琥珀酸盐。以 3.0g 化合物 298 为起始物重复工序， 得到基本上定量产率的化合物 298·琥珀酸盐。
     通过以下得到结晶化合物 298· 琥珀酸盐 ： 将 50mg 非晶形物质溶 于 5mL Et2O 中， 然后逐滴添加庚烷直到观测到有些混浊， 但混浊消失。将混合物在室温下密封储存， 在约 7 天后得到 298· 琥珀酸盐的长针状结晶。或者， 将 100mg 非晶形物质溶于 13.5mL-15mL Et2O 中， 加热到 40℃℃ ( 油浴 )， 然后逐滴添加 1.5mL-2.5mL 庚烷。将混合物冷却到室温， 然后 储存在室温下。 获得大正方形透明晶体。 在其它的实验中， 需要在 -20℃下冷却或缓慢蒸发 Et2O 以实现结晶。
     熔点 ： 可能在 80℃ -90℃下转变， 在 155℃ -158℃下分解。
     实施例 8
     合成化合物 298·丙二酸盐
     向溶于 2mL 丙酮中的 100mg 化合物 298 游离碱中添加 0.4mL(1.1 当量 ) 丙二酸 水溶液 ( 通过将 269mg 丙二酸溶于 5mL 水中来制备 )。将溶液搅动 10 分钟， 然后在真空中 蒸发丙酮 ( 旋转蒸发器 )。用 EtOAc(3×5mL) 萃取所得水溶液。将合并的有机相经 MgSO4 干燥， 过滤并在真空中蒸发滤液直到残留约 2mL-3mL EtOAc， 然后添加庚烷以使白色固体沉 淀。在真空中除去溶剂， 得到 85mg 化合物 298· 丙二酸盐。如果固体变色， 那么将其溶于最 少量的 EtOAc 中， 然后添加庚烷以使盐沉淀， 用庚烷研磨并通过过滤收集。1H NMR 与对于此 盐所预期的 1HNMR 一致 ( 包括约 3.05ppm 处的单峰 )。将盐干燥过夜 ( 真空泵 )。
     以 3.0g 化合物 298 为起始物重复工序， 得到基本上定量产率的化合物 298·丙二 酸盐。
     熔点 ： 在 90℃ -110℃下转变， 在 165℃下分解。实施例 9
     合成化合物 298·乙磺酸盐
     向溶于 2mL 丙酮中的 100mg 化合物 298 游离碱中添加 0.4mL(1.1 当量 ) 乙磺酸水 溶液 ( 通过将 0.42mL 乙磺酸溶于 10mL 水中来制备 )。将溶液搅动 10 分钟， 然后在真空中 蒸发丙酮 ( 旋转蒸发器 )。用 EtOAc(3×5mL) 萃取所得水溶液。将合并的有机相经 MgSO4 干燥， 过滤并在真空中蒸发滤液直到残留约 2mL-3mL EtOAc， 此时白色固体沉淀。将盐干 1 燥过夜 ( 真空泵 )， 得到 75mg 化合物 298· 乙磺酸盐。 H NMR 与对于此盐所预期的 1H NMR 一致 [ 包括以下特征峰 ： 1.2ppm( 单峰 )、 2.1ppm( 宽单峰 )、 8.2ppm( 多重峰 )]。
     以 3.0g 化合物 298 为起始物重复工序， 得到 3.60g( 定量产率 ) 化合物 298· 乙磺 酸盐。
     熔点 ： 在 190℃ -195℃下分解。
     实施例 10
     测定化合物 298 的盐和溶剂合物的溶解度稳定性
     向溶于水中的 5％右旋糖 (D5W) 中添加 5mg 和 20mg 各种化合物 298 盐和溶剂合 物， 并用缓冲液将 pH 值确定在 4、 5 或 6。将样品在室温下维持 3 周， 其中定期观测并测定溶 解度 (HPLC)。结果呈现在表 10 中。
     表 10. 化合物 298 盐和溶剂合物的溶解度稳定性
     样品 化合物 298·HCl·H2O 化合物 298·HCl·EtOH 化合物 298·HCl 非晶形物 化合物 298·琥珀酸盐
     在 pH 5 下的溶解度 (mg/mL) 5 8 7 15-20对于所有样品来说， 溶解度在三周时间内保持稳定， 或甚至略有增加。 没有观测到沉淀。 实施例 11
     制备 298·HCl H2O 的代表性药物组合物
     可以利用以下工序制备可用作药物的化合物 298·HCl H2O 制剂。批料量可以变 化； 描述用于 30L 批料的工序。
     1. 将约 25.0L 无菌注射用水加入配衡的 40L 玻璃酸瓶中， 同时混合。
     2. 将 1363.68g 无水右旋糖加入玻璃酸瓶中并混合直到溶解。
     3. 将 17.04mL 冰乙酸加入来自步骤 2 的溶液中并混合至少 5 分 钟。
     4. 记录制剂的 pH 值。
