抗催乳素受体抗体制剂.pdf

提供了一种宽浓度范围(特别是高浓度)、基本上不含盐的抗催乳素受体抗体制剂，所述制剂基本上是等渗的并具有低粘度。

权利要求书
1.  一种抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.0mM至70mM组氨酸；
b.50ppm至300ppm非离子型表面活性剂；
c.34mM至292mM的选自甘露醇、右旋糖、葡萄糖、海藻 糖和蔗糖的糖；
d.0mM至50mM精氨酸；
e.0mM至50mM赖氨酸；
f.0mM至270mM甘氨酸或丙氨酸；
g.0mM至10mM甲硫氨酸；以及
h.1mg/ml至150mg/ml的抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

2.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其中所述抗PRLR制剂除了缓 冲所述制剂的有机盐或无机盐以外基本上不包含无机盐。

3.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其中所述抗PRLR制剂基本上 不包含选自氯化钠(NaCl)、硫酸钠(Na2SO4)、硫氰酸钠(NaSCN)、 氯化镁(MgCl)、硫酸镁(MgSO4)、硫氰酸铵(NH4SCN)、硫酸铵 ((NH4)2SO4)、氯化铵(NH4Cl)、氯化钙(CaCl2)、硫酸钙(CaSO4) 和氯化锌(ZnCl2)的无机盐。

4.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其中所述制剂在22至23℃下 的粘度范围为1至8mPa·S。

5.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其中所述制剂的重量摩尔渗 透压浓度范围为240至380mmol/kg。

6.  权利要求1中任一项的抗PRLR抗体制剂，其中所述非离子型 表面活性剂是选自聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80的聚山梨醇酯。

7.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其中所述糖是蔗糖或海藻糖。

8.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，所述制剂包含10mM至50 mM的精氨酸。

9.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.30mM组氨酸，
b.100ppm聚山梨醇酯80，
c.292mM蔗糖，以及
d.20mg/ml抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

10.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.10mM组氨酸，
b.80ppm聚山梨醇酯80，
c.234mM蔗糖，
d.60mg/ml抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.0。

11.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.10mM组氨酸，
b.75ppm聚山梨醇酯80，
c.234mM蔗糖，以及
d.60mg/ml抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

12.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.10mM组氨酸，
b.75ppm聚山梨醇酯80，
c.88mM蔗糖，
d.270mM甘氨酸，以及
e.60mg/ml抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

13.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.10mM组氨酸，
b.75ppm聚山梨醇酯20，
c.88mM蔗糖，
d.133mM甘氨酸，以及
e.60mg/ml抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

14.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.10mM组氨酸，
b.200ppm聚山梨醇酯20，
c.88mM蔗糖，
d.133mM甘氨酸，以及
e.60mg/ml抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

15.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.70mM组氨酸，
b.80ppm聚山梨醇酯80，
c.200mM蔗糖，以及
d.60mg/ml抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

16.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.10mM组氨酸，
b.75ppm聚山梨醇酯80，
c.292mM蔗糖，
d.10mM精氨酸，以及
e.60mg/ml抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

17.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.70mM组氨酸，
b.75ppm聚山梨醇酯80，
c.176mM蔗糖，
d.30mM赖氨酸，以及
e.60mg/ml抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

18.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.10mM组氨酸，
b.75ppm聚山梨醇酯80，
c.234mM蔗糖，
d.30mM精氨酸，和
e.10mM甲硫氨酸，以及
f.60mg/ml抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

19.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.10mM组氨酸，
b.75ppm聚山梨醇酯80，
c.234mM蔗糖，
d.30mM精氨酸，和
e.10mM甲硫氨酸，以及
f.2mg/ml抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

20.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.10mM组氨酸，
b.75ppm聚山梨醇酯80，
c.234mM蔗糖，
d.20mM精氨酸，和
e.10mM甲硫氨酸，以及
f.150mg/ml抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

21.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.10mM组氨酸，
b.75ppm聚山梨醇酯80，
c.205mM蔗糖，
d.20mM精氨酸，
e.10mM甲硫氨酸，以及
f.1mg/ml抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

22.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.10mM组氨酸，
b.80ppm聚山梨醇酯80，
c.205mM蔗糖，
d.20mM精氨酸，和
e.10mM甲硫氨酸，以及
f.60mg/ml抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

23.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.10mM组氨酸，
b.75ppm聚山梨醇酯80，
c.205mM海藻糖，
d.20mM精氨酸，和
e.10mM甲硫氨酸，以及
f.60mg/ml抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

24.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.10mM组氨酸，
b.75ppm聚山梨醇酯80，
c.205mM海藻糖，
d.30mM精氨酸，
e.10mM甲硫氨酸，以及
f.2mg/ml抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

25.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.10mM组氨酸，
b.234mM蔗糖，
c.80ppm聚山梨醇酯80，
d.30mM精氨酸，
e.5mM甲硫氨酸，以及
f.7.5mg/ml抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

26.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.10mM组氨酸，
b.234mM蔗糖，
c.80ppm聚山梨醇酯80，
d.30mM精氨酸，
e.5mM甲硫氨酸，以及
f.60mg/mL抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

27.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.10mM组氨酸，
b.234mM蔗糖，
c.75ppm聚山梨醇酯80，
d.30mM精氨酸，
e.10mM甲硫氨酸，以及
f.60mg/mL抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

