番石榴焦腐病菌产孢培养基.pdf

一种番石榴焦腐病菌产孢培养基，由燕麦、葡萄糖、酸水解酪蛋白和番石榴果汁组成。分别以葡萄糖为碳源，以酸水解酪蛋白为氮源，提供了该菌产孢所需要的碳元素和氮元素；加入的生长因子—燕麦中的维生素则是调节微生物正常代谢所必需的；满足了该菌的营养需要。本发明的番石榴焦腐病菌产孢培养基，培养7天产孢量4×103个孢子/25毫升培养基。

权利要求书
1.  一种番石榴焦腐病菌产孢培养基，其特征在于：由燕麦、葡萄糖、酸水解酪蛋白和番石榴果汁组成，各种原料及其含量的关系如下：
原料                                原料重量比（%）
          燕麦                                    2.0～5.0
          葡萄糖                                  2.0～4.0
酸水解酪蛋白                            1.0～2.0
          琼脂                                    1.5～1.8
          番石榴果汁                              93.5～87.2，
以上各原料组成的重量百分比之和为100%。

2.  根据权利要求1所述的一种番石榴焦腐病菌产孢培养基，其特征在于由燕麦、葡萄糖、酸水解酪蛋白和番石榴果汁组成，各原料及其含量的关系如下：
原料                                原料重量比（%）
          燕麦                                      5.0
          葡萄糖                                    2.5
酸水解酪蛋白                              1.0
          琼脂                                      1.6
          番石榴果汁                                89.9。

