一种治疗子宫内膜异位症的中药组合物及其制备方法 【发明领域】
本发明涉及一种中药组合物，特别涉及用于治疗子宫内膜异位症的中药组合物，同时涉及该组合物的制备方法。
背景技术
子宫内膜异位症是由生长在子宫腔以外的部位的子宫内膜所引起的一种病变。由于异位的子宫内膜仍受卵巢激素的影响，经前充血，经期出血，血液积聚于组织内，可引起病灶周围出现炎性反应刺激局部组织出现痛经。
据统计，子宫内膜异位症发病率占生育年龄妇女的15％-20％。其主要表现为继发性痛经、性交瘤、盆腔痛、月经异常、不孕等。子宫内膜异位症引发的恶性肿瘤发生率约为0.7％-1％，主要形成的恶性瘤生长于卵巢上。
目前，市场上还没有治疗子宫内膜异位症的有效药物，西医一般采用激素疗法或手术治疗，病人的恢复期较长，且在治疗过程中也给病人带来巨大的痛苦，因此广大患者呼唤服用方便、起效迅速、毒性低的药物。
【发明内容】
本发明的一个目的在于公开一种新的子宫内膜异位症的中药组合物；本发明的另一个目的在于公开制备一种新的治疗子宫内膜异位症中药组合物的方法。
本发明药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)：
A组合物：
五灵脂170-230重量份 乌 药135-190重量份 当 归135-190重量份
赤 芍135-190重量份 益母草135-190重量份 没 药135-190重量份
地 龙80-120重量份 皂角刺235-290重量份
本发明在中医药理论的指导下，在A组合物组成整体构思的基础之上，加减形成以下B、C、D、E组合物。
B组合物：
五灵脂170-230重量份 乌 药135-190重量份 当 归135-190重量份
赤 芍135-190重量份 益母草135-190重量份 没药135-190重量份
地 龙80-120重量份 皂角刺235-290重量份 桂枝135-190重量份
附 子135-190重量份 丹参390-440重量份 延胡索135-190重量份
红 花180-220重量份 白芍80-120重量份。
附子优选制附子。
C组合物：
五灵脂170-230重量份 乌 药135-190重量份 当 归135-190重量份
赤 芍135-190重量份 益母草135-190重量份 没 药135-190重量份
地 龙80-120重量份 皂角刺235-290重量份 肉 桂135-190重量份
川 乌135-190重量份 牡丹皮416.67g 苏 木135-190重量份
红 花180-220重量份 三 棱80-120重量份。
川乌优选制川乌。
D组合物：
五灵脂170-230重量份 乌 药135-190重量份 当 归135-190重量份
赤 芍135-190重量份 益母草135-190重量份 没 药135-190重量份
地 龙80-120重量份 皂角刺235-290重量份 桂 枝135-190重量份
附 子135-190重量份 丹 参390-440重量份 苏 木135-190重量份
莪 术180-220重量份 三 棱80-120重量份。
附子优选制附子。
E组合物：
五灵脂170-230重量份 乌 药135-190重量份 当 归135-190重量份
赤 芍135-190重量份 益母草135-190重量份 没 药135-190重量份
地 龙80-120重量份 皂角刺235-290重量份 肉 桂135-190重量份
附 子135-190重量份 丹 参390-440重量份 延胡索135-190重量份
莪 术180-220重量份 三 棱80-120重量份
附子优选制附子。
本发明上述组方药物，可加入赋型剂，按照常规的制剂工艺制备成常用的药物剂型，例如，丸剂、片剂、颗粒剂、口服液体制剂、胶囊剂、咀嚼剂等。
A、药物组合物的胶囊剂制备方法为：以上八味，乌药、皂角刺、赤芍加8-12倍量60-80％地乙醇加热回流提取1-3次，每次1-3小时，滤过，合并两次滤液，得滤液①，-0.09～-0.06Mpa，70-85℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80-90℃密度为1.08-1.10的清膏；益母草加5-7倍量85-95％乙醇，加热回流提取1-3次，每次1-2小时，滤过，合并两次滤液，得滤液②，-0.09～-0.06Mpa，70-85℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80-90℃密度为1.08-1.10的清膏；益母草药渣与五灵脂、没药、地龙加5-7倍量的水，煎煮2-4次，每次2-4小时，滤过，合并三次滤液，得滤液③，浓缩至80-90℃密度为1.08-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达60-80％，静置22-26小时，取上清液，回收乙醇，继续浓缩80-90℃密度为1.08-1.10的清膏；当归加5-7倍量水，浸泡60分钟，水蒸汽蒸馏5-7小时，以油水分离器提取挥发油，备用；提取液滤过，得滤液④，4000-6000r/min离心，取上清液，浓缩至80-90℃密度为1.08-1.10的清膏；当归、莪术提取挥发油后的药渣加8倍量85-95％的乙醇，回流提取2-3次，每次1-2小时，滤过，合并两次滤液，得滤液⑤，滤液-0.09～-0.06Mpa，70-85℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80-90℃密度为1.08-1.10的清膏；合并各清膏，混匀，喷雾干燥，得干粉；挥发油加适量乙醇溶解，以挥发油与β-环糊精之比为1∶4-7，β-环糊精与水之比为1∶1-3，采用搅拌法，于50-70℃搅拌1-3小时进行包合，滤过，得糊状物，30-50℃干燥，粉碎，即得挥发油包合物；干粉中加入颗粒理论产量的34％-36％糊精及挥发油包合物，混匀，制粒，得ZHG1颗粒，或装胶囊，得ZHG1胶囊。B、药物组合物的胶囊剂制备方法为：延胡索、白芍、乌药、皂角刺、赤芍加8-12倍量60-80％的乙醇加热回流提取1-3次，每次1-3.0小时，滤过，合并滤液，得滤液①-0.09～-0.06Mpa，70-85℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80-90℃密度为1.08-1.10的清膏；丹参、益母草加6倍量90％乙醇，加热回流提取1-3次，每次1-2小时，滤过，合并滤液，得滤液②，-0.09～-0.06Mpa，70-85℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；丹参、益母草药渣与制附子、五灵脂、没药、地龙加6倍量的水，煎煮2-4次，每次2-4小时，滤过，合并滤液，得滤液③，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达60-80％，静置22-26小时，取上清液，回收乙醇，80℃-90℃继续浓缩密度为1.08-1.10的清膏；桂枝、当归、红花加5-7倍量水，浸泡50-70分钟，水蒸汽蒸馏5-7小时，以油水分离器提取挥发油，备用；提取液滤过，得滤液④，4000-6000r/min离心，取上清液，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；桂枝、当归、红花提取挥发油后的药渣加7-9倍量85-95％的乙醇，回流提取1-3次，每次1-2小时，滤过，合并滤液，得滤液⑤，滤液-0.09～-0.06Mpa，70-85℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；合并各清膏，混匀，喷雾干燥，得干粉；挥发油加适量乙醇溶解，以挥发油与β-环糊精之比为1∶4-7，β-环糊精与水之比为1∶1-3，采用搅拌法，于50-70℃搅拌1-3小时进行包合，滤过，得糊状物，40-50℃干燥，粉碎，即得挥发油包合物；干粉中加入颗粒理论产量的34％-36％糊精及挥发油包合物，混匀，制粒，装胶囊，得ZH62胶囊。