28.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其包含：
a.10mM组氨酸，
b.263mM蔗糖，
c.80ppm聚山梨醇酯80，以及
d.60mg/mL抗PRLR抗体；
其中所述抗PRLR抗体制剂的pH范围为pH 5.0至pH 6.5。

29.  权利要求1的抗PRLR抗体制剂，其中所述抗PRLR抗体是 人IgG2单克隆抗体。

30.  权利要求29的抗PRLR抗体制剂，其中所述人IgG2单克隆抗 体包含第WO/2011/069799、WO/2011/069798、WO/2011/069797、 WO/2011/069796、WO/2011/069795和WO/2011/069794号PCT专利 公开文本中的一篇或多篇中所记载的轻链序列和重链序列。

31.  权利要求29的抗PRLR抗体制剂，其中所述人IgG2单克隆 抗体包含SEQ ID NO:1的轻链序列和SEQ ID NO:7的重链序列。

32.  一种用于非激素治疗患者的子宫内膜异位症的方法，所述方 法包括向所述患者给予治疗有效量的抗PRLR抗体制剂，所述制剂在 pH 5.0至pH 6.5之间的pH下包含：0mM至70mM组氨酸、50ppm 至200ppm聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20、34mM至292mM蔗糖或海 藻糖、0mM至50mM精氨酸、0mM至50mM赖氨酸、0mM至270mM 甘氨酸或丙氨酸、0mM至10mM甲硫氨酸，以及1mg/ml至150mg/ml 蛋白质或抗体，其中所述抗PRLR抗体制剂基本上不包含无机盐。

33.  权利要求32的方法，其中所述抗PRLR抗体制剂通过静脉内、 皮下或肌肉内给药。

34.  权利要求33的方法，其中所述抗PRLR抗体是人IgG2单克隆 抗体。

35.  权利要求34的方法，其中所述人IgG2单克隆抗体包含第 WO/2011/069799、WO/2011/069798、WO/2011/069797、 WO/2011/069796、WO/2011/069795和WO/2011/069794号PCT专利 公开文本中的一篇或多篇中所记载的轻链序列和重链序列。

