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1、(10)申请公布号 CN 102703922 A(43)申请公布日 2012.10.03CN102703922A*CN102703922A*(21)申请号 201210157810.9(22)申请日 2012.05.21C25B 7/00(2006.01)(71)申请人沈阳化工大学地址 110142 辽宁省沈阳市经济技术开发区11号(72)发明人关瑾 阎峰 石爽 王思林牛秋玲(74)专利代理机构沈阳技联专利代理有限公司 21205代理人张志刚(54) 发明名称一种分离泮托拉唑和泰托拉唑药物消旋体的方法(57) 摘要一种分离泮托拉唑和泰托拉唑药物消旋体的方法，涉及一种分离拉唑类药物的方法，该方法。
2、以Cu（）和L-组氨酸作手性选择剂，磷酸氢二钠为背景电解液，运用配体交换毛细管电泳法，使Cu（）、L-组氨酸和拉唑药物消旋体形成三元配合物，然后通过毛细管电泳仪使对映体实现分离，其运用配体交换毛细管电泳法分离两个拉唑类药物消旋体，所用的手性选择剂是Cu（）和L-组氨酸；本发明分离效率高、操作简单，包括处理样品、准备仪器和进样三个环节；手性选择剂价廉易得且样品和试剂用量少；背景电解质不含有机溶剂，成本低且对环境污染小。可用于此类拉唑药物的体内分析和产品光学纯度检测，同时也为研发此类手性药物提供技术支持与保障。(51)Int.Cl.权利要求书2页 说明书3页 附图2页(19)中华人民共和国国家知识。
3、产权局(12)发明专利申请权利要求书 2 页 说明书 3 页 附图 2 页1/2页21.一种分离泮托拉唑和泰托拉唑药物消旋体的方法 ，其特征在于，该方法以Cu（）和L-组氨酸作手性选择剂，磷酸氢二钠为背景电解液，运用配体交换毛细管电泳法，使Cu（）、L-组氨酸和拉唑药物消旋体形成三元配合物，然后通过毛细管电泳仪使消旋体实现分离，其运用配体交换毛细管电泳法分离两个拉唑类药物消旋体，所用的手性选择剂是Cu（）和L-组氨酸；其具体分离步骤如下：a.样品和运行缓冲液的配置：样品储备溶液的配置，分别精密称取泮托拉唑和泰妥拉唑样品粉末10 mg，置10 mL棕色容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得各。
4、样品浓度均为1 mg/mL的储备液，-20oC冰箱保存；样品供试溶液的配制，精密量取各样品储备液1 mL分别至10 mL棕色容量瓶中，以甲醇定容至刻度，摇匀，得100 g/mL供试液，4oC冰箱保存；运行缓冲液1的配制，依次称取磷酸二氢钠、醋酸铜和L-组氨酸0.0195 g、0.040 g、0.0620 g置于50 mL烧杯，加25 mL二次蒸馏水溶解，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液和10%磷酸调至pH 5.0，即得运行缓冲液，经0.45 m微孔滤膜过滤后备用；运行缓冲液2的配制，依次称取磷酸二氢钠、醋酸铜和L-组氨酸0.0195 g、0.060 g、0.0932 g置于50 mL烧杯，加2。
5、5 mL二次蒸馏水溶解，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液和10%磷酸调至pH 5.0，即得运行缓冲液，经0.45 m微孔滤膜过滤后备用；b.仪器准备：分离过程在石英毛细管中进行，选取内径50 m的毛细管，截取一段长度53 cm，在距端口8 cm处除去毛细管的聚酰亚胺层得到检测窗口，新的毛细管在使用前需冲洗和活化，连续分析时，每次分析前依次用依次0.1 mol/LNaOH、二次蒸馏水和运行缓冲液各冲洗10 min；c. 设置分离条件：泮托拉唑：分离电压10 kV，检测波长 290 nm；泰妥拉唑：分离电压10 kV，检测波长 306 nm；d. 进样： 进样高度10 cm，进样时间10 s，正极。