C、药物组合物的胶囊剂制备方法为：苏木、三棱、乌药、皂角刺、赤芍加8-12倍量65-80％的乙醇加热回流提取1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液，得滤液①，-0.09～-0.06Mpa，70-85℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；牡丹皮、益母草加6-7倍量85-95％乙醇，加热回流提取1-3次，每次1-2小时，滤过，合并滤液，得滤液②，-0.09～-0.06Mpa，70-85℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；牡丹皮、益母草药渣与制川乌、五灵脂、没药、地龙加5-7倍量的水，煎煮2-4次，每次2-4小时，滤过，合并滤液，得滤液③，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达65-80％，静置22-26小时，取上清液，回收乙醇，继续浓缩80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；肉桂、当归、红花加5-7倍量水，浸泡50-70分钟，水蒸汽蒸馏5-7小时，以油水分离器提取挥发油，备用；提取液滤过，得滤液④，4000-6000r/min离心，取上清液，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；肉桂、当归、红花提取挥发油后的药渣加7-9倍量85-95％的乙醇，回流提取1-3次，每次1-2小时，滤过，合并滤液，得滤液⑤，滤液-0.09～-0.06MPa，70-85℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；合并各清膏，混匀，喷雾干燥，得干粉；挥发油加适量乙醇溶解，以挥发油与β-环糊精之比为1∶4-7，β-环糊精与水之比为1∶1-3，采用搅拌法，于50-70℃搅拌1-3小时进行包合，滤过，得糊状物，30-50℃干燥，粉碎，即得挥发油包合物；干粉中加入颗粒理论产量的34％-36％糊精及挥发油包合物，混匀，制粒，装胶囊，得ZH63胶囊。D、药物组合物的胶囊剂制备方法为：苏木、三棱、乌药、皂角刺、赤芍加9-11倍量60-75％的乙醇加热回流提取1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液，得滤液①，-0.09～-0.06Mpa，70-85℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；丹参、益母草加5-7倍量85-95％乙醇，加热回流提取1-3次，每次1-2小时，滤过，合并滤液，得滤液②，-0.09～-0.06Mpa，70-85℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；丹参、益母草药渣与制附子、五灵脂、没药、地龙加5-7倍量的水，煎煮2-4次，每次2-4小时，滤过，合并滤液，得滤液③，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达65-80％，静置22-26小时，取上清液，回收乙醇，80℃-90℃继续浓缩密度为1.08-1.10的清膏；桂枝、当归、莪术加5-7倍量水，浸泡50-70分钟，水蒸汽蒸馏5-7小时，以油水分离器提取挥发油，备用；提取液滤过，得滤液④，4000-6000r/min离心，取上清液，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；桂枝、当归、莪术提取挥发油后的药渣加7-9倍量85-95％的乙醇，回流提取1-3次，每次1-2小时，滤过，合并滤液，得滤液⑤，滤液-0.09～-0.06Mpa，70-85℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；合并各清膏，混匀，喷雾干燥，得干粉；挥发油加适量乙醇溶解，以挥发油与β-环糊精之比为1∶4-7，β-环糊精与水之比为1∶1-3，采用搅拌法，于50-70℃搅拌1-3小时进行包合，滤过，得糊状物，30-50℃干燥，粉碎，即得挥发油包合物；干粉中加入颗粒理论产量的34％-36％糊精及挥发油包合物，混匀，制粒，装胶囊，得ZHG4胶囊。E、药物组合物的胶囊剂制备方法为：延胡索、三棱、乌药、皂角刺、赤芍加9-11倍量65-80％的乙醇加热回流提取1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液，得滤液①，-0.09～-0.06Mpa，70-85℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；丹参、益母草加5-7倍量85-95％乙醇，加热回流提取1-3次，每次1-2小时，滤过，合并滤液，得滤液②，-0.09～-0.06Mpa，70-85℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；丹参、益母草药渣与制附子、五灵脂、没药、地龙加5-7倍量的水，煎煮2-4次，每次2-4小时，滤过，合并滤液，得滤液③，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达65-80％，静置22-26小时，取上清液，回收乙醇，80℃-90℃继续浓缩密度为1.08-1.10的清膏；肉桂、当归、莪术加5-7倍量水，浸泡50-70分钟，水蒸汽蒸馏5-7小时，以油水分离器提取挥发油，备用；提取液滤过，得滤液④，4000-6000r/min离心，取上清液，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；肉桂、当归、莪术提取挥发油后的药渣加7-9倍量85-95％的乙醇，回流提取1-3次，每次1-2小时，滤过，合并滤液，得滤液⑤，滤液-0.09～-0.06Mpa，70-85℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏，混匀，喷雾干燥，得干粉；挥发油加适量乙醇溶解，以挥发油与β-环糊精之比为1∶5-7，β-环糊精与水之比为1∶1-3，采用搅拌法，于50-70℃搅拌1-3小时进行包合，滤过，得糊状物，30-50℃干燥，粉碎，即得挥发油包合物；干粉中加入颗粒理论产量的34％-36％糊精及挥发油包合物，混匀，制粒，装胶囊，得ZHG5。
本发明组合物制剂具有明显的活血化瘀、镇痛、抗炎及对子宫内膜异位的抑制作用，服用方便，起效迅速，毒性低。
下面实验例用于进一步说明本发明。ZHG1颗粒、ZHG2颗粒、ZHG3颗粒、ZHG4颗粒、ZHG5颗粒分别为上述A-E组合物的颗粒制剂。
实验例1 本发明组合物制剂药效学试验
