一种百里香组培快繁方法.pdf

本发明公开了一种百里香组培快繁方法，百里香（Thymus mongolicus Ronn.）唇形科百里香属半灌木植物，茎叶有香味，富含百里香精油，其主要百里酚和香芹酚等，在制药，食品、化妆品等领域中具有重要的应用价值。百里香的人工栽培主要种子育苗，但种子育苗易受病毒浸染，导致种性退化，产量和品质下降，不能适应规模化和标准化生产的需要。本发明以百里香茎段为外植体，通过愈伤组织诱导、增殖培养、分化培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了百里香离体再植株，建立了有效的百里香组培快繁殖技术体系，短时期内即可生产大量种苗，提高繁殖效率，有利加快其繁育及推广。

权利要求书1.  一种百里香组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：（1）诱导培养：将经消毒处理得到的无菌茎段切成约 0.5cm，以平放的接种方式接种至诱导培养基中，接种后先黑暗条件下培养，待出现愈伤组织再移至置于每天光照12～14小时，光照强度为1000～2000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计诱导率；（2）增殖培养：以步骤（1）诱导得到愈伤组织转入增殖培养基进行扩繁，接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计增殖情况；（3）分化培养：将步骤（2）增殖得到的愈伤组织转至分化培养基中进行分化培养，接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计分化情况；    （4）生根培养：将分化培养基中长到3cm以上的芽苗转入生根培养基中，接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计生根情况；    （5）炼苗移栽：当组培苗具备发达健壮的根后,即可移栽，移栽在遮阴棚中进行，将生长健壮的试管苗在自然条件下炼苗5～7天,再开盖炼苗3～5天.在试管苗移栽前,基质先用0.5%的KMnSO4溶液消毒,后装入营养袋，用小勺轻轻取出带根小苗(带少许培养基)移到营养小钵中，移栽完用自动喷水装置将移栽苗浇透，以后每2h喷一次,每次喷50s。2.      根据权利要求1所述的一种百里香组培快繁方法，其特征在于步骤（1）所述的诱导培养基为：MS+1.0～5.0mg/L KT+0.5～1.5mg/L NAA+25～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。3.  根据权利要求1所述的一种百里香组培快繁方法，其特征在于步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+0.5～1.0mg/L 6-BA+1.0～3.0mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。4.      根据权利要求1所述的一种百里香组培快繁方法，其特征在于步骤（3）所述的分化培养基为：MS+1.0～5.0mg/LNAA+20～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。5.      根据权利要求1所述的一种百里香组培快繁方法，其特征在于步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+0.5～1.0mg/LNAA+0.1～0.5mg/LIAA+20～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