6、进样负极检测，进样间用运行缓冲液冲柱5 min，然后进行下一次进样。2.根据权利要求1所述的一种分离泮托拉唑和泰托拉唑药物消旋体的方法，其特征在于，所述分离拉唑类药物消旋体的样品操作：运行缓冲液和样品均经0.45 m微孔滤膜过滤，并超声脱气，样品用甲醇溶解，4冰箱保存备用。3.根据权利要求1所述的一种分离泮托拉唑和泰托拉唑药物消旋体的方法，其特征在于，所述分离拉唑类药物消旋体的电泳分离条件泮托拉唑消旋体：运行缓冲液：5 mmol/L磷酸二氢钠含18 mmol/L L-组氨酸、6 mmol/L醋酸铜，调至pH 5.0；分离电压：10 kV；紫外检测波长：290 nm；电泳分离条件泰妥拉唑消旋体：。
7、运行缓冲液5 mmol/L磷酸二氢钠含24 mmol/L L-组氨酸、12 mmol/L醋酸铜，调至pH 5.0；分离电压：15 kV；紫外检测波长：306 nm。4.根据权利要求1所述的一种分离泮托拉唑和泰托拉唑药物消旋体的方法，其特征在于，所述分离拉唑类药物消旋体所选用的配位原子是Cu（），手性配体是L-组氨酸，它们配位比是1：2。5.根据权利要求1所述的一种分离泮托拉唑和泰托拉唑药物消旋体的方法，其特征在于，所述分离拉唑类药物消旋体的仪器准备：毛细管总长53 cm，有效长度45 cm，内径：50 mm；新的毛细管在使用前需冲洗和活化，连续分析时，每次分析前依次用0.1mol/L NaOH。
8、、二权 利 要 求 书CN 102703922 A2/2页3次蒸馏水和运行缓冲液各冲洗10 min；进样间用运行缓冲液冲柱5 min，然后进行下一次进样。权 利 要 求 书CN 102703922 A1/3页4一种分离泮托拉唑和泰托拉唑药物消旋体的方法技术领域0001 本发明涉及一种分离药物的方法，特别是涉及一种分离泮托拉唑和泰托拉唑药物消旋体的方法。背景技术0002 泮托拉唑和泰妥拉唑是一类抗溃疡药物，主要用于治疗十二指肠溃疡、胃溃疡、反流性食管炎等与胃酸分泌相关的疾病。由图1，图2可知泮托拉唑和泰妥拉唑是分子结构相似，以硫原子为手性中心的手性药物，存在R，S两个对映异构体。对于大部分具有立。
9、体选择性的药物来说，消旋体给药相当于两种药物同时给药，或者说药物杂质含量50%，因此，抗溃疡药物单一对映体的研究开发成为热点。由于两个对映体具有相似的理化性质，常规的方法很难分离。目前对此类药物手性分离分析方法已经报道的有手性固定相高效液相色谱法和流动相添加剂高效液相色谱法。毛细管电泳法( Capillalry Electrophoresis, CE ) 是20世纪80年代发展起来的一项高效的分离分析新技术。它以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，根据各组分之间的浓度和分配行为的差异而实现分离。它以高效、快速、简便著称，而且分离模式多、样品和试剂消耗量少、环境污染小、成本低，最重要的是优化分。
10、离时可以灵活改变选择剂的种类和浓度，因此已经越来越广泛的应用于手性分离。0003 手性配体交换色谱法( chiral ligand-exchange chromatography, CLEC )，即在色谱系统中引入某种金属离子和某种手性配位体，与待测对映体可形成两个非对映的三元配合物，经色谱过程实现光学异构体的立体选择性分离。该方法既不需要手性固定相也不需要柱前衍生化，在流动相中添加量极小，而且手性选择剂种类多样，所以该方法方便、快捷、成本低。目前，国内外没有采用手性配体交换毛细管电泳法分离此类手性化合物的报道。发明内容0004 本发明的目的在于提供一种分离泮托拉唑和泰托拉唑药物消旋体的方法，。