1、实验材料：1.1动物：SD种大鼠，雌性，体重250-280克，SPF级，动物合格证号：SCXK(京)2002-0003；家兔：雌性，新西兰种，2-2.5Kg，I级，动物许可证号：第024号总069号，均购自北京维通利华实验动物技术有限公司。昆明种小鼠，雌性，体重18-20克，购自北京生物制品研究所动物室，动物许可证号：(1999)第016号。1.2仪器LG-R-80系列血液黏度计，北京世帝仪器公司生产。热板测痛仪GJ-8420型，中国浙江。1.3药物：ZHG1颗粒、ZHG2颗粒、ZHG3颗粒、ZHG4颗粒、ZHG5颗粒，江苏康缘药业股份有限公司提供；丹那唑胶囊：200mg/粒，江苏联环药业股份有限公司生产，批号：20020401。乙烯雌酚：1mg/ml，批号：20001102上海第九制药厂生产。
2、实验方法和结果：
2.1对试验性子宫内膜异位模型的影响
2.1.1对大鼠子宫内膜异位模型的影响：动物适应性饲养一周后皮下注射乙烯雌酚0.1ml/100g，每日一次，连续注射3天，第4天以3％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，0.1ml/100g，开腹，剪下左侧子宫长约2cm，行对端吻合术，将剥离的子宫内膜组织用卡尺量切成3×3mm大小的内膜块，分别缝在右侧子宫角、右侧输卵管正中和右侧卵巢附近，缝合线为无损伤6号锦纶单丝线，闭腹。造型后第3日将大鼠随机分为8组，即正常对照组、模型对照组、阳性药对照组和ZHG1颗粒、ZHG2颗粒、ZHG3颗粒、ZHG4颗粒，ZHG5颗粒组，每组10只，ZHG4颗粒按照9.0、4.5、2.25g/Kg灌胃给药，阳性药丹那唑胶囊按照67mg/Kg灌胃给药，连续给药30天，药后31天动物禁食16h，戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉取血，测血液流变学指标；取子宫及异位组织，肉眼观察子宫及子宫内膜的大体形态；10％甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，高倍显微镜下观察子宫内膜的组织形态，按照病变程度的分级标准进行统计，并进行组间比较；在光镜下，以目镜测微尺的小格数为单位，计数假腺体的个数，测量假腺体的横径和竖径，比较组间差异。
2.1.1.1血液流变学结果：结果显示，ZHG1颗粒、ZHG2颗粒、ZHG3颗粒、ZHG4颗粒、ZH65颗粒均可降低内膜异位模型大鼠切变率下的全血黏度和还原黏度(见表1、2)。提示ZHG颗粒具有一定的活血化瘀作用。
2.1.1.2大体形态：子宫及子宫内膜肉眼观察可见：正常对照组大鼠的组织结构正常，未见有颜色改变，子宫管腔未见有增大或增厚，内膜未见有充血及瘀血现象。模型组大鼠的子宫内膜增大增厚，内膜呈红色透亮状，右侧(异位子宫内膜侧)子宫表面有囊肿，囊肿大小不等，有的相互融合形成桑葚样结构，部分异位内膜与周围粘连，个别动物粘连较重。阳性药和给药ZHG1颗粒、ZHG2颗粒、ZHG3颗粒、ZHG4颗粒、ZHG5颗粒组大鼠的异位子宫呈棕色病灶，子宫内膜增大增厚、内膜色泽及内膜与其周围组织粘连等症状均较模型组有不同程度地减轻，其中ZHG3颗粒、ZHG4颗粒的改变较明显。
2.1.1.3病理组织观察结果(纵切面组织形态)：镜下结果可见：正常对照组大鼠的子宫内膜上皮未见增生，未见有炎性细胞浸润，腺体未见有萎缩，腺上皮充盈无脱落，组织结构正常。模型组大鼠的异位子宫内膜有囊肿形成，囊肿的囊壁内衬柱状上皮，似异位内膜的腺上皮，呈萎缩状态。表面上皮和内膜的间质细胞增生，部分肌层增厚，异位内膜呈假线体样改变，主要表现为假腺上皮呈萎缩状，腺囊腔大小不均匀，形态不规则，个别动物的异位内膜间质有陈旧性出血，并有少量炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主，并有少量嗜酸性细胞。给药各组(阳性药、ZHG1颗粒、ZHG2颗粒、ZHG3颗粒、ZHG4颗粒、ZHG5颗粒组)大鼠的异位内膜囊壁及平滑肌层变薄，假腺体减少，表面上皮和间质细胞稀少，其中ZHG3颗粒组、ZHG4颗粒组异位内膜囊壁及平滑肌层明显变薄，假腺体明显萎缩，表面上皮和间质细胞增生明显减轻，按照分级标准(见表3下)进行统计。
表1、对子宫内膜异位大鼠血液流变学的影响(1)(X±S；n＝9)
剂量 全血黏度(mpa/s-1)
组别
(g/Kg) 150s-1 38s-1 10s-1 5s-1
正常 3.23±0.45 4.62±0.74 7.87±1.33 11.34±2.06
模型 4.94±0.45## 7.15±0.61## 12.61±1.21 18.45±1.96##
丹哪唑 67mg 4.12±0.25** 6.02±0.40** 10.65±0.87** 15.63±1.44**
ZHG4 4.5 3.65±0.27** 5.35±0.53** 9.49±1.32** 13.95±2.25**
ZHG2 4.5 3.96±0.50** 5.70±0.71** 9.88±1.34** 14.35±2.09**
ZHG1 4.5 4.26±0.27** 6.34±0.49** 11.17±1.15** 16.56±1.67*
ZHG3 4.5 4.01±0.23** 5.98±0.44** 10.09±1.20** 15.38±2.11**
ZHG5 4.5 3.87±0.19** 5.66±0.41** 9.46±1.16** 14.59±1.43**
注：组间t检验：与正常对照组比较：##P＜0.01；
与模型对照组比较：*P＜0.05；**P＜0.01
表2、对子宫异位大鼠血液流变学的影响(2)(X±S；n＝9)
剂量 还原黏度(mpa/s-1)
组别
(g/Kg) 150s-1 38s-1 10s-1 5s-1
正常 5.09±0.36 8.21±0.50 15.67±1.16 23.59±2.03
模型 7.79±0.95## 12.20±1.18## 22.92±1.90## 34.42±2.88##
丹哪唑 67mg 6.99±0.67* 11.24±0.92* 21.58±1.72* 32.69±2.71
ZHG4 4.5 5.37±0.67** 8.46±1.17** 17.20±3.01** 26.24±5.05**
ZHG2 4.5 6.58±1.34* 10.45±2.03* 19.78±3.93* 29.65±6.08*
ZHG1 4.5 6.56±0.47** 10.56±0.63** 20.30±1.29** 30.77±2.20*
ZHG3 4.5 6.29±1.2* 10.41±1.99* 18.88±4.03* 29.20±6.12*
ZHG5 4.5 6.47±1.35* 10.06±1.28* 19.43±3.55* 29.11±6.30*
注：组间t检验：与正常对照组比较：#P＜0.01；##P＜0.01；
与模型对照组比较：*P＜0.05；**P＜0.01。
表3、对大鼠子宫异位内膜病理组织学的影响(n＝10)
组别 剂量(g/Kg) +++ ++ + -
正常 0 0 0 10
模型 6# 4# 0# 0##
丹哪唑 67mg 0* 0* 4* 6*
ZHG4 4.5 0* 0* 3* 7*
ZHG2 4.5 0* 0* 4* 6*
ZHG1 4.5 0* 0* 6* 4*
ZHG3 4.5 0* 0* 4* 7*
ZHG5 4.5 0* 0* 4* 6*
注：卡方检验：与正常对照组比较：#P＜0.05；##P＜0.01；
与模型对照组比较：*P＜0.05；**P＜0.01
分级标准：+++异位子宫内膜假腺体较多，并有炎细胞浸润及出血灶。
++ 异位子宫内膜假腺体减少，炎细胞浸润及出血减轻。
+ 异位子宫内膜假腺体基本萎缩，炎细胞浸润和出血明显减轻。