     5. 用 1NNaOH( 水 ) 溶液将制剂的 pH 值调节到 pH 4.5±0.2。
     6. 在达到此 pH 值后， 通过定期量测来监测溶液的 pH 值直到其稳定。
     7. 在 pH 值稳定后， 将 33.72g 化合物 298·HCl·H2O 加入玻璃酸瓶中。
     8. 搅动直到观测到完全溶解 ( 约 1 小时 )。
     9. 添加无菌注射用水以达到 30.41kg 的最终批料重量 ( 密度是 1.0136g/mL)。
     10. 将 制 剂 经 由 0.45μmDurapore Millipak 预 过 滤 器 和 0.22μmDurapore Millipak 过滤器无菌过滤。
     11. 进行制剂外观和 pH 值的处理中测试。 12. 用制剂无菌填充 10mL 玻璃小瓶， 达到 9.37g±0.19g 的目标重量 ( 约 9.5mL)。 13. 塞住并密封小瓶， 然后检查每一者。 可以如表 11 中所概述来分析所得药物组合物， 在所述表 11 中， 显示了预期的结 表 11. 化合物 298·HCl·H2O 药物组合物的代表性分析测试果。
     对使用实施例 11 所制备的化合物 298·HCl·H2O 的代表性药物组合物的分析列 在表 12 中。药物组合物的稳定性呈现在表 13 中。
     表 12. 对实施例 11 的药物组合物的分析
     报道超过 0.1％的各单个降解物和降解物总和的结果。
     没有观测到超过临限值 0.1％的降解物。仅仅观测到早已存在于活性成分中的 杂质。通过 HPLC-UV(λ ＝ 230nm) 所指定的纯度是 99.6％。
     表 13. 实施例 11 的代表性药物组合物的稳定性
     ba
     1 2方法 4P 方法 4Q 3 方法 4S a 使用标准电极测量， 所有其它测量值用微电极测量。 b 未测试 c 相对湿度 所研究的所有样品呈澄清无色溶液的外观 ( 方法 4O) 在整个 24 个月时间内保持不变。 在第 6 个月、 第 12 个月、 第 18 个月、 第 24 个月时的测试显示， 所测试的所有样品 保持无菌 ( 方法 4U)。
     条件 3 的测试仅仅进行 6 个月。
     药代动力学分析
     已经报道了在对健康人类志愿者静脉内施用单个和多个剂量的实施例 11 药物组 合物后的药代动力学分析。(Lasseter， K.C. ； Shaughnessy， L. ； Cummings， D. 等， J. Clin. Pharmacol.2008， 48， 193-202。)
     实施例 12
     制备 298·HCl H2O 的代表性药物组合物
     可以利用以下工序制备可用作医药产品的 298·HCl·H2O 制剂， 以下工序是实施 例 11 工序的变体。批料量可以变化 ； 描述用于约 50L 批料的工序。
     1. 将约 45.0L 无菌注射用水 (WFI) 加入配衡的干净 50L 玻璃酸瓶中， 同时混合。
     2. 将 2272.8g 无水右旋糖加入玻璃酸瓶中并混合直到溶解。
     3. 将 28.40mL 冰乙酸加入来自步骤 2 的溶液中并混合至少 5 分钟。
     4. 记录制剂的 pH 值。
     5. 用 1N NaOH( 水 ) 溶液 ( 需要约 210mL) 将制剂的 pH 值调节到 pH4.5±0.2。
     6. 在达到此 pH 值后， 通过定期量测来监测溶液的 pH 值直到其稳定。
     7. 在 pH 值稳定后， 将 56.20g 化合物 298·HCl·H2O 加入玻璃酸瓶中。
     8. 搅动直到观测到完全溶解 ( 约 1 小时到 2 小时 )。
     9. 添加无菌 WFI 以达到 50.68kg 的最终批料重量 ( 密度是 1.0136g/mL)。
     10. 将制剂经由两个 0.22μm Durapore Millipak 过滤器无菌过滤。
     11. 进行制剂外观和 pH 值的处理中测试。
     12. 用含有 298·HCl 一水合物药物产品的制剂无菌填充 10mL 玻璃小瓶， 达到 9.63g±0.19g 的目标重量。
     13. 塞住并密封小瓶， 然后检查每一者。
     对使用实施例 12 所制备的化合物 298·HCl·H2O 的代表性药物组合物的分析列 在表 14 中。药物组合物的两个单独制备物的稳定性呈现于表 15 和表 16 中。
     表 14. 对实施例 12 的药物组合物的代表性分析