36.  权利要求34的方法，其中所述人IgG2单克隆抗体包含SEQ ID  NO:1的轻链序列和SEQ ID NO:7的重链序列。

说明书抗催乳素受体抗体制剂
本申请在2013年8月28日作为PCT国际专利申请提交，并要 求在2012年8月31日提交的第61/695949号美国临时专利申请和在 2013年3月15日提交的第13/842906号美国专利申请的优先权，其 全部公开内容在此通过引证的方式纳入本说明书。
背景
本公开总体上涉及宽浓度范围的抗催乳素受体抗体制剂，所述制剂 基本上为等渗的并具有低粘度，包括用于皮下注射给药和常规注射给药 的制剂。
催乳素(PRL)是由199个氨基酸组成的多肽激素。PRL属于生长 激素(GH)、多肽激素的胎盘催乳素(PL)家族并在垂体的催乳素细 胞和几种垂体外组织例如淋巴细胞、乳腺上皮细胞、子宫肌层和前列腺 中合成。两种不同的启动子调控垂体和垂体外PRL合成(BioEssays 28:1051-1055(2006))。
PRL结合至PRL受体(PRLR)，所述PRL受体为属于1类细胞 因子受体超家族的单次跨膜受体(Endocrine Reviews 19:225-268 (1998))。PRLR存在三种不同的同种型，即可以通过其胞质尾区的长度 区分的短、长和中间形式。在配体结合时，一种有序的过程导致PRLR 活化。PRL通过其结合位点1与一个PRLR分子相互作用，然后通过其 结合位点2吸引第二个受体分子，得到PRLR的活性二聚体。
PRLR二聚化导致JAK/STAT(Janus激酶/信号转导子和转录激活 子)途径的显著激活。在受体二聚化时，与受体关联的JAK(主要是 JAK2)转磷酸化并相互激活。此外，PRLR还被磷酸化并可结合至包含 SH2-结构域的蛋白质(例如STAT)。受体结合的STAT随后被磷酸化、 与该受体解离并易位到细胞核，在那里它们刺激靶基因的转录。此外， 已描述通过PRLR激活Ras-Raf-MAPK途径并激活胞质src激酶(参见 Endocrine Reviews 19:225-268(1998))。
已在良性疾病子宫内膜异位症中研究PRLR介导的信号传导的作 用。在一项研究中，在月经周期的中后期增生期中分析PRLR在子宫内 膜异位症患者的子宫内膜异位样品和在位子宫内膜中的表达模式(Acta  Obstet Gynecol Scand 81:5-10,2002)。结果表明，在79％的所分析的子 宫内膜异位症患者中，PRLR mRNA存在于在位子宫内膜中，而在86％ 的子宫内膜异位症患者中，PRLR mRNA不存在于子宫内膜异位病灶中。 这些数据表明，在正常组织和子宫内膜异位组织之间可能存在PRLR表 达的差别调控。然而，从这些表达数据中无法得出以下结论，即PRLR 的抑制可代表合适的子宫内膜异位症疗法--特别是因为并未发现PRLR 在子宫内膜异位病灶中表达(Acta Obstet Gynecol Scand 81:5-10 (2002))。
正致力于研发针对催乳素受体(PRLR)的抗体(包括抗PRLR单 克隆抗体(aPRLR mAb))以阻断PRLR作用。一种所述aPRLR mAb 是正研发的用于子宫内膜异位症患者的非激素治疗的IgG2抗PRLR  mAb。
可将抗体通过静脉内、肌肉内和/或皮下注射给予患者。为了确保患 者的顺应性，期望肌肉内和皮下注射剂型是等渗的并包括小注射量(每 个注射部位<2ml)。为了减少注射量并提供有效剂量，抗体通常在宽浓 度范围下给予，所述宽浓度范围为1mg/ml至150mg/ml，包括在20mg/ml 至150mg/ml范围内的高浓度。
虽然液体和冻干剂型都用于目前市售的抗体药物产品，但冻干剂型 更常用于具有高蛋白质浓度的抗体药物产品。高浓度抗体制剂在制剂、 特别是液体制剂的研发中可能存在许多挑战。对于其中抗体浓度接近表 观溶解极限的制剂而言，可通过沉淀、凝胶化和/或结晶发生相分离。在 高蛋白质浓度下，抗体的稳定性会出现问题，这是由于形成可溶性和不 溶性蛋白质-蛋白质聚集体。高度浓缩的抗体制剂通常是高粘度的，这为 加工(例如，超滤和无菌过滤)和剂量溶液的注射带来困难。且在高抗 体浓度下——其对意欲肌肉内或皮下给药的制剂而言是可取的——需要 相应的高浓度稳定剂(例如，蔗糖和氯化钠)以实现长期蛋白质稳定性。 所得的高渗溶液经常由于组织损伤而引起注射疼痛。因此，通常期望在 用于稳定的稳定剂的量和高蛋白质浓度的制剂的渗透压之间取得平衡。
发明内容
本公开提供了具有宽的抗PRLR抗体浓度范围的液体抗PRLR 抗体制剂和冻干的抗PRLR抗体制剂，所述制剂基本上是等渗的且粘度 低，并且除了用于缓冲所述制剂的有机盐或无机盐以外基本上不包含盐。
本文中的抗PRLR抗体制剂在约pH 5.0至约pH 6.5的pH下包含约 0mM至约70mM组氨酸；约50ppm至约300ppm非离子型表面活性剂， 例如聚山梨醇酯()80和/或聚山梨醇酯()20；约34mM 至约292mM糖或糖醇，例如甘露醇、右旋糖、葡萄糖、海藻糖和/或蔗 糖；约0mM至约50mM精氨酸；约0mM至约50mM赖氨酸；约0mM 至约270mM甘氨酸或丙氨酸；约0mM至约10mM甲硫氨酸；约1mg/ml 至约150mg/ml抗PRLR抗体，其包括aPRLR特异性的IgG2单克隆抗 体(mAb)。
每种本公开的抗体制剂除了用于缓冲所述制剂的有机盐或无机盐以 外基本上不包含盐。这允许添加其他稳定剂以维持所述制剂的等渗性(即， 重量摩尔渗透压浓度范围为约240mmol/kg至约380mmol/kg)，从而 促进更高度的患者顺应性。