- 异位子宫内膜未见假腺体，未见炎细胞浸润和出血。
表4、对大鼠子宫异位内膜腺体的影响(X±S；n＝9)
假腺体
组别 剂量(g/Kg)
数量(个) 横径 竖径
正常 0 - -
模型 6.6±3.9## 10.67±2.48## 7.77±1.25##
丹哪唑 67mg 1.0±0.9** 3.63±2.33** 2.34±1.56**
ZHG4 4.5 0.6±0.7** 2.00±2.20** 1.06±1.27**
ZHG2 4.5 1.2±0.8** 2.68±1.83** 1.63±1.38**
ZHG1 4.5 1.9±0.7** 4.15±1.12** 3.41±0.98**
ZHG3 4.5 0.7±0.7** 2.13±2.16** 1.05±1.26**
ZHG5 4.5 1.7±0.8** 2.99±1.95** 3.15±1.09**
注：组间t检验：与正常对照组比较：##P＜0.01；
与模型对照组比较：**P＜0.01
假腺体横径和竖径的单位为光镜目镜下测微尺的小格数(16×16)
2.1.2对家兔子宫内膜异位模型的影响(以ZHG4进行试验，以下试验同)
取2-2.5kg雌性家兔以3％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，lml/10kg，开腹，剪下左则子宫长约3cm，行对端吻合术，将切下的子宫迅速放入生理盐水液中，纵向剖开，展平，切成0.7×0.7cm大小，分别缝在右侧子宫阴道结合部、右侧输卵管系膜和右侧卵巢内侧1cm，缝合线为无损伤6号锦纶单丝线，闭腹。造型后第3日将大鼠随机分为6组，即正常对照组、模型对照组、阳性药对照组和ZHG4颗粒大、中、小剂量组，每组8只，ZHG4颗粒按照3.0、1.5、0.75g/Kg剂量灌胃给药，阳性药丹那唑胶囊按照20mg/Kg剂量灌胃给药，连续给药30天，药后31天动物禁食16h，戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉取血，测血液流变学指标；取子宫及异位组织，10％甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，做病理组织学检查，按照病理分级标准进行统计，进行组间比较；在光镜下，以目镜测微尺的小格数为单位，计数假腺体的个数，测量假腺体的横径和竖径，比较组间差异。
2.1.2.1血液流变学的结果：
结果显示，ZHG4颗粒大、中、小剂量均可降低内膜异位模型兔高、中、低切变率下的全血还原黏度；大、中剂量可降低其中、低切变率下的全血黏度(见表5、6)。提示ZHG4颗粒具有一定的活血化瘀作用。
2.1.2.2大体形态：子宫及子宫内膜肉眼观察可见：正常对照组兔子宫组织结构正常，未见有颜色改变，子宫管腔未见有增大或增厚，内膜未见有充血及瘀血现象。模型组兔的子宫内膜增大增厚，内膜呈红色透亮状，右侧(异位子宫内膜侧)子宫表面有囊肿，囊肿大小不等，有的相互融合形成桑葚样结构，部分异位内膜与周围粘连，个别动物粘连较重。阳性药和给药大、中、小剂量组兔的异位子宫呈棕色病灶，子宫内膜增大增厚、内膜色泽及内膜与其周围组织粘连等症状均较模型组有不同程度地减轻，其中大剂量组的改变较明显。
2.1.2.3病理组织观察结果(纵切面组织形态)：镜下结果可见：正常对照组兔的子宫内膜上皮未见增生，未见有炎性细胞浸润，腺体未见有萎缩，腺上皮充盈无脱落，组织结构正常。模型组兔的异位子宫内膜有囊肿形成，囊肿的囊壁内衬柱状上皮，较薄，呈萎缩状态。表面上皮和内膜的间质细胞增生，大部分肌层增厚，异位内膜呈假线体样改变，主要表现为假腺上皮呈萎缩状，腺囊腔大小不均匀，形态不规则，个别动物的异位内膜间质有少量炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主。给药各组(阳性药、大、中、小剂量组)兔的异位内膜囊壁及平滑肌层变薄，假腺体减少，表面上皮和间质细胞稀少，其中大剂量组异位内膜囊壁及平滑肌层明显变薄，假腺体明显萎缩，表面上皮和间质细胞增生明显减轻。按照分级标准(见表3下)进行统计，三剂量组间呈现一定的量效关系(见表7、8)。
表5、对子宫异位兔血液流变学的影响(1)(X±S；n＝8)
剂量 全血黏度(mpa/s-1)
组别
(g/Kg) 150s-1 38s-1 10s-1 5s-1
正常 2.52±0.35 3.62±0.54 6.26±1.09 9.07±1.73
模型 3.60±0.67## 5.51±0.75## 10.33±1.37## 15.83±2.22##
丹哪唑 67mg 2.73±0.12** 3.87±0.11** 6.59±0.41** 9.48±0.83**
ZHG4大 3.0 3.07±0.87 4.08±0.83** 6.41±2.00** 8.93±3.73**
ZHG4中 1.5 3.33±0.43 4.29±0.38** 7.04±1.51** 11.36±1.58**
ZHG4小 0.75 3.23±0.62 4.70±0.86 8.46±2.04 12.16±3.32**
注：组间t检验：与正常对照组比较：#P＜0.05；##P＜0.01；
与模型对照组比较：*P＜0.05；**P＜0.01。
表6、对子宫异位兔血液流变学的影响(2)(X±S；n＝8)
剂量 还原黏度(mpa/s-1)
组别
(g/Kg) 150s-1 38s-1 10s-1 5s-1
正常 4.45±1.19 7.67±1.96 15.20±4.18 23.75±6.42
模型 7.17±1.78## 12.52±2.37## 25.99±5.23## 40.83±9.25##
丹哪唑 67mg 4.39±0.42** 7.30±0.78** 14.27±2.11** 21.67±3.68**
ZHG4 3.0 4.97±0.90** 7.24±1.46** 12.44±3.98** 18.17±7.60**
ZHG4中 1.5 5.07±0.89** 7.83±0.93** 14.42±3.32** 21.41±6.36**
ZHG4小 0.75 5.08±0.90* 8.45±1.72** 16.71±4.43** 25.60±7.76**
注：组间T检验：与空白对照组比较：#P＜0.01；##P＜0.01；
与模型组比较：*＜0.05；**P＜0.01。
表7、对子宫异位内膜病理组织学的影响(n＝8)
组别 剂量(g/Kg) +++ ++ + -
正常 0 0 0 10
模型 3# 4# 1 0##
丹哪唑 20mg 0* 1* 3 5*
ZHG4大 3.0 0* 0* 2 6*
ZHG4中 1.5 0* 2 2 4*
ZHG4小 0.75 1 2 2 3*
注：卡方检验：与正常对照组比较：#P＜0.05；##P＜0.01；
与模型对照组比较：*P＜0.05；**P＜0.01。
分级标准：+++异位子宫内膜假腺体较多，肌层较厚，并有炎细胞浸润及
出血。
++异位子宫内膜假腺体减少，炎细胞浸润及出血减轻。
+异位子宫内膜假腺体基本萎缩，炎细胞浸润和出血明显减
轻。
-异位子宫内膜未见假腺体，未见炎细胞浸润和出血。
表8、对兔子宫异位内膜腺体的影响(X±S；n＝8)
假腺体
组别 剂量(g/Kg)
数量(个) 横径(mm) 竖径(mm)
正常 0 - -
模型 13.4±10.0## 8.51±1.53## 4.59±0.87##
丹哪唑 20mg 1.5±1.1** 4.74±2.13** 2.59±1.14**
ZHG4大 3.0 1.1±0.8** 3.50±2.25** 2.19±1.46**