     报道超过 0.1％的各单个降解物和降解物总和的结果。 b
     没有观测到超过临限值 0.1％的降解物。仅仅观测到早已存在于活性成分中的 杂质。通过 HPLC-UV(λ ＝ 230nm) 所指定的纯度是 99.5％。
     表 15. 实施例 12 的代表性药物组合物的稳定性 ( 批料 1)
     a
     1 2方法 4P 方法 4Q 3 方法 4S a 使用标准电极测量， 所有其它测量值用微电极测量。 b 未测试 c 相对湿度 所研究的所有样品呈澄清无色溶液的外观 ( 方法 4O) 在整个 24 个月时间内保持不变。 在第 6 个月、 第 12 个月、 第 18 个月、 第 24 个月时的测试显示， 所测试的所有样品 保持无菌 ( 方法 4U)。仅在第 3 个月时进行的条件 3 的测试显示， 样品仍无菌。
     条件 3 的测试仅仅进行 6 个月。
     表 16. 实施例 12 的代表性药物组合物的稳定性 ( 批料 2)
     1 2方法 4P 方法 4Q 3 方法 4S a 使用标准电极测量， 所有其它测量值用微电极测量。 b 未测试 c 相对湿度 所研究的所有样品呈澄清无色溶液的外观 ( 方法 4O) 在整个 24 个月时间内保持不变。 在第 6 个月、 第 12 个月、 第 18 个月、 第 24 个月时的测试显示， 所测试的所有样品 保持无菌 ( 方法 4U)。
     实施例 13
     制备化合物 298·HCl·H2O 的代表性药物组合物
     下文描述了适用于药物的化合物 298·HCl·H2O 组合物的另一制备物。在所概述 的逐步操作之前， 通常适当地将不锈钢槽和槽之间的连接管道以及槽与填充机之间的连接 管道灭菌。
     1. 在 25℃ ±5℃的温度下将等于约 85％的最终目标重量的注射用水 (WFI) 装入 装备有磁性搅拌器的 200L 不锈钢混配槽中。 启动混合器以在后续添加期间进行连续混合。
     2. 向其中添加乙酸 (100％ ) 并测量 pH 值。
     3. 然后使用 1N NaOH 将 pH 值调节到 4.5±0.2。
     4. 当达到这一 pH 值时， 在连续混合下， 添加所需的全部量的右旋糖 ( 无水 )。
     5. 在右旋糖完全溶解后， 添加化合物 298·HCl·H2O 并将混合物搅动 1 小时。必 要时， 将混合进行更久以确保大环完全溶解， 之后继续。
     6. 在完全溶解后， 添加剩余量的 WFI。
     7. 使 用 氮 气 压 力 将 溶 液 经 由 灭 菌 Pall 0.22μm 筒 式 过 滤 器 ( 例 如 产 品 号 ： MCY4440DFLPH4) 预过滤。( 请注意， 在使用之前和之后， 用 WFI 将所有溶液过滤器润湿并使 用适当方法 ( 诸如泡点测试或前进流测试 ) 测试其完整性。)
     8. 可以将溶液储存在氮气下直到准备用于填充到适当容器 ( 诸如小瓶 ) 中。
     9. 对于填充， 将已预过滤的溶液通过经由两个 0.22μm Pall 过滤器 ( 例如产品 号： KA3DFLP1) 加压过滤来灭菌并放入填充贮器中。
     10. 为用药物组合物填充小瓶， 使用 Bosch FLC 3080 填充 / 加塞机 ( 或类似机 器 )。例如， 在 10mL 玻璃小瓶的情况下， 准备 10.5mL 目标填充物体积。
     虽然已使用实施例 13 的工序制备了批料量为约 170L 的化合物 298·HCl·H2O 药 物组合物 (2mg/mL)， 但是同样可以用所述方法制备更小或更大的批料量。用于此批料的组 分的量显示在表 17 中。此代表 性药物组合物 (2mg/mL) 的测试结果呈现在表 18 中， 且代 表性药物组合物的稳定性呈现在表 19 中。
     表 17. 用于实施例 13 的代表性药物组合物的制备物的组分的量
     组分 298·HCl·H2O 右旋糖 ( 无水 ) 冰乙酸 氢氧化钠 ( 用于制备 1.0N 溶液 ) 注射用水
     量 340.0g 8.16kg 0.107L 40g 164.36L表 18. 对实施例 13 的药物组合物的代表性分析
     表 19. 实施例 13 的代表性药物组合物的稳定性
     1 2方法 4P 方法 4Q 3 方法 4S 4 未测试 a 使用标准电极测量， 所有其它测量值用微电极测量。 b 相对湿度 所研究的所有样品呈澄清无色溶液的外观 ( 方法 4O) 在整个 12 个月时间内保持不变。 在第 6 个月和第 12 个月时的条件 1 测试显示， 所测试的所有样品保持无菌 ( 方法 4U)。在第 6 个月时的条件 2 测试显示， 样品仍无菌。
