重组人干扰素α2b滴鼻剂及其制备方法 所属技术领域 本发明涉及具有药用抗病毒、调节免疫功能的作用的干扰素，尤其涉及重组人干扰素α2b滴鼻剂及其制备方法。
背景技术 干扰素有抑制病毒复制，抗细胞增殖和调节免疫应答等多种生物学效应。广泛应用于治疗和预防病毒感染性、免疫功能失调性等疾病。干扰素包括α、β、γ三大类型，最近又发现了ω和Γ两类干扰素。α干扰素可分为许多亚型，分别命名为α1、α2、α3……，其中α2又包括α2a和α2b两种亚型。干扰素α2b的序列结构特征及其重组制备方法，见《欧洲药典》(2000年版)。
从其生产制备方法上来分，干扰素可分为天然干扰素和重组干扰素。天然干扰素是通过培养人的白细胞并利用适当的刺激原(如鸡瘟病毒、仙台病毒)对其进行刺激诱导，使其产生干扰素，再利用生化方法进行纯化而得到。重组干扰素则是通过基因重组的方法，将干扰素基因整合到适当的表达系统中(如大肠杆菌)，在通过发酵或细胞培养的方法使干扰素得到大量表达，然后通过分离纯化而得到。重组人干扰素α2b就是利用此方法，将人的干扰素α2b基因整合到大肠杆菌中，通过发酵，纯化而得到高纯度、高产量的重组人干扰素α2b。重组人干扰素与天然干扰素相比，具有纯度高、产量大、成本低等优点。
现有的α干扰素研究大都采用天然干扰素，如中国专利申请98105384.x公开了一种复方干扰素口含片及其制备方法，但采用的是天然α干扰素与白细胞介素2的混合物。中国专利申请95111433.6公开了一种人白细胞干扰素口含片及其制备方法，但采用的人白细胞干扰素，系由健康人白细胞通过仙台病毒诱导、提纯，并经特殊灭活病毒处理制成。中国专利申请98105383.1公开了一种β干扰素口含片及其制备方法，但采用的是β干扰素。中国专利申请95101216.9也隐含公开了一种口服给药的重组人α干扰素组合物，但组分复杂、成本高。中国专利申请0213242.2也公开了一种重组人干扰素α滴鼻剂及其生产工艺，但组分复杂、成本高、疗效有待验证。这些天然α干扰素口含片具有抗病毒、调节免疫功能的作用，如抗流感病毒、抗SARS冠状病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、使用的剂量为小剂量，在10000IU以下，以100IU～500IU较多。上述文献公开的技术方案都存在着组分复杂、原料成本高等不足之处。
重组人干扰素α2b目前有注射剂、滴眼剂、栓剂、凝胶剂、软膏剂等。常用的注射剂具有增加病人痛苦、副作用大、价格昂贵的不足。重组人干扰素滴鼻剂剂型地研究报道甚少。因此，研究和开发滴鼻剂剂型，充分发挥该剂型生物利用度高(干扰素通过鼻粘膜得到良好的吸收)、用药方便(因不存在下咽，特别适合儿童用药)、病人耐受性好、价格低廉等优点，成为人们期盼。本发明人按照SFDA的要求，经过大量的实验研究，终于完成了本发明。
发明内容 本发明的目的在于提供一种生物利用度高、组分简单、安全有效剂量、疗效好、副作用小、使用方便的重组人干扰素α2b滴鼻剂。
本发明的目的还在于提供重组人干扰素α2b滴鼻剂制备方法，使得重组人干扰素α2b在制备过程中失活少。
为了达到以上目的，本发明提供了一种重组人干扰素α2b滴鼻剂，其中包含作为有效成份的重组人干扰素α2b，以及药学上认可的保护液，保护液选自人血白蛋白、羟苯乙酯等。
上述滴鼻剂的重组人干扰素α2b含量为10万IU～300万IU/ml，保护液人血白蛋白重量百分比0.5％～2％、羟苯乙酯重量百分比0.01％～0.05％。
本发明的制备工艺是，先用生理盐水配制成0.01％～0.05％羟苯乙酯和0.5％～2％人血白蛋白为保护液，再将重组人干扰素α2b溶于保护液中使其浓度为10万IU～300万IU/ml，然后经0.22um滤膜过滤除菌，最后分装。
本发明也可以使用其它适宜的添加剂如防腐剂和矫味剂。
本发明的重组人干扰素α2b滴鼻剂经一系列实验研究表明安全有效，具有抗病毒，调节免疫功能等功效。可用于治疗和预防严重急性呼吸道综合症(SARS)、流感、乙肝、丙肝、病毒性心肌炎、多发性硬化症及其它疾病。
本发明由于保护液组分选择简单、合理，且滴鼻剂无污染、杂质极少、无潜在因子，因此本发明具有生物利用度高、组分简单、安全有效剂量、疗效好、副作用小、使用方便。人干扰素α2b在制备过程中失活少。
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
【具体实施方式】
实施例1 重组人干扰素α2b滴鼻剂(10万IU/ml)制备
组分：
重组人干扰素α2b 10万IU
人血白蛋白 0.5％
羟苯乙酯 0.01％
制备方法：