11、该方法采用CLEC，以Cu()，L-组氨酸为手性选择剂，分离分析两个抗溃疡药物消旋体，用于此类抗溃疡手性药物的体内分析和产品光学纯度检测，为此类手性药物的研究开发提供技术支持和保障。0005 本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种分离泮托拉唑和泰托拉唑药物消旋体的方法 ，该方法以Cu（）和L-组氨酸作手性选择剂，磷酸氢二钠为背景电解液，运用配体交换毛细管电泳法，使Cu（）、L-组氨酸和拉唑药物形成三元配合物，然后通过毛细管电泳仪使消旋体实现分离，其运用配体交换毛细管电泳法分离两个拉唑类药物消旋体，所用的手性选择剂是Cu（）和L-组氨酸；其具体分离步骤如下：a.样品和运行缓冲液的配置：样品储。
12、备溶液的配置，分别精密称取泮托拉唑和泰妥拉唑样品粉末10 mg，置10 mL棕色容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得各样品浓度说 明 书CN 102703922 A2/3页5均为1 mg/mL的储备液，-20oC冰箱保存；样品供试溶液的配制，精密量取各样品储备液1 mL分别至10 mL棕色容量瓶中，以甲醇定容至刻度，摇匀，得100 g/mL供试液，4oC冰箱保存；运行缓冲液1的配制，依次称取磷酸二氢钠、醋酸铜和L-组氨酸0.0195 g、0.040 g、0.0620 g置于50 mL烧杯，加25 mL二次蒸馏水溶解，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液和10%磷酸调至pH 5.0，即得运行缓。
13、冲液，经0.45 m微孔滤膜过滤后备用；运行缓冲液2的配制，依次称取磷酸二氢钠、醋酸铜和L-组氨酸0.0195 g、0.060 g、0.0932 g置于50 mL烧杯，加25 mL二次蒸馏水溶解，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液和10%磷酸调至pH 5.0，即得运行缓冲液，经0.45 m微孔滤膜过滤后备用。0006 b.仪器准备：分离过程在石英毛细管中进行，选取内径50 m的毛细管，截取一段长度53 cm，在距端口8 cm处除去毛细管的聚酰亚胺层得到检测窗口，新的毛细管在使用前需冲洗和活化，连续分析时，每次分析前依次用依次0.1 mol/LNaOH、二次蒸馏水和运行缓冲液各冲洗10 min；c。
14、. 设置分离条件：泮托拉唑：分离电压10 kV，检测波长 290 nm；泰妥拉唑：分离电压10 kV，检测波长 306 nm；d. 进样： 进样高度10 cm，进样时间10 s，正极进样负极检测，进样间用运行缓冲液冲柱5 min，然后进行下一次进样。0007 所述的一种分离泮托拉唑和泰托拉唑药物消旋体的方法，其所述分离拉唑类药物消旋体的样品操作：运行缓冲液和样品均经0.45 m微孔滤膜过滤，并超声脱气，样品用甲醇溶解，4冰箱保存备用。0008 所述的一种分离泮托拉唑和泰托拉唑药物消旋体的方法，其所述分离拉唑类药物消旋体的电泳分离条件泮托拉唑消旋体：运行缓冲液：5 mmol/L磷酸二氢钠含18 。
15、mmol/L L-组氨酸、6 mmol/L醋酸铜，调至pH 5.0；分离电压：10 kV；紫外检测波长：290 nm；电泳分离条件泰妥拉唑消旋体：运行缓冲液5 mmol/L磷酸二氢钠含24 mmol/L L-组氨酸、12 mmol/L醋酸铜，调至pH 5.0；分离电压：15 kV；紫外检测波长：306 nm。0009 所述的一种分离泮托拉唑和泰托拉唑药物消旋体的方法，其所述分离拉唑类药物消旋体所选用的配位原子是Cu（），手性配体是L-组氨酸，它们配位比是1：2。0010 所述的一种分离泮托拉唑和泰托拉唑药物消旋体的方法，其所述分离拉唑类药物消旋体的仪器准备：毛细管总长53 cm，有效长度45 。