说明书一种百里香组培快繁方法
技术领域
    本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种百里香组培快繁方法。
背景技术
百里香（Thymus mongolicus Ronn.）唇形科百里香属半灌木植物，广泛分布于非洲北部，欧洲及亚洲温带，全世界百里香属植物大约有300～400种，在我国约有12种，分布于甘肃、陕西、山西、山东、河北、辽宁和内蒙古等地区。百里香茎叶有香味，富含百里香精油，其主要百里酚和香芹酚等，研究证实百里香精油和百里酚能够有效抑制霉菌和食品中滋生的微生物的生长，还能够缓解神经紧张，对蚊虫也具有驱除的功效。此外，百里香还具有抗氧化作用。因此，百里香精油在制药，食品、化妆品等领域中具有重要的应用价值，具有及其广阔的开发前景。
一般百里香主要来自野生资源，人们对百里香精油的需求量与日俱增，野生资源不能满足需要，而且很快会导致野生资源的枯竭，故需要开展人工栽培。目前，百里香的人工栽培主要种子育苗，但种子育苗易受病毒浸染，导致种性退化，产量和品质下降，不能适应规模化和标准化生产的需要，因此有必要建立百里香的组织培养技术体系。本发明以百里香茎段为外植体，通过愈伤组织诱导、增殖培养、分化培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了百里香离体再植株，建立了有效的百里香组培快繁殖技术体系，短时期内即可生产大量种苗，提高繁殖效率，有利加快其繁育及推广。
发明内容
    本发明的目的在于提供出一种百里香组培快繁方法，本发明以百里香茎段为外植体，通过愈伤组织诱导、增殖培养、分化培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了百里香离体再植株，建立了有效的百里香组培快繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种百里香组培快繁方法，包括以下的步骤：
（1）诱导培养：将经消毒处理得到的无菌茎段切成约 0.5cm，以平放的接种方式接种至诱导培养基中。接种后先黑暗条件下培养，待出现愈伤组织再移至置于每天光照12～14小时，光照强度为1000～2000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计诱导率。
（2）增殖培养：以步骤（1）诱导得到愈伤组织转入增殖培养基进行扩繁。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计增殖情况。
（3）分化培养：将步骤（2）增殖得到的愈伤组织转至分化培养基中进行分化培养。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计分化情况。
    （4）生根培养：将分化培养基中长到3cm以上的芽苗转入生根培养基中。接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计生根情况。
    （5）炼苗移栽：当组培苗具备发达健壮的根后,即可移栽。移栽在遮阴棚中进行。将生长健壮的试管苗在自然条件下炼苗5～7天,再开盖炼苗3～5天.在试管苗移栽前,基质先用0.5%的KMnSO4溶液消毒,后装入营养袋。用小勺轻轻取出带根小苗(带少许培养基)移到营养小钵中。移栽完用自动喷水装置将移栽苗浇透。以后每2h喷一次,每次喷50s。
    上述步骤（1）所述的诱导培养基为：MS+1.0～5.0mg/L KT+0.5～1.5mg/L NAA+25～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
    上述步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+0.5～1.0mg/L 6-BA+1.0～3.0mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
    上述步骤（3）所述的分化培养基为：MS+1.0～5.0mg/LNAA+20～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
    上述步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+0.5～1.0mg/LNAA+0.1～0.5mg/LIAA+20～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
本发明的优点是：以百里香茎段为外植体，通过愈伤组织诱导、增殖培养、分化培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了百里香离体再植株，建立了有效的百里香组培快繁殖技术体系，短时期内即可生产大量种苗，提高繁殖效率，有利加快其繁育及推广。
具体实施方式
    以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1
（1）诱导培养：将经消毒处理得到的无菌茎段切成约 0.5cm，以平放的接种方式接种至诱导培养基中。接种后先黑暗条件下培养，待出现愈伤组织再移至置于每天光照12小时，光照强度为1000lx，置于培养温度为25℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后诱导率达到96.2%。所述的诱导培养基为：MS+1.5mg/L KT+0.8mg/L NAA+25g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.4。
（2）增殖培养：以步骤（1）诱导得到愈伤组织转入增殖培养基进行扩繁。接种后置于每天光照12小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为25℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后增殖系数达到4.8。所述的增殖培养基为：MS+0.6mg/L 6-BA+1.5mg/LNAA+25g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.4。
（3）分化培养：将步骤（2）增殖得到的愈伤组织转至分化培养基中进行分化培养。接种后置于每天光照12小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为25℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后86.4%均能分化成无根苗。所述的分化培养基为：MS+3.0mg/LNAA+25g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.4。
    （4）生根培养：将分化培养基中长到3cm以上的芽苗转入生根培养基中。接种后置于每天光照12小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为25℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后生根率达到84.6%。所述的生根培养基为：1/2MS+0.8mg/LNAA+0.2mg/LIAA+25g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.4。
    （5）炼苗移栽：当组培苗具备发达健壮的根后,即可移栽。移栽在遮阴棚中进行。将生长健壮的试管苗在自然条件下炼苗5～7天,再开盖炼苗3～5天.在试管苗移栽前,基质先用0.5%的KMnSO4溶液消毒,后装入营养袋。用小勺轻轻取出带根小苗(带少许培养基)移到营养小钵中。移栽完用自动喷水装置将移栽苗浇透。移栽30后成活率达到95%以上。  
实施例2
    （1）诱导培养：将经消毒处理得到的无菌茎段切成约 0.5cm，以平放的接种方式接种至诱导培养基中。接种后先黑暗条件下培养，待出现愈伤组织再移至置于每天光照14小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为27℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后诱导率达到92.8%。所述的诱导培养基为：MS+3.5mg/L KT+1.0mg/L NAA+30g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.4。
    （2）增殖培养：以步骤（1）诱导得到愈伤组织转入增殖培养基进行扩繁。接种后置于每天光照14小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为27℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后增殖系数达到5.1。所述的增殖培养基为：MS+1.0mg/L 6-BA+2.0mg/LNAA+25g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.4。
（3）分化培养：将步骤（2）增殖得到的愈伤组织转至分化培养基中进行分化培养。接种后置于每天光照12小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为27℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后89.8%均能分化成无根苗。所述的分化培养基为：MS+5.0mg/LNAA+25g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.4。
    （4）生根培养：将分化培养基中长到3cm以上的芽苗转入生根培养基中。接种后置于每天光照13小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为27℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后生根率达到90%。所述的生根培养基为：1/2MS+1.0mg/LNAA+0.1mg/LIAA+25g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.4。
    （5）炼苗移栽：当组培苗具备发达健壮的根后,即可移栽。移栽在遮阴棚中进行。将生长健壮的试管苗在自然条件下炼苗5天,再开盖炼苗3天.在试管苗移栽前,基质先用0.5%的KMnSO4溶液消毒,后装入营养袋。用小勺轻轻取出带根小苗(带少许培养基)移到营养小钵中。移栽完用自动喷水装置将移栽苗浇透。移栽30后成活率达到95%以上。