每种本公开的抗体制剂在22℃至23℃下具有范围为约1至约8 mPa·S的低粘度，其促进加工的容易程度，例如改善超滤和无菌过滤，以 及促进给药过程中通过注射器针头的抗体制剂的注射。
本文公开的制剂在高蛋白质浓度下以液体形式或冻干形式使抗体稳 定，特别是使包括抗PRLR IgG2抗体的抗PRLR抗体稳定。
具体实施方式
如上所述，本公开提供了抗PRLR抗体制剂，所述制剂在预期的贮 存条件下以液体形式或冻干形式使宽浓度范围内的抗PRLR抗体稳定。 本文所述的制剂包括一种或多种药学上可接受的赋形剂或稳定剂，并包含 于合适的pH下的缓冲介质中，且在生理液体下基本上是等渗的。对于全 身给药而言，注射是一种可能的给药途径，所述注射包括肌肉内、静脉内、 腹膜内和皮下注射。
因为其低粘度，本公开的抗PRLR抗体制剂可方便地通过例如超滤 和无菌过滤进行加工，并且可通过注射(包括静脉内和皮下注射)给予患 者。此外，因为其基本上是等渗的，本公开的抗PRLR抗体制剂减少了 组织损伤或其他生理副作用，因此实现良好的患者耐受性和提高的患者的 顺应性。
本文所述制剂的特征是，除了用于缓冲所述制剂的有机盐或无机盐以 外基本上不添加盐，这为提高其他稳定剂(例如蔗糖)的浓度带来了灵活 性，同时保持所述制剂的重量摩尔渗透压浓度以提高体内耐受性，从而提 高患者的顺应性。此外，本文所述制剂的低粘度使得加工方便，包括超滤 和无菌过滤，以及通过针头注射药物产品溶液。
为了阐述本说明书，将使用以下定义。当下文所述的任何定义与其他 任何文献(包括通过引证的方式纳入本说明书的任何文献)中该术语的用 法有抵触时，为了阐述本说明书及其相关的权利要求的目的应以以下定义 为准，除非明显表示相反的含义(例如，在最初使用该术语的文献中)。
只要合适，以单数形式使用的术语还包括复数，反之亦然。本文使用 的“一”意指“一个或多个”，除非另有说明或在使用“一个或多个”明 显不合适的情况。使用“或”意指“和/或”，除非另有说明。所用的“包 含(“comprise”、“comprises”、“comprising”)”和“包括(“include”、 “includes”和“including”)”是可互换的并不旨在进行限制。术语“例如” 也不旨在进行限制。例如，术语“包括”应指“包括，但不限于”。此外， 在使用术语“包含(comprising)”描述一个或多个实施方案中，本领域 技术人员应理解，在某些具体的情况下，可替代性地使用“基本上由…… 组成”和/或“由……组成”描述实施方案。
如本文所用，术语“粘度”是指液体制剂流动(例如在给药于患者的 过程中通过注射器针头注射时)的阻力。可在所规定的温度(例如本文所 述的22℃至23℃)下用珀尔帖元件组(Peltier element set)通过锥板 技术测量粘度。通常，将定义明确的剪切应力梯度应用于液体制剂并 测量所产生的剪切速率。粘度是剪切应力和剪切速率的比值。如本文 所用，在22℃至23℃下，粘度以单位mPa·S表示，其中1mPa·S＝1 cP。本文公开的高浓度、低粘度、基本等渗的制剂的典型特征在于， 在22℃至23℃下具有的粘度范围为1至8mPa·S。
如本文所用，术语“重量摩尔渗透压浓度”是指溶质浓度的度量， 其定义为每千克溶液中溶质的毫摩尔数。所需的重量摩尔渗透压浓度 水平可通过添加一种或多种稳定剂来实现，所述稳定剂为例如糖或糖 醇，包括甘露醇、右旋糖、葡萄糖、海藻糖和/或蔗糖。其他适于提供重 量摩尔渗透压浓度的稳定剂记载于文献，例如The handbook of  Pharmaceutical Excipients(第4版,Royal Pharmaceutical Society of Great  Britain,Science&Practice Publishers)或Remingtons：The Science and  Practice of Pharmacy(第19版,Mack Publishing Company)中。
如本文所用，术语“约”是指所提供的单位值的+/-10％。如本文所 用，术语“基本上”是指表现出目标特征或特性的总程度或近似程度 的定性情况。生物领域的普通技术人员应理解，由于有许多影响测试、 生产以及储存生物和化学组合物和材料的变量，且由于在测试、生产 以及储存生物和化学组合物和材料中所用的仪器和设备中的固有误 差，生物和化学现象难以(如果有的话)实现或避免绝对结果。因此， 在本文中使用术语“基本上”来表示许多生物和化学现象中所固有的 潜在缺乏的完全性。
如本文所用，术语“等渗的(“isosmotic”和“isotonic”)”可 与术语“基本上等渗的(“substantially isosmotic”和“substantially  isotonic”)”互换使用，且指特征为具有与另一种溶液的渗透压相 同或至少基本上相等的渗透压的制剂，这通过如下制剂而实现，其中 所述制剂中的溶质(包括可渗透的溶质和不可渗透的溶质)总浓度与 另一种溶液中的溶质总数相同或至少基本上相等。因此，虽然本领域 技术人员理解，用于体内给药的“等渗的”制剂通常具有的重量摩尔 渗透压浓度范围为约270mmol/kg至约310mmol/kg，但在本公开的 高浓度、低粘度制剂情况下，术语“等渗的”、“基本上等渗的”可 互换地用于指重量摩尔渗透压浓度范围为约240mmol/kg至约380 mmol/kg，或约270mmol/kg至约370mmol/kg，或约300mmol/kg 至约330mmol/kg的制剂。