     条件 2 的测试仅仅进行 6 个月。
     实施例 14 用于皮下施用的化合物 298·HCl·H2O 的代表性药物组合物的制备和药代动力学(PK) 以 0.4mg/mL( 以化合物 298 游离碱等效物计 ) 的浓度制备化合物 298·HCl·H2O 在乙酸盐缓冲液和溶于水中的 5％右旋糖 (D5W) 中的水溶液， 其最终的 pH 值是 4.5 并指定 为制剂 A。其通过以下来制备 ： 用 6mL D5W 稀释 4mL 溶于 10mM 乙酸盐在 D5W 中的缓冲液中 的 1mg/mL( 以化合物 298 游离碱计 ) 实施例 11 的组合物。
     通过以下来制备各种浓度的化合物 298· HCl· H2O 的 12％ N- 甲基吡咯烷酮 (NMP) 和 0.25％苯甲醇的 D5W 溶液 ： 将化合物 298·HCl·H2O 溶于 NMP 中并搅拌约 5 分钟， 继而添 加苯甲醇并随后添加 D5W。所得制剂 B-1、 B-2 和 B-3 为 0.4mg/mL、 1.6mg/mL 和 6.4mg/mL，
     分别对应于 0.36mg/mL、 1.45mg/mL 和 5.81mg/mL 化合物 298 游离碱 (MW ＝ 538.65g/mol)。
     以 5mL/kg 的给药体积对雄性斯泼累格· 多雷大鼠 (Sprague-Dawley rat) 皮下 (sc) 施用制剂 A、 B-1、 B-2 和 B-3。化合物施用的细节呈现在表 20 中。
     表 20. 化合物 298·HCl·H2O 的代表性药物组合物的施用细节
     附注 ： 剂量水平是以化合物 298 游离碱的 mg/kg 数计。
     采血方案
     在以下时间收集血液样本 ( 约 300μL) ： 给药前、 在皮下施用后第 5 分钟、 第 15 分 钟、 第 30 分钟、 第 60 分钟、 第 120 分钟、 第 240 分钟、 第 360 分钟和第 480 分钟。经由 JVC 将 血液收集到容纳乙二胺四乙酸钠 (NaEDTA) 的试管中并放在冰上直到离心。在将温度维持 在 4℃同时， 将样本以 13,000rpm 离心 5 分钟。分离血浆并在分析之前冷冻储存在干冰上。 通过 LC-MS-MS 测定每一取样时间点的大鼠血浆样本中的化合物 298 浓度。
     计算
     使用非隔室模型化 ( 血管外输入模型 ) 和 WinNonlin 软件 ( 版本 5.2， Pharsight) 计算各动物的药代动力学 (PK) 参数。对于各动物和给药组来说， 计算半衰期 (t1/2)、 时间 零点到最后的可定量点 (AUC0-t) 和时间零点到无限的时间 (AUC0- ∞ ) 的浓度 - 时间曲线下 面积并将所观测到的 Cmax 和 Tmax 制成表格。在皮下施用 2mg/kg 的化合物 298 后， 对于制剂 A 所观测到的平均 Cmax 是约 1.6μg/mL( 范围是 1.2μg/mL-1.8μg/mL) 且对于制剂 B 所观 测到的平均 Cmax 是 1.5μg/mL( 范围是 1.3μg/mL-1.7μg/mL)。在 7mg/kg 或 29mg/kg 给药 后， 在制剂 B 的较高剂量的化合物 298·HCl·H2O 下所观测到的平均 Cmax 分别是约 2.6μg/ mL( 范围是 2.1μg/mL-2.9μg/mL) 和 3.3μg/mL( 范围是 2.8μg/mL-3.7μg/mL)。在皮下 施用后， Cmax 的增加小于与剂量成比例的增加， 或许是因为从皮下隔室的吸收具有速率限制 性。然而， 在施用药物后， 血浆水平长时间维持在高并稳定的水平， 表示在皮下施用化合物 后血浆暴露较高并且持续。计算终末消除速率常数以获得外推的 AUC0- ∞值。在此研究中，
     AUC0- ∞与剂量成比例地增加， 指示在所测试的剂量范围内从皮下隔室的吸收为线性吸收。 对 于这些代表性药物组合物测定的 PK 参数总结在表 21 中。
     表 21. 在对大鼠皮下施用后化合物 298·HCl·H2O 的代表性药物组合物的药代动 力学参数
     59CN 102781441 A
     1说明书54/54 页S.D. ＝标准偏差
     上文是对本发明的说明， 而不应理解为对本发明进行限制。本发明由以下权利要 求及其中包括的等效物限定。