16、cm，内径：50 mm；新的毛细管在使用前需冲洗和活化，连续分析时，每次分析前依次用0.1mol/LNaOH、二次蒸馏水和运行缓冲液各冲洗10 min；进样间用运行缓冲液冲柱5 min，然后进行下一次进样。0011 本发明的优点与效果是：1. 本发明采用CLEC分离效率高、操作简单，背景电解质不含有机溶剂，手性选择剂种类和浓度可灵活改变、分析成本低、对环境友好，手性选择剂用量少且价廉易得。0012 2. 本发明提供了分离两个拉唑类药物的配体交换毛细管电泳法，用Cu（）和L-组氨酸作手性选择剂，在合适的pH条件下，使Cu（）、L-组氨酸分别和拉唑药物的左旋、右旋形成三元配合物，然后通过毛细管电泳。
17、仪实现药物消旋体分离，可用于此类拉唑药物的体内分析和产品光学纯度检测，同时也为研发此类药品和单一对映体给药提供技术支持与保障。说 明 书CN 102703922 A3/3页6附图说明0013 图1 是泮托拉唑结构式；图2 是泰托拉唑结构式；图3 是本发明 CLEC 分离泮托拉唑消旋体色谱图；图4是本发明CLEC分离泰妥拉唑消旋体色谱图。具体实施方式0014 下面参照附图对本发明进行详细说明。 图3为CLEC分离泮托拉唑消旋体色谱图，两对映体分析时间在25 min内，分离度大于1.5。0015 图4为CLEC 分离泰妥拉唑消旋体色谱图，两对映体分析时间在25 min内，分离度大于1.5。0016。
18、 实施例一：1. 精密称取泮托拉唑消旋体10 mg，置10 mL棕色容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。得样品浓度均为1 mg/mL的储备液，-20oC冰箱保存。精密量取样品储备液1 mL分别至10 mL棕色容量瓶中，以甲醇定容至刻度，摇匀，得100g/mL供试液，经0.45 m微孔滤膜过滤后备用。0017 2. 配制5 mmol/LNaH2PO4含8 mmol/L醋酸铜和16 mmol/LL-组氨酸作背景电解质溶液，用H3PO4和NaOH调至pH 5.0，经0.45 m微孔滤膜过滤，并超声脱气备用。毛细管柱依次用0.1 mol/LNaOH、二次蒸馏水和上述运行缓冲液各冲洗10 min后走。
19、基线，待基线平稳后（2 min左右）采用虹吸进样，进样高度10 cm，进样时间10 s，正极进样负极检测，记录电泳图。进样间依次用二次蒸馏水和运行缓冲液各冲柱5 min，走基线2 min左右，然后进下一个样品。分离电压：10 kV，紫外检测波长：290 nm。分离电泳图如图3，泮托拉唑消旋体达基线分离，分离度大于1.5。0018 实施例二：1. 精密称取泰妥拉唑消旋体10 mg，10 mL棕色容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。得样品浓度均为1 mg/mL的储备液，-20oC冰箱保存。精密量取样品储备液1 mL至10 mL棕色容量瓶中，以甲醇定容至刻度，摇匀，得100g/mL供试液，经0.。
20、45 m微孔滤膜过滤后备用。0019 2. 配制5 mmol/LNaH2PO4含12 mmol/L醋酸铜和24 mmol/LL-组氨酸作运行缓冲液，用H3PO4和NaOH调至pH 5.0，经0.45 m微孔滤膜过滤，并超声脱气备用。毛细管柱依次用0.1 mol/LNaOH、二次蒸馏水和上述运行缓冲液各冲洗10 min后走基线，待基线平稳后（2 min左右）采用虹吸进样，进样高度10 cm，进样时间10 s，正极进样负极检测，记录电泳图。进样间依次用二次蒸馏水和运行缓冲液各冲柱5 min，走基线2 min左右，然后进下一个样品。分离电压：15 kV，紫外检测波长：306 nm。分离电泳图如图4，泰妥拉唑消旋体达基线分离，分离度对于1.5。说 明 书CN 102703922 A1/2页7图1图2图3说 明 书 附 图CN 102703922 A2/2页8图4说 明 书 附 图CN 102703922 A。