本公开的高浓度、低粘度、基本上等渗的抗PRLR抗体制剂在约pH 5.0至约pH 6.5的pH下包含：约0mM至约70mM组氨酸；约50ppm 至约300ppm非离子型表面活性剂，例如聚山梨醇酯()80和/ 或聚山梨醇酯()20；约34mM至约292mM糖或糖醇，例如甘 露醇、右旋糖、葡萄糖、海藻糖和/或蔗糖；约0mM至约50mM精氨酸； 约0mM至约50mM赖氨酸；约0mM至约270mM甘氨酸或丙氨酸； 约0mM至约10mM甲硫氨酸；和约1mg/ml至约150mg/ml抗PRLR 抗体。本文公开的制剂在22℃至23℃下表现出范围为约1至约8mPa·S 的粘度和范围为约240至约380mmol/kg的重量摩尔渗透压浓度。
在上述制剂中，组氨酸是缓冲剂，其可用于维持所述制剂的pH 值为约pH 5.0至约pH 6.5，或约pH 5.5至约pH 6.0，例如约pH 5.0、约 pH 5.5、约pH 6.0或约pH 6.5。
糖或糖醇(例如甘露醇、右旋糖、葡萄糖、海藻糖和/或蔗糖)单独 或结合用作液体制剂中以及冻干过程中抗PRLR抗体的冷冻保护剂和稳 定剂。
非离子型表面活性剂通过减少界面相互作用并防止抗体吸附而在加 工和贮存过程中使抗PRLR抗体稳定，所述非离子型表面活性剂为例如 聚山梨醇酯，包括聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80；泊洛沙姆(poloxamer)， 包括泊洛沙姆184和泊洛沙姆188；多元醇；以及其他乙烯/聚 丙烯嵌段聚合物。
精氨酸是蛋白质增溶剂，也是减少抗体和其他蛋白质聚集(例如抗 PRLR抗体聚集)和其他可能的降解的稳定剂。甲硫氨酸是在加工和贮存 过程中防止抗体氧化的抗氧化剂。
糖和无机盐通常用作蛋白质稳定剂，然而，糖和无机盐还是有效的张 度剂(tonicity agent)。如果制剂需要高浓度的一种或多种糖来稳定抗 PRLR抗体，无机盐的浓度应当为零或保持在非常低的水平以维持所述制 剂的重量摩尔渗透压浓度，以便降低给药时的注射疼痛。
如本文所用，术语“盐”是指无机盐，其包括氯化钠(NaCl)、硫 酸钠(Na2SO4)、硫氰酸钠(NaSCN)、氯化镁(MgCl)、硫酸镁(MgSO4)、 硫氰酸铵(NH4SCN)、硫酸铵((NH4)2SO4)、氯化铵(NH4Cl)、氯 化钙(CaCl2)、硫酸钙(CaSO4)、氯化锌(ZnCl2)等，或其结合。 本文公开的抗PRLR抗体制剂的特征在于，基本上不添加盐，因此在本 文中被称为无盐抗体制剂。本领域技术人员应理解，在本公开的制剂中通 过调节pH而引入的无机盐的存在并不视为添加的盐。此类通过调节pH 而引入的无机盐，如果在本公开内容的制剂中存在的话，其浓度不应超过 约2mM。
如本文所用，术语“表面活性剂”包括非离子型表面活性剂， 其包括但不限于，聚山梨醇酯，例如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80； 泊洛沙姆，例如泊洛沙姆184或泊洛沙姆188；多元醇；以及 其他乙烯/聚丙烯嵌段聚合物。有效提供稳定的高浓度抗PRLR抗体制剂 的表面活性剂的量通常在50ppm至300ppm范围内。使用非离子型表 面活性剂使所述制剂暴露于剪切应力和表面应力之下而没有引起抗 PRLR抗体变性，还降低了加工和贮存过程中的表面吸附。本文公开的制 剂包括但不限于，具有一种或多种非离子型表面活性剂的制剂，所述非离 子型表面活性剂包括，例如，一种或多种聚山梨醇酯，例如聚山梨醇酯 20或聚山梨醇酯80；一种或多种泊洛沙姆，例如泊洛沙姆184或泊洛沙 姆188；多元醇；和/或一种或多种乙烯/聚丙烯嵌段聚合物。本 文所举例说明的是含有聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20(20) 或聚山梨醇酯80(80))的制剂。
如本文所用，术语“抗体”指通常已知为免疫球蛋白的一类蛋白质。 抗体包括全长单克隆抗体(mAb)，例如IgG2单克隆抗体，其包含免 疫球蛋白Fc区。术语抗体还包括双特异性抗体、双体抗体(diabodies)、 单链分子和抗体片段，例如Fab、F(ab')2和Fv。
如本文所用，术语“抗PRLR抗体”指对人PRLR蛋白质以及 人PRLR蛋白质的片段和变体具有结合特异性的抗体。本文所述的抗 PRLR抗体可以是IgG2抗体并包括抗PRLR IgG2单克隆抗体，例如 嵌合、人源化和全人(fully-human)抗PRLR IgG2单克隆抗体。适 用于本文所公开的制剂的抗PRLR单克隆抗体(其包括全长抗体及其 抗原结合片段和变体)记载于第WO/2011/069799、WO/2011/069798、 WO/2011/069797、WO/2011/069796、WO/2011/069795和 WO/2011/069794号PCT专利公开文本中，其各自公开的内容分别以 引证的方式全部纳入本文中。
“单克隆抗体”的特征为，具有对于单一抗原决定簇的特异性。 单克隆抗体可例如通过由Kohler和Milstein，Nature 256:495(1975) 所记载的杂交瘤法或通过如记载于第4816567号美国专利中的那些 重组DNA法制备。还可使用如Clackson等人,Nature 352:624-628 (1991)和Marks等人,J.Mol.Biol.222:581-597(1991)中所记载的那些 技术从噬菌体展示文库中分离单克隆抗体。
单克隆抗体包括“嵌合单克隆抗体”，其中一部分重链和/或轻 链包括衍生自一个物种的抗体的序列，而所述抗体的其余部分(包括 Fc区)包括衍生自第二物种的抗体的序列，并且所述第二物种可以 是人。参见，例如，第4816567号美国专利和Morrison等人,Proc.Natl. Acad.Sci.USA 81:6851-6855(1984)。