ZHG4中 1.5 1.8±1.0** 3.81±1.69** 2.81±1.11**
ZHG4小 0.75 2.5±0.9** 5.04±1.11** 3.45±1.05**
注：组间t检验：与正常对照组比较：##P＜0.01；
与模型对照组比较：**P＜0.01
假腺体横径和竖径的单位为光镜目镜下测微尺的小格数(16×16)
2.2对非特异性炎症模的影响
2.2.1对慢性炎症模型的影响(大鼠棉球肉芽肿)
取体重150-180克雄性大鼠，适应性饲养3天后以3％戊巴比妥钠麻醉(1.0ml/Kg)，将已称重并经高压灭菌的棉球植入大鼠两侧腹股沟部皮下，术后随机分为5组，每组10只，手术当日开始连续灌胃给药7天，ZHG4颗粒大、中小剂量组分别为9、3、1.5g/Kg，阳性药阿司匹林的剂量为0.1g/Kg，术后第8天处死动物，剥离并取出棉球肉芽组织，于60-90℃烘箱内干燥1小时后称重，减去棉球的重量，即为肉芽肿的净量，比较组间肉芽肿的重量，计算其抑制率。
结果显示，ZHG4颗粒大、中、小三剂量均可抑制大鼠棉球肉芽肿，提示，本品对慢性非异性炎症模型具有抑制作用(见表9)。
表9、对大鼠棉球肉芽肿的影响(X±S；n＝10)
组别 剂量(g/Kg) 肉芽肿干重mg 抑制率％
模型 116.80±15.48
阿司匹林 0.1 74.90±13.46*** 36
ZHG4大 9 85.42±13.18*** 27
ZHG4中 3 92.40±20.19** 21
ZHG4小 1.5 99.00±17.44* 15
注：T检验：与模型对照组比较：*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。
2.2.2对急性炎症模型的影响(二甲苯性小鼠耳肿胀)
取体重为25-30克雄性小鼠，随机分为5组，每组10只，连续灌胃给药3天，ZHG4颗粒大、中小剂量组分别为10、5、2.5gKg，阳性药阿司匹林的剂量为0.1g/Kg，将二甲苯0.1ml用加样器滴于小鼠左耳的前后两面，右耳为对照，1小时后处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用8mm直径的打孔器分别在同一部位打下圆耳片，组织天平称重，以每鼠的左耳减去右耳片重即为肿胀度，计算各组的肿胀度的均值及标准差，计算其抑制率，比较组间差异。
结果显示，ZHG4颗粒大、中剂量均可抑制二甲苯致小鼠的耳肿胀，起效剂量为5、10g/Kg，小剂量组2.5g/Kg的作用不明显。提示本品对动物非特异性急性炎症模型具有一定地抑制作用。
表10、对小鼠耳肿胀的影响(X±S；n＝10)
组别 剂量(g/Kg) 肉芽肿干重mg 抑制率％
模型 26.7±5.31
阿司匹林 0.1 16.7±5.50** 37
ZHG4大 10 21.6±5.34** 19
ZHG4中 5.0 22.1±3.81* 17
ZHG4小 2.5 24.5±4.60 8
注：T检验：与模型对照组比较：*P＜0.05；**P＜0.01。
2.3对非特异性疼痛模型的影响
2.3.1对化学刺激致痛模型的影响：取体重为18-22克的小鼠，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，连续灌胃给药3天，ZHG4颗粒大、中小剂量组分别为10、5、2.5g/Kg，阳性药阿司匹林的剂量为0.1g/Kg，未次给药后0.5h每鼠腹腔注射0.6％的冰醋酸液0.1ml/10g，记录注射醋酸后20mim内的扭体反应次数及出现扭体反应的潜伏期，计算镇痛百分率，比较组间差异。
结果显示，ZHG4颗粒大、中剂量均可抑制冰醋酸致小鼠的疼痛反应，大、中、小三剂量均可延长小鼠出现疼痛反应的潜伏期。提示本品对动物非特异性急性疼痛模型具有一定地抑制作用。
表11、对小鼠扭体反应的影响(X±S；n＝10)
扭体反应
组别 剂量(g/Kg)
抑制率％
潜伏期(S) 次数
模型 15.0±4.1 14.3±2.4
阿司匹林 0.1 39.9±12.6** 5.0±1.8** 65
ZHG4大 10.0 27.7±7.6** 10.1±2.9** 29
ZHG4中 5.0 23.9±6.2** 11.2±3.1* 22
ZHG4小 2.5 21.3±7.6* 12.3±2.9 14
注：组间T检验：与模型对照组比较：*＜0.05；**P＜0.01。
2.3.2对热刺激致痛模型的影响：将小鼠放在55度恒温的热刺激致痛仪上，用秒表记录自小鼠投入热板至出现舔后足的时间，以此为痛阈值，共测定2次，以平均值不超过30秒为合格。取经筛选后的合格小鼠随机分为5组，每组10只，连续灌胃给药3天，ZHG4颗粒大、中小剂量组分别为10、5、2.5g/Kg，阳性药阿司匹林的剂量为0.1g/Kg，未次给药后每间隔0.5h测定一次，连续测定至给药组小鼠无镇痛作用，如痛阈值超过60秒以60秒计。计算痛阈提高百分率，比较组间差异。
表12、对热刺激致小鼠疼痛反应的影响(X±S；n＝10)
痛阈值(S)
组别 剂量(g/Kg)
0.5h 1h 1.5h 2h
模型 11.5±2.9 14.0±3.7 23.5±11.9 17.5±4.1
阿司匹林 0.1 39.3±15.4** 36.6±14.8** 44.8±17.8* 23.6±6.4*
ZHG4大 10.0 29.4±15.0** 27.5±14.8** 33.0±16.3* 21.5±4.1*
ZHG4中 5.0 25.1±25.2** 24.8±10.7** 33.2±14.6* 19.9±1.8
ZHG4小 2.5 25.2±12.3** 22.6±10.2* 30.0±13.86* 17.7±6.2
注：组间T检验：与模型对照组比较：*P＜0.05；**P＜0.01。
3、结论
大鼠和家兔两种动物模型在病理组织学方面的改变相近，并表现为似血瘀证模型的症状，即血液黏度增加，相比知下，大鼠的子宫内膜异位模型更成功。药效学试验显示，ZHG4颗粒可抑制子宫内膜异位大鼠和家兔病理组织学的改变，降低其高、中、低切变率下的全血黏度和还原黏度，对大鼠的作用强于家兔；抑制大鼠棉球肉芽肿和小鼠二甲苯性耳肿胀；抑制化学刺激和和热刺激致小鼠的疼痛反应。家兔的起效剂量为3、1.5、0.75g(生药)/Kg，大鼠的起效剂量为9、4.5、2.25g(生药)/Kg，小鼠的起效剂量为10、5、2.5g(生药)/Kg。提示ZHG4颗粒对动物试验性子宫内膜异位模型具有治疗作用，并具有一定的活血化瘀、镇痛和抗炎作用。
实验例2 ZHG4颗粒对大鼠子宫内膜异位模型的影响的病理检查报告标本来源：SD种大鼠，雌性。送检目的：观察ZHG4颗粒对子宫内膜异位模型大鼠子宫内膜病理组织的影响。送检脏器：子宫。实验药物：ZHG4颗粒。送检动物数：60只。送检日期：2002年9月27日。病理编号：19804-19863。报告日期：2002年10月30日。
1、材料和方法：1.1材料 甲醛：北京旭东化工厂生产(批号：20011023)；无水乙醇：(批号：20011017)，二甲苯：(批号：2001040121)，伊红：(批号：810915)均由北京化工厂生产；苏木香：北京化学试剂公司生产(批号：940727)；石蜡：上海华灵康复仪器厂出品(批号20020129)，溶点56-58℃；中性树脂：上海标本模型厂生产(批号：20000802)。
1.2仪器：Leitz旋转式切片机：德国生产；SAKURA自动脱水机、SAKURARSH-100自动染色机、NiKon光学显微镜、OLYMPUS BH-2生物自动显微照相系统均由日本生产。
