川芎挥发油的一种新制法 技术领域
本发明涉及医药技术领域，是一种以中药川芎为原料制备川芎挥发油新的制备方法。
背景技术
目前国内外有很多药物用于防治缺血性脑病，但疗效尚欠满意。从中药中寻找防治缺血性脑病的药物早已成为国内外研究的热点。缺血性脑病如最常见的脑血栓形成，在祖国医学中属“淤血症”的范畴，为血行不畅而淤滞，用活血化淤法治疗缺血性脑病可获得良好疗效。
川芎有解除血管痉挛、扩张血管、改善血循环、解除淤血或供血不足状态等药理作用，目前用川芎治疗缺血性脑中风的使用方式，最多的为水煎煮法或水提醇沉法，但这种制备方法使原料药中易挥发部位的活性成分较难保留，从而影响疗效。目前利用超临界二氧化碳流体萃取技术提取川芎挥发油的方法[详见原永芳，周践，郑晓梅等.超临界流体CO2萃取川芎挥发油化学成分的研究[J].中国药学杂志，2000，35(2)：84]，其提取条件压力高达34.5MPa，提取温度为60℃，远离二氧化碳的临界点压力7.185MPa和温度31.1℃，以致所得到的挥发油色泽较深，发红，明显有别于水蒸气蒸馏所得的浅黄色挥发油，经GC-MS联用仪测定，SFE所得挥发油中杂质不饱和长链脂肪酸含量较高，与水蒸气蒸馏所得油有相当大的差异，且由于提取压力高，操作条件不易控制，对设备的损耗较大。
发明内容
本发明采用近临界二氧化碳流体提取法提取川芎中挥发油，其提取压力小，温度低，不仅提高了提取效率，而且无溶剂残留，不破坏天然活性成分和热敏性成分，能最大限度地保持提取物的天然特征；还由于提取条件温和，操作条件易控制，工艺稳定，本挥发油性质稳定，药效显著。
本发明川芎挥发油制备步骤如下：
1、原料准备：将川芎洗净后于30～70℃低温烘干，优选温度为30～60℃，最佳温度为30～40℃，粉碎至10～20目细粉，最佳为20目；
2、萃取：川芎细粉采用二氧化碳流体萃取装置，提取挥发油，萃取温度为15～60℃，萃取压力为4～15Mpa，萃取时间为1～4小时；优选条件萃取温度为25～40℃，萃取压力为6～8Mpa，萃取时间为一个半小时至两个半小时；最佳条件萃取温度为29～31℃，萃取压力为6.8～7.2Mpa，萃取时间为一个半小时至两个半小时。
具体实施方式
实施例1：制备川芎挥发油
1、原料准备：用清水将川芎清洗干净，置30℃低温烘干，用粉碎机粉碎至20目细粉；
2、萃取：取川芎细粉500g，采用二氧化碳流体萃取装置(南通华安超临界流体萃取仪，下同)，提取挥发油，萃取温度为20℃，萃取压力为7.2Mpa，萃取时间为一个半小时，得挥发油15ml。
实施例2：制备川芎挥发油
1、原料准备：用清水将川芎清洗干净，置40℃低温烘干，用粉碎机粉碎至20目细粉；
2、萃取：取川芎细粉500g，采用二氧化碳流体萃取装置提取挥发油，萃取温度为25℃，萃取压力为7.0Mpa，萃取时间为一个半小时，得挥发油14ml。
实施例3：制备川芎挥发油
1、原料准备：用清水将川芎清洗干净，置30℃低温烘干，用粉碎机粉碎至20目细粉；
2、萃取：取川芎细粉500g，采用二氧化碳流体萃取装置提取挥发油，萃取温度为20℃，萃取压力为7.5Mpa，萃取时间为两个半小时，得挥发油18ml。
实施例4：制备川芎挥发油
1、原料准备：用清水将川芎清洗干净，置30℃低温烘干，用粉碎机粉碎至20目细粉；
2、萃取：取川芎细粉500g，采用二氧化碳流体萃取装置提取挥发油，萃取温度为16℃，萃取压力为7.2Mpa，萃取时间为一个半小时，得挥发油16ml。