单克隆抗体还包括“人源化单克隆抗体”，其中一个或多个衍生 自一个物种的抗体的重链和/或轻链序列的互补性决定区域(CDR) 取代一个或多个衍生自第二物种的抗体的重链和/或轻链序列的互补 性决定区域，并且第二物种可以是人。“人源化”方法通常应用于为 人类给药而研发的单克隆抗体。参见，例如，Riechmann等人,Nature 332(6162):323-27(1988)和Queen等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86(24):10029-33(1989)。
单克隆抗体还包括“全人单克隆抗体”，其中所有重链和轻链序 列衍生自人抗体序列。全人单克隆抗体可通过噬菌体展示技术而制 备，并且可与已进行基因工程而表达人抗体谱的鼠分离。参见，例如， McCafferty等人,Nature 348(6301):552-554(1990)、Marks等人,J. Mol.Biol.222(3):581-597(1991)，以及Carmen和Jermutus,Brief Funct.Genomic Proteomic 1(2):189-203(2002)。
如本文所用，术语抗PRLR抗体制剂的“药学上有效量”是指在 给药方案中提供治疗作用的制剂的量。本文公开的高浓度抗PRLR抗 体制剂通常包括浓度范围为约1mg/ml至约150mg/ml、或约2mg/ml 至约120mg/ml、或约5mg/ml至约100mg/ml、或约7.5mg/ml至约 60mg/ml的抗PRLR抗体。在某些方面，所述制剂中的抗PRLR抗 体的浓度为约2mg/ml、或约7.5mg/ml、或约20mg/ml、或约50 mg/ml、或约60mg/ml。对皮下注射而言，所述制剂通常以每个注射 部位小于约2ml、或约1.5ml、或约1ml、或约0.5ml的体积进行给 药。
在某些方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH下包含约30mM组氨酸、约100ppm聚山梨醇酯80、约 292mM蔗糖、约20mg/ml抗PRLR抗体。在相关方面，所述抗PRLR 抗体制剂还包含约10mM至约50mM精氨酸。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH下包含约10mM组氨酸、约80ppm聚山梨醇酯80、约234 mM蔗糖、约60mg/ml抗PRLR抗体。在相关方面，所述抗PRLR 抗体制剂还包含约30mM至约50mM精氨酸。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH下包含约10mM组氨酸、约75ppm聚山梨醇酯80、约234 mM蔗糖、约60mg/ml抗PRLR抗体。在相关方面，所述抗PRLR 抗体制剂还包含约30mM至约50mM精氨酸。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH下包含约10mM组氨酸、约75ppm聚山梨醇酯80、约88 mM蔗糖、约133mM甘氨酸、约60mg/ml抗PRLR抗体。在相关 方面，所述抗PRLR抗体制剂还包含约10mM至约50mM精氨酸。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH下包含约10mM组氨酸、约75ppm聚山梨醇酯20、约88 mM蔗糖、约133mM甘氨酸、约60mg/ml抗PRLR抗体。在相关 方面，所述抗PRLR抗体制剂还包含约10mM至约50mM精氨酸。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH下包含约10mM组氨酸、约200ppm聚山梨醇酯20、约 88mM蔗糖、约133mM甘氨酸、约60mg/ml抗PRLR抗体。在相 关方面，所述抗PRLR抗体制剂还包含约10mM至约50mM精氨酸。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH下包含约70mM组氨酸、约80ppm聚山梨醇酯80、约200 mM蔗糖、约60mg/ml抗PRLR抗体。在相关方面，所述抗PRLR 抗体制剂还包含约10mM至约50mM精氨酸。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH下包含约10mM组氨酸、约80ppm聚山梨醇酯80、约292 mM蔗糖、约10mM精氨酸、约60mg/ml抗PRLR抗体。在相关方 面，所述抗PRLR抗体制剂还包含约0mM至约10mM甲硫氨酸。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH下包含约70mM组氨酸、约80ppm聚山梨醇酯80、约176 mM蔗糖、约133mM甘氨酸、约30mM赖氨酸、约60mg/ml抗PRLR 抗体。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH下包含约10mM组氨酸、约75ppm聚山梨醇酯80、约234 mM蔗糖、约30mM精氨酸、约60mg/ml抗PRLR抗体。在相关方 面，所述抗PRLR抗体制剂还包含约0mM至10mM甲硫氨酸。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH下包含约10mM组氨酸、约80ppm聚山梨醇酯80、约234 mM蔗糖、约20mM精氨酸、约150mg/ml抗PRLR抗体。