1.3方法：雌性大鼠60只，分为正常对照组、模型组、阳性药组和给药大、中、小剂量组6组，每组10只，动物处死后解剖，取异位的子宫放入10％的甲醛液中固定，取材后流水冲洗，梯度乙醇(60、70、80、90、95、100％)脱水，二甲苯透明，浸蜡包埋，切片，HE染色，中性树脂胶封片，光学显微镜观察其组织形态。
病理编号：对照组10只：19804-19813；模型组10只：19814-19823；阳性药组10只：19824-19833；大剂量组10只：19834-19943；中剂量组10只：19844-19853；小剂量组10只：19854-19863。
2、结果：2.1肉眼观察结果
正常对照组：组织结构正常，未见有颜色改变，子宫管腔未见有增大或增厚，内膜未见有充血机瘀血现象。
模型组：子宫内膜增大增厚，内膜呈红色透亮状，右侧子宫表面有囊肿，囊肿大小不等，有的相互融合形成桑葚样结构，部分异位内膜与周围粘连，个别动物粘连较重。
阳性药和给药大、中、小剂量组：动物的异位子宫呈棕色病灶，子宫内膜增大增厚、内膜色泽及内膜与其周围组织粘连均较模型组动物有不同程度地减轻，其中大剂量组的改变较明显。
2.2镜下观察结果(纵切面组织形态)：正常对照组：子宫内膜上皮未见增生，未见有炎性细胞浸润，腺体未见有萎缩，腺上皮充盈无脱落，组织结构正常。模型组：异位子宫内膜有囊肿形成，囊肿的囊壁内衬柱状上皮，似异位内膜的腺上皮，呈萎缩状态。表面上皮和内膜的间质细胞增生，部分肌层增厚，异位内膜呈假线体样改变，主要表现为假腺上皮呈萎缩状，腺囊腔大小不均匀，形态不规则，个别动物的异位内膜间质有陈旧性出血，并有少量炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主，并有少量嗜酸性细胞。给药组(阳性药、大、中、小剂量组)：异位内膜囊壁及平滑肌层变薄，假腺体减少，表面上皮和间质细胞稀少，其中大剂量组异位内膜囊壁及平滑肌层明显变薄，假腺体明显萎缩，表面上皮和间质细胞增生明显减轻。
3、结论：对照组腺体大小均匀一致，数量较多。模型组异位子宫内膜腺体大小不均匀，形态不规则，腺上皮萎缩形成假腺体。阳性药及给药三剂量组异位内膜腺体明显萎缩，显示可不同程度地抑制异位子宫内膜异位大鼠的病理性改变。
实验例3 ZHG4颗粒对动物的子宫内膜异位模型的影响病理检查报告
标本来源：新西兰种兔，雌性。送检目的：观察ZHG4颗粒对子宫内膜异位模型动物子宫内膜病理组织的影响。送检脏器：子宫。实验药物：ZHG4颗粒。送检动物数：48只。送检日期：2002年10月25日。病理编号：20221-20268。报告日期：2002年12月10日。
2、材料和方法：2.1材料：甲醛：北京旭东化工厂生产(批号：20011023)；无水乙醇：(批号：20011017)，二甲苯：(批号：2001040121)，伊红：(批号：810915)均由北京化工厂生产；苏木香：北京化学试剂公司生产(批号：940727)；石蜡：上海华灵康复仪器厂出品(批号20020129)，溶点56-58℃；中性树脂：上海标本模型厂生产(批号：20000802)。2.2仪器：Leitz旋转式切片机：德国生产：SAKURA自动脱水机、SAKURA RSH-100自动染色机、NiKon光学显微镜、OLYMPUS BH-2生物自动显微照相系统均由日本生产。2.3方法：雌性兔48只，分为正常对照组、模型组、阳性药组和给药大、中、小剂量组6组，每组8只，动物处死后解剖，取异位的子宫放入10％的甲醛液中固定，取材后流水冲洗，梯度乙醇(60、70、80、90、95、100％)脱水，二甲苯透明，浸蜡包埋，切片，HE染色，中性树脂胶封片，光学显微镜观察其组织形态。
病理编号：对照组8只：20221-20228；模型组8只：20229-20236；阳性药组8只：20237-20244；大剂量组8只：20245-20252；中剂量组8只：20253-20260；小剂量组8只：20261-20268。：
3、结果
3.1肉眼观察结果：正常对照组：组织结构正常，未见有颜色改变，子宫管腔未见有增大或增厚，内膜未见有充血机瘀血现象。模型组：子宫内膜增大增厚，内膜呈红色透亮状，右侧子宫表面有囊肿，囊肿大小不等，有的相互融合形成桑葚样结构，部分异位内膜与周围粘连，个别动物粘连较重。阳性药和给药大、中、小剂量组：动物的异位子宫呈棕色病灶，子宫内膜增大增厚、内膜色泽及内膜与其周围组织粘连均较模型有不同程度地减轻，其中大剂量组的改变较明显。
3.2镜下观察结果(纵切面组织形态)：正常对照组：子宫内膜上皮未见增生，未见有炎性细胞浸润，腺体未见有萎缩，腺上皮充盈无脱落，组织结构正常。模型组：异位子宫内膜有囊肿形成，囊肿的囊壁内衬柱状上皮，似异位内膜的腺上皮，呈萎缩状态。表面上皮和内膜的间质细胞增生，部分肌层增厚，异位内膜呈假线体样改变，主要表现为假腺上皮呈萎缩状，腺囊腔大小不均匀，形态不规则，个别动物的异位内膜间质有陈旧性出血，并有少量炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主，并有少量嗜酸性细胞。给药组(阳性药、大、山、小剂量组)：异位内膜囊壁及平滑肌层变薄，假腺体减少，表面上皮和间质细胞稀少，其中大剂量组异位内膜囊壁及平滑肌层明显变薄，假腺体明显萎缩，表面上皮和间质细胞增生明显减轻。
4、结论
对照组腺体大小均匀一致，数量较多。模型组异位子宫内膜腺体大小不均匀，形态不规则，腺上皮萎缩形成假腺体。阳性药及给药三剂量组异位内膜腺体明显萎缩，显示可不同程度地抑制模型组异位子宫内膜的病理性改变。
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
实施例1 胶囊剂
五灵脂200g 乌 药166.67g 当 归166.67g
赤 芍166.67g 益母草166.67g 没 药166.67g
地 龙100g 皂角刺266.67g
以上八味，乌药、皂角刺、赤芍加10倍量70％的乙醇加热回流提取二次，每次2.0小时，滤过，合并两次滤液，得滤液①，-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；益母草加6倍量90％乙醇，加热回流提取二次，每次1小时，滤过，合并两次滤液，得滤液②，-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；益母草药渣与五灵脂、没药、地龙加6倍量的水，煎煮三次，每次3小时，滤过，合并三次滤液，得滤液③，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达70％，静置24小时，取上清液，回收乙醇，继续浓缩80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；当归加6倍量水，浸泡60分钟，水蒸汽蒸馏6.0小时，以油水分离器提取挥发油，备用；提取液滤过，得滤液④，5000r/min离心，取上清液，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；当归提取挥发油后的药渣加8倍量95％的乙醇，回流提取二次，每次1.5小时，滤过，合并两次滤液，得滤液⑤，滤液-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；合并各清膏，混匀，喷雾干燥，得干粉；挥发油加适量乙醇溶解，以挥发油与β-环糊精之比为1∶6，β-环糊精与水之比为1∶2，采用搅拌法，于60℃搅拌2小时进行包合，滤过，得糊状物，30-40℃干燥，粉碎，即得挥发油包合物；干粉中加入颗粒理论产量的34％-36％糊精及挥发油包合物，混匀，制粒，得ZHG1颗粒，或装胶囊，得ZHG1胶囊1000粒。