实施例5：制备川芎挥发油
1、原料准备：用清水将川芎清洗干净，置30℃低温烘干，用粉碎机粉碎至20目细粉；
2、萃取：取川芎细粉500g，采用二氧化碳流体萃取装置提取挥发油，萃取温度为30℃，萃取压力为7.7Mpa，萃取时间为2小时，得挥发油17ml。
实施例6：超临界二氧化碳流体萃取法制备川芎挥发油
1、原料准备：用清水将川芎清洗干净，置30℃低温烘干，用粉碎机粉碎至20目细粉；
2、萃取：取川芎细粉500g，采用二氧化碳流体萃取装置提取挥发油，萃取温度为60℃，萃取压力为34.5Mpa，萃取时间为2小时，得挥发油16ml。
实施例7：制备川芎注射液
取上述实施例5和6制备的挥发油各1.5ml，分别加入药用辅料20％甘露醇水溶液75ml和泊洛沙姆7.5g，加蒸馏水至250ml，按10ml/支分装消毒，即成5号川芎注射液成品和6号川芎注射液成品。
动物实验
实验方法如下：
1、试剂 二磷酸腺苷二钠ADP购自上海蓝季科技发展有限公司，磷酸二氢钠和磷酸氢二钠购自广东金砂化工厂，配成浓度为0.2mol/L、pH为7.4的缓冲液，枸橼酸钠购自上海试剂一厂，注射用生理盐水购自上海百特医疗用品有限公司。
2、动物 新西兰家兔，雄性，体重3.0±0.2kg，购自第二军医大学动物房。
3、方法 取家兔9只，分成三组：空白组、对照组和给药组，每组3只动物。空白组：于耳缘静脉滴注生理盐水，每只110ml；对照组：将6号川芎注射液10ml用100ml的生理盐水稀释后于耳缘静脉滴注，每只110ml；给药组：将5号川芎注射液10ml用100ml的生理盐水稀释后于耳缘静脉滴注，每只110ml。半小时后各自心脏取血5ml，置事先放有抗凝剂3.8％枸橼酸钠溶液的塑料离心管中，血与抗凝剂比例9∶1，将血液与抗凝剂轻轻混匀，离心(800rpm)4分钟，吸出上层悬液约1.5ml即为富血小板血浆(PRP)。继续离心(2000rpm)10分钟，吸取上清液，制得贫血小板血浆(PPP)。取3只比色杯，一只加入PPP，另2只加入PRP，各比色杯预热至恒温(37±0.1℃)，以PPP调零，以PRP调幅，于装PRP杯中加搅拌珠，加入ADP10μl，浓度为2μmol/L，以0.2mol/L磷酸缓冲液为溶剂，同时启动测试开关，记录5分钟聚集曲线，测定空白组、对照组、给药组地血小板聚集功能。
4、结果 在空白组、对照组和给药组的聚集曲线上分别得出1和5分钟聚集强度AGG(1)、AGG(5)、最大聚集强度AGG(MA)、到达最大聚集强度的时间TMA。比较给药组与对照组血小板动态过程中的相应的各参数值，并以AGG(MA)求对照组和给药组的聚集抑制百分率：
结果见表1。
表1 川芎注射液对家兔血小板功能的影响(n＝3， x±s)
药物 AGG(1) AGG(5) AGG(MA) TMA(s) 聚集抑
制率
(％)
空白组 28.47 25.27 32.23 119±2 -
±5.42 ±5.93 ±3.62
对照组 13.48 17.85 23.15 97±3 28.17
±2.85 ±11.25 ±4.15
给药组 11.37 13.33 18.83 87±3 41.57
±8.43 ±6.38 ±5.60
由表1结果可见，采用体内法测定近临界流体萃取和超临界流体萃取川芎挥发油制备的注射液对兔血小板功能的影响，结果显示近临界流体萃取法所得川芎注射液对ADP诱导的兔血小板聚集功能有显著的抑制作用，明显优于超临界流体法所制备的川芎注射液。