在相关 方面，所述抗PRLR抗体制剂还包含约0mM至10mM甲硫氨酸。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH下包含约10mM组氨酸、约80ppm聚山梨醇酯80、约205 mM蔗糖、约20mM精氨酸、约60mg/ml抗PRLR抗体。在相关方 面，所述抗PRLR抗体制剂还包含约0mM至10mM甲硫氨酸。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH下包含约10mM组氨酸、约80ppm聚山梨醇酯80、约205 mM蔗糖、约20mM精氨酸、约2mg/ml抗PRLR抗体。在相关方 面，所述抗PRLR抗体制剂还包含约0mM至10mM甲硫氨酸。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH下包含约10mM组氨酸、约80ppm聚山梨醇酯80、约205 mM蔗糖、约20mM精氨酸、约1mg/ml抗PRLR抗体。在相关方 面，所述抗PRLR抗体制剂还包含约0mM至10mM甲硫氨酸。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH下包含约10mM组氨酸、约75ppm聚山梨醇酯80、约205 mM海藻糖、约20mM精氨酸、约2mg/ml抗PRLR抗体。在相关 方面，所述抗PRLR抗体制剂还包含约0mM至10mM甲硫氨酸。 在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5 的pH下包含约10mM组氨酸、约75ppm聚山梨醇酯80、约205mM 海藻糖、约20mM精氨酸、约60mg/ml抗PRLR抗体。在相关方面， 所述抗PRLR抗体制剂还包含约0mM至10mM甲硫氨酸。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH(例如pH 5.5)下包含约10mM组氨酸、约234mM蔗糖、 约80ppm聚山梨醇酯80、约30mM精氨酸、约5mM甲硫氨酸、 约7.5mg/ml抗PRLR抗体。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH(例如pH 5.5)下包含约10mM组氨酸、约234mM蔗糖、 约80ppm聚山梨醇酯80、约30mM精氨酸、约5mM甲硫氨酸、 约60mg/ml抗PRLR抗体。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH(例如pH 5.5)下包含约10mM组氨酸、约234mM蔗糖、 约75ppmTween 80、约30mM精氨酸、约10mM甲硫氨酸、约60 mg/ml抗PRLR抗体。
在其他方面，所述抗PRLR抗体制剂在范围为约pH 5.0至约pH 6.5的pH(例如pH 6.0)下包含约10mM组氨酸、约263mM蔗糖、 约80ppm聚山梨醇酯80、约60mg/ml抗PRLR抗体。
因此，本公开提供了抗PRLR mAb制剂，其包括抗PRLR IgG2 mAb制剂，其中抗PRLR mAb在高蛋白质浓度下是可溶的。在本文 公开的制剂中，所述抗PRLR mAb在浓度为约1mg/ml至约150 mg/ml之间保持可溶，且在等渗贮存条件下保持稳定，并与当前市售 的抗体制剂相比表现出减小的粘度。
具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链和包含SEQ ID NO:7 的氨基酸序列的重链的抗PRLR抗体是阻断催乳素受体(PRLR)的 IgG2抗体。抗PRLR抗体可通过阻断PRLR防止子宫内膜异位症发病 或发展，从而克服子宫内膜途径中的缺陷。本文所述的高浓度、不含盐 的抗PRLR抗体制剂可通过静脉内注射或皮下注射或其他注射途径 给药于患者。
作为本公开的一部分，抗PRLR抗体的稳定性受赋形剂影响。在 所规定的pH范围内，抗PRLR抗体的稳定性随着NaCl浓度的降低而 升高。此外，带正电的氨基酸(例如精氨酸和赖氨酸)可提高抗PRLR 抗体的稳定性，且pH显著影响抗PRLR抗体聚集。抗体溶液的聚集 随着pH增加而增加。用于稳定本文所述的抗PRLR抗体的最佳pH 范围为约pH5.0至约pH6.5，或约pH5.5至约pH6.0，例如约pH5.0、约 pH5.5、约pH6.0或约pH6.5。
本文所提供的是抗PRLR抗体制剂，其中所述抗PRLR抗体包括 IgG2抗体，其包括具有第WO/2011/069799、WO/2011/069798、 WO/2011/069797、WO/2011/069796、WO/2011/069795和 WO/2011/069794号PCT专利公开文本中的一篇或多篇中所述的轻链 序列和重链序列的人IgG2单克隆抗PRLR抗体。
适于在本文中描述的抗PRLR抗体制剂中使用的抗体通过示于表1 中的Mat3-hIgG2抗体举例说明，其从BioInvent噬菌体展示文库(Lund, Sweden)获得，并随后对亲和性、活性、物种交叉反应性和可制造 性进行种系化和序列优化。
Fab部分包含λ轻链(VL：DPL3种系；CL：Mcg-/Kern-/Oz- 同种型)和重链VH DP47种系框架区。所述抗体被重组为缺少C端 赖氨酸的IgG2m(n-)重链同种异型的人IgG2。在所述轻链的氨基酸 位置98处的CDR3中存在潜在的脱酰胺位点，且在该抗体中此位点 保持不变。在所述重链的N294处存在IgG2的标准N-糖基化位点。
表1
示例性人抗PRLR IgG2单克隆抗体Mat3-hIgG2的重链和轻链序 列