实施例2 片剂
五灵脂210g 乌 药170g 当 归170g
赤 芍170g 益母草170g 没 药180g
地 龙90g 皂角刺250g
以上八味，乌药、皂角刺、赤芍加10倍量70％的乙醇加热回流提取二次，每次2.0小时，滤过，合并两次滤液，得滤液①，-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；益母草加6倍量90％乙醇，加热回流提取二次，每次1小时，滤过，合并两次滤液，得滤液②，-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；益母草药渣与五灵脂、没药、地龙加6倍量的水，煎煮三次，每次3小时，滤过，合并三次滤液，得滤液③，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达70％，静置24小时，取上清液，回收乙醇，继续浓缩80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；当归加6倍量水，浸泡60分钟，水蒸汽蒸馏6.0小时，以油水分离器提取挥发油，备用；提取液滤过，得滤液④，5000r/min离心，取上清液，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；当归提取挥发油后的药渣加8倍量95％的乙醇，回流提取二次，每次1.5小时，滤过，合并两次滤液，得滤液⑤，滤液-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；合并各清膏，混匀，喷雾干燥，得干粉；挥发油加适量乙醇溶解，以挥发油与β-环糊精之比为1∶6，β-环糊精与水之比为1∶2，采用搅拌法，于60℃搅拌2小时进行包合，滤过，得糊状物，30-40℃干燥，粉碎，即得挥发油包合物；干粉中加入颗粒理论产量的34％-36％糊精及挥发油包合物，混匀，经常规工艺制得1000片。
实施例3 胶囊剂
桂 枝166.67g 附子(制)166.67g 丹 参416.67g
延胡索166.67g 红 花200g 白 芍100g
五灵脂 200g 乌 药166.67g 当 归166.67g
赤 芍166.67g 益母草166.67g 没 药166.67g
地 龙100g 皂角刺266.67g
以上十四味，延胡索、白芍、乌药、皂角刺、赤芍加10倍量70％的乙醇加热回流提取二次，每次2.0小时，滤过，合并两次滤液，得滤液①，-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；丹参、益母草加6倍量90％乙醇，加热回流提取二次，每次1小时，滤过，合并两次滤液，得滤液②，-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；丹参、益母草药渣与制附子、五灵脂、没药、地龙加6倍量的水，煎煮三次，每次3小时，滤过，合并三次滤液，得滤液③，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达70％，静置24小时，取上清液，回收乙醇，80℃-90℃继续浓缩密度为1.08-1.10的清膏；桂枝、当归、红花加6倍量水，浸泡60分钟，水蒸汽蒸馏6.0小时，以油水分离器提取挥发油，备用；提取液滤过，得滤液④，5000r/min离心，取上清液，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；桂枝、当归、红花提取挥发油后的药渣加8倍量95％的乙醇，回流提取二次，每次1.5小时，滤过，合并两次滤液，得滤液⑤，滤液-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；合并各清膏，混匀，喷雾干燥，得干粉；挥发油加适量乙醇溶解，以挥发油与β-环糊精之比为1∶6，β-环糊精与水之比为1∶2，采用搅拌法，于60℃搅拌2小时进行包合，滤过，得糊状物，30-40℃干燥，粉碎，即得挥发油包合物；干粉中加入颗粒理论产量的34％-36％糊精及挥发油包合物，混匀，制粒，装胶囊，得ZHG2胶囊1000粒。每日服用三次，每次相当于原药材10.5g。
实施例4 颗粒剂
桂 枝180g 附子(制)150g 丹 参430g
延胡索180g 红 花190g 白 芍120g
五灵脂220g 乌 药150g 当 归150g
赤 芍180g 益母草180g 没 药185g
地 龙110g 皂角刺245g
以上十四味，延胡索、白芍、乌药、皂角刺、赤芍加10倍量70％的乙醇加热回流提取二次，每次2.0小时，滤过，合并两次滤液，得滤液①，-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；丹参、益母草加6倍量90％乙醇，加热回流提取二次，每次1小时，滤过，合并两次滤液，得滤液②，-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；丹参、益母草药渣与制附子、五灵脂、没药、地龙加6倍量的水，煎煮三次，每次3小时，滤过，合并三次滤液，得滤液③，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达70％，静置24小时，取上清液，回收乙醇，80℃-90℃继续浓缩密度为1.08-1.10的清膏；桂枝、当归、红花加6倍量水，浸泡60分钟，水蒸汽蒸馏6.0小时，以油水分离器提取挥发油，备用；提取液滤过，得滤液④，5000r/min离心，取上清液，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；桂枝、当归、红花提取挥发油后的药渣加8倍量95％的乙醇，回流提取二次，每次1.5小时，滤过，合并两次滤液，得滤液⑤，滤液-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；合并各清膏，混匀，喷雾干燥，得干粉；挥发油加适量乙醇溶解，以挥发油与β-环糊精之比为1∶6，β-环糊精与水之比为1∶2，采用搅拌法，于60℃搅拌2小时进行包合，滤过，得糊状物，30-40℃干燥，粉碎，即得挥发油包合物；干粉中加入颗粒理论产量的34％-36％糊精及挥发油包合物，混匀，制粒，得颗粒剂。包装即得，每日服用三次，每次相当于原药材10.5g。
实施例5 胶囊剂
肉 桂166.67g 川乌(制)166.67g 牡丹皮416.67g
苏 木166.67g 红 花200g 三 棱100g
五灵脂200g 乌 药166.67g 当 归166.67g
赤 芍166.67g 益母草166.67g 没 药166.67g
地 龙100g 皂角刺266.67g 糊精适量