说明书番石榴焦腐病菌产孢培养基
技术领域
本发明涉及一种植物病菌真菌产孢培养基，特别是番石榴焦腐病菌（Botryosphaeriarhodina）的产孢培养基。
背景技术
番石榴焦腐病菌（Botryosphaeriarhodina）属于半知菌亚门腔孢纲真菌，番石榴果实病害（特别是真菌性病害）是影响番石榴生长及果实货架期的主要原因，而且焦腐病是番石榴生长及果实货架期最主要病害之一。焦腐病菌以田间枝条等病残组织为初侵染源，以菌丝体和分生孢子的形式越冬。翌年春产生子囊孢子和分生孢子借风雨溅到果实上在萼片与果皮之间潜伏；或在托盘的坏死组织上腐生。因此研究番石榴焦腐病菌的分生孢子对明确番石榴焦腐病菌的生活史或发病规律具有重大的作用，为科学制定控制番石榴焦腐病菌采前潜伏侵染和采后病害的技术措施提供理论依据。但是目前国内外尚无关于番石榴焦腐病菌产孢培养基研究的报道，真菌通用的培养基不能很好的满足该菌生长发育产生孢子，这极大地限制了对番石榴焦腐病菌以及病害发生规律的进一步深入研究。
技术内容
 本发明目的在于提供一种番石榴焦腐病菌产孢培养基，综合利用碳源、氮源和维生素配制成适合于番石榴焦腐病菌产孢的培养基。
本发明的番石榴焦腐病菌产孢培养基，由燕麦、葡萄糖、酸水解酪蛋白和番石榴果汁组成，各原料及其含量的关系如下：
             原料                                原料重量比（%）
             燕麦                                    2.0～5.0
             葡萄糖                                  2.0～4.0
酸水解酪蛋白                            1.0～2.0
             琼脂                                    1.5～1.8
             番石榴果汁                              93.5～87.2，
以上各原料组成的重量百分比之和为100%。
上述原料中除番石榴果汁外各原料均为干燥化合物，纯度为分析纯。 
按上述培养基配方混合溶解后121℃高压灭菌20分钟即可使用。
本发明的显著优点：
本发明各物质性能稳定，分别以葡萄糖为碳源，以酸水解酪蛋白为氮源，提供了该菌产孢所需要的碳元素和氮元素；加入的生长因子—燕麦中的维生素则是调节微生物正常代谢所必需的；满足了该菌的营养需要。本发明的番石榴焦腐病菌产孢培养基，培养7天产孢量4×103个孢子/25毫升培养基。
附图说明
图1为在番石榴焦腐病菌产孢培养基上的产孢；
图2为番石榴焦腐病菌分生孢子器（×200）；
图3为番石榴焦腐病菌分生孢子（×500）；
图4为龙眼焦腐病菌分生孢子形态（×500）；
图5为在肉桂枝枯病菌产孢培养基上的产孢；
图6为在香蕉黑腐病菌产孢培养基上的产孢。
具体实施例
番石榴采后贮藏期真菌性病害主要是由于番石榴焦腐病菌[Botryosphaeriarhodina(Cke.)Arx]等少数病原真菌的潜伏侵染造成的。该病原菌还可在红毛丹（Sivakumaretal，2002）、芒果（罗远婵等，2004）、香蕉（刘秀娟等，1998）、荔枝（Deirdreetal，1996）、番木瓜（刘秀娟等，1994）、柑桔（罗永兰等，1997）等多种热带和亚热带水果上侵染造成采后损失。也危害凤梨（曾莉等，2004）、龙舌兰（习平根等，2005）、肉桂（岑炳沾等，1994）、瓜栗（习平根等，2000）、香龙血树（习平根等，2002）和楹树（叶新峰等，2004）等一些热带和亚热带经济作物。为了更充分地公开本发明的一种番石榴焦腐病菌培养基，下面结合实例加以说明。以下为本发明的优选实施例，进一步描述本发明，但是本发明不仅限于此。
实施例1：一种番石榴焦腐病菌产孢培养基，各原料及其含量的关系如下：
原料                                原料重量比百分率（%）
          燕麦                                      5.0
          葡萄糖                                    2.5
酸水解酪蛋白                              1.0
          琼脂                                      1.6
          番石榴果汁                                89.9，
按上述培养基配方混合溶解后121℃高压灭菌20分钟即可使用。
具体培养方法如下：
将储存在4℃冰箱的番石榴焦腐病菌（2008－2009年从福建番石榴产区福清、琅歧等地采收的番石榴果实中分离病原菌，经纯化后观察其形态特征，并用马铃薯琼脂（PDA）培养所得的分生孢子接种在采收后的无病虫害番石榴果实上，观察发病症状。镜检分离的病原菌。经柯氏法则验证，同时将我们测得的BotryosphaeriarhodinaDNA-ITS序列（GenBank登录号为GU323603.1）进行比对，同源性为99%，从柯氏法则和分子验证方法，将番石榴焦腐病的病原菌鉴定为Botryosphaeriarhodina）取出，转接CM固体培养基（CM培养基配制：酵母粉6g；酸水解酪蛋白6g；蔗糖10g；琼脂18g）中进行活化。再将活化好的番石榴焦腐病菌用直径为5mm打孔器打成菌饼，将菌饼接到产孢培养基中，处理3个重复，置28℃下光照培养7d后，观察产孢培养基上番石榴焦腐病菌的子座数目，水洗研磨子座计算产孢量，培养7天产孢量4×103个孢子/25毫升培养基。如图1、2、3所示。
实施例2：一种肉桂枝枯病菌产孢培养基，各原料及其含量的关系如下：
原料                                原料重量比百分率（%）
          燕麦                                      2.0
          葡萄糖                                    2.5
酸水解酪蛋白                              1.0
          琼脂                                      1.6
          番石榴果汁                                92.9
按上述培养基配方混合溶解后121℃高压灭菌20分钟即可使用。
具体培养方法如下：
将储存在4℃冰箱的肉桂枝枯病菌（薛振南等，2003）取出，转接CM固体培养基（CM培养基配制：酵母粉6g；酸水解酪蛋白6g；蔗糖10g；琼脂18g）中进行活化。再将活化好的肉桂枝枯病菌用直径为5mm打孔器打成菌饼，将菌饼接到产孢培养基中，处理3个重复，置28℃下光照培养7d后，观察产孢培养基上肉桂枝枯病菌的子座数目，水洗研磨子座计算产孢量，培养7天产孢量3.25×103个孢子/25毫升培养基，如图5所示。
实施例3：一种龙眼焦腐病菌产孢培养基，各原料及其含量的关系如下：
原料                                原料重量比百分率（%）
          燕麦                                      3.0
          葡萄糖                                    2.5
酸水解酪蛋白                              1.0
          琼脂                                      1.6
          番石榴果汁                                91.9
按上述培养基配方混合溶解后121℃高压灭菌20分钟即可使用。
具体培养方法如下：
将储存在4℃冰箱的龙眼焦腐病菌（张居念等，2005）取出，转接CM固体培养基（CM培养基配制：酵母粉6g；酸水解酪蛋白6g；蔗糖10g；琼脂18g）中进行活化。再将活化好的龙眼焦腐病菌用直径为5mm打孔器打成菌饼，将菌饼接到产孢培养基中，处理3个重复，置28℃下光照培养7d后，观察产孢培养基上龙眼焦腐病菌的子座数目，水洗研磨子座计算产孢量，培养7天产孢量3.40×103个孢子/25毫升培养基，如图4所示。
实施例4：一种香蕉黑腐病菌产孢培养基，各原料及其含量的关系如下：
原料                                原料重量比百分率（%）
          燕麦                                      5.0
          葡萄糖                                    2.5
酸水解酪蛋白                              1.5
          琼脂                                      1.6
          番石榴果汁                                89.4
按上述培养基配方混合溶解后121℃高压灭菌20分钟即可使用。
具体培养方法如下：
将储存在4℃冰箱的香蕉黑腐病菌（郭立佳等，2007）取出，转接CM固体培养基（CM培养基配制：酵母粉6g；酸水解酪蛋白6g；蔗糖10g；琼脂18g）中进行活化。再将活化好的香蕉黑腐病菌用直径为5mm打孔器打成菌饼，将菌饼接到产孢培养基中，处理3个重复，置28℃下光照培养7d后，观察产孢培养基上香蕉黑腐病菌的子座数目，水洗研磨子座计算产孢量，培养7天产孢量3.65×103个孢子/25毫升培养基，如图6所示。