因此，本公开提供了抗PRLR mAb制剂，其包括抗PRLR IgG2 mAb制剂，其中抗PRLR mAb在高蛋白质浓度下是可溶的。通常， 在本文公开的制剂中的抗PRLR mAb在浓度为约1mg/ml至约150 mg/ml下保持可溶，并在等渗贮存条件下保持稳定，且与当前市售的 抗体制剂相比表现出减小的粘度。
具有所附的序列表中和第WO/2011/069799(U.S.2013/0129739)、 WO/2011/069798(U.S.2013/0022606)、WO/2011/069797(U.S. 2012/0315276)、WO/2011/069796(U.S.2013/0171147)、 WO/2011/069795和WO/2011/069794(U.S.2012/0321632)号PCT 专利公开文本中的一篇或多篇中所示的轻链序列和重链序列的抗 PRLR抗体可以是阻断催乳素受体活性的IgG2抗体。抗PRLR抗体 可通过阻断PRLR防止子宫内膜异位症的发病或发展，从而克服子宫内 膜途径中的缺陷。本文所述的宽蛋白质浓度范围(包括高浓度)的抗 PRLR抗体制剂可通过静脉内注射、肌肉内注射或皮下注射给药于患 者。
本公开还提供了用于非激素治疗患者的子宫内膜异位症的方法， 包括向患者给予治疗有效量的一种或多种本文所述的制剂。例如，提 供了用于非激素治疗患者的子宫内膜异位症的方法，其包括向患者给 予治疗有效量的抗催乳素受体抗体(aPRLR Ab)制剂，所述制剂包 括aPRLR特异性的IgG2单克隆抗体(mAb)制剂，其在范围为约pH 5.0 至约pH 6.5的pH下包含：约0mM至约70mM组氨酸；约50ppm至 约300ppm聚山梨醇酯()80和/或聚山梨醇酯()20； 约34mM至约292mM蔗糖；约0mM至约50mM精氨酸，约0mM至 约50mM赖氨酸，约0mM至约270mM甘氨酸或丙氨酸，约0mM至 约10mM甲硫氨酸；以及约1mg/ml至约150mg/ml抗PRLR抗体。在 这些方法的至少一方面，所述抗PRLR抗体制剂可静脉内给药。在这些 方法的其他方面，所述抗PRLR抗体制剂可皮下给药。在所述方法的其 他方面，所述抗PRLR抗体制剂可肌肉内给药。
根据用于非激素治疗患者子宫内膜异位症的那些方法的某些方面，所 述抗PRLR抗体是人抗PRLR IgG2单克隆抗体，例如，包含第 WO/2011/069799、WO/2011/069798、WO/2011/069797、 WO/2011/069796、WO/2011/069795和WO/2011/069794号PCT专利 公开文本中的一篇或多篇中所述的轻链序列和重链序列的人抗PRLR IgG2单克隆抗体。
可通过以下实施例进一步了解本公开的各方面，所述实施例不应以任 何方式解释为限制本发明的范围。
实施例
实施例1
NaCl浓度和pH对抗体溶液的浊度的影响
本实施例公开了盐(NaCl)浓度和pH对含有人抗PRLR单克隆 抗体的溶液的聚集的影响，所述抗体包含第WO/2011/069799、 WO/2011/069798、WO/2011/069797、WO/2011/069796、 WO/2011/069795和WO/2011/069794号PCT专利公开文本中的一篇 或多篇中所述的轻链序列和重链序列。通过目测法估计溶液的浊度， 以快速评估盐浓度和pH对aPRLR mAb溶液的影响。在5℃和25℃ 下2个月之后观察到在pH为5.5至6.5的不含盐的制剂中没有沉淀。
pH为5.5至6.5的不含氯化钠的溶液推荐用于本公开的抗PRLR 抗体制剂。
不囿于理论，认为具有高NaCl浓度的抗PRLR mAb制剂在浊度 或聚集方面的稳定性降低是由抗PRLR mAb精氨酸侧链上的正电荷 的中和引起的。在一价盐(NaCl)的影响下在不同pH下的aPRLR mAb的相行为解释了获得稳定的、可溶的、无盐和基本上等渗的 aPRLR mAb制剂的原因。
当pH低于等电点(PI)时(例如，pH 5至6.5)，抗PRLR抗 体带净正电荷。所述抗PRLR抗体表面上的正电荷的斥力可防止单个 分子间的蛋白质-蛋白质缔合，从而显著增加溶解度。假设盐的阴离 子(Cl-)结合至抗PRLR抗体表面上的精氨酸侧链上的鈲盐基以中 和正电荷，其增强蛋白质-蛋白质的相互作用并因此导致较低的溶解 度和溶液浊度。通过将pH调节至5.0至6.5，研发出本文所述的无盐 制剂，以实现提高的抗体溶解度和稳定性。在不存在盐的情况下，其 他稳定剂(例如蔗糖)的浓度可增加至>150mM且<300mM，而不 会损害重量摩尔渗透压浓度。
实施例2
抗PRLR抗体制剂
制备不含有NaCl的基本上等渗的高浓度抗PRLR抗体制剂。这 些制剂使用高蔗糖浓度以帮助稳定抗PRLR Ab。
将冷冻的抗PRLR抗体解冻，并根据表2中所示的配方进行配制。 制备所述制剂并用0.22μm滤器进行无菌过滤，无菌装入玻璃管形瓶 (glass tubing vial)中并用橡胶塞塞住。
在不存在NaCl且存在34mM至292mM蔗糖或海藻糖以及聚山 梨醇酯80(50-300ppm)的条件下，且在pH 5.0至6.5下，带正电 荷的氨基酸(例如精氨酸(10至50mM))可有效抑制aPRLR Ab 聚集。
表2
抗PRLR抗体制剂





代表性抗PRLR mAb制剂通过HPLC-SEC分析蛋白质聚集和降 解，通过LC-MS分析aPRLR结构变化(糖基化和氧化)，通过粘 度计测量粘度，以及通过重量摩尔渗透压浓度仪测量重量摩尔渗透压 浓度。HPLC-SEC分析蛋白质聚集的结果示于表3中，浊度测定分析 浊度的结果示于表4中，LC-MS分析aPRLR结构变化的结果示于表 5中，粘度和重量摩尔渗透压浓度的分析结果示于表6中。
表3
HPLC-SEC聚集形成的平均速率(％/天)


1此计算结果基于100天的数值。
2此计算结果基于90天的数值。
表4
所述制剂在室温下在100rpm下振荡之后的LC-MS结果

1所述制剂在室温下在100rpm下振荡14天之后。
2所述制剂在室温下在100rpm下振荡21天之后。
LC＝轻链；HC＝重链；RS＝参考标准。
表5
在室温下在100rpm下振荡之后浊度变化的平均速率(通过浊度 测定法)

1所述制剂在室温下在100rpm下振荡14天之后。
2所述制剂在室温下在100rpm下振荡21天之后。
表6
抗PRLR Ab制剂的粘度和重量摩尔渗透压浓度