以上十四味，苏木、三棱、乌药、皂角刺、赤芍加10倍量70％的乙醇加热回流提取二次，每次2.0小时，滤过，合并两次滤液，得滤液①，-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；牡丹皮、益母草加6倍量90％乙醇，加热回流提取二次，每次1小时，滤过，合并两次滤液，得滤液②，-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；牡丹皮、益母草药渣与制川乌、五灵脂、没药、地龙加6倍量的水，煎煮三次，每次3小时，滤过，合并三次滤液，得滤液③，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达70％，静置24小时，取上清液，回收乙醇，继续浓缩80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；肉桂、当归、红花加6倍量水，浸泡60分钟，水蒸汽蒸馏6.0小时，以油水分离器提取挥发油，备用；提取液滤过，得滤液④，5000r/min离心，取上清液，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；肉桂、当归、红花提取挥发油后的药渣加8倍量95％的乙醇，回流提取二次，每次1.5小时，滤过，合并两次滤液，得滤液⑤，滤液-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；合并各清膏，混匀，喷雾干燥，得干粉；挥发油加适量乙醇溶解，以挥发油与β-环糊精之比为1∶6，β-环糊精与水之比为1∶2，采用搅拌法，于60℃搅拌2小时进行包合，滤过，得糊状物，30-40℃干燥，粉碎，即得挥发油包合物；干粉中加入颗粒理论产量的34％-36％糊精及挥发油包合物，混匀，制粒，装胶囊，得ZHG3胶囊1000粒。
实施例6 胶囊剂
桂 枝166.67g 附子(制)166.67g 丹 参416.67g
苏 木166.67g 莪 术200g 三 棱100g
五灵脂200g 乌 药166.67g 当 归166.67g
赤 芍166.67g 益母草166.67g 没 药166.67g
地 龙100g 皂角刺266.67g 糊精适量
以上十四味，苏木、三棱、乌药、皂角刺、赤芍加10倍量70％的乙醇加热回流提取二次，每次2.0小时，滤过，合并两次滤液，得滤液①，-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；丹参、益母草加6倍量90％乙醇，加热回流提取二次，每次1小时，滤过，合并两次滤液，得滤液②，-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；丹参、益母草药渣与制附子、五灵脂、没药、地龙加6倍量的水，煎煮三次，每次3小时，滤过，合并三次滤液，得滤液③，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达70％，静置24小时，取上清液，回收乙醇，80℃-90℃继续浓缩密度为1.08-1.10的清膏；桂枝、当归、莪术加6倍量水，浸泡60分钟，水蒸汽蒸馏6.0小时，以油水分离器提取挥发油，备用；提取液滤过，得滤液④，5000r/min离心，取上清液，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；桂枝、当归、莪术提取挥发油后的药渣加8倍量95％的乙醇，回流提取二次，每次1.5小时，滤过，合并两次滤液，得滤液⑤，滤液-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；合并各清膏，混匀，喷雾干燥，得干粉；挥发油加适量乙醇溶解，以挥发油与β-环糊精之比为1∶6，β-环糊精与水之比为1∶2，采用搅拌法，于60℃搅拌2小时进行包合，滤过，得糊状物，30-40℃干燥，粉碎，即得挥发油包合物；干粉中加入颗粒理论产量的34％-36％糊精及挥发油包合物，混匀，制粒，装胶囊，得ZHG4胶囊1000粒。
实施例7 口服液
桂 枝150g 附子(制)170g 丹 参430g
苏 木180g 莪 术220g 三 棱120g
五灵脂180g 乌 药145g 当 归145g
赤 芍185g 益母草185g 没 药185g
地 龙110g 皂角刺275g
以上十四味，苏木、三棱、乌药、皂角刺、赤芍加10倍量70％的乙醇加热回流提取二次，每次2.0小时，滤过，合并两次滤液，得滤液①，-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；丹参、益母草加6倍量90％乙醇，加热回流提取二次，每次1小时，滤过，合并两次滤液，得滤液②，-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；丹参、益母草药渣与制附子、五灵脂、没药、地龙加6倍量的水，煎煮三次，每次3小时，滤过，合并三次滤液，得滤液③，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达70％，静置24小时，取上清液，回收乙醇，80℃-90℃继续浓缩密度为1.08-1.10的清膏；桂枝、当归、莪术加6倍量水，浸泡60分钟，水蒸汽蒸馏6.0小时，以油水分离器提取挥发油，备用；提取液滤过，得滤液④，5000r/min离心，取上清液，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；桂枝、当归、莪术提取挥发油后的药渣加8倍量95％的乙醇，回流提取二次，每次1.5小时，滤过，合并两次滤液，得滤液⑤，滤液-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；合并各清膏，加水至2500ml；上述挥发油加入60-80ml吐温-80，溶解后加入药液中，搅拌均匀，即得。每瓶10ml，每天服用三次，每次相当于原药材10.5g。
实施例8 胶囊剂
肉 桂166.67g 附子(制)166.67g 丹 参416.67g
延胡索166.67g 莪 术200g 三 棱100g
五灵脂200g 乌 药166.67g 当 归166.67g
赤 芍166.67g 益母草166.67g 没 药166.67g
地 龙100g 皂角刺266.67g 糊精适量
以上十四味，延胡索、三棱、乌药、皂角刺、赤芍加10倍量70％的乙醇加热回流提取二次，每次2.0小时，滤过，合并两次滤液，得滤液①，-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；丹参、益母草加6倍量90％乙醇，加热回流提取二次，每次1小时，滤过，合并两次滤液，得滤液②，-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；丹参、益母草药渣与制附子、五灵脂、没药、地龙加6倍量的水，煎煮三次，每次3小时，滤过，合并三次滤液，得滤液③，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏，加乙醇使含醇量达70％，静置24小时，取上清液，回收乙醇，80℃-90℃继续浓缩密度为1.08-1.10的清膏；肉桂、当归、莪术加6倍量水，浸泡60分钟，水蒸汽蒸馏6.0小时，以油水分离器提取挥发油，备用；提取液滤过，得滤液④，5000r/min离心，取上清液，浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏；肉桂、当归、莪术提取挥发油后的药渣加8倍量95％的乙醇，回流提取二次，每次1.5小时，滤过，合并两次滤液，得滤液⑤，滤液-0.07Mpa，80℃减压回收乙醇，继续减压浓缩至80℃-90℃密度为1.08-1.10的清膏，混匀，喷雾干燥，得干粉；挥发油加适量乙醇溶解，以挥发油与β-环糊精之比为1∶6，β-环糊精与水之比为1∶2，采用搅拌法，于60℃搅拌2小时进行包含，滤过，得糊状物，30-40℃干燥，粉碎，即得挥发油包含物；干粉中加入颗粒理论产量的34％-36％糊精及挥发油包合物，混匀，制粒，装胶囊，得ZHG5胶囊1000粒。每日服用三次，每日3～4粒，每次相当于原药材10.5g。