先用生理盐水配制成0.01％羟苯乙酯和0.5％人血白蛋白为保护液，再将重组人干扰素α2b溶于保护液中使其浓度为10万IU/ml，然后经0.22um滤膜过滤除菌，最后分装。
实施例2 重组人干扰素α2b滴鼻剂(100万IU/ml)制备
组分：
重组人干扰素α2b 100万IU
人血白蛋白 1％
羟苯乙酯 0.03％
制备方法：
先用生理盐水配制成0.03％羟苯乙酯和1％人血白蛋白为保护液，再将重组人干扰素α2b溶于保护液中使其浓度为100万IU/ml，然后经0.22um滤膜过滤除菌，最后分装。
实施例3 重组人干扰素α2b滴鼻剂(300万IU/ml)制备
组分：
重组人干扰素α2b 300万IU
人血白蛋白 2％
羟苯乙酯 0.05％
制备方法：
先用生理盐水配制成0.05％羟苯乙酯和2％人血白蛋白为保护液，再将重组人干扰素α2b溶于保护液中使其浓度为300万IU/ml，然后经0.22um滤膜过滤除菌，最后分装。
试验实施例1 重组人干扰素α2b滴鼻剂急性毒性试验
实验目的：观察重组人干扰素α2b滴鼻剂一次性于鼻腔粘膜给药后，由于粘膜吸收所产生的毒性反应和死亡情况。
实验材料：
1、药品：重组人干扰素α2b滴鼻剂，50万IU/ml，由深圳海王英特龙生物公司提供。
2动物：Wistar大鼠20只雌雄各半，体重250-300g，由吉林省药品检验所动物室提供，合格证编号10-1009。
实验方法：
1、剂量选择：重组人干扰素α2b滴鼻剂临床每日拟用剂量为50万IU/人，在预试的基础上，选高于临床剂量100倍量。
2、分组、给药及观察：上述大鼠均分为生理盐水组和重组人干扰素α2b滴鼻剂组。将滴鼻剂滴在鼻腔中，5000万IU/只，1次给药，即刻观察动物状态、毛发、食欲、四肢活动、精神状态、死亡情况及体重变化，连续14日。
实验结果：
1、给药7日之内，生理盐水组及重组人干扰素α2b滴鼻剂组动物毛发、食欲、四肢活动、精神状态均无异常，无一死亡，体重亦无明显差别，见下表。
表 重组人干扰素α2b滴鼻剂及生理盐水组急毒试验体重变化(x±s，n＝5) 组别 给药前(g) 给药后7天(g) 给药后14天(g) 生理盐水组 270.2±13.78 290.0±14.96 310.2±14.19 α2b滴鼻剂组 271.7±14.45 292.0±14.95 311.3±15.93
2、重组人干扰素α2b滴鼻剂临床拟用量为每日50万IU/人，若人体重按60kg计算，即8333IU/kg；而急毒试验证明，给药量5000万IU/只，未出现毒性反应，若大鼠体重按0.27kg计算，即18518万IU/kg相当于临床剂量的22000倍，所以临床用药非常安全。
试验实施例2 大鼠机体免疫力IgG(g/L)检测
实验目的：检测重组人干扰素α2b滴鼻剂对大鼠免疫力作用，为临床用药效性提供依据。
实验材料：
1、药品：重组人干扰素α2b滴鼻剂，50万IU/ml，由深圳市海王英特龙生物技术股份有限公司提供。
2、动物：Wistar大鼠40只，雌雄各半，体重200-300g，由吉林省药品检验所动物室提供。
实验方法：
1、动物分组、给药剂量：将大鼠随机分为A、B二组，A组为滴鼻生理盐水对照组，20只；B组为滴鼻重组人干扰素α2b滴鼻剂试验组，20只，连续滴鼻7周时间，3天1次，每次50万IU/kg。
2、检测大鼠IgG(g/L)
实验结果：分组 实验方案 动物数 IgG(g/L)A 生理盐水对照组 20 12.13B 重组人干扰素α2b滴鼻剂试验组 20 41.87
A、B组比较：P＜0.01
结论：经过对重组人干扰素α2b滴鼻剂用于大鼠免疫学指标测定和统计学分析，有显著性差异，表示提高了机体免疫力。
试验实施例3 小鼠机体免疫力IgM(g/L)检测
实验目的：检测重组人干扰素α2b滴鼻剂对小鼠免疫力作用，为临床用药效性提供依据。
实验材料：
1、药品：重组人干扰素α2b滴鼻剂，50万IU/ml，由深圳市海王英特龙生物技术股份有限公司提供。
2、动物：小鼠40只，雌雄各半，体重25-40g，由吉林省药品检验所动物室提供。
实验方法：
1、动物分组、给药剂量：将大鼠随机分为A、B二组，A组为滴鼻生理盐水对照组，20只；B组为滴鼻重组人干扰素α2b滴鼻剂试验组，20只，连续滴鼻3周时间，2天1次，每次50万IU/kg。
2、检测小鼠IgM(g/L)
实验结果：分组 实验方案 动物数 IgM(g/L)A 生理盐水对照组 20 4.07B 重组人干扰素α2b滴鼻剂试验组 20 14.76
A、B组比较：P＜0.01
结论：经过对重组人干扰素α2b滴鼻剂用于小鼠免疫学指标测定和统计学分析，有显著性差异，表示提